抗肝炎藥物及其制備和用途的制作方法

專利名稱：抗肝炎藥物及其制備和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，具體地說是提供抗肝炎的治療或輔助治療藥物——甘草酸衍生物及其制備和用途。
背景技術：
目前，公開的文獻僅報道了 18 a-甘草酸二銨或18 e-甘草酸二銨(Di ammoniumGlycyrrhizinate， C^HeAOw,分子量857)，到目前為止，國內外尚沒有公開的文獻報道能夠用于治療肝炎、肝硬化、肝損害和肝功能的藥物，即甘草酸衍生物——甘草酸二銨結晶水合物[(:4晶^2016 nH20， n=0. 5 4. O]及其制備方法和用途。

發明內容
本發明所涉及的是抗肝炎藥物及其制備和用途，進一步說，是涉及抗肝炎、肝硬化、肝損害和肝功能異常腎綜合癥出血熱、過敏性紫癜、尋常性銀屑病及濕疹皮炎等的藥物——甘草酸衍生物及其制備和用途，即18ct-甘草酸二銨和18e-甘草酸二銨水合物或18ci-甘草酸二銨結晶水合物和18p-甘草酸二銨結晶水合物的混合體[C42H68N2016 nH20， n=0. 5 4. 0， n可以是0.5、 1.0、 1.4， 1.5、 2、 2.23， 2.25、 2.28， 2.5、3.0、 3.5、 4或其之間的數字]及其制備方法和用途。
本發明獲得的含有結晶水的甘草酸二銨包括18 a -甘草酸二銨結晶水合物或l鄰-甘草酸二銨結晶水合物以及18 a -甘草酸二銨結晶水合物和l鄰-甘草酸二銨結晶水合物的混合體。令人驚奇的是，不含結晶水的甘草酸二銨引濕性遠高于含有結晶水的甘草酸二銨，含有結晶水的甘草酸二銨水合物比不含結晶水的更能穩定的存在，便于儲存和運輸，并在室溫下具有良好的水溶性，易于制成水溶性的制劑。此外，無水物的潮解使得在處理時要隔絕空氣防止粘連等，而水合物具有良好的滑動性，從而改善制劑的可操作性。
令人^C奇的是，特征性的，本發明的水合物的熱分析(TG-DTG或者TG-DTA)圖譜可以看出失重平臺下具有強烈的、對應的吸熱峰，熱分析圖譜顯示出18a-甘草酸二銨1.5水合物、18 a -甘草酸二銨2水合物(C42HMN2016'2H2O)、 18 a -甘草酸二銨2.5水合物(C42H68N2016'2.5H2O)、 18 a-甘草酸二銨3水合物(C42H68N2016.1.5H2O)、 18 a -甘草酸二銨4水合物等，用卡爾費休法測定水分結果與熱分析結果相吻合。本發明的同一構型的結晶水合物在同一的HPLC條件下具有相同的色譜行為，將本發明的實施例的水合物溶解后，兩兩或多個化合物溶液混合后進樣，在本文本采用的檢測條件下，在可檢測的濃度范圍內，在HPLC圖譜上主峰均顯示為單峰。
本發明的甘草酸二銨水合物，為白色或類白色結晶性粉末，能穩定存儲。將上述甘草酸二銨水合物和甘草酸二銨無水物樣品分別密閉與西林瓶中進行加速穩定性試驗{色譜條件色譜柱C18(250 mrnX4.6 ram， 5wm);流動相0.02moL/L乙酸銨(用磷酸調pH值為3. 0)—乙腈(55: 45);流速lml/min;溫度室溫；檢測波長252nm(18a -甘草酸二銨水合物)或257nm(18(3-甘草酸二銨水合物)}，出人意料地發現，本發明的甘草酸二銨水合^^;購含量和有關物質沒有明顯變化，甘草酸二銨無水物加速試驗6個月與0月相比(4CTC，朋75%下)，有關物質增加的高于甘草酸二銨水合物。按中國藥酸二銨無水物和本發明的水合物約5g，置于干燥恒重
的表面皿中，精密稱重，25°C、相對濕度為75%，分別于試驗0h和48h取樣，計算引濕增重的百分率，結果顯示，無水物引濕性比本發明的水合物都高得多，說明本發明的甘草酸二銨水合物具有更好的存儲穩定性。結果見表1 3。
表1本友明18a -甘草酸二銨水合物加速穩定性試驗結果
取樣時間(月)o月6月
樣品性狀含量(%)性狀含量(%)18。i -甘草酸二銨1. 5水合物類白色粉末98. 1類白色粉末98.218。 -甘草酸二銨2水合物類白色粉末98.2類白色粉末98.318。!-甘草酸二銨2. 5水合物類白色粉末98.5類白色粉末98. 318。i -甘草酸二銨3水合物類白色粉末98. 3類白色粉末98.218。 -甘草酸二銨4水合物類白色粉末98.2類白色粉末98.3
表2.本發明1鄰-甘草酸二銨水合物加速穩定性試驗結果
取樣時間(月)o月6月
樣品性狀含量ft)性狀含量(%)
18|3-甘草酸二銨4水合物類白色粉末98. 3類白色粉末98.2
18p-甘草酸二銨3水合物類白色粉末98. 1類白色粉末98.0
l鄰-甘草酸二銨2. 5水合物類白色粉末98.4類白色粉末98.6
l鄰-甘草酸二銨2水合物類白色粉末98.5類白色粉末98.3
18p-甘草酸二銨1. 5水合物類白色粉末98. 1類白色粉末98.2
表3.引濕試驗結果
取樣時間(48小時)
18a-甘草酸二銨l水合物18a-甘草酸二銨1.5水合物18 a -甘草酸二銨2水合物18 a -甘草酸二銨3水合物18a-甘草酸二銨4水合物l鄰-甘草酸二銨4水合物18p-甘草酸二銨2水合物18p-甘草酸二銨1. 5水合物不含結晶水的18 a -甘草酸二銨無水物不含結晶水的l鄰-甘草酸二銨無水物
——^2塵且祖些二，重％6. 07
