一種采用陶瓷膜提取蠅蛆蛋白的方法
【專利摘要】本發明涉及陶瓷膜分離技術提取蠅蛆動物蛋白的方法，新鮮蠅蛆經過清洗、破碎、熱處理、酶解、滅酶等步驟后，用陶瓷膜分離技術對酶解液進行分離和純化，然后經濃縮以及噴霧干燥等步驟，在酶解液中，先經過粗過濾器去除大顆粒物質，再分別采用陶瓷微濾膜和超濾膜去其中的大分子膠體、油脂，并將分解后的蛋白質與多肽、氨基酸分離，濃縮液噴霧干燥后制得蛋白質粉，再用納濾濃縮、干燥后獲得多肽、氨基酸和小分子蛋白質的混合物。該方法可以有效地獲得蠅蛆蛋白質，并降低提取產品的苦味，提取效率高，同時可以分離出多肽、氨基酸小分子蛋白質。
【專利說明】一種采用陶瓷膜提取蠅蛆蛋白的方法
[0001]
【技術領域】
[0002]本發明涉及一種從蠅蛆中提取蛋白質的方法，特別是一種將酶水解和陶瓷膜法耦合提取蠅蛆動物蛋白的工藝，屬于生物技術酶解蠅蛆蛋白及膜分離【技術領域】。
[0003]
【背景技術】
[0004]隨著飼養業和飼料業的快速發展，我國對動物蛋白的需求量也在不斷增加。目前，我國動物蛋白質的主要來源是魚粉，國產魚粉滿足不了市場的需求，因此每年還需進口大量的魚粉。蠅蛆干基含粗蛋白54%飛5%，脂肪10%~14%，甲殼素8%~?Ο%和豐富的維生素、微量元素等，營養成分較全面，其氨基酸總量是魚粉的2.3倍，蛋氨酸、賴氨酸分別是魚粉的2.7倍和2.6倍。另外，蒼蠅的繁殖能力很強，據測算，一對蒼蠅4個月可繁殖2660億個蠅蛆，重量可達600噸以上。因此，蠅蛆蛋白質完全可以作為優質蛋白質飼料，替代魚粉。
[0005]據研究，蠅蛆蛋白粉具有抗菌、抗病毒、清除自由基等作用。利用蠅蛆開發蛋白粉及氨基酸產品，可以滿足需補充高品質蛋白或氨基酸的特定人群的需要，同時也可能成為重要的蛋白質來源。因而研究蠅蛆蛋白產品深加工技術、提高產品的附加值，是非常必要而且具有實際意義的工作。
[0006]中國專利CN1415757A公布了一種用酶水解法從蠅蛆中提取蛋白質和甲殼素及用甲殼素制備殼聚糖的方法，通過將蠅蛆清洗、膠磨破碎、酶解后得到濾液和濾渣，濾液經增香、濃縮、噴霧干燥后得到蛋白質，該方法提取的蛋白質收率高于60%。專利CN1377898A公布了一種提取甲殼素和生物蛋白粉的方法，通過加堿浸泡、過濾、加酸浸泡、水洗及烘干后得蛋白質粉。上述的方法提取的蛋白質雖然保留了其生物活性，但都是用濾布進行過濾，過濾精度不高，成品中含有很多無效雜質成分，因此純度不高，此外，都是對蠅蛆內的全部蛋白進行提取，但是并不是所有的蛋白都能被人體吸收，因此要開發一種純度高，并且能提取易被人體吸收的蛋白質的方法。
[0007]
【發明內容】
[0008]本發明的目的是提供一種蠅蛆蛋白的提取純化方法，需要提高提取蛋白的含量和純度、降低分離出蛋白質的苦味，且操作簡單、污染小、適用于大規模生產。主要是通過陶瓷膜微濾和超濾膜集成進行分離純化操作，采用的具體技術方案如下:
一種采用陶瓷膜提取蠅蛆蛋白的方法，包括如下步驟:
第一步、將蠅蛆洗凈、烘干、研磨成粉末；
第二步、將蠅蛆粉通過酶解法進行水解處理后，再滅酶；
第三步、將水解液通過粗過濾器進行過濾后，濾液由陶瓷微濾膜進行過濾；第四步、將微濾膜的透過液通過陶瓷超濾膜進行過濾；
