愈創木內酯類倍半萜二聚體及其制備方法與應用的制作方法

專利名稱：：愈創木內酯類倍半萜二聚體及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及愈創木內酯類倍半萜二聚體及其制備方法與應用。
背景技術：
：很多植物中均含有具有抗癌活性的化合物，如從太平洋紫杉(短葉紅豆杉，7^o^ev^//fl)樹皮中提取出來的紫杉醇即是一種應用廣泛的抗癌藥物。同時很多植物中也含有具有抗炎活性的化合物。因此從植物提取物中尋找抗癌及抗炎藥物是目前癌癥及炎癥治療的研究熱點。奇蒿Jrfem/Wafl"oma/aS.Moore，又名南劉寄奴、六月霜、野馬蘭頭、苦婆菜等。《中國植物志》記載奇蒿為菊科春黃菊族蒿屬植物，本系我國有l種及l變種。其全草入藥，具有斂瘡消腫、破瘀通經的功效。主治跌打損傷、金瘡出血、風濕痹痛、燙傷等癥。我國南方等地尚用其泡茶，用以治療腸炎、痢疾、中暑等癥。據報道，奇蒿主要含黃酮類、香豆素類、揮發油類、倍半萜類以及芳香類等成分(江蘇新醫學院編.中藥大辭典.上海上海人民出版社，2006:1303;肖永慶等.藥學學報,1984,19(12):卯9;肖永慶等.植物學報,1986，28(3):307;JakupovicJ.etal,Phytochemistry.1987;26(10):2777.)。
發明內容本發明的目的是提供愈創木內酯類倍半萜二聚體及其制備方法。本發明所提供的愈創木內酯類倍半萜二聚體，其結構如式(I)所示式(I)°其中，&為氫、鹵素、甲基、乙基、羥基、垸氧基、巰基、氨基、羥代烷氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基或芐氧羰甲氧基；R2為氫、卣素、甲基、乙基、羥基、烷氧基、巰基、氨基、羥代烷氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基或芐氧羰甲氧基。所述Ri具體可為囪素、甲基、乙基、羥基、烷氧基、巰基、氨基、羥代垸氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基或芐氧羰甲氧基；所述R2具體可為乙酰氧基。所述A、R2可同時為氫、鹵素、甲基、乙基、羥基、烷氧基、巰基、氨基、羥代烷氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基或芐氧羰甲氧基。所述&具體可為氫，所述R2具體可為氫、鹵素、甲基、乙基、羥基、垸氧基、巰基、氨基、羥代烷氧基、羧代垸氧基、酰氧基、羧基或芐氧羰甲氧基。所述式(I)中，當Ri為羥基，R2為乙酰氧基時，其結構如式(II)所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>式(II)所述的式(I)中，當A為羥基，R2為羥基時，其結構如式(III)所示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>式(III)所述的式(I)中，當A為氫，R2為羥基時，其結構如式(IV)所示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>式(IV)本發明所提供的制備式(II)、式(III)或式(IV)所示化合物的方法，包括以下步驟1)用乙醇提取奇蒿全草，然后除去乙醇，收集提取物；所述提取可以采用回流提取；2)將所述提取物懸浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯進行萃取；3)將乙酸乙酯層進行硅膠柱層析，用氯仿和甲醇進行梯度洗脫，收集體禾只比為25:1的氯仿和甲醇混合液的洗脫組分；4)將所述步驟3)得到的組分進行硅膠柱層析，用石油醚和丙酮進行梯度f先脫，收集體積比為4:1的石油醚和丙酮混合液的洗脫組分；5)將所述步驟4)得到的組分用羥丙基葡聚糖凝膠進行純化，以體積比為i:l的氯仿-甲醇混合液作為洗脫液，收集洗脫組分；6)將所述步驟5)得到的組分用半制備型HPLC進行純化，儀器型號為Waters600半制備型高效液相色譜儀，W2487雙波長檢測器檢測，所用半制備柱型號為WatersPrepNova-PakHRC187.8X300mm，進行HPLC純化，收集保留時間為18.5min、19.6min及21min的洗脫峰，得到式(III)、式(IV)及式(II)所示化合物；所述HPLC純化中所用的流動相為體積比為52:48的甲醇-水混合液，所述流動相的流速為2ml/min。制備式(I)所述化合物的方法，為下述1)至10)中的任一種方法1)制備Ri為氯，R2為乙酰氧基的式(I)所述化合物的方法，是將式(II)所述的化合物與二氯亞砜進行反應得到式(I)中P4為氯,R2為乙酰氧基的化合物；2)制備Ri為巰基,R2為乙酰氧基的式(I)所述化合物的方法，是將式(II)所述的化合物與三甲基氯硅烷進行反應，將得到的反應產物再與硫脲進行反應，得到式(I)中Ri為巰基,R2為乙酰氧基的化合物；3)制備R4和R2皆為乙酰氧基的式(I)所述化合物的方法，是將式(II)所述的化合物與乙酰氯進行反應，得到式(I)中^和R2皆為乙酰氧基的化合物；4)制備&為琥珀酰氧基，R2為乙酰氧基的式(I)所述化合物的方法，是將式(II)所述的化合物與琥珀酸酐進行反應，得到式(I)中Ri為琥珀酰氧基，R2為乙酰氧基的化合物；5)制備&為芐氧羰甲氧基，R2為乙酰氧基的式(I)所示化合物的方法，是將式(II)所述的化合物與溴乙酸芐酯進行反應，得到式(I)中I^為芐氧羰甲氧基，R2為乙酰氧基的化合物；6)制備R,和R2皆為氯的式(I)所述化合物的方法，是將式(III)所述的化合物與二氯亞砜進行反應得到式(I)中A和R2皆為氯的化合物；7)制備F^和R2皆為巰基的式(I)所述化合物的方法，是將式(III)所述的化合物與三甲基氯硅垸進行反應，將得到的反應產物再與硫脲進行反應，得到式(I)中Rt和R2皆為巰基的化合物；8)制備A為氨基，R2為乙酰氧基的式(I)所述化合物的方法，是將式(II)所述的化合物與二氯亞砜進行反應，將得到的反應產物再與氨的甲醇溶液進行反應，得到式(I)中R,為氨基，R2為乙酰氧基的化合物；9)制備A為氫,R2為氯的式(I)所述化合物的方法，是將式(IV)所述的化合物與二氯亞砜進行反應，得到式(I)中A為氫,R2為氯的化合物；10)制備Ri為氫,R2為乙酰氧基的式(I)所述化合物的方法，是將式(W)所述的化合物與乙酰氯進行反應，得到式(I)中R4為氫，R2為乙酰氧基的化合物。其中，式(II)、式(III)及式(IV)所述化合物的制備方法包括以下步驟-1)用乙醇提取奇蒿全草，然后除去乙醇，收集提取物；所述提取可以采用回流提取；2)將所述提取物懸浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯進行萃取；3)將乙酸乙酯層進行硅膠柱層析，用氯仿和甲醇進行梯度洗脫，收集體積比為25:1的氯仿和甲醇混合液的洗脫組分；4)將所述步驟3)得到的組分進行硅膠柱層析，用石油醚和丙酮進行梯度洗脫，收集體積比為4:1的石油醚和丙酮混合液的洗脫組分；5)將所述步驟4)得到的組分用羥丙基葡聚糖凝膠進行純化，以體積比為1:1的氯仿-甲醇混合液作為洗脫液，收集洗脫組分；6)將所述步驟5)得到的組分用半制備型HPLC進行純化，儀器型號為Waters600半制備型高效液相色譜儀，W2487雙波長檢測器檢測，所用半制備柱型號為WatersPrepNova-PakHRC187.8X300mm，進行HPLC純化，收集保留時間為18.5min、19.6min及21min的洗脫峰，得到式(III)、式(IV)及式(II)所示化合物；所述HPLC純化中所用的流動相為體積比為52:48的甲醇-水混合液，所述流動相的流速為2ml/min。