4. 63
3. 75
1. 49
0.05
0.07
3.89
4.85
8.12
8.25
甘草酸衍生物——甘草酸二銨水合物的制備包括如下方法
方法A:將18 a -甘草酸或18 0 -甘草酸或18 a -甘草酸單銨或18 e -甘草酸單銨于反應容器中，加水，攪拌下通氨氣或加氨水，使溶解，使pH值在6. 5. 0-8. 5之間，pH值優選在6.0-7.2之間，攪拌反應0.2-10小時，用酸及其溶液包括冰醋酸，鹽酸、硫酸溶液等控制反應液的pH值在5. 0-6. 2之間，加入低分子醇Cl-C5如甲醇、乙醇、異丙醇，低級(C3-C6)酮，如丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯，低取代鹵代烴(C1-C6)，包括二氯甲垸、二氯乙垸、氯仿，低級醚(C1-C6)，包括乙醚、甲乙醚，丁醚，直鏈或支鏈烷烴(C5-C8)，環垸烴(C3-C6)，如環己烷，芳香烴，如苯，甲苯中的一種或幾種，進行結晶，過濾，干燥，得18a-甘草酸二銨結晶水合物或18P-甘草酸二銨結晶水合物；用水、低分子醇C1-C5，如甲醇、乙醇、異丙醇，低級(C3-C6)酮，如丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯，低取代鹵代烴(C1-C6)，包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿，低級醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚，丁醚，直鏈或支鏈垸烴(C5-C8)，環烷烴(C3-C6)，如環己垸，芳香烴，如苯，甲苯中的的一種或幾種重結晶，過濾，干燥，得18ci-甘草酸二銨結晶水合物或18e-甘草酸二銨結晶水合物；
或者方法B:將18 a -甘草酸或18 e -甘草酸或18 a -甘草酸單銨或18 P -甘草酸單銨與碳酸氫銨在水溶液中，攪拌，反應0.2-10小時，加入低分子醇C1-C5，如甲醇、乙醇、異丙醇，低級(C3-C6)酮，如丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯的的一種或幾種進行結晶；或用水、低分子醇C1-C5,如甲醇、乙醇、異丙醇，低級(C3-C6)酮，如丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯，低取代鹵代烴(C1-C6)，包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿，低級醚(C1-C6)，包括乙醚、甲乙醚，丁醚，直鏈或支鏈垸烴(C5-C8),環烷烴(C3-C6)，如環己烷，芳香烴，如苯，甲苯中的一種或幾種重結晶，白色晶體析出，過濾，干燥，得18a-甘草酸二銨結晶水合物或18 3 -甘草酸二銨結晶水合物；
18ct-甘草酸或18P-甘草酸與碳酸氫銨反應摩爾比一般為1: 1.9~2.2; 18a-甘草酸單銨或18e-甘草酸單銨與碳酸氫銨的反應摩爾比一般為1: 0.9~1.2;
或者方法C:分別將甘草酸三銨鹽與氫氧化鈉或氫氧化鉀等堿溶液，升溫回流7-8小時后，降至室溫后，分別用酸調PHM-2，加入正丁醇，攪拌，靜置，分去水層，有機層用PH=l-2的酸水溶液洗滌，水洗，洗后的有機層通氨氣，使pH值在6.5-8.5之間，pH值優選在6. 0-7. 2之間，再用酸如冰醋酸，鹽酸、硫酸溶液等回調pH在5.0,6.2之間，分離水層，有機層減壓蒸去正丁醇，得固體；將固體加到乙醇和水的溶液中，加熱回流，活性炭脫色，過濾，加異丙醇，低級(C3-C6)酮，如丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯低取代鹵代烴(C1-C6)，包括二氯甲烷、二氯乙垸、氯仿，低級醚(C1-C6)，包括乙醚、甲乙醚，丁醚，直鏈或支鏈垸烴(C5-C8)，環垸烴(C3-C6)，如環己烷，芳香烴，如苯，甲苯中的一種或幾種，冷卻，靜置析晶，過濾，干燥，即得；或將所得再用水、低分子醇C1-C5，如甲醇、乙醇、異丙醇，低級(C3-C6)酮，如丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯低取代鹵代烴(Cl-C6)，包括二氯甲垸、二氯乙烷、氯仿，低級醚(C1-C6)，包括乙醚、甲乙醚，丁醚，直鏈或支鏈烷烴(C5-C8)，環垸烴(C3-C6)，如環己烷，芳香烴，如苯，甲苯中的一種或幾種重結晶，過濾，干燥，得到高純度的18a-甘草酸二銨結晶水合物；
或者方法D:將方法A或者方法B或者方法C結晶后未干燥的濕品或其方法A
或B或者方法C的最終產物，加水溶解，將其冷凍到一70 一30°C，真空冷凍干燥，得甘草酸二銨水合物。
甘草酸二銨水合物的結晶或重結晶溶劑選自水、低分子醇Cl-C5，包括甲醇、乙醇、異丙醇，低級(C3-C6)酮，包括丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯，低取代鹵代烴(C1-C6)，包括二氯甲垸、二氯乙垸、氯仿，低級醚(C1-C6)，包括乙醚、甲乙醚，丁醚，直鏈或支鏈垸烴(C5-C8)，環垸烴(C3-C6)，如環己烷，芳香烴，如苯，甲苯中的一種或幾種；甘草酸二銨水合物的結晶或重結晶溶劑，優選水、乙醇、異丙醇，丙酮、丁酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、苯中的一種或幾種。更優選水、乙醇、異丙醇，丙酮、乙酸乙酯、氯仿、乙醚中的一種或幾種。