第五步、將超濾膜的濃縮液進行干燥，得到蠅蛆蛋白；
第六步、將超濾膜的滲透液用納濾膜濃縮再干燥后，得到多肽、氨基酸和小分子蛋白質。
[0009]本發明的提取方法主要是通過酶解的作用將蠅蛆的蛋白質大分子水解，使其更易被分離、提純、而且更易人體吸收，另外，由于在水解過程中會產生一部分多肽和氨基酸，這一部分的水解物具有其特定的用途，而且這一部分的水解物具有較明顯的苦味，需要將其從蛋白質中分離，提高產物的品質，本發明通過納濾濃縮、干燥將其提取。水解工藝的參數包括有酶的類型、酶的用量、水解溫度和水解時間等，水解工藝的不同會影響到蛋白質的水解程度、苦味的有無和大小、微濾和超濾的工藝參數、產物的收率等。如果水解程度較高，會導致水解物的苦味較重、蛋白質過多的被水解而收率低；相反，如果水解程度不夠，則會導致蛋白質不能完全水解、較多的蛋白質會對微濾膜和超濾膜產生污染，而且水解的工藝參數與陶瓷膜的選擇也密切相關，需要確定最優的陶瓷膜類型以適應不同的水解工藝。較為優選的水解參數是:蠅蛆粉與水的質量比優選是1:20~1:30 ;水解使用的酶優選是胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶中的一種，水解溫度45~55°C，水解時間50~70分鐘。
[0010]第三步中，水解物首先需要通過粗過濾器去除其中的大顆粒雜質，這主要是蠅蛆皮，可以防止微濾膜的污染、提高產品純度，粗過濾器可以是常規的濾布、砂濾等。微濾膜進一步地對濾液進行過濾，除去水解液中的膠質、油脂等，可以提高產物的純度、減小產物中的油脂含量、灰分；由于陶瓷膜的表面性質親水性非常強，水解后物料中的帶有的油脂與陶瓷膜的表面有較強的排斥力，不易透過膜層、截留率高、而且不易在表面形成污染、易清洗、再生。經過大量試驗摸索，微濾膜的平均孔徑的優選范圍是200~500nm，如果孔徑太大，會導致產物的純度下降，灰分、油脂等雜質含量偏高，如果孔徑太小，會使過濾通量降低，而且會使一部分蛋白質被截留，導致產品得率降低。陶瓷微濾膜的材質優選是氧化鋁、氧化鋯、氧化鈦中的一種。在微濾過程中，跨膜壓差的選擇與微濾膜的平均孔徑、過濾通量、產物純度都有著相互影響的關系，如果跨膜`壓差過大，會導致一部分膠體受壓后穿過膜孔達到滲透側，影響產品純度，如果跨膜壓差過濾，則會導致過濾通量過小，經過大量試驗的摸索，優選的跨膜壓差范圍是0.05~0.3MPa。過濾過程中的pH的改變會與蛋白產生電荷相互作用，會影響到蛋白存在的形態，進而會影響到過濾通量和蛋白的截留率，優選的PH范圍是
6.0~7.0。膜面流速會影響到過濾通量，優選的范圍是I~5m/s。過濾溫度優選是40~500C，濃縮比優選是料液濃縮6~8倍。
