M2e合成肽豬流感病毒通用疫苗及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種M2e合成肽豬流感病毒通用疫苗，該疫苗用分支肽將A型流感病毒M2蛋白N端保守的23個氨基酸序列與通用型輔助性T細胞表位進行連接。本發明還公開了該疫苗在制備預防或治療豬流感的藥物中的應用。本發明的M2e合成肽豬流感病毒通用疫苗，不僅具有長效保護能力，而且具有廣泛保護作用，具有產業化優勢。
【專利說明】M2e合成肽豬流感病毒通用疫苗及其應用
【技術領域】[0001]本發明涉及生物工程【技術領域】，尤其涉及一種M2e合成肽豬流感病毒通用疫苗及其應用。
【背景技術】
[0002]豬流感(swine influenza, SI)是由隸屬于正黏病毒科的豬流感病毒(swineinfluenza virus, SIV)引起的豬急性高度傳染性疾病。主要臨床癥狀表現為體溫升高、食欲不振、呼吸困難、咳嗽、流產以及延遲出欄等，是目前危害全世界養豬業的重要疫病之一。豬流感曾多次在世界上引起大的爆發和流行，其中最嚴重的一次是1918年西班牙大流感，全球近2100萬人感染死亡。2009年4月甲型HlNl流感病毒在墨西哥爆發，迅速引發了 21世紀人類歷史上第一次流感大流行，給人類健康和社會發展造成巨大損失。抗原分析結果顯示，此次甲型HlNl流感病毒來源于北美的HlNl亞型豬流感病毒，能夠在人群中廣泛傳播并造成部分感染人員死亡。其它動物源性流感病毒，尤其是高致病性禽流感病毒同樣出現了感染人類的變異毒株，很可能會造成新的人類流感大流行(Garten等，Science, 2009,325:197-201),人類面臨流感病毒的威脅日益加劇。與此同時，近年來我國部分豬場也發生了豬流感的流行，給養殖業帶來很大的經濟損失。
[0003]目前預防流感發生與傳播的最有效方式是疫苗接種，而現有的流感疫苗主要針對病毒表面糖蛋白HA和NA產生特異性抗體。HA抗體能夠阻止病毒感染宿主細胞，中和病毒的感染力；NA抗體能夠抑制宿主細胞內新形成的病毒粒子的釋放，從而抑制病毒的傳播。但在選擇壓力下，HA蛋白平均每年出現3-4個氨基酸位點突變，每2-5年突變累積導致抗原漂移；而動物流感病毒和人流感病毒重組或動物流感病毒直接傳播給人類導致新的HA亞型的出現(如人類H5N1，H7N7及H9N2流感病毒)則會引發抗原轉換。HA抗原的頻繁變異使疫苗免疫產生的特異性抗體與其結合能力逐漸降低，導致疫苗失去有效性，嚴重限制了疫苗的長效保護能力(Prabhu等，J Virol, 2009,83 =2553-2562) 0因此，世界衛生組織會根據不斷更新的流感監測信息定期更改推薦疫苗株，而流感疫苗的研發和生產也隨之更新，這不但消耗大量的人力和物力，而且新疫苗生產開發還面臨時效性和有效性的問題。此外，流感病毒血清型眾多，現有疫苗在各個血清型之間的交叉保護力較差，這也給疫苗的研究和應用帶來了許多限制。因此，研制一種能夠應對流感病毒快速變異，并具有廣泛保護作用的通用疫苗具有重要的應用價值。
【發明內容】
[0004]本發明要解決的技術問題是提供一種豬流感病毒通用疫苗，該疫苗是由A型流感病毒的M2蛋白N端保守的23個氨基酸序列(簡稱M2e)與通用型輔助性Th表位通過分支肽結構連接而成，該疫苗不僅具有長效保護能力，而且具有廣泛保護作用。
[0005]此外，還需要提供一種上述豬流感病毒通用疫苗在制備預防或治療豬流感的藥物中的應用。[0006]為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現:
[0007]在本發明的一個方面，提供了一種豬流感病毒通用疫苗，所述疫苗具有Th-L_nM2e或nM2e-L-Th結構，其中，
[0008]Th為通用型輔助性T細胞表位，該通用型輔助性T細胞表位包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；
[0009]M2e為A型流感病毒M2蛋白N端保守的23個氨基酸序列，其氨基酸序列序列如SEQ IDNO:2所示，η為M2e的數量，η的值為2~8 ;
[0010]L為連接Th與M2e的連接肽，該連接肽為分支肽，選自下述結構式:
[0011]
【權利要求】
1.一種豬流感病毒通用疫苗，其特征在于，所述疫苗具有Th-L-nM2e或nM2e-L_Th結構，其中， Th為通用型輔助性T細胞表位，該通用型輔助性T細胞表位包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列； M2e為A型流感病毒M2蛋白N端保守的23個氨基酸序列，其氨基酸序列序列如SEQIDNO:2所示，η為M2e的數量，η的值為2~8 ; L為連接Th與M2e的連接肽，該連接肽為分支肽，選自下述結構式:
2.根據權利要求1所述的豬流感病毒通用疫苗，其特征在于，所述分支肽L具有下述結構式:
3.根據權利要求1或2所述的豬流感病毒通用疫苗，其特征在于，所述疫苗具有下述結構式:
4.根據權利要求3所述的豬流感病毒通用疫苗，其特征在于，所述M2e序列的游離末端具有乙酰化修飾。
5.根據權利要求3所述的豬流感病毒通用疫苗，其特征在于，所述通用型輔助性T細胞表位的游離末端具有酰胺化修飾。
6.一種疫苗組合物，其特征在于，包含:權利要求1所述的豬流感病毒通用疫苗、以及佐劑。
7.一種由權利要求6所述疫苗組合物免疫動物產生的特異性抗體。
8.一種由權利要求6所述疫苗組合物免疫動物產生的細胞因子。
9.權利要求1所述的豬流感病毒通用疫苗在制備預防或治療豬流感的藥物中的應用。
【文檔編號】C07K14/52GK103705917SQ201210375982
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2012年9月28日 優先權日:2012年9月28日
【發明者】童光志, 于海, 楊馥如, 馬繼紅, 周艷君 申請人:中國農業科學院上海獸醫研究所