本發明的另一個目的是提供式(I)所示的愈創木內酯類倍半萜二聚體的用途。8本發明所提供的愈創木內酯類倍半萜二聚體的用途是式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備預防和/或治療腫瘤藥物及抗炎藥物中的應用。式(I)所示的愈創木內酯類倍半萜二聚體或其藥學上可接受的鹽，特別適合于制備預防和/或治療人結腸癌、肝癌、胃癌、肺癌和卵巢癌藥物以及抗炎藥物。所述預防和/或治療腫瘤藥物及抗炎藥物可通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學介導的方法導入機體如肌肉、皮內、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其他物質混合或包裹后導入機體。以式(I)所示的愈創木內酯類倍半萜二聚體或其藥學上可接受的鹽為活性成分的抗腫瘤藥物及抗炎藥物，需要的時候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學上可接受的載體。所述載體包括藥學領域常規的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。用愈創木內酯類倍半萜二聚體或其藥學上可接受的鹽制備的預防和/或治療腫瘤藥物和抗炎藥物可以制成口服、外用、注射劑等劑型，其中口服制劑包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑、酒劑、滴丸劑等；外用包括栓劑、搽劑、洗劑、膏劑、透皮帖劑；注射劑包括注射液、混懸液、凍干粉針等。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領域的常規方法制備。本發明從奇蒿植物中提取、分離出三種新的愈創木內酯類倍半萜二聚體類化合物(奇蒿二聚體A，結構如式(II)所示；奇蒿二聚體B，結構如式(III)所示；奇蒿二聚體C，結構如式(IV)所示)，并以此為基礎制備出多種愈創木內酯類倍半萜二聚體類化合物。本發明通過實驗證實愈創木內酯類倍半蔽二聚體類化合物具有對癌細胞的細胞毒活性，同時該類化合物對脂多糖(LPS)刺激的小鼠腹腔巨噬細胞COX-2活性有明顯的抑制作用，可以作為抗癌及抗炎藥物的活性成分。具體實施例方式實施例l、奇蒿二聚體A、奇蒿二聚體B及奇蒿二聚體C的提取將15kg的奇蒿全草粗粉，用95。/。乙醇回流提取3h，共提取3次。減壓回收溶齊U，得到固體浸膏4.52kg;將所述固體浸膏4kg懸浮于水中，用石油醚進行萃取，收集水層，用乙酸乙酯萃取該水層，收集乙酸乙酯層。將乙酸乙酯萃取物經硅膠柱層析，用100200目硅膠裝柱，柱床的長度為1250cm，柱的內徑為25cm，按照40ml/min的流速用如下三個梯度的氯仿和甲醇混合液依次進行梯度洗脫氯仿和甲醇的體積比為100:1的混合液1、氯仿和甲醇的體積比為50:1的混合液2，氯仿和甲醇的體積比為25:1的混合液3。每個梯度洗脫量為三倍硅膠柱床體積。收集氯仿-甲醇體積比為25:1時的洗脫組分。將上述收集的洗脫組分再進行硅膠柱層析，用200300目硅膠裝柱，柱床的長度為550cm，柱的內徑為13cm，按照40ml/min的流速用如下三個梯度的石油醚和丙酮混合液依次進行梯度洗脫石油醚和丙酮的體積比為15:l的混合液i、石油醚和丙酮的體積比為8:i的混合液2，石油醚和丙酮的體積比為4:l的混合液3。每個梯度洗脫量為三倍硅膠柱體積。收集石油醚-丙酮體積比為4:l時的洗脫組分；將此組分6(TC真空減壓濃縮，然后經羥丙基葡聚糖凝膠(sephadexLH-20)純化，以氯仿-甲醇(體積比為1:l)作為洗脫液；將純化后的濃縮液再經過半制備型HPLC分離純化，儀器型號為Waters600半制備型高效液相色譜儀，W2487雙波長檢測器檢測，所用半制備柱型號為WatersPrepNova-PakHRC187.8X300mm。以甲醇-水(體積比為52:48)作為流動相進行分離，流速為2ml/min。收集保留時間為18.5min、19.6min及21min的洗脫峰，得到式(in)、式(IV)及式(II)所示化合物，6(TC進行真空減壓濃縮，得到492mg奇蒿二聚體A(式(II))、86mg奇蒿二聚體B(式(III))及58mg奇蒿二聚體C(式(IV))。奇蒿二聚體A(ArtanomalideA)，結構式如式II所示，為白色無定形粉末，其熔點為198°C202°C，所用儀器為X4型顯微熔點測定儀(溫度計未校正)。結構確證+(calcdforC32H3708:549.24692);UV(CHCL3);252nm;IR(KBr)vmax3437(OH),2923，1765(Y-內酯)，1691(環外雙鍵)cm",1647,1617,1261,1240cm";iH-NMR(CDCl3,500MHz):S6.29(lH,d,J^5.5,H-2，)》6.19(lH，t,^1.0,H-3),S6.08(lH,d,J=3.0,H-13，),S5.81(lH，d,J=5.5，H-3，),55.36(lH,d,J=3.0,H-13，),S4.78(lH,dt,J=2.5;11.0;11.0,H-8),S4.06(lH,t，J=10.0，H-6，),54.02(lH,dt,J=10.0;11.0,H-6),S3.26(lH,d,J=10.0，H-5),52.86(lH,d，J=10.0,H-5，),S2.76(lH,m,H-7，),S2.68(lH,t,J=11.0;11.0，H-7),S2.52(lH,d，J=12.0,H-13),S2.47(m,dd,J=11.0;13.5,H-9),S2.39(3H，s,H-15),S2.33(3H,s,H-14),S2.31(lH,dd,J=5.0;13.5,H-9),52.04(lH,d，J=12.0,H-13),S2.01(3H,s,H-2，，)，S1.74(2H,q,J=7.0,H-9，)，S1.56(2H,q,H-8，)，51.48(3H，s,H-14，)，51.45(3H,s,H-15，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):S194.8(C-2),5178.7(C-12)，S170.2(C-4),S169.6(C-12，),S169.3(C-l"),S143.9(C-10),5140.1(C-ir),5138.5(C-2'),8136.1(C-3),5134.9(C-3，),3134.0(C-1),S119.2(C-13，),S80.1(C-6)，S78.0(C-6，),572.8(C隱10，),S68.0(C-8),S66.6(C-5，),S63.2(C-1，)，S61.9(C-11)，S59.4(C-7),S58.2(C-4，)，S52.0(C-5)，S44.4(C-9)，S43.3(C-7，),539.7(C-13),S37.0(C-9，)，S23.7(C-15，),S23.0(C-8，),S21.5(C匿2，，)，S20.5(C-15),S20.2(C-14),S17.O(C-14，)。奇蒿二聚體B(ArtanomalideB)，結構式如式III所示，為白色無定形粉末，其熔點為196°C20rC，所用儀器為X4型顯微熔點測定儀(溫度計未校正)。結構確證+(calcdforC30H35O7:507.23773);UV(CHCL3)、収251nm;IR(KBr)vmax3432(OH),2918,1762(y-內酯)，1684(環外雙鍵)。