[0011]第四步中，超濾的作用是實現水解蛋白的濃縮并與多肽、氨基酸的分離，由于多肽、氨基酸帶有一定的苦味，因此需要對超濾的工藝參數進行優化，如果超濾膜的平均孔徑過大，會導致蛋白質不能被完全截留，導致產物回收率的損失，如果超濾膜的平均過小，不僅會導致過濾通量太小，沒有工業實用價值，而且會導致多肽、氨基酸等組分被截留，會使回收蛋白產生苦味；超濾的跨膜壓差也是需要進行大量試驗摸索，超濾膜的平均孔徑優選是20~50nm，陶瓷超濾膜的材質選氧化鋯、氧化鈦中的一種。在超濾的過程中，跨膜壓差對產物的收率、含量也有影響，由于蛋白質是具有一定受壓性的大分子物質，如果跨膜壓差過大時，會有一部分大分子蛋白質透過膜孔進入到滲透側，如果跨膜壓差過小，過濾通量則會偏小，經過大量試驗摸索，跨膜壓差優選0.2~0.4MPa。過濾過程中的pH的改變會與蛋白產生電荷相互作用，會影響到蛋白質、多肽存在的形態，進而會影響到過濾通量和蛋白的截留率、多肽的透過率，優選的PH范圍是5.0~6.0。膜面流速會影響到過濾通量，由于超濾蛋白質過程中，陶瓷膜表面的污染主要是由吸附污染、膜孔阻塞污染為主，膜面流速對過濾通量的影響相對較小，因此過大的膜面流速對于通量的提高有限，優選的范圍是I~3m/s。過濾溫度優選是40~50°C，濃縮比優選是料液濃縮5~7倍。
[0012]作為本發明方法的優選，第五步中采用的是噴霧干燥，操作時間短，可以保證蛋白質在干燥的過程中不會被破壞。
[0013]作為本發明方法的優選，所述的第六步中，納濾工藝是:操作壓力為0.8~I MPa，循環流量為2.0~3.0m3 /h,濃縮倍數是7~10倍。
[0014]作為本發明方法的優選，所述的第六步中，干燥方法是真空干燥。
[0015]有益效果
本發明提供了一種陶瓷膜法提取蠅蛆水解蛋白的方法，采用酶解和膜分離耦合，操作簡單、提取率高，產品保留的活性成分更多，可有效去蠅蛆中的雜質、油脂，將可以將蛋白與產生苦味的多肽、氨基酸分離，工藝簡單，效率高，能耗低，適用于工業生產。
[0016]
【具體實施方式】
[0017]實施例1
取蠅蛆洗凈、烘干、研磨成粉末，用Ikg的蠅蛆粉與20kg水的混合均勻后，升溫至50°C，加入50g胰蛋白酶進行水解，水解60分鐘，料液進入滅酶裝置，升溫到75°C進行滅酶5分鐘。將水解液送入砂濾器進 行過濾，濾液送入陶瓷微濾膜進行微濾，陶瓷微濾膜的平均孔徑是500 nm,材質是氧化鋁，調節料液的pH至6.0左右，微濾過程跨膜壓差0.05Mpa,膜面流速I m/s，過濾溫度40°C，將料液濃縮6倍后，停止微濾。將微濾的滲透液送入超濾膜進行過濾，陶瓷超濾膜的材質采用氧化鋯，平均孔徑是20 nm,調節料液的pH至5.0，跨膜壓差0.2 MPa,膜面流速I m/s，過濾溫度40°C，將料液濃縮5倍后，停止超濾。將超濾的濃縮液進行噴霧干燥后，得到提取的蠅蛆蛋白，再將超濾的滲透液送入納濾膜濃縮，操作壓力為0.8MPa，循環流量為3.0m3/h，濃縮倍數是8倍，得到多肽類、氨基酸和小分子蛋白質的混合物。
[0018]實施例2
取蠅蛆洗凈、烘干、研磨成粉末，用Ikg的蠅蛆粉與20kg水的混合均勻后，升溫至50°C，加入50g胰蛋白酶進行水解，水解60分鐘，料液進入滅酶裝置，升溫到75°C進行滅酶5分鐘。將水解液送入砂濾器進行過濾，濾液送入陶瓷微濾膜進行微濾，陶瓷微濾膜的平均孔徑是200 nm,材質是氧化鋁，調節料液的pH至6.0左右，微濾過程跨膜壓差0.1Mpa,膜面流速lm/s，過濾溫度40°C，將料液濃縮6倍后，停止微濾。將微濾的滲透液送入超濾膜進行過濾，陶瓷超濾膜的材質采用氧化鋯，平均孔徑是20nm，調節料液的pH至5.0，跨膜壓差0.2MPa,膜面流速I m/s，過濾溫度40°C，將料液濃縮5倍后，停止超濾。將超濾的濃縮液進行噴霧干燥后，得到提取的蠅蛆蛋白，再將超濾的滲透液送入納濾膜濃縮，操作壓力為1.0 MPa,循環流量為2.0m3/h，濃縮倍數是7倍，得到多肽類、氨基酸和小分子蛋白質的混合物。