本發明的甘草酸二銨水合物用途本發明的甘草酸二銨水合物用于制備注射用凍
6干粉針制劑、或者無菌分裝粉針制劑、或者大輸液制劑、或者小水針注射劑，經腸道給藥制劑，包括片劑、膠囊、顆粒劑、溶液劑、經皮膚給藥的軟膏和凝膠等。適用于制備用于治療或預防肝炎的藥物或健康食品中的應用。
用于制備經腸道給藥制劑的片劑、膠囊、顆粒劑，其中可含有藥學上可接受的填充劑，如淀粉、變性淀粉、乳糖、微晶纖維素、環糊精、山梨醇、甘露醇、磷酸鈣、氨基酸等；藥學上可接受的崩解劑，如淀粉、變性淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯聚乙烯吡咯垸酮、低取代羥丙基纖維素、表面活性劑；藥學上可接受的潤濕劑和粘合劑，如膠化淀粉、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸及其鹽；藥學上可接受的潤滑劑和助流劑，如硬脂酸、硬脂酸鎂、聚乙二醇4000—6000、滑石粉、微粉硅膠、十二垸基硫酸鎂等；藥學上可接受的甜味劑和香精，如阿斯巴甜、甜蜜素、糖精鈉、三氯蔗糖、食用香精等。
本發明的結晶水合物不同于無水物的潮解使得在處理時要隔絕空氣防止粘連等，而結晶水合物具有良好的滑動性，從而改善制劑的可操作性；并使制備的固體制劑具
有良好的溶出性能，使得其容易被吸收進入血液循環，改善生物利用度，并有利于快速發揮其作用。
甘i酸二銨水合物較易溶解于水，所以其制備的凝膠劑具有良好的釋放性能，使得其容易被吸收進入血液循環，提高生物利用度，并有利于快速發揮其抗炎、抗過敏等作用。
甘草酸二銨水合物的軟膏或凝膠制備將甘草酸二銨水合物與50 95%基質混勻，基質可以是乙醇、甘油、三乙醇胺、甘油明膠、聚乙二醇200 8000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯垸酮、半合成硬脂肪酸脂、水溶性單甘酯、卡波姆系列(931、 934、 940、 974、AA-1、 1342等)、吐溫60—80，凡士林；軟膏或凝膠中可含有藥學上可接收的防腐劑和穩定劑，凝膠的制備時可分別將卡波姆用水分散，加入甘油、聚乙二醇200 8000、加熱，攪拌混合，加處方量的甘草酸二銨水合物、攪拌、用藥學上可接收的無機堿或者有機堿調節pH二4.5 7.5左右，加水至全量、攪拌至勻、分裝，即得。
甘草酸二銨水合物可作為添加劑用于制備預防或治療肝炎等疾病的健康食品。
甘草酸二銨水合物針劑，其制備方法為甘草酸二銨水合物無菌分裝粉針制劑可按照常規方法制備。
凍干粉針制劑的制備方法為取甘草酸二銨水合物，可以加藥學上可接受的凍干支持劑或輔形劑，加注射用水攪拌使溶解，若需要，可用藥學上可接受的酸堿調節pH為4.5 7.5，加活性碳0.005 0.5% (W/V)攪拌15 45min，過濾，補水，無菌過濾，按20 600mg/瓶(以主藥計)分裝，冷凍干燥，壓塞，得成品。
甘草酸二銨水合物小容量注射液及其制備工藝甘草酸二銨水合物加注射用水和藥學上可接受的附加劑，例如藥學上可接受的pH調節劑、藥學上可接受的抗氧劑、惰性氣體，過濾、除菌制成滅菌小容量注射液，其pH值在4.5 7.5之間。
其藥學上可接受的pH調節劑可以是藥學上可接受的無機酸或有機酸、無機堿或有機堿，也可以是廣義的路易斯酸或堿，可以含有一種或者幾種，可以是鹽酸、磷酸、丙酸、醋酸及醋酸鹽、如醋酸鈉等，乳酸以及乳酸藥用鹽、枸櫞酸藥用鹽、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸鹽、酒石酸及其藥用鹽、硼砂、硼酸、丁二酸、己酸、己二酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、三羥基氨基甲烷、二乙醇胺、乙醇胺、異丙醇胺、二異丙醇胺、2-氨基-2-(羥甲基)1， 3-丙二醇胺、1， 2-己二胺、N-甲基葡萄胺、二異丙胺以及它們的鹽，多羥基羧酸及藥用鹽，如葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、乳糖酸、蘋果酸、蘇糖酸、葡庚糖酸、氨基酸及氨基酸鹽等中的一種或者幾種。
其藥學上可接受的抗氧劑和穩定劑可以是亞硫酸、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、焦亞
7硫酸鹽、連二亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽，有機硫化合物硫脲、谷胱甘肽、二巰基丙醇、 巰基乙酸及鹽、硫代乳酸及鹽、硫代二丙酸及鹽、苯酚類化合物，如沒食子酸及鹽、 咖啡酸、咖啡酸鹽、阿魏酸、阿魏酸鹽、二叔丁基對苯酚、2， 5-二羥基苯甲酸、2， 5-二羥基苯甲酸鹽、苯酚或其衍生物、水楊酸或其鹽；氨基酸以及其鹽；抗壞血酸及 抗壞血酸鹽、異抗壞血酸及異抗壞血酸鹽、煙酰胺、酒石酸、硝酸鹽、磷酸鹽、醋酸 藥用鹽、檸檬酸鹽、EDTA及EDTA鹽、如EDTA二鈉、EDTA四鈉、N—二 (2 —羥 乙基)甘氨酸等中的一種或者幾種。
