專利名稱：一種水蔓菁苷的分離制備方法
技術領域：
本發明屬于中藥有效成分的提取純化方法，具體而言，涉及一種水蔓菁苷的分離制備方法。
背景技術：
水蔓菁為玄參科細葉婆婆納屬水蔓菁linariifolia Pall. Ex Link subsp. dilatata (Nakai et Kitagawa)Hong)的干燥全草，具有清熱解毒、利尿、止咳化痰的功效，臨床用于治療慢性氣管炎、肺化膿癥、咳吐膿血、急性腎炎、尿路感染等。近年來研究發現，水蔓菁黃酮類成分有明顯的鎮咳、體外促凝血和清除自由基活性。水蔓菁主要化學成分為木犀草素、芹黃素、木犀草素苷等黃酮類化合物，其中木犀草素苷以水蔓菁苷為主。目前尚未見水蔓菁苷工業提取方法的相關專利報道。
發明內容
本發明的目的是提供一種水蔓菁苷的分離制備方法，采用高效液相色譜法測定產品中水蔓菁苷含量達到98%以上。為實現上述目的，本發明采用以下技術方案
一種水蔓菁苷的分離制備方法，其特征在于包括以下步驟
(1)提取稱取水蔓菁原藥材，加入其重量6-10倍的水煎煮2-3次，每次l-2h，過濾，合并提取液，濃縮至浸膏；
(2)醇沉將浸膏加入乙醇使乙醇濃度達到60%，靜置，上清液濃縮，再加乙醇使乙醇濃達到80%，靜置，過濾，濾液回收乙醇，離心得到離心液；
(3)膜分離離心液通過截留分子量1000-3000中空纖維素膜分離設備分離，收集透過液，濃縮干燥得到粗品；
(4)高速逆流色譜純化以正己烷-正丁醇-甲醇-水為溶劑系統，以上相為固定相， 下相為流動相，將上述得到的粗品采用高速逆流色譜法進行分離純化，HPLC檢測，收集目標流分，濃縮，冷凍干燥得到水蔓菁苷。所述步驟(4)中的溶劑系統正己烷-正丁醇-甲醇-水體積比為(1-5) (3-5) (1-3) (4-8)。所述步驟(4)中的高速逆流色譜儀轉速為700-900r/min，流動相流速為 1. 5-2. 5ml/min。采用上述技術方案的有益效果是
(1)本發明采用膜分離技術過濾除雜，比傳統加熱蒸發濃縮節能；
(2)采用高速逆流色譜法進行分離純化，與以往技術手段相比，具有分離能力強、分離時間短、樣品損失小、產品質量高等優點。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明作進一步說明，但本發明并不限于以下實施例。實施例1
稱取水蔓菁原藥材，取^g，加入其重量6倍的水煎煮2次，每次2h，過濾，合并提取液，濃縮至浸膏，加入乙醇使乙醇濃度達到60%，靜置，上清液濃縮，再加乙醇使乙醇濃達到80%，靜置，過濾，濾液回收乙醇，離心得到離心液，通過截留分子量1000-3000中空纖維素膜分離設備分離，收集透過液，濃縮干燥得到粗品；取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例 1:3:1:4混合，靜置分層，上相為固定相，下相為流動相。將固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調節分離柱轉速為700r/min，控制流動相流速為1. 5ml/min，將粗品溶于流動相作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，HPLC檢測，收集目標流分，濃縮，冷凍干燥得到水蔓菁苷，含量為98. 6%。實施例2:
稱取水蔓菁原藥材，取^g，加入其重量6-10倍的水煎煮2-3次，每次l-2h，過濾，合并提取液，濃縮至浸膏，加入乙醇使乙醇濃度達到60%，靜置，上清液濃縮，再加乙醇使乙醇濃達到80%，靜置，過濾，濾液回收乙醇，離心得到離心液，通過截留分子量1000-3000中空纖維素膜分離設備分離，收集透過液，濃縮干燥得到粗品；取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例 5:5:3:8混合，靜置分層，上相為固定相，下相為流動相。將固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調節分離柱轉速為900r/min，控制流動相流速為2. 5ml/min，將粗品溶于流動相作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，HPLC檢測，收集目標流分，濃縮，冷凍干燥得到水蔓菁苷，含量為98. 4%。實施例3:
稱取水蔓菁原藥材，取3kg，加入其重量10倍的水煎煮3次，每次lh，過濾，合并提取液，濃縮至浸膏，加入乙醇使乙醇濃度達到60%，靜置，上清液濃縮，再加乙醇使乙醇濃達到80%，靜置，過濾，濾液回收乙醇，離心得到離心液，通過截留分子量1000-3000中空纖維素膜分離設備分離，收集透過液，濃縮干燥得到粗品；取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例 3:4:3:7混合，靜置分層，上相為固定相，下相為流動相。將固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調節分離柱轉速為800r/min，控制流動相流速為2ml/min，將粗品溶于流動相作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，HPLC檢測，收集目標流分，濃縮，冷凍干燥得到水蔓菁苷，含量為98. 5%。實施例4:
稱取水蔓菁原藥材，取3kg，加入其重量8倍的水煎煮2次，每次lh，過濾，合并提取液，濃縮至浸膏，加入乙醇使乙醇濃度達到60%，靜置，上清液濃縮，再加乙醇使乙醇濃達到80%，靜置，過濾，濾液回收乙醇，離心得到離心液，通過截留分子量1000-3000中空纖維素膜分離設備分離，收集透過液，濃縮干燥得到粗品；取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例 2:5:3:6混合，靜置分層，上相為固定相，下相為流動相。將固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調節分離柱轉速為750r/min，控制流動相流速為2ml/min，將粗品溶于流動相作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，HPLC檢測，收集目標流分，濃縮，冷凍干燥得到水蔓菁苷，含量為98. 5%。實施例5:
稱取水蔓菁原藥材，取10kg，加入其重量8倍的水煎煮2次，每次2h，過濾，合并提取液，濃縮至浸膏，加入乙醇使乙醇濃度達到60%，靜置，上清液濃縮，再加乙醇使乙醇濃達到80%，靜置，過濾，濾液回收乙醇，離心得到離心液，通過截留分子量1000-3000中空纖維素膜分離設備分離，收集透過液，濃縮干燥得到粗品；取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例5: 3:1:6混合，靜置分層，上相為固定相，下相為流動相。將固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調節分離柱轉速為800r/min，控制流動相流速為2. 5ml/min，將粗品溶于流動相作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，HPLC檢測，收集目標流分，濃縮，冷凍干燥得到水蔓菁苷，含量為98. 3%。
權利要求
1.一種水蔓菁苷的分離制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)提取稱取水蔓菁原藥材，加入其重量6-10倍的水煎煮2-3次，每次l-2h，過濾，合并提取液，濃縮至浸膏；(2)醇沉將浸膏加入乙醇使乙醇濃度達到60%，靜置，上清液濃縮，再加乙醇使乙醇濃達到80%，靜置，過濾，濾液回收乙醇，離心得到離心液；(3)膜分離離心液通過截留分子量1000-3000中空纖維素膜分離設備分離，收集透過液，濃縮干燥得到粗品；(4)高速逆流色譜純化以正己烷-正丁醇-甲醇-水為溶劑系統，以上相為固定相， 下相為流動相，將上述得到的粗品采用高速逆流色譜法進行分離純化，HPLC檢測，收集目標流分，濃縮，冷凍干燥得到水蔓菁苷。
2.如權利要求1所述的一種水蔓菁苷的分離制備方法，其特征在于所述步驟(4)中的溶劑系統正己烷-正丁醇-甲醇-水體積比為(1-5) (3-5) (1-3) (4-8)。
3.如權利要求1所述的一種水蔓菁苷的分離制備方法，其特征在于所述步驟(4)中的高速逆流色譜儀轉速為700-900r/min，流動相流速為1. 5-2. 5ml/min。
全文摘要
本發明涉及天然藥物的分離，具體地說是一種水蔓菁苷的分離制備方法，包括提取、醇沉、膜分離、高速逆流色譜純化等步驟進行分離制備得到水蔓菁苷。本發明產品純度高、制備量大，工藝穩定可靠。本發明特別適用于水蔓菁中分離制備大量的高純度的水蔓菁苷。
文檔編號C07H1/08GK102268051SQ201110226568
公開日2011年12月7日 申請日期2011年8月9日 優先權日2011年8月9日
發明者萬冬梅, 劉東鋒 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司