專利名稱：一種蓮葉桐堿的制備方法
技術領域：
本發明屬于天然藥物提取技術領域，涉及一種蓮葉桐堿的制備方法。
背景技術：
蓮葉桐喊是蓮葉桐科植物蓮葉桐nymphaeifolia(Presl. ) Kubitzki的主要活性成分之一。蓮葉桐具有行氣止痛、行血去瘀，用于治療氣滯腹痛、癌性疼痛、瘀血癥等，其主要化學成分為木脂素和生物堿類。蓮葉桐堿屬于阿樸啡類生物堿。CAS登錄號為172924-21-9，分子式為C18H11NO4,分子量為305. 29。蓮葉桐堿對P388、KB16、A_549和HT-29細胞株有顯著細胞毒活性，其ED5tl分別為O. 539μ g/mL、0. 640μ g/mL、0. 684 μ g/mL和0. 474μ g/mL。開發簡單實用、經濟可行的蓮葉桐堿的制備工藝，對確保該對照品的質量穩定和供應充足，確保蓮葉桐藥材、提取物、配方顆粒和含蓮葉桐制劑的質量得到有效控制和合理評價具有重要意義。 目前未見有關自天然植物蓮葉桐的莖葉中提取制備蓮葉桐堿的方法報道和專利申請。
發明內容
本發明的目的是提供一種從蓮葉桐莖葉中提取制備蓮葉桐堿的方法。為實現上述目的，本發明采用以下技術方案
一種蓮葉桐堿的制備方法，其特征在于包括以下步驟將蓮葉桐莖葉粉碎，用60-90%乙醇加熱回流提取，過濾，濾液合并濃縮得到提取物浸膏；將浸膏用O. 5%-1%的鹽酸水溶液超聲溶解分散，靜置，離心，取上清液調PH至8-9，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物，將萃取物用氧化鋁柱反復柱層析分離得到蓮葉桐堿淡黃色棱晶。所述乙醇加入量為藥材量的6-10倍，提取時間為1-3小時，過濾后，藥渣再提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮至無醇味。所述鹽酸水溶液加入量為浸膏量的2-4倍。所述氧化鋁為200-300目堿性或中性氧化鋁，將萃取物用甲醇溶解，然后按1:1-3拌入氧化鋁，自然烘干，得到拌樣氧化鋁，將拌樣氧化鋁裝于氧化鋁柱頂，體積比為1-5:1的環己烷-丙酮混合溶劑為洗脫劑，分段收集，薄層色譜跟蹤檢識，合并含有蓮葉桐堿的流分，減壓濃縮后再次上柱層析，合并蓮葉桐堿高濃度流分，自然析晶，得到淡黃色蓮葉桐堿結晶。本發明采用乙酸乙酯萃取，毒性小，且較高速逆流色譜法操作簡單，采用氧化鋁柱分離，環己烷-丙酮混合溶劑洗脫，工藝簡單易于放大生產。
具體實施例方式 下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。實施例I :將蓮葉桐莖葉粉碎，取IOkg用8倍量的85%乙醇溶液回流提取4次，每次I. 5小時，合并4次提取液，70°C條件下減壓回收試劑至無醇味，得到蓮葉桐提取浸膏I. 2kg。將浸膏加4000mL0. 8%鹽酸水溶液超聲分散溶解，靜置，離心，將上清液用lmol/L氫氧化鉀溶液調pH至8. 0，用乙酸乙酯萃取至水層無生物堿成分，乙酸乙酯萃取液回收試劑得到乙酸乙酯萃取物。將乙酸乙酯萃取物用少量甲醇溶解，拌入等量堿性氧化鋁(200-300目)，自然烘干得到拌樣氧化鋁，另取堿性氧化鋁干法裝柱，將拌樣氧化鋁裝于柱頂，以環己烷-丙酮(3:1)混合溶劑為洗脫劑，分段收集，每份500ml，硅膠薄層層析跟蹤檢識，收集合并含有蓮葉桐堿的流分，加壓濃縮再與堿性氧化鋁拌樣上柱，以環己烷-丙酮(3:1)為洗脫劑洗脫，收集高濃度蓮葉桐堿流分，減壓濃縮，自然析晶，得到淡黃色蓮葉桐堿棱晶。經HPLC檢測其含量大于95%。實施例2:
將蓮葉桐莖葉粉碎，取IOkg用6倍量的80%乙醇溶液回流提取2次，每次2. 5小時，合并2次提取液，70°C條件下減壓回收試劑至無醇味，得到蓮葉桐提取浸膏I. Ikgo將浸膏加2500mL0. 5%鹽酸水溶液超聲分散溶解，靜置，離心，將上清液用lmol/L氫氧化鉀溶液調pH至8. 5，用乙酸乙酯萃取至水層無生物堿成分，乙酸乙酯萃取液回收試劑得到乙酸乙酯萃取物。將乙酸乙酯萃取物用少量甲醇溶解，拌入3倍體積量的中性氧化鋁(200-300目)，自然烘干得到拌樣氧化鋁，另取中性氧化鋁干法裝柱，將拌樣氧化鋁裝于柱頂，以環己烷-丙酮(4:1)混合溶劑為洗脫劑，分段收集，每份500ml，硅膠薄層層析跟蹤檢識，收集合并含有蓮葉桐堿的流分，加壓濃縮再與中性氧化鋁拌樣上柱，以環己烷-丙酮(4:1)為洗脫劑洗脫，收集高濃度蓮葉桐堿流分，減壓濃縮，自然析晶，得到淡黃色蓮葉桐堿棱晶。經HPLC檢測其含量大于95%。實施例3:
將蓮葉桐莖葉粉碎，取20kg用8倍量的85%乙醇溶液回流提取4次，每次I. O小時，合并4次提取液，70°C條件下減壓回收試劑至無醇味，得到蓮葉桐提取浸膏2. 5kg。將浸膏加7000mLl. 0%鹽酸水溶液超聲分散溶解，靜置，離心，將上清液用lmol/L氫氧化鉀溶液調pH至9. 0，用乙酸乙酯萃取至水層無生物堿成分，乙酸乙酯萃取液回收試劑得到乙酸乙酯萃取物。將乙酸乙酯萃取物用少量甲醇溶解，拌入2倍體積量的中性氧化鋁(200-300目)，自然烘干得到拌樣氧化鋁，另取中性氧化鋁干法裝柱，將拌樣氧化鋁裝于柱頂，以環己烷-丙酮(1:1)混合溶劑為洗脫劑，分段收集，每份500ml，硅膠薄層層析跟蹤檢識，收集合并含有蓮葉桐堿的流分，加壓濃縮再與中性氧化鋁拌樣上柱，以環己烷-丙酮(I: I)為洗脫劑洗脫，收集高濃度蓮葉桐堿流分，減壓濃縮，自然析晶，得到淡黃色蓮葉桐堿棱晶。經HPLC檢測其含量大于95%。實施例4:
將蓮葉桐莖葉粉碎，取50kg用6倍量的90%乙醇溶液回流提取3次，每次3小時，合并3次提取液，70°C條件下減壓回收試劑至無醇味，得到蓮葉桐提取浸膏5kg。將浸膏加15L0. 6%鹽酸水溶液超聲分散溶解，靜置，離心，將上清液用lmol/L氫氧化鉀溶液調pH至
8.5，用乙酸乙酯萃取至水層無生物堿成分，乙酸乙酯萃取液回收試劑得到乙酸乙酯萃取物。將乙酸乙酯萃取物用少量甲醇溶解，拌入等量堿性氧化鋁(200-300目)，自然烘干得到拌樣氧化鋁，另取堿性氧化鋁干法裝柱，將拌樣氧化鋁裝于柱頂，以環己烷-丙酮(5:1)混合溶劑為洗脫劑，分段收集，每份500ml，硅膠薄層層析 跟蹤檢識，收集合并含有蓮葉桐堿的流分，加壓濃縮再與堿性氧化鋁拌樣上柱，以環己烷-丙酮(5:1)為洗脫劑洗脫，收集高濃度蓮葉桐堿流分，減壓濃縮，自然析晶，得到淡黃色蓮葉桐堿棱晶。經HPLC檢測其含量大于95%。
權利要求
1.一種蓮葉桐堿的制備方法，其特征在于包括以下步驟將蓮葉桐莖葉粉碎，用60-90%乙醇加熱回流提取，過濾，濾液合并濃縮得到提取物浸膏；將浸膏用O. 5%-1%的鹽酸水溶液超聲溶解分散，靜置，離心，取上清液調PH至8-9，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物，將萃取物用氧化鋁柱反復柱層析分離得到蓮葉桐堿淡黃色棱晶。
2.如權利要求I所述的一種蓮葉桐堿的制備方法，其特征在于所述乙醇加入量為藥材量的6-10倍，提取時間為1-3小時，過濾后，藥渣再提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮至無醇味。
3.如權利要求I所述的一種蓮葉桐堿的制備方法，其特征在于所述鹽酸水溶液加入量為浸骨量的2-4倍。
4.如權利要求I所述的一種蓮葉桐堿的制備方法，其特征在于所述氧化鋁為200-300目堿性或中性氧化鋁，將萃取物用甲醇溶解，然后按1:1-3拌入氧化鋁，自然烘干，得到拌樣氧化鋁，將拌樣氧化鋁裝于氧化鋁柱頂，體積比為1-5:1的環己烷-丙酮混合溶劑為洗脫齊IJ，分段收集，薄層色譜跟蹤檢識，合并含有蓮葉桐堿的流分，減壓濃縮后再次上柱層析，合并蓮葉桐堿高濃度流分，自然析晶，得到淡黃色蓮葉桐堿結晶。
全文摘要
本發明屬于天然藥物化學領域，涉及一種蓮葉桐堿的制備方法，方法包括以蓮葉桐莖皮為原料，粉碎，用乙醇回流提取得浸膏，將浸膏用鹽酸水溶液超聲溶解，靜置，取上清液調pH，然后用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物，萃取物采用氧化鋁柱層析分離得到蓮葉桐堿淡黃色棱晶。經高效液相色譜法測定其純度高于95%。
文檔編號C07D491/06GK102838608SQ20121035013
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月20日 優先權日2012年9月20日
發明者劉東鋒 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司