其藥學上可接受的等滲調節劑可以是葡萄糖、果糖、木糖醇、山梨醇、甘露醇、 轉化糖、麥芽糖、右旋糖酐、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉等中的一種或幾種。
去熱源和除菌方式可以是加入配液量0.005 3%的活性炭去熱源，微孔濾膜除菌 和熱壓滅菌，也可以采用超濾除菌、去熱源。超濾方法中，超濾器可選用平板式、巻 式、管式、中空纖維式或圓盒式等，優選巻式和中空纖維式超濾器，采用截留相對分 子質量為5萬至30萬的濾膜除去大部分發熱性物質和細菌后，再采用截留相對分子質 量1000 30000的超濾膜除去剩余熱源，優選相對分子質量1000 10000的超濾膜。
本發明的甘草酸二銨水合物，適用于制備下列對所引起的人和動物感染的治療或 預防的藥物中的應用制備用于于臨床上各型肝炎、肝硬化、肝損害和肝功能異常的 治療或輔助治療、以及心肌缺血再灌注損傷、流行性乙型腦炎、腎綜合征出血熱、過 敏性紫癜、尋常性銀屑病、濕疹皮炎的治療或預防的藥物中的應用。
用量用法 一般情況下，于成人，口服， 一次20 400mg， 一日1 3次。取本發 明藥物0. 02 0. 5g于0. 9%氯化鈉或者5 10%葡萄糖20 500亳升中，作靜脈推注或 滴注，每日1 2次；取本發明藥物0.02 0.2g溶于注射用水中，肌內注射，每日l 2次；經胃腸道給藥用量用法10~70 kg體重的人或動物， 一般情況下50 500mg/天， 分1-3次給藥；兒童減半量以上使用。


圖1為18 a -甘草酸二銨4水合物的熱分析圖譜。 圖2為18P -甘草酸二銨4水合物的熱分析圖譜。 圖3為18 a -甘草酸二銨3水合物的熱分析圖譜。 圖4為18 a -甘草酸二銨2水合物的熱分析圖譜。 圖5為18 a -甘草酸二銨1.5水合物的熱分析圖譜。 圖6為l鄰-甘草酸二銨1.5水合物的熱分析圖譜。
測試條件Setaram公司Setsys 16，樣品量約5mg，升溫速度10K/min， &流速: 50ml/min，室溫 400。C。
具體實施例方式
實施例1 18 a -甘草酸二銨4水合物的制備將l鄰-甘草酸單銨鹽300g與20% 氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液1600ml,升溫回流8h后，降至室溫后，用鹽酸調節pH二l-2， 加正丁醇2000ml，攪拌45min，靜止分層，分離水層，有機層用1N鹽酸溶液洗滌2次， 水洗，分離水層，然后有機層通氨氣，使p^8為止，冰醋酸回調pH至5.8左右，分 離下層料液，減壓蒸發正丁醇，得粗品；將粗品加到90%乙醇中，加熱回流，溶液變清， 活性炭脫色，過濾，加異丙醇，低溫冷卻，結晶，過濾，固體3(TC左右干燥72小時，
8得類白色結晶性粉末156.2g，易溶解于水，熔點144.2°C分解(未校正)，[a]D25 +25.8°(H20， l%w/v);紫外光譜入H2°max252nm (lg e >4， 0.1MHC1); ESI-MS: m/z:857，821;紅外光譜v,狀cm-13450 (寬)、2973、 1716、 1651、 1455、 1401、 1045，卡氏法測定水分為7.86%, TG-DTG:平臺失重約7.55%，這與樣品含有4個結 晶水的結果(理論值7. 76%)在誤差范圍內(見附圖1),元素分析理論值C 54.30%， H8.25%， N3.02%; 實測值C 54.43%， H8.13%， N2.92%。
實施例2 l鄰-甘草酸二銨4水合物的制備稱取57g碳酸氫銨于500ml反應瓶中， 加水180ml使溶解，攪拌下逐漸加入605g 18p-甘草酸單銨，攪拌反應2h，加熱到50~70 °C，攪拌30 min，加入350ml無水乙醇，加熱回流30min，活性炭脫色，濾除活性炭， 加異丙醇100ml，冷卻放置，有白色晶體析出，過濾，3(TC干燥72小時得類白色粉末16g， 得18p-甘草酸二銨495g，收率82X;熔點145。C分解(未校正)，紫外光譜A"^股257nm (lge〉4， H20); ESI-MS: m/z:857,821;卡氏法測定水分為7.83%, TG-DTG:平臺 失重約7.52%，這與樣品含有4個結晶水的結果(理論值7.76%)在誤差范圍內(見附 圖2)，元素分析理論值C 54.30%， H8.25%， N3.02%;實測值C 54.47%， H8.16%， N2.95%