[0019]實施例3取蠅蛆洗凈、烘干、研磨成粉末，用Ikg的蠅蛆粉與30kg水的混合均勻后，升溫至50°C，加入50g胰蛋白酶進行水解，水解55分鐘，料液進入滅酶裝置，升溫到75°C進行滅酶5分鐘。將水解液送入砂濾器進行過濾，濾液送入陶瓷微濾膜進行微濾，陶瓷微濾膜的平均孔徑是200 nm,材質是氧化鋁，調節料液的pH至6.0左右，微濾過程跨膜壓差0.3Mpa，膜面流速5 m/s,過濾溫度40°C，將料液濃縮8倍后，停止微濾。將微濾的滲透液送入超濾膜進行過濾，陶瓷超濾膜的材質采用氧化鋯，平均孔徑是20 nm,調節料液的pH至6.0，跨膜壓差0.4 MPa,膜面流速3 m/s,過濾溫度40°C，將料液濃縮5倍后，停止超濾。將超濾的濃縮液進行噴霧干燥后，得到提取的蠅蛆蛋白，再將超濾的滲透液送入納濾膜濃縮，操作壓力為0.9 MPa，循環流量為2.5m3/h，濃縮倍數是10倍，得到多肽類、氨基酸和小分子蛋白質的混合物。 [0020]實施例4
取蠅蛆洗凈、烘干、研磨成粉末，用Ikg的蠅蛆粉與30kg水的混合均勻后，升溫至50°C，加入50g胰蛋白酶進行水解，水解65分鐘，料液進入滅酶裝置，升溫到75°C進行滅酶5分鐘。將水解液送入砂濾器進行過濾，濾液送入陶瓷微濾膜進行微濾，陶瓷微濾膜的平均孔徑是500 nm,材質是氧化鋁，調節料液的pH至6.0左右，微濾過程跨膜壓差0.2 Mpa,膜面流速3 m/s,過濾溫度40°C，將料液濃縮8倍后，停止微濾。將微濾的滲透液送入超濾膜進行過濾，陶瓷超濾膜的材質采用氧化鈦，平均孔徑是20 nm，調節料液的pH至6.0，跨膜壓差0.2 MPa,膜面流速3 m/s,過濾溫度40°C，將料液濃縮5倍后，停止超濾。將超濾的濃縮液進行噴霧干燥后，得到提取的蠅蛆蛋白，再將超濾的滲透液送入納濾膜濃縮，操作壓力為
0.9MPa，循環流量為2.3m3/h，濃縮倍數是10倍，得到多肽類、氨基酸和小分子蛋白質的混合物。
[0021]實施例5
取蠅蛆洗凈、烘干、研磨成粉末，用Ikg的蠅蛆粉與20kg水的混合均勻后，升溫至50°C，加入50g胰蛋白酶進行水解，水解60分鐘，料液進入滅酶裝置，升溫到75°C進行滅酶5分鐘。將水解液送入砂濾器進行過濾，濾液送入陶瓷微濾膜進行微濾，陶瓷微濾膜的平均孔徑是200 nm,材質是氧化鋯，調節料液的pH至7.0左右，微濾過程跨膜壓差0.2 Mpa,膜面流速2 m/s,過濾溫度40°C，將料液濃縮7倍后，停止微濾。將微濾的滲透液送入超濾膜進行過濾，陶瓷超濾膜的材質采用氧化鈦，平均孔徑是20 nm，調節料液的pH至5.0，跨膜壓差0.1 MPa,膜面流速3 m/s,過濾溫度40°C，將料液濃縮7倍后，停止超濾。將超濾的濃縮液進行噴霧干燥后，得到提取的蠅蛆蛋白，再將超濾的滲透液送入納濾膜濃縮，操作壓力為