111-1,1636,1622,1252，1241cm";iH-NMR(CDCl3,500固z):S6.24(lH,d,卜5.0,H-2，),S6.17(lH,t,hl.0,H-3),S6.12(lH,d,J=3.5,H-13，),S5.85(lH,d,J=5.0,H-3，),S5.32(lH,d,J=3.5,H-13，),S4.72(lH,dt,J=2.5;10.5;10.5,H-8),54.08(lH,t,J=10.0,H-6，),54.04(lH,dt,J=10.0;10.5,H-6),S3.23(lH,d,J=10.0,H-5),52.84(lH,d,J=10.0,H-5，),S2.73(lH,m，H-7，),S2.64(lH,t,J=10.5;11.0,H-7),S2.55(lH,d,J=12.0,H-13),52.45(lH,dd,J=11.0;13.0,H-9),S2.42(3H,s,H-15),S2.31(3H,s,H-14),52.28(lH,dd，J=5.0;13.0,H-9),S2.06(lH,d,J=12.0,H-13),S1.78(2H,q,J=7.0,H-9，)，S1.56(2H,q,H-8'):S1.46(3H,s,H-14，)，51.43(3H,s,H-15，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):5193.9(C-2),5177.2(C-12),S170.2(C-4),S168.9(C-12，),S143.9(C畫10),5139.2(C-11，)，5138.7(C-2，),8135.6(C誦3),S134.9(C-3,),S134.2(C-1),S118.9(C-13，)，580.5(C-6),S78.2(C-6，),S72.6(C-10,),S67.6(C-8),S66.9(C-5，),S63.2(C-r),S61.9(C墨ll),S59.5(C陽7),S58,7(C陽4，),S52.0(C-5),S44.3(C-9),S43.1(C隱7，),S39.6(C-13),S37.3(C-9，)，S23.9(C-15，),S22.8(C-8，),S20.4(C-15),S20.2(C-14)，S16.8(C-14')。奇蒿二聚體C(ArtanomalideC)，結構式如式IV所示，為白色無定形粉末，其熔點為195°C198°C，所用儀器為X4型顯微熔點測定儀(溫度計未校正)。結構確證+(calcdforC3。H3506:491.24281);UV(CHCL3);ax252nm;IR(KBr)v薩3425(OH),2918,1762(^-內酯)，1696(環外雙鍵》111-1,1643,1622,1258，1237cm";iH隱NMR(CDCl3,500MHz):S6.26(lH,d,^5.5,H-2,),S6.17(lH，t,J-1.0,H-3),S6.06(lH,d,J=3.0，H-13，)，55.83(lH,d,J=5.5,H-3，),S5.34(lH,d,J=3.0,H-13，)，54.04(lH，t,J=10.5,H-6，),S4.02(lH，dt,J=10,5;11.0,H-6),S3.24(lH,d,J=10.5，H-5),S2.83(lH,d,J=10.5，H-5，),52,72(lH,m,H-7，)，S2.64(lH,t，J=U.0;11.0，H-7),S2.55(lH,d，J=12.0,H-13),S2.36(3H,s,H-15),52.32(3H,s，H-14),S2.04(lH,d,J=12.0，H-13),S1.92(2H,m,H-9),51.74(2H,q,J=7.0,H隱9，),S1.56(2H,q,H-8，)，S1.52(1H,m,H-8),S1.24(lH,m,H誦8),S1.48(3H,s,H-14，),S1.45(3H,s,"C-NMR(CDCl3，125MHz):S194.8(C-2),S178.7(C-12),5170.2(C-4),5169.6(C-12，),S143.9(C-10)，S140.1(C-ir)，6138.5(C-2，),S136.1(C-3),5134.9(C-3，),S134.0(C-l),S119.2(C-13，),580.1(C-6),S78.0(C誦6，),S72.8(C-10，)，S66.6(C-5，),S63.2(C-1，),561.9(C-11),S59.4(C-7),S58.2(C國4,)，S52.0(C-5)，S43.3(C-7，)，539.7(C隱13),S37.0(C匿9，),S34.5(C-9),S26.5(C-8),S23.7(C-15，),S23.0(C-8，),跳5(C-15)，520.2(C-14),S17.0(C-14')。上述圖譜結果表明所得化合物結構正確。實施例2、其他衍生物的制備以實施例1中得到的奇蒿二聚體A、B或C為反應物，進行各種衍生化反應，可以得到本發明的愈創木內酯類倍半萜二聚體化合物A的衍生物1、奇蒿二聚體A衍生化反應H-15，);衍生化2、奇蒿二聚體B衍生化反應衍生化<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>3、奇蒿二聚體C衍生化反應具體如下:1、奇蒿二聚體氯代物l(式(I)中Ri為氯，R2為乙酰氧基)的制備將實施例1中10mg的奇蒿二聚體A溶于5ml吡啶中，冰浴條件下滴加入0.5ml二氯亞砜，反應1小時，減壓除去溶劑，即得產物l。該氯代物l為白色粉末，其熔點為205t:208r;，所用儀器為X4型顯微熔點測定儀(溫度計未校正)。結構確證ESIMSm/z:567[M+H]+(C32H36C107).^-NMR(CDCl3,500廳z):S6.06(lH,t,J:1.5,H-3)，S3.14(lH,d,J-11.0,H-5),S4.13(1H,dt,J=l1.0;11.5，H-6),S2.82(lH,t,J=l1.5;11.5,H-7),4.96(lH,dt,J:2.5;11.5;11.5，H-8),S2.49(lH,dd,J=11.5;13.0，H-9),52.35(lH,dd，J=3.0;13.5,H-9),S2.46(lH,d,J=12.0，H-13),S2.12(lH,d,J=12.0，H-13)，S2.23(3H,s，H-14),S2.31(3H,s，H-15)，S6.21(lH,d,J=5.5,H-2，)，S5.75(lH，d,J^5.5,H-3,),52.76(lH,d，hl0.5,H-5，),54.02(lH,t,卜10.5,H-6，),S2.72(lH,m,H-7，),S1.52(2H,q,H-8，),S1.65(2H,q,J=7.0，H-9，),S6.04(lH,d,J=3.0,H-13，),S5.31(lH,d，J=3.0,H-13')，S1.42(3H,s，H國14'),51.40(3H,s,H-15，)，52.03(3H,s,H-2，，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):5132.5(C-l),5195.2(C-2),5134.2(C-3)，5172.1(C-4),550.8(C-5),S79.8(C-6),S57.6(C-7),49.5(C-8),542.1(C-9),5142.6(C-10),S60.8(C-11),13S178.2(C-12),S38.8(C-13),S19.8(C-14),S20.1(C-15),S62.9(C-1，)，S137.6(C-2，),S133.8(C-3，),S57.7(C-4，),S65.8(C-5，),S77.4(C-6，),S42.6(C-7，),S22.6(C-8，),S36.5(C-9，),S72.1(C-10，),S139.1(C-11，)，S169.2(C-12,),S118.6(C-13，),S16.8(C國14，),S23.3(C-15，)，5170.2(C隱l"),521.2(C-2");上述圖譜結果表明所得化合物結構正確。