實施例3 18a-甘草酸二銨3水合物的制備將甘草酸三銨鹽100g與5M氫氧化 鈉或5M氫氧化鉀溶液500ml置于反應瓶中，升溫回流7-8小時后，降至室溫后，分別 用3M硫酸調PH^1 3，加入正丁醇，攪拌，靜置，分去水層，有機層用pl^l 2的酸 水溶液洗滌，洗后的有機層通氨氣，使pH在7.0 8.1之間，再用乙酸溶液回調pH在 5.5~6.2之間，將下層的料液分出，減壓蒸發正丁醇，得固體，將固體加到90%乙醇中， 加熱回流，加90%乙醇使溶液變清，活性炭脫色，過濾，濾液中加異丙醇30ml和丙酮 10ml，冷卻，靜置析晶，過濾，固體物60'C左右干燥6h得到18a-甘草酸二銨3水合 物56.6克，易溶解于水，[a]D30 +24.3°(H20， l%w/v);紫外光譜A H20max252nm (lg e 〉4, 45ug/ml); ESI-MS: m/z:857，821;卡氏法測定水分為6. 16%， TG-DTG:平 臺失重約5.87P6. 10%，這與樣品含有3個結晶水的結果(理論值5.93%)在誤差范 圍內(見附圖3);元素分析理論值C 55.37%， H8.19%， N3.07%;實測值C 55.49%， H8.08%， N2.91%。
實施例4依照實施例3的方法類似的制備l鄰-甘草酸二銨3水合物，得52. 3 克，易溶解于水，紫外光譜入"^max257腿(lge >4， 45ug/ml); ESI-MS: m/z:857,821; 卡氏法測定水分為6. 25%， TG-DTG:平臺失重約6. 30%。
實施例5甘草酸二銨2水合物的制備，稱取100g碳酸氫銨于1000ml反應瓶中， 加水1500ml使溶解，攪拌下逐漸加入520g 18 a-甘草酸，攪拌反應4h，加熱到6(TC， 攪拌30min，加入3000ml無水乙醇，加熱回流30min，活性炭脫色，過濾除炭，加異 丙醇1500ml和乙酸乙酯100ml，低溫冷卻，放置，待晶體析出完全，過濾，76。C左右干 燥4h，得類白色晶體18ci-甘草酸二銨2水合物436g，收率83%，易溶于水；熔點 148.3。C分解(未校正)；[a]D25 +26.5°(H20， l%w/v);紫外光譜入"^隨252nm (lg e 〉4， 0. 1MHC1); ESI-MS: m/z:857， 821;水分(卡氏法)4.18%， TG-DTG:平臺 容重約4. 09%%，這與樣品含有2個結晶水(理論值4. 04% )在誤差范圍內(見附圖4); 元素分析理論值C 56.49%， H8.13%， N3.14%;實測值C 56.38%， H8.16%， N3.05%。
實施例6甘草酸二銨1.5水合物的制備取18 a -甘草酸單銨60g于1000ml反應瓶 中，加8(^的乙醇水溶液300ml，加熱使溶解，攪拌下滴加氨水，控制pH值在6.8-8 之間，攪拌反應2小時，用乙酸溶液回調PH在5.4^6.2之間，升溫回流30min，活性 炭脫色，過濾除炭，濾液加入異丙醇150ml，冷卻，過夜，有白色晶體析出，過濾，80
9。C左右真空干燥4h，得18 a -甘草酸二銨結晶1. 5水合物47. 3g，產物易溶于水，熔點 152。C分解(未校正)，[a]D25 +26.1°(H20， l%w/v);紫外光譜入H2Umax252nm (lge 〉4); ESI-MS: m/z:857,821;卡氏法測定水分為3.16%， TG-DTG:平臺失重約3.11 %，這與樣品含有1.5個結晶水的結果(理論值3.06%)在誤差范圍內(見附圖5)。 元素分析理論值C 57.06%， H8.10%， N3.17%;實測值C 56.92%， H8.19%， N3.05%。
實施例7依實施例6方法以i8 e -甘草酸單銨為反應起始物制備的is e -甘草酸
二銨1.5水合物，為類白色粉末，熔點151°C分解(未校正)；紫外光譜A ^^^57nm (lge〉4); ESI-MS: m/z:857, 821，卡氏法測定水分為3.20%, TG-DTG:平臺失重 約2.99% (見附圖6)，元素分析理論值C 57.06%， H8.10%， N3.17%; 實測值 C 56.95%， H8.22%， N3.07%。
實施例8甘草酸二銨1水合物的制備，稱取5g碳酸氫銨于250ml反應瓶中，加 水70ml使溶解，攪拌下逐漸加入26gl8a-甘草酸，攪拌反應2h，加熱到6(TC，攪拌 30min，加入120ml無水乙醇，加熱回流30min，活性炭脫色，過濾除炭，加異丙醇100ml 和丙酮20ml,冷卻，5'C以下放置過夜，有類白色晶體析出，過濾，IO(TC左右真空干燥 4h，得類白色晶體18a-甘草酸二銨2水合物18.6g，收率72%，易溶于水；熔點152 °C分解(未校正)；[a]D25 +27.0°(H2O， l%w/v);紫外光譜入H2°max252nm (lge〉4， 0. 1MHC1); ESI-MS: m/z:857，821;水分(卡氏法)2.01%， TG-DTG:平臺失重約 2. 16%%，這與樣品含有l個結晶水(理論值2.06%)在誤差范圍內；元素分析理 論值C 57.65%， H8.06%， N3.20%;實測值C 57.52%， H8.23%， N3.08%。
實施例9甘草酸二銨2.5水合物的制備或者方法D:將方法A或者方法B或者 方法C結晶后未干燥的濕品或其方法A或B或者方法C的最終產物，加水溶解，將其 冷凍到一70 一30°C，真空冷凍干燥，得甘草酸二銨水合物。將所得固體加水使溶解， 置于凍干機中，冷凍3 6個小時，使溫度達到-35 -65。C，使機內真空度為6 30Pa， 低溫真空干燥20 28小時，將溫度升至20-3(TC左右，真空干燥3 6小時，得類白色 粉末，易溶于水，紫外光譜A^m狀252nm (lg e >4); ， ESI-MS: m/z:857，821;卡 氏法測定水分為5.07%， TG-DTG: 150°0前平臺失重約4.69%，這與樣品含有2.5個結 晶水的結果在誤差范圍內；元素分析理論值C 55.92%， H8.16%， N3.11% ;實測 值C 56.05%， H8.04%， N3.19%。