0.9MPa，循環流量為2.8m3/h，濃縮倍數是10倍，得到多肽類、氨基酸和小分子蛋白質的混合物。
[0022]實施例6
取蠅蛆洗凈、烘干、研磨成粉末，用Ikg的蠅蛆粉與20kg水的混合均勻后，升溫至50°C，加入50g胰蛋白酶進行水解，水解60分鐘，料液進入滅酶裝置，升溫到75°C進行滅酶5分鐘。將水解液送入砂濾器進行過濾，濾液送入陶瓷微濾膜進行微濾，陶瓷微濾膜的平均孔徑是400 nm,材質是氧化鋁，調節料液的pH至6.0左右，微濾過程跨膜壓差0.4 Mpa,膜面流速I m/s，過濾溫度40°C，將料液濃縮6倍后，停止微濾。將微濾的滲透液送入超濾膜進行過濾，陶瓷超濾膜的材質采用氧化鈦，平均孔徑是30nm，調節料液的pH至5.0，跨膜壓差0.3 MPa,膜面流速I m/s，過濾溫度40°C，將料液濃縮5倍后，停止超濾。將超濾的濃縮液進行噴霧干燥后，得到提取的蠅蛆蛋白，再將超濾的滲透液送入納濾膜濃縮，操作壓力為
1.0MPa，循環流量為3.0m3/h，濃縮倍數是7倍，得到多肽類、氨基酸和小分子蛋白質的混合物。
[0023]實施例7
取蠅蛆洗凈、烘干、研磨成粉末，用Ikg的蠅蛆粉與25kg水的混合均勻后，升溫至45°C，加入50g胰蛋白酶進行水解，水解65分鐘，料液進入滅酶裝置，升溫到75°C進行滅酶5分鐘。將水解液送入砂濾器進行過濾，濾液送入陶瓷微濾膜進行微濾，陶瓷微濾膜的平均孔徑是200 nm,材質是氧化鋁，調節料液的pH至6.0左右，微濾過程跨膜壓差0.2 Mpa,膜面流速2 m/s,過濾溫度40°C，將料液濃縮6倍后，停止微濾。將微濾的滲透液送入超濾膜進行過濾，陶瓷超濾膜的材質采用氧化鋯，平均孔徑是30 nm,調節料液的pH至6.0，跨膜壓差0.2 MPa,膜面流速I m/s，過濾溫度40°C，將料液濃縮6倍后，停止超濾。將超濾的濃縮液進行噴霧干燥后，得到提取的蠅蛆蛋白，再將超濾的滲透液送入納濾膜濃縮，操作壓力為0.8MPa，循環流量為2.0m3/h，濃縮倍數是10倍，得到多肽類、氨基酸和小分子蛋白質的混合物。
[0024]實施例8
取蠅蛆洗凈、烘干、研磨成粉末，用Ikg的蠅蛆粉與25kg水的混合均勻后，升溫至45°C，加入50g胰蛋白酶進行水解，水解55分鐘，料液進入滅酶裝置，升溫到75°C進行滅酶5分鐘。將水解液送入砂濾器進行過濾，濾液送入陶瓷微濾膜進行微濾，陶瓷微濾膜的平均孔徑是500 nm,材質是氧化鋯，調節料液的pH至7.0左右，微濾過程跨膜壓差0.3 Mpa,膜面流速I m/s，過濾溫度4`0°C，將料液濃縮6倍后，停止微濾。將微濾的滲透液送入超濾膜進行過濾，陶瓷超濾膜的材質采用氧化鋯，平均孔徑是30 nm,調節料液的pH至6.0，跨膜壓差0.4 MPa,膜面流速I m/s，過濾溫度40°C，將料液濃縮7倍后，停止超濾。將超濾的濃縮液進行噴霧干燥后，得到提取的蠅蛆蛋白，再將超濾的滲透液送入納濾膜濃縮，操作壓力為0.9MPa，循環流量為2.1m3/h，濃縮倍數是9倍，得到多肽類、氨基酸和小分子蛋白質的混合物。