2、奇蒿二聚體巰化物2(式(I)中&為巰基，R2為乙酰氧基)的制備將實施例1中的100mg的奇蒿二聚體A溶于10ml吡啶中，室溫下加入三甲基氯硅垸20mg，TLC監測反應至原料奇蒿二聚體A完全消失，待反應結束后，減壓除去溶劑，收集殘余物；將上述殘余物溶于二甲基甲酰胺(DMF)中，加入硫脲，TLC監測反應至原料奇蒿二聚體A完全消失，反應結束后，加入NaOH溶液進行皂化反應，反應結束后重結晶得到產物2。該巰代物2為白色粉末，其熔點為185°C188°C，所用儀器為X4型顯微熔點測定儀(溫度計未校正)。結構確證ES歸m/z:565[M+H]+(C32H37S07).iH-NMR(CDCl3，500MHz):56.02(lH,t,卜1.5,H-3),S3.04(lH,d,^10.5,H-5),S4.05(1H，dt,J=10.5;11.5,H-6),52.74(lH,t,J=11.0;11.5,H-7),3.62(lH,dt,J=2.5;11.0;11.5,H-8),S2.58(lH,dd,J=11.5;13.0,H-9),52.32(lH,dd,J=3.0;13.5,H-9),S2.46(lH,d,J=12.0,H-13),S2.09(lH,d,J=12.0,H-13),52.21(3H,s,H-14),S2.26(3H，s,H-15),S6.17(lH,d,J=5.5,H-2，),S5.71(lH,d,J=5.5,H-3，),S2.71(lH,d,J=10.5,H-5，),53.92(lH,t,J=10.5，H-6，),52.69(lH,m,H-7，),Sl.48(2H,q,H-8，),S1.62(2H,q,;K7.0，H-9，)，S6.02(lH,d,J=3.0,H-13，)，S5.28(lH,cl,J=3.0，H-13，),51.36(3H,s，H-14，)，S1.34(3H,s,H-15，)，S2.03(3H,s，H-2，，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):S132.7(C-l),S195.1(C-2),5134.8(C-3),5171.6(C-4),S51.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>上述圖譜結果表明所得化合物結構正確。3、奇蒿二聚體乙酰氧化物3(式(I)中R4為乙酰氧基，R2為乙酰氧基)的制備將實施例1中50mg的奇蒿二聚體A溶于5ml吡啶中，室溫下滴加入1ml乙酰氯，TLC監測反應至原料完全消失，反應結束后，減壓除去溶劑，加入少量二氯甲垸溶解，有機層以5ml飽和NaHC03洗滌三次，二氯甲烷層以無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮至干，即得產物3。該乙酰氧化物3為白色粉末。結構確證ES歸m/z:591[M+H]+(C34H3909).LH-NMR(CDCl3,500薩z):S6.19(lH,t,J:1.5,H-3),S3.26(lH,d，J:10.5，H-5),S4.05(1H,dt,J=10.5;11.5，H-6),S2.74(lH，t，J=11.0;11.5,H-7),4.88(lH,dt，J=2.5;11.0;11.5,H-8),S2.48(lH,dd,J=11.5;13.0，H-9),52.29(lH,dd，J=3.0;13.5,H-9)，S2.59(lH,d,J=12.0,H-13),52.02(lH,d,J=12.0,H-13),52.31(3H,s，H-14),52.36(3H,s,H-15)，56.26(lH，d,J=5.5,H-2，),S5.56(lH，d，J=5.5,H-3，)，S2.62(lH,d,J=10.5,H-5，),S3.94(lH,t，J=10.5,H-6，),S2.62(lH,m,H-7，),51.62(2H,q,H-8，),S1.76(2H,q,J=7.0，H-9，),S6.02(lH，d,J=3.0,H-13,),S5.28(lH,d,J=3.0,H-13，),S1.32(3H,s,H-14，),S1.28(3H,s,H-15，),52.01(3H,s,H-2，，),S2.02(3H,s,H匿2，，，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):S134.2(C-l),5194.8(C-2),5135.8(C-3)，5170.2(C-4)，551.9(C-5)，580.3(C-6),S58.2(C-7)，70.2(C-8)，543.2(C-9),S143.2(C-10),S61.2(C-11),S176.2(C-12),540.3(C隱13),S20.2(C-14),S20.6(C-15),563.6(C-1，),5134.2(C-2,),5135.5(C-3，),S58.3(C-4，)，S66,4(C-5，)，S77.2(C-6，),S44.6(C-7，),523.6(C-8，),S38.2(C-9，),S72.4(C-10，),5138.6(C-ll，),S169.2(C-12，),S118.5(C-13，),S17.4(C-14，),S23.6(C-15，),S169.3(C-r，)，S22.5(C-2"),S169.1(C-1，，')，S22.2(C-2，，，)；上述圖譜結果表明所得化合物結構正確。4、奇蒿二聚體琥珀酰氧化物4(式(I)中R,為琥珀酰氧基，R2為乙酰氧基)的制備將實施例l中100mg的奇蒿二聚體A溶于10ml四氫呋喃(THF)中，室溫下加入25mg琥珀酸酐和5mg4-二甲氨基吡啶(DMAP)，TLC監測反應至原料奇蒿二聚體A完全消失，反應結束后，減壓除去溶劑，柱層析分離(洗脫劑為體積比為100:3的二氯甲烷與甲醇的混合液)，即得產物4。該琥珀酰氧化物4為白色粉末。結構確證ES謹m/z:649[M+H]+(C36H410).iH-NMR(CDCL3，500顧z):S6.13(lH,t,》1.5,H陽3),S3.22(lH,d,河0.5，H-5),S4.02(1H,dt,J=l1.0;11.0,H-6)，52.82(lH,t，J=l1,0;11.0,H-7),4.94(lH,dt,J=2.5;11.0;11.5,H-8),S2.33(lH,dd,J=11.5;13.0,H-9),S2.24(lH,dd,J=3.0;13.5,H-9),52.46(lH,d,J=12.0,H-13),S2.06(lH,d，J=12.0,H-13),52.24(3H,s,H-14),S2.31(3H,s,H-15)，S6.21(lH，d,J=5.5,H-2，),S5.32(lH，d,J=5.5,H-3，)，S2.52(lH,d,J=10.5，H-5，),S3.82(lH，t,J=10.5,H-6，),32.54(lH，m,H-7，)，Sl.54(2H，q，H國8,),M.68(2H，q,卜7.0,H-9，)，S6.02(lH,d,卜3.0，H-13，),55.28(lH，d，J:3.0,H-13，),S1.32(3H,s,H匿14，),51.28(3H,s,H-15，),52.52(2H,m,H-2，，),