實施例IO取甘草酸二銨2水合物10Kg (按干品計)，加葡萄糖或甘露醇或木糖醇 200 2000g，加新鮮的注射用水400 600L攪拌使溶解，用藥學上可接受的酸或堿調節 pH為4.0 6.5，加活性碳0.01 0.5% (W/V)攪拌15 45min，過濾，用0.22微米微孔濾 膜過濾，按20mg/瓶、50mg/瓶或100mg/瓶或150mg/瓶或200mg/瓶(以主藥計)分裝， 置于凍干機中，冷凍3 6個小時，使溫度達到-40 -55。C，使機內真空度為5 20Pa， -20°(:真空干燥30小時，將溫度升至3(TC左右，真空干燥6小時，壓塞，得成品。
實施例ll取甘草酸二銨水合物20g (按干品計)，加甘露醇5g，力fJ40-6(TC注射用 水1200ml攪拌使溶解，用lM的L-谷氨酸或氫氧化鈉調節pH為4.5 7.5，加活性碳0.01 0.5% (W/V)攪拌30min，過濾，測定中間體含量，用0.22微米微孔濾膜過濾或者采用 截留相對分子質量1000-8000的超濾膜過濾，按25、 50mg/瓶或100mg/瓶或200mg/瓶(按 無水物計)分裝，真空冷凍干燥，壓塞，得成品。
實施例ll取無菌的甘草酸二銨水合物25Kg(按干品計)，以無菌分裝工藝按25mg/ 瓶、50mg/瓶或100mg/瓶或150mg/瓶分裝，加塞、壓塞，軋鋁蓋得成品。
實施例12甘草酸二銨水合物(按干品計)50 g，加鹽酸半胱氨酸0.6g， EDTA二
10和L-精氨酸溶液調節pH為5.0 8.0，加活性碳 0.01% (W/V)攪拌15 45min,過濾，補水至5000ml，用0.22微米微孔濾膜過濾或者采 用截留相對分子質量1000-8000的超濾膜過濾，按10ml/瓶分裝，滅菌得成品。
實施例13甘草酸二銨水合物(按干品計)10g，加注射用水800ml攪拌使溶解，加 活性碳0.01% (W/V)攪拌15 45min,過濾，用0.22微米微孔濾膜過濾或者采用截留相 對分子質量1000-8000的超濾膜過濾，測定中間體含量，按2-5ml/瓶分裝，冷凍干燥， 壓塞，得成品。
實施例14甘草酸二銨水合物大容量注射液的制備稱取葡萄糖500g加入注射用水 中，攪拌使溶解完全，加入配液量0.05%的活性炭，加熱10-30分鐘左右，放冷，經 砂濾棒過濾脫炭；將甘草酸二銨水合物(以甘草酸二銨計)10.1g用新鮮的注射用水溶 解完全后，與上述濾液混合均勻，甘氨酸10g，加鹽酸L-半胱氨酸lg， ￡01八二鈉0.28， 加注射用水至5000ml，用lM鹽酸溶液調節pH值在4.2-5.3的范圍內，加配液量0.05%的 活性炭，加熱攪拌10-30分鐘左右，過濾脫炭，再經0.22um微孔濾膜精濾或者采用截 留相對分子質量1000-8000的超濾膜過濾，經半成品化驗，待其含量、pH值和澄明度合 格后，灌封于50ml或100ml或200ml的玻璃瓶中，滅菌，成品檢查，包裝即得。
實施例15甘草酸二銨水合物氯化鈉輸液的制備將甘草酸二銨水合物(按無水 物計)10g、氯化鈉85g、焦亞硫酸鈉l.lg、 ￡01八二鈉0.28，加入注射用水中，攪拌使 溶解完全，用lM的枸櫞酸和枸櫞酸鈉溶液調節pH值在4.3-6.5的范圍內，加注射用水至 10000ml，加配液量0.05%的活性炭，加熱攪拌10-30分鐘左右，過濾脫炭，再經0.22um 微孔濾膜精濾或者采用截留相對分子質量1000-8000的超濾膜過濾，經半成品化驗，待 其含量、pH值和澄明度合格后，灌封于50ml或100ml或200ml的玻璃瓶中，滅菌，成 品檢查，包裝即得。
實施例16.甘草酸二銨水合物片劑(50mg/片)
處方甘草酸二銨3水合物 50g
微晶纖維素 130g
羧甲基淀粉鈉 20g
聚乙烯吡咯垸酮5% 適量
硬脂酸鎂 2g
將甘草酸二銨3水合物、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、過IOO目篩，用5%的聚乙 烯吡咯烷酮適量制軟材，過18—24目篩制粒，干燥，過14一20目篩整粒后，加微粉 硅膠、硬脂酸鎂混合，壓片。
實施例17甘草酸二銨3水合物膠囊(25mg/粒)
處方甘草酸二銨3水合物 25g
微晶纖維素 55g
乳糖 20g
膠化淀粉10% 適量
硬脂酸鎂 2g
將甘草酸二銨3水合物、微晶纖維素、乳糖過IOO目篩，用10%的膠化淀粉適量 制軟材，過18—24目篩制粒，干燥，過14一20目篩整粒后，加硬脂酸鎂混合，灌裝膠囊。
實施例18甘草酸二銨水合物顆粒包括乳甘草酸二銨4水合物或甘草酸二銨3 水合物或甘草酸二銨2水合物或甘草酸二銨1. 5水合物或甘草酸二銨1水合物等顆粒 (25mg/包)
處方甘草酸二銨水合物 25g (以無水物計)聚乙烯吡咯烷酮5% 適量 將甘草酸二銨水合物、甘露醇、乳糖、食用香精過IOO目篩，用5%的聚乙烯吡咯 垸酮適量制軟材，過18—24目篩制粒，6(TC以下干燥，過14一20目篩整粒后，分包 裝。
實施例19甘草酸二銨2水合物的凝膠(25mg/支)
處方甘草酸二銨2水合物 25g
聚乙二醇6000 200g
聚乙二醇400 50g
甘油 5ml
卡波姆934 30g
卡波姆1342 2g
水 2800ml
將分別將卡波姆1342和卡波姆934用水分散，加入甘油、聚乙二醇6000、聚乙二 醇400、攪拌混合，加甘草酸二銨2水合物，加熱、攪拌至勻、用磷酸氫二鈉和磷酸二 氫鈉溶液調節pl^5.0 7.0左右，分裝即得。
實施例20 藥理學試驗如下
對D-GAIN致肝損傷小鼠的ALT和AST影響
取體重18-22g的昆明小鼠70只，雌雄各半，隨機分為7組，生理鹽水組(生理鹽 水，20ml/kg)、中毒對照組(生理鹽水，20ml/kg)、實施例l組(20mg/kg)、實施例2 組(20mg/kg)、實施例3組(40mg/kg)、實施例5組(20mg/kg)、實施例6組(20mg/kg)、 每組10只，均腹腔注射給藥，每天一次，連續給藥七天。本發明藥物均按干品折純計算， 于末次給藥lh后，除正常對照組外，其余各組腹腔注射10%0-氨基半乳糖鹽酸鹽
(800mg/kg)，禁食不禁水。注射10WD-氨基半乳糖鹽酸鹽(D-GAIN)后20h眼球后靜脈 叢采血，分離血清，按試劑盒檢測方法測定谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)， 給藥組與對照組相比給藥后經t檢驗差異均有顯著性，P〈0.05或P〈0.01。結果見表4。 表4本發明藥物對D-GAIN致肝損傷小鼠的ALT和AST影啊
組別動物數劑量(mg/kg)ALT(IU/L)AST加/L)
正常對照組10—29. 3±8. 657.8±21. 7
中毒對照組10—229. 2 ±52. 1202. 5±35. 4
實施例11020112. 4±24.6136. 1±21. 5
實施例21020124. 4± 15. 2142. 6± 13. 5
實施例3104081.7±16. 293. 7±16. 3
實施例51020103. 5±17. 9115. 3±16. 7
實施例61020107. 4± 14. 8126. 6± 18. 3
血清中的ALT和AST活性被廣泛用作臨床診斷肝臟炎癥的程度和判斷臨床療效的 敏感指標，本發明的實施例能夠顯著降低小鼠血清中ALT和AST活性，說明對肝細胞 具有保護作用，減輕或防止肝臟損傷，并減輕其壞死程度。按照本發明的精神得到isci-甘草酸二銨結晶水合物或ise-甘草酸二銨結晶水
合物的混合物是很容易實現的。譬如，按照方法B，若將18a-甘草酸或18e-甘草酸 或18 a -甘草酸單銨或18 e -甘草酸單銨混合物投入反應容器中，與碳酸氫銨進行反應， 最后的結果是，產物將為18 a -甘草酸二銨結晶水合物或18 e -甘草酸二銨結晶水合物 的混合物，這并與本發明的精神是一致的。
可以理解，從本專業角度，很多細節的變化是可能的，這并不因此限制本發明范 圍和精神，本發明并不限于上述實施例。
權利要求
1、抗肝炎藥物——甘草酸衍生物，其特征在于甘草酸衍生物為18α-甘草酸二銨水合物或18β-甘草酸二銨水合物，其分子式為C42H68N2O16·nH2O，n＝0.5～4.0之間的數字。
2、 根據權利要求1所述的甘草酸衍生物，其特征在于甘草酸衍生物為18a -甘草酸二銨4水合物或is e -甘草酸二銨4水合物。
3、 根據權利要求1所述的甘草酸衍生物，其特征在于甘草酸衍生物為18a -甘草酸二銨3水合物或18 0 -甘草酸二銨3水合物。
4、 根據權利要求1所述的甘草酸衍生物，其特征在于甘草酸衍生物為18a -甘草酸二銨2.5水合物或18 P -甘草酸二銨2.5水合物。
5、 根據權利要求1所述的甘草酸衍生物，其特征在于甘草酸衍生物為18a -甘草酸二銨2水合物或18 e -甘草酸二銨2水合物。
6、 根據權利要求1所述的甘草酸衍生物，其特征在于甘草酸衍生物為18a -甘草酸二銨1.5水合物或18 e -甘草酸二銨1.5水合物
7、 根據權利要求1所述的甘草酸衍生物，其特征在于甘草酸衍生物為18a -甘草酸二銨1水合物或18 e -甘草酸二銨1水合物。
8、 甘草酸衍生物——甘草酸二銨水合物制備方法，其特征在于制備方法包括方法A:將18 a -甘草酸或18 e -甘草酸或18 a -甘草酸單銨或18 P -甘草酸單銨于反應容器中，加水，攪拌下通氨氣或加氨水，使溶解，攪拌反應0.2-10小時，用酸控制反應液的pH值在5.0-6.2之間，加入低分子醇C1-C5如甲醇、乙醇、異丙醇，低級(C3-C6)酮，如丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯，低取代鹵代烴(C1-C6)，包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿，低級醚(C1-C6)，包括乙醚、甲乙醚，丁醚，直鏈或支鏈烷烴(C5-C8)，環烷烴(C3-C6)，如環己烷，芳香烴，如苯，甲苯中的一種或幾種，進行結晶過濾，干燥，得18a-甘草酸二銨結晶水合物或18P-甘草酸二銨結晶水合物；用水、低分子醇Cl-C5，如甲醇、乙醇、異丙醇，低級(C3-C6)酮，如丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯，低取代鹵代烴(C1-C6)，包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿，低級醚(C1-C6)，包括乙醚、甲乙醚，丁醚，直鏈或支鏈烷烴(C5-C8)，環烷烴(C3-C6)，如環己垸，芳香烴，如苯，甲苯中的的一種或幾種重結晶，過濾，干燥，得18a-甘草酸二銨結晶水合物或18P-甘草酸二銨結晶水合物；^"'或者方法B:將18a-甘草酸或18e-甘草酸或18a-甘草酸單銨或18e-甘草酸單銨與碳酸氫銨在水溶液中， 