52.62(2H,m,H陽3'，),S2.04(3H，16s,H-2，")；13C-NMR(CDCL3,125MHz):S134.2(C-l),S194.8(C-2)，5135.8(C-3)，S170.2(C-4),S519(C-5),S80.3(C-6)，857.6(C-7),68.5(C-8),S43.8(C-9),S143.2(C-10),561.2(C-11),S176.2(C國12),S40.3(C-13),S20.2(C-14),520.6(C匿15)，S63.6(C-1，),S134.2(C-2，),5135.5(C-3，)，S58.3(C-4，),S66.4(C-5，)，S77.2(C-6，),S44.6(C-7，),S23.6(C匿8，),S38.2(C-9，),S72.4(C-10，),S138.6(C陽ll，),S169.2(C-12，),S118.5(C-13，)，517.4(C-14，)，S23.6(C-15，),S172.8(C-r，),529.2(C-2"),S31.5(C-3"),S174.5(C-4"),S169.1(C陽1，")，S22.2(C-2"，)；上述圖譜結果表明所得化合物結構正確。5、奇蒿二聚體芐氧羰甲氧基衍生物5(式(I)中&為芐氧羰甲氧基，仗2為乙酰氧基)的制備將實施例1中100mg的奇蒿二聚體A溶于10mlDMF中，0°〇下加入15mgNaH，反應15min之后，加入60mg溴乙酸節酯(BrCH2COOCH2C6H5)，升溫至5(TC反應，TLC監測反應至原料奇蒿二聚體A完全消失，反應結束后，減壓除去溶劑，即得產物5。該芐氧羰甲氧基衍生物5為白色粉末。結構確證ESIMSm/z:697[M+H]+(C41H45O10).^-畫R(CDCL3,500MHz):S6.12(lH,t，片1.5,H匿3),53.35(lH,d,^10.5,H-5),54.02(1H,dt,J=10.5;11.0,H-6),52.74(lH，t，J=11.0;11.0,H-7)，4.24(lH,dt,J=2.5;11.0;11.0,H-8),52.2l(lH,dd,J=11.5;13.0,H-9),51.96(lH,dd，J=3.0;13.5,H-9),S2.62(lH,d,J=12.0,H-13),S2.14(lH,d，J=12.0,H-13),S2.29(3H,s,H-14),52.32(3H,s，H-15),S6.22(lH,d,J=5.5,H-2，),S5.53(lH,d,J=5.5,H-3，),S2.48(lH,d,J=10.5,H-5，),S3.82(lH,t,J=10.5,H-6，)，S2.62(lH,m，H-7，),Sl.64(2H,q，H-8，),S1.82(2H,q,J=7.0,H-9，)，S6.02(lH,d,J=3.0,H-13，),S5.34(lH,d,J=3.0,H-13,),S1.30(3H,s,H-14，),S1.25(3H,s，H-15，),S4.32(2H,d,J=13,0,H-l，，),55,32(2H,d,J=12.5,H-3，')，S7.35(5H,m,H-Ar)，S2.02(3H,s,H-2，")；13C-NMR(CDCL3,125MHz):5133.5(C-l),S194.2(C-2)，S135.2(C-3),S169.2(C-4),S524(C-5),S80.1(C-6),S57.2(C-7)，72.5(C-8),S42.3(C-9)，S142.8(C-10)，560.5(C-11),S175.4(C-12),539.4(C-13)，S20.5(C-14),S21.2(C-15),S62.9(C-1，),S133.7(C-2，)，S134.5(C-3，)，S57.6(C匿4，)，S65.4(C-5，),S75.2(C-6，)，S43.9(C國7，),S23.3(C-8，)，S36.2(C-9，),S73.4(C-10，),S136.2(C-ll，),S170.3(C-12，),S119.2(C-13，),518.6(C隱14'),S22.8(C-15，),S64.9(C-r，),S168.5(C-2"),S68.9(C-3，，)，S140.5(Ar-C-l),S126.6(Ar-C-2;6),S128.9(Ar-C-3;5),5127.4(Ar-C-4),S169.1(C-r，，),S22.6(C匿2，")；上述圖譜結果表明所得化合物結構正確。6、奇蒿二聚體雙氯代物6(式(I)中I^和R2皆為氯)的制備將實施例1中8mg的奇蒿二聚體B溶于5ml吡啶中，冰浴條件下滴加入0.5ml二氯亞砜，反應1小時，在減壓除去溶劑，即得產物6。該雙氯代物6為白色粉末，其熔點為207"21(TC，所用儀器為X4型顯微熔點測定儀(溫度計未校正)。結構確證ESIMSm/z:543[M+H]+(C30H33Cl2O5).iH-NMR(CDCl3,500顧z):S6.04(lH,t,J:1.5,H隱3),53.16(lH,d,卜11.0,H-5),S4.11(1H,dt，J=11.0;11.5,H-6),S2.81(lH,t,J=11.5;11.5，H-7),4.94(lH，dt,J=2.5;11.5;11.5,H-8),52.49(lH,dd,J=11.5;13.0,H-9)，S2.35(lH,dd，J=3.0;13.5,H-9),S2.42(lH,d,J=12.0,H-13),52.16(m,d,J=12.0,H-13),52.18(3H，s,H-14),S2.28(3H,s,H-15),S6.18(m,d,J=5.5,H-2,),S5.72(lH，d,J=5.5,H-3，),52.74(lH,d,J=10.5,H-5，),54.06(lH,t，J=10.5,H-6，)，52.76(lH，m,H-7，),Sl.50(2H，q,H-8,),51.64(2H,q,J:7.0,H-9，),S6.02(lH，d,J:3.0,H-13，),55.29(m,d,J:3.0,H-13，)，S1.42(3H,s,H-14，)，S1.37(3H,s,H隱15，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):S132.2(C-l),S194.9(C-2),5134.8(C-3),S172,2(C-4)，S50.189(C-5),S79.2(C-6),S57.4(C-7)，49.6(C-8),541.7(C-9),S141.5(C-10),S60.2(C-11),5178.4(C-12)，S38.6(C-13),S19.8(C-14),S20.4(C國15)，S62.7(C-l，),5137.8(C-2')，S133.6(C-3，),557.4(C-4，),S65.4(C-5，)，S77.2(C-6，),S42.7(C-7，),S22.9(C-8,),S39.2(C-9，),S58.4(C-10，),S138.7(C-11，)，S168.9(C-12，),S117.8(C-13，),S16.7(C-14，),523.2(C-15，)；上述圖譜結果表明所得化合物結構正確。7、奇蒿二聚體雙巰化物7(式(I)中Ri和R2皆為巰基)的制備將實施例1中的30mg的奇蒿二聚體B溶于10ml吡啶中，室溫下加入三甲基氯硅垸15mg，TLC監測反應至原料奇蒿二聚體B完全消失，待反應結束后，減壓除去溶劑，收集殘余物；將上述殘余物溶于二甲基甲酰胺(DMF)中，加入硫脲，TLC監測反應至原料奇蒿二聚體B完全消失，反應結束后，加入NaOH溶液進行皂化反應，反應結束后重結晶得到產物7。