攪拌，反應0.2-10小時，加入低分子醇Cl-C5，如甲醇、乙醇、異丙醇，低級(C3-C6)酮，如丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯的的一種或幾種進行結晶，或用水、低分子醇C1-C5，如甲醇、乙醇、異丙醇，低級(C3-C6)酮，如丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸T酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯，低取代鹵代烴(C1-C6)，包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿，低級醚(C1-C6)，包括乙醚、甲乙醚，丁醚，直鏈或支鏈烷烴(C5-C8)，環烷烴(C3-C6)，如環己垸，芳香烴，如苯，甲苯中的一種或幾種重結晶，過濾，干燥，得18a-甘草酸二銨結晶水合物或18P-甘草酸二銨結晶水合物；或者方法C:分別將甘草酸三銨鹽與氫氧化鈉或氫氧化鉀堿溶液，升溫回流7-8小時后，降至室溫后，分別用酸調pH=l-2，加入正丁醇，攪拌，靜置，分去水層，有機層用pH=l-2的酸水溶液洗滌，洗后的有機層通氨氣，攪拌，使pH值在6.5-8.5之間，再用酸回調pH在5.0.-6.2之間，分離水層，減壓蒸去正丁醇，得固體；將固體加到乙醇水溶液中，加熱回流，活性炭脫色，過濾，加異丙醇，低級(C3-C6)酮，如丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯低取代鹵代烴(C1-C6)，包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿，低級醚(C1-C6)，包括乙醚、甲乙醚，丁醚，直鏈或支鏈烷烴(C5-C8)，環烷烴(C3-C6)，如環己烷，芳香烴，如苯，甲苯中的一種或幾種，冷卻，靜置析晶，過濾，干燥，即得；或將其再用水、低分子醇Cl-C5，如甲醇、乙醇、異丙醇，低級(C3-C6)酮，如丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯低取代鹵代烴(Cl-C6)，包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿，低級醚(C1-C6)，包括乙醚、甲乙醚，丁醚，直鏈或支鏈烷烴(C5-C8)，環垸烴(C3-C6)，如環己烷，芳香烴，如苯，甲苯中的一種或幾種進行重結晶，得到高純度的18a-甘草酸二銨結晶水合物；或者方法D:將方法A或者方法B或者方法C結晶后未干燥的濕品或其方法A或B或者方法C的最終產物，加水溶解，將其冷凍到一70 一3(TC，真空冷凍干燥，得甘草酸二銨水合物。
9、 根據權利要求1， 8所述的甘草酸衍生物，其特征在于甘草酸二銨水合物的結晶或重結晶溶劑選自水、低分子醇C1-C5，包括甲醇、乙醇、異丙醇，低級(C3-C6)酮，包括丙酮、丁酮，低級(C2-C6)酯，如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯，低取代鹵代烴(C1-C6)，包括二氯甲垸、二氯乙烷、氯仿，低級醚(C1-C6)，包括乙醚、甲乙醚，丁醚，直鏈或支鏈烷烴(C5-C8)，環烷烴(C3-C6)，如環己烷，芳香烴，如苯，甲苯中的一種或幾種。
10、 根據權利要求9所述的甘草酸二銨水合物的結晶或重結晶溶劑，其特征在于選自水、乙醇、異丙醇，丙酮、丁酮、乙酸乙酯、二氯甲垸、氯仿、乙醚、苯中的一種或幾種。
11、 甘草酸衍生物用途，其特征在于甘草酸衍生物——甘草酸二銨水合物用于制備注射用凍干粉針制劑、或者無菌分裝粉針制劑、或者大輸液制劑、或者小水針注射劑，經腸道給藥制劑，包括片劑、膠囊、顆粒劑、溶液劑、經皮膚給藥的軟膏和凝膠。
12、 甘草酸衍生物的用途，其特征在于甘草酸衍生物——甘草酸二銨水合物適用于制備用于治療或預防肝炎的藥物或健康食品中的應用。
全文摘要
本發明涉及甘草酸衍生物及其制備和用途，該衍生物具有較好的水溶性、較好的存儲穩定性，適用于制備抗肝炎、肝硬化、肝損害和肝功能異常腎綜合癥出血熱、過敏性紫癜、尋常性銀屑病及濕疹皮炎等的治療或預防的藥物和保健食品中的應用。
文檔編號C07J63/00GK101633683SQ200810048600
公開日2010年1月27日 申請日期2008年7月26日 優先權日2008年7月26日
發明者力 劉 申請人:力 劉