<image>imageseeoriginaldocumentpage19</image>該雙巰代物7為白色粉末，其熔點為181°C184°C，所用儀器為X4型顯微熔點測定儀(溫度計未校正)。結構確證ESIMSm/z:539[M+H]+(C30H35S2O5).iH-NMR(CDCl3,500顧z):S6.11(lH，t,J:1.5,H-3),S3.08(lH,d,卜10.5，H-5),S4.02(1H,dt,J=10.5;11.0,H-6),S2.68(lH,t,J=11.0;11.0,H-7),3.60(lH，dt,J=2.5;11.0;11.5,H-8),52.48(lH，dd,J=11.5;13.0，H-9)，S2.35(lH,dd,J=3.0;13.5,H-9),S2.42(lH,d,J=12.0,H-13),S2.02(lH,d,J=12.0,H-13),52.16(3H,s，H-14),S2.24(3H，s,H-15),56.13(lH,d,J=5.5,H-2'),S5.68(lH,d,h5.5,H-3，),52.67(lH，d,^10.5,H-5,),S3.87(lH,t,卜10.5,H-6，),S2.62(lH,m,H-7，),S1.49(2H,q,H-8，),51.74(2H,q,J=7.0，H-9，)，S6.01(lH,d,J=3.5,H-13，),55.24(lH,d,J=3.5,H-13，),S1.32(3H,s，H-14，)，51.30(3H,s，H-15，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):S132.2(C-l),S194.6(C-2),5132,7(C-3)，S170.4(C-4),551.2(C-5)，S79.6(C-6),S59.8(C-7)，35.3(C-8),S42.5(C-9),S140.6(C-10),S60.2(C-11),5175.8(C-12),S38.7(C-13),S17.6(C-14),521.2(C-15),S64.1(C-1，),S132.8(C-2，),S132.6(C-3，),S56.3(C-4，),564.6(C-5，),576.2(C-6，),545.8(C-7，),S22.8(C-8，),536.5(C-9，)，S50.2(C-10，),S135.6(C-11'),S168.4(C-12，),S115.6(C-13，),516.6(C-14，),S24.2(C國15，)；上述圖譜結果表明所得化合物結構正確。8、奇蒿二聚體氨化物8(式(I)中Ri為氨基，R2為乙酰氧基)的制備將實施例1中8mg的奇蒿二聚體A溶于5ml吡啶中，冰浴條件下滴加入0.5ml二氯亞砜，反應1小時，減壓除去溶劑，所得粗產品溶于無水二氯甲垸(DCM)中，加入lml氨的甲醇溶液(lM)，室溫攪拌TLC監測反應至氯代物消失，減壓濃縮即得產物8。該氨代物8為白色粉末。結構確證ESIMSm/z:548[M+H]+(C32H38N07).iH-NMR(CDCl3,500麗z):S6.14(lH,t,J:1.5,H-3),S3.12(lH,d,卜11.0,H-5),S4.06(1H,dt,J=l1.0;11.0，H-6),52.32(lH,t,J=l1,0;11.0，H-7),2.73(lH,dt,J=2.0;11.0;11.5,H-8),S2.34(lH，dd，J=11.5;13.5,H-9),S2.12(lH,dd,J=3.0;13.5,H-9)，S2.45(lH,d,J=12.0,H-13)，82.06(lH,d，J=12.0,H-13)，52.12(3H,s,H-14)，S2.28(3H，s,H-15)，S6.17(lH,d,J=5.5,H-2，),S5.62(lH，d,J=5.5,H-3，),S2.62(lH,d，J=10.5，H-5，),S3.81(lH,t,J=10.5,H-6，),S2.62(lH,m,H-7，),Sl.52(2H,q,H-8，),51.70(2H,q,J=7.0,H-9，)，S6.01(lH,d,J=3.5,H-13，),S5.22(lH,d,J=3.5，H-13，),S1.36(3H,s,H-14')，S1.28(3H,s,H-15');13C-NMR(CDCl3,125MHz):5131.2(C-l),S194.8(C-2),5132.4(C-3),5170,5(C-4),S51.4(C-5)，S78.2(C-6)，S42.3(C-7),46.2(C-8),S40.1(C-9),S143.6(C-10),S56.2(C-11),5176.2(C-12),S32.7(C-13),S17.4(C-14),S21.5(C扁15),S64.2(C-1，),5133.4(C-2，)，S132.6(C-3，),S56.6(C-4，),564.2(C-5，),S76.2(C扁6，),545.6(C-7，),S22.4(C-8，),S36.6(C-9，),S50.1(C-10，)，S135.2(C誦11，),5168.2(C誦12，),5115.4(C-13，),S16.7(C-14，),524.4(C-15，)；20上述圖譜結果表明所得化合物結構正確。9、奇蒿二聚體氯代物9(式(I)中R,為氫，R2為氯)的制備將實施例1中8mg的奇蒿二聚體C溶于5ml吡啶中，冰浴條件下滴加入0.5ml二氯亞砜，反應1小時，減壓除去溶劑，即得產物9。該氯代物9為白色粉末，其熔點為198°C202°C，所用儀器為X4型顯微熔點測定儀(溫度計未校正)。結構確證ESIMSm/z:509[M+H]+(C30H34ClO5).iH-NMR(CDCl3，500畫z):S6.18(lH,d，J^5.5，H-2，),S6.12(lH,t，M.0,H扁3),S6.02(lH,d，J=3.0,H-13，)，55.81(lH,d,J=5.5，H-3，),S5.31(lH,d，J=3.0,H-13，)，53.98(lH,t,J=11.0，H-6，),S3.95(lH，dt,J=11.0;11.0,H-6),S3.21(lH,d,J=10.5，H-5),S2.80(lH,d,J=10.5,H-5，),52.69(lH,m，H-7，),S2.62(lH,t,J=11.0;11.0,H-7),S2.51(lH,d,J=12.0,H-13),S2.32(3H,s,H-15)，S2.27(3H，s,H-14),52.02(lH,d,J=12.0，H-13),S1.89(2H，m,H-9),S1.68(2H,q，J=7.0,H-9，)，S1.52(2H,q，H-8,),S1.48(1H，m,H-8),S1.20(lH，m,H國8),S1.46(3H，s，H-14，),S1.65(3H,s:H-15，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):5194.2(C-2),S178.6(C-12),S170.3(C-4),S169.2(C-12，),S143.2(C-10),S140.3(C-ir),S138.2(C-2，),S135.8(C-3),S133.7(C-3，)，S133.8(C-l)，S119.2(C-13,),S80.5(C-6)，577.2(C-6，)，S66.3(C-5，),563.2(C-1，),S61.9(C-11)，S60.8(C-10，),359.4(C-7),S58.2(C匿4，),S52.0(C-5),543.3(C隱7，),S39.7(C-13),S39.6(C-9，),534.5(C隱9),527.2(C-15，),526.5(C-8),523.0(C-8，),S20.3(C-15),S20.2(C-14),517.2(C-14，)。上述圖譜結果表明所得化合物結構正確。10、奇蒿二聚體乙酰氧化物IO(式(I)中R!為氫，R2為乙酰氧基)的制備將實施例1中35mg的奇蒿二聚體C溶于5ml吡啶中，室溫下滴加入1ml乙酰氯，TLC監測反應至原料完全消失，反應結束后，減壓除去溶劑，加入少量二氯甲烷溶解，有機層以5ml飽和NaHC03洗滌三次，二氯甲烷層以無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮至干，即得產物IO。該乙酰氧化物IO為白色粉末。結構確證ESIMSm/z:533[M+H〗+(C32H3707).^-畫R(CDCl3,500固z):56.22(lH,d，片5.5,H扁2，),56.14(lH,t,J^1.0,H-3),S6.03(lH,d,J=3.5，H-13，)，S5.76(lH,d,J=5.5,H-3，),55.33(lH,d,J=3.5，H-13,)，53.95(lH,t,J=11.0,H-6，),S3.92(lH,dt，J=11.0;11.0,H-6),S3.18(lH,d，J=10.5,H-5),S2.82(lH,d,J=10.5,H-5，),S2.72(lH，m，H-7，),S2.64(lH,t,J=11.0;11.0,H-7),S2.52(lH,d,J=12.0,H-13),S2.32(3H,s,H-15),S2.25(3H,s,H國14),S2.06(lH,d,J-12.0,H-13),S2.05(3H,s,H-2，，),S1.88(2H,m,H-9),S1.70(2H,q,J=7.0,H-9，)，S1.52(2H,q,H-8，)，S1.46(1H，m,H畫8),S1.18(lH,m,H-8),S1.48(3H,s,H隱14,),S1.65(3H,s，H-15，)；13C-NMR(CDCl3,125MHz):5194.2(C-2),S178.6(C-12),5170.3(C-4),5169.2(C-12，),S169.0(C-r，),S143.2(C-10),5140.3(C-ir)，S138.2(C-2，),5135.8(C-3),S133.7(C-3，),S133.8(C-1),5119,2(C-13，),S81.2(C-10，),580.5(C-6),S77,2(C-6，),S66.3(C-5，),S61.9(C-11),S60.89),S26.5(C-8),S23.0(C-8，),S21.5(C國2"),S20.3(C-15),S20.2(C-14)，S20.2(C國15，),517.2(C-14，)。上述圖譜結果表明所得化合物結構正確。實施例3、愈創木內酯類倍半萜二聚體化合物抗癌活性1、實驗細胞人結腸癌細胞株HCT-8，人肝癌細胞株Bd7402，人胃癌細胞株BGQ23，人肺癌細胞株A549，人卵巢癌細胞株A2780。將上述細胞株分別培養于添加10%滅活新生小牛血清的RPMI1640完全培養液22中。培養液中添加100IU/mL青霉素和100嗎/mL鏈霉素及10mMHEPES，并置于37°C，5%(^02培養箱中培養。實驗用細胞均處于對數生長期。2、實驗藥物實施例1-2中制備的8種愈創木內酯類倍半萜二聚體化合物奇蒿二聚體A、奇蒿二聚體B、奇蒿二聚體氯代物l、奇蒿二聚體巰化物2、奇蒿二聚體乙酰氧化物3、奇蒿二聚體琥珀酰氧化物4、奇蒿二聚體芐氧羰甲氧基衍生物5、奇蒿二聚體雙巰化物7;并以紫杉醇(北京協和藥廠，生產批號060103)作為陽性對照藥物。以培養基配制濃度為10nM-lOOpM的藥物溶液。3、細胞抗癌細胞活性測定采用MTT法進行測定取對數生長期細胞，用胰蛋白酶-EDTA消化液消化后，配制成單細胞懸液，將細胞懸液接種于96孔板，每孔加100pl，HCT-8、Bel濯、BGC823、A549和A2780的接種密度分別為6X104/ml、6X104/ml、5X104/ml、1X105/ml、7X104/ml和5X104/ml，培養24小時后，按組距l:IO用培養液(即含l0%胎牛血清的1640培養基)稀釋8種愈創木內酯類倍半萜二聚體化合物和陽性對照藥物紫杉醇的藥物溶液，使每種藥物的濃度分別為100nM、10|iM、lpM、O.lpM、0.01^M，繼續培養72小時。然后，每孔加5(HilMTT，37。C孵育4小時后，棄培養基和MTT，每孔立即加200(ilDMSO溶解MTT甲簪顆粒，微型振蕩器振蕩混勻后，用酶標儀測定光密度(OD)值，參考波長為450nm，檢測波長為570nm，最后，根據下述公式計算藥物對腫瘤細胞的抑制率，并按照中效方程計算IC5o值抑制率(％)=(對照組平均OD值-給藥組平均OD值)/對照組平均OD值x100%(其中OD對照、OD實驗為已經扣除OD空自的實驗數值)。4、實驗結果實驗測得的各種藥物對5種癌細胞的ICso值如表1所示表1愈創木內酯類倍半萜二聚體化合物的細胞毒性試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>奇蒿二聚體B4,36.2>10>103.2奇蒿二聚體氯代物131.24.20.4奇蒿二聚體巰化物27.41.8〉10>103.4奇蒿二聚體乙酰氧化物32.52.44.2>104.6奇蒿二聚體琥珀酰氧化物49.5>106.21.20.5奇蒿二聚體芐氧羰甲氧基衍生物51.26.4〉103.8〉10奇蒿二聚體雙巰化物7>104.6〉10>106.2表1數據表明，本發明8種愈創木內酯類倍半萜二聚體化合物均具有不同程度的抗癌細胞的細胞毒活性，其中奇蒿二聚體A對結腸癌、肝癌及卵巢癌活性較好；奇蒿二聚體B對結腸癌及卵巢癌活性較好；奇蒿二聚體氯代物1對五種癌細胞抑制率都較好；奇蒿二聚體巰化物2對肝癌及卵巢癌活性較好；奇蒿二聚體乙酰氧化物3對除肺癌外其余四種癌細胞抑制率較好；奇蒿二聚體琥珀酰氧化物4對肺癌和卵巢癌活性較好而奇蒿二聚體芐氧羰甲氧基衍生物5對結腸和肺癌細胞抑制率較好；奇蒿二聚體雙巰化物7對肝癌及卵巢癌活性較好。由此可以得出結論即本發明8種愈創木內酯類倍半萜二聚體化合物均具有不同程度的抗癌細胞的細胞毒活性，可以用于癌癥的治療。24實施例4、愈創木內酯類倍半萜二聚體化合物抗炎活性1.試劑與儀器實驗動物Cs7BL/6J小鼠，雄性，1618g，購于中國醫學科學院實驗動物中心。試劑東亞放免研究所PGE2檢測試劑盒(中國人民解放軍總醫院)；4%巰基乙醇酸鈉培養基；5%新生牛血清RPMI1640培養基；D-Hank's生理緩沖液。儀器離心機、細胞培養箱。2.實驗樣品及配制方法實施例1-2中制備的4種愈創木內酯類倍半萜二聚體化合物奇蒿二聚體A、奇蒿二聚體B、奇蒿二聚體氯代物1、奇蒿二聚體巰化物2;以塞來昔布(Celecoxib)作為陽性對照藥物，用DMSO配成0.1mol/L的儲備液，實驗時用PBS稀釋成10—5mol/L。3、細胞抗炎細胞活性測定每只C57BL/6J小鼠腹腔注射4%巰基乙醇酸鈉培養基lml，注射后第4天將小鼠斷頭處死，腹腔注射D-Hank，s生理緩沖液68ml，充分按摩后緩緩吸出腹腔中液體，再重復沖洗腹腔一次，合并細胞懸液。1000rpm離心5min，小心傾去上清，細胞用RPMI1640培養基重懸，將細胞濃度調整為lxl(^個/ml，接種于48孔(0.5ml/孔)細胞板中。37°C，5。/。C02貼壁培養2h。傾去培養基，用D-Hank，s生理緩沖液洗兩次，除去未貼壁細胞，每孔加入含有5%新生牛血清的RPMI1640培養基待用。用臺盼藍拒染法測定細胞活性，Giemsa染色法檢査所得細胞中巨噬細胞百分率應大于95%。將不同藥物加到上述48孔板中的小鼠腹腔巨噬細胞中，37°C，5。/。C02培養箱中培養細胞60min，再加入終濃度lmg/L脂多糖(LPS)，繼續培養細胞12h。培養結束，收集細胞上清液，使用東亞放免研究所PGE2檢測試劑盒測定細胞培養上清液中前列腺素E2(PGE2)的含量，用下列公式計算化合物對COX-2活性的抑制作用。其中Alps，At和Ae分別表示LPS組，待測化合物組和空白對照組細胞培養上清中PGE2的濃度，IRM表示抑制率。IR(%)=(Alps—At)/(Alps—Ac)x100%4、實驗結果實驗測得的各種藥物對小鼠腹腔巨噬細胞COX-2活性的影響如表2所示表2愈創木內酯類倍半萜二聚體化合物對小鼠腹腔巨噬細胞COX-2活性的影響組別劑量PGE2濃度(ng/105cell)抑制率(％)空白0.10±0.06LPS1fig/ml22.89士18.69奇嵩~■聚體Al(T5mol/L0.22±0.1099.5奇蒿一聚體B10-5mol/L0.48±0.1398.4奇蒿二聚體氯代物l10-5mol/L0.51±0.3198.2奇蒿二聚體巰代物2l(T5mol/L0.32±0.1496.4表2數據表明，本發明的4種愈創木內酯類倍半萜二聚體化合物在10—5mol/L濃度時，對LPS刺激的小鼠腹腔巨噬細胞COX-2活性均有明顯的抑制作用，因此該類化合物具有不同程度的抗炎活性。2權利要求1、結構如式(I)所示的化合物式(1)其中，R1為氫、鹵素、甲基、乙基、羥基、烷氧基、巰基、氨基、羥代烷氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基或芐氧羰甲氧基；R2為氫、鹵素、甲基、乙基、羥基、烷氧基、巰基、氨基、羥代烷氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基、芐氧羰甲氧基。2、根據權利要求1所述的化合物，其特征在于所述R,為羥基，所述R2為乙酰氧基。3、根據權利要求1所述的化合物，其特征在于所述&和R2皆為羥基。4、根據權利要求1所述的化合物，其特征在于所述Ri為氫，所述R2為羥基。5、一種制備權利要求2、3或4所述化合物的方法，包括以下步驟1)用乙醇提取奇蒿全草，然后除去乙醇，收集提取物；2)將所述提取物懸浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯進行萃取；3)將乙酸乙酯層進行硅膠柱層析，用氯仿和甲醇進行梯度洗脫，收集體積比為25:1的氯仿和甲醇混合液的洗脫組分；4)將所述步驟3)得到的組分進行硅膠柱層析，用石油醚和丙酮進行梯度洗脫，收集體積比為4:1的石油醚和丙酮混合液的洗脫組分；5)將所述步驟4)得到的組分用羥丙基葡聚糖凝膠進行純化，以體積比為1:1的氯仿-甲醇混合液作為洗脫液，收集洗脫組分；6)將所述步驟5)得到的組分用半制備型HPLC進行純化，得到權利要求2所述的化合物或權利要求3所述的化合物或權利要求4所述的化合物；所述HPLC純化中所用的流動相為體積比為52:48的甲醇-水混合液。6、制備權利要求1所述化合物的方法，為下述l)至IO)中的任一種方法1)制備Ri為氯,R2為乙酰氧基的權利要求l所述化合物的方法，是將權利要求2所述的化合物與二氯亞砜進行反應得到權利要求1中R4為氯，R2為乙酰氧基的化合物1;2)制備&為巰基，R2為乙酰氧基的權利要求l所述化合物的方法，是將權利要求2所述的化合物與三甲基氯硅烷進行反應，將得到的反應產物再與硫脲進行反應，得到權利要求1中&為巰基,R2為乙酰氧基的化合物2;3)制備R!為乙酰氧基，R2為乙酰氧基的權利要求l所述化合物的方法，是將權利要求2所述的化合物與乙酰氯進行反應，得到權利要求1中&為乙酰氧基，R2為乙酰氧基的化合物3;4)制備&為琥珀酰氧基，R2為乙酰氧基的權利要求l所述化合物的方法，是將權利要求2所述的化合物與琥珀酸酐進行反應，得到權利要求1中R,為琥珀酰氧基，R2為乙酰氧基的化合物4;5)制備R,為芐氧羰甲氧基，R2為乙酰氧基的權利要求l所述化合物的方法，是將權利要求2所述的化合物與溴乙酸芐酯進行反應，得到權利要求1中&為芐氧羰甲氧基，R2為乙酰氧基的化合物5;6)制備R^和R2皆為氯的的權利要求1所述化合物的方法，是將權利要求3所述的化合物與二氯亞砜進行反應，得到權利要求1中&和R2皆為氯的化合物6;7)制備&和R2皆為巰基的的權利要求1所述化合物的方法，是將權利要求3所述的化合物與三甲基氯硅烷進行反應，將得到的反應產物再與硫脲進行反應，得到權利要求1中R,和R2皆為巰基的化合物7;8)制備Ri為氨基，R2為乙酰氧基的權利要求l所述化合物的方法，是將權利要求2所述的化合物與二氯亞砜進行反應，將得到的反應產物再與氨的甲醇溶液進行反應，得到權利要求1中Ri為氨基,R2為乙酰氧基的化合物8;9)制備R,為氫,R2為氯的權利要求1所述化合物的方法，是將權利要求4所述的化合物與二氯亞砜進行反應，得到權利要求l中A為氫，R2為氯的化合物9;10)制備R^為氫,R2為乙酰氧基的權利要求1所述化合物的方法，是將權利要求4所述的化合物與乙酰氯進行反應，得到權利要求1中&為氫,R2為乙酰氧基的化合物10。7、根據權利要求6所述的方法，其特征在于所述的權利要求2或權利要求3或權利要求4所述化合物的制備方法包括以下步驟-1)用乙醇提取奇蒿全草，然后除去乙醇，收集提取物；2)將所述提取物懸浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯進行萃取；3)將乙酸乙酯層進行硅膠柱層析，用氯仿和甲醇進行梯度洗脫，收集體積比為25:1的氯仿和甲醇混合液的洗脫組分；4)將所述步驟3)得到的組分進行硅膠柱層析，用石油醚和丙酮進行梯度洗脫，收集體積比為4:1的石油醚和丙酮混合液的洗脫組分；5)將所述步驟4)得到的組分用羥丙基葡聚糖凝膠進行純化，以體積比為i:i的氯仿-甲醇混合液作為洗脫液，收集洗脫組分；6)將所述步驟5)得到的組分用半制備型HPLC進行純化，得到權利要求2或權利要求3或權利要求4所述的化合物；所述HPLC純化中所用的流動相為體積比為52:48的甲醇-水混合液。8、式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備預防和/或治療腫瘤藥物和/或抗炎藥物中的應用，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式(I)其中，R,為氫、鹵素、甲基、乙基、羥基、垸氧基、巰基、氨基、羥代垸氧基、羧代垸氧基、酰氧基、羧基、芐氧羰甲氧基；R2為氫、鹵素、甲基、乙基、羥基、烷氧基、巰基、氨基、羥代垸氧基、羧代烷氧基、酰氧基、羧基、芐氧羰甲氧基。9、一種預防和/或治療腫瘤和/或抗炎的藥物，它的有效成分為式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽。10、根據權利要求8所述的應用或根據權利要求9所述的藥物，其特征在于所述腫瘤為人結腸癌、人肝癌、人胃癌、人肺癌和人卵巢癌中的任一種。全文摘要本發明公開了愈創木內酯類倍半萜二聚體及其制備方法與應用。該愈創木內酯類倍半萜二聚體，結構如式(I)所示。本發明用乙醇提取奇蒿全草，然后除去乙醇，收集提取物，經分離純化，分別得到式(I)中R₁為羥基、R₂為乙酰氧基的化合物，R₁為氫、R₂為羥基的化合物，以及R₁和R₂皆為羥基的化合物。并在羥基化合物的基礎上進行一系列取代反應得到了多種愈創木內酯類倍半萜二聚體。體外抗癌及抗炎活性結果表明愈創木內酯類倍半萜二聚體具有良好的抗癌及抗炎活性。文檔編號C07D493/00GK101585841SQ20081011237公開日2009年11月25日申請日期2008年5月22日優先權日2008年5月22日發明者周思祥,勇姜,屠鵬飛,晶溫申請人:北京大學