[0025]實施例9
取蠅蛆洗凈、烘干、研磨成粉末，用Ikg的蠅蛆粉與30kg水的混合均勻后，升溫至50°C，加入50g胰蛋白酶進行水解，水解55分鐘，料液進入滅酶裝置，升溫到75°C進行滅酶5分鐘。將水解液送入砂濾器進行過濾，濾液送入陶瓷微濾膜進行微濾，陶瓷微濾膜的平均孔徑是500 nm,材質是氧化鋁，調節料液的pH至6.0左右，微濾過程跨膜壓差0.4 Mpa,膜面流速5 m/s,過濾溫度40°C，將料液濃縮8倍后，停止微濾。將微濾的滲透液送入超濾膜進行過濾，陶瓷超濾膜的材質采用氧化鋯，平均孔徑是50nm，調節料液的pH至6.0，跨膜壓差0.2 MPa,膜面流速3 m/s,過濾溫度40°C，將料液濃縮5倍后，停止超濾。將超濾的濃縮液進行噴霧干燥后，得到提取的蠅蛆蛋白，再將超濾的滲透液送入納濾膜濃縮，操作壓力為
0.9MPa，循環流量為2.0m3/h，濃縮倍數是8倍，得到多肽類、氨基酸和小分子蛋白質的混合物。
[0026]性能評價
1.提取蛋白質的含量:采用凱式定氮法測定。[0027]2.脂肪的含量:采用索氏提取法測定。
[0028]3.灰分:照GB/T5009.4-2003灼燒恒重法測定。
[0029]4.水分:照GB/T5009.4-2003直接干燥法測定。
[0030]5.苦味:采用感觀評定法，隨機選取10名參評人員(均為不吸煙者)，取待測液1-2 ml于口中，5秒后吐出。待測液是將提取所得的蛋白按重量比1:20混合于水中制得。將待測液的苦味設定為4個級別:無苦味、苦味小、苦味一般、苦味重。
[0031]6.收率:提取的蛋白質重量/蠅蛆粉的重量X 100%。
[0032]試驗結果如表1所示。
[0033]表1實施例1~實施例9的性能評價
【權利要求】
1.一種采用陶瓷膜提取蠅蛆蛋白的方法，包括如下步驟: 第一步、將蠅蛆洗凈、烘干、研磨成粉末； 第二步、將蠅蛆粉通過酶解法進行水解處理后，再滅酶； 第三步、將水解液通過粗過濾器進行過濾后，濾液由陶瓷微濾膜進行過濾； 第四步、將微濾膜的透過液通過陶瓷超濾膜進行過濾； 第五步、將超濾膜的濃縮液進行干燥，得到蠅蛆蛋白； 第六步、將超濾膜的滲透液用納濾膜濃縮再干燥后，得到多肽、氨基酸和小分子蛋白質。
2.根據權利要求1所述的采用陶瓷膜提取蠅蛆蛋白的方法，其特征在于:所述的第二步中，水解步驟參數是:蠅蛆粉與水的質量比是1:20~1:30 ;水解使用的酶是胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶中的一種；水解溫度45~55°C，水解時間50~70分鐘。
3.根據權利要求1所述的采用陶瓷膜提取蠅蛆蛋白的方法，其特征在于:所述的第三步中，陶瓷微濾膜平均孔徑的范圍是200~500nm，陶瓷微濾膜的材質是氧化鋁、氧化鋯、氧化鈦中的一種。
4.根據權利要求1所述的采用陶瓷膜提取蠅蛆蛋白的方法，其特征在于:所述的第三步中，微濾步驟中，將料液的pH調節至6.0~7.0，微濾的跨膜壓差范圍是0.05~0.3MPa，膜面流速范圍是I~5m/s，過濾溫度是40~50°C，濃縮比是料液濃縮6~8倍。
5.根據權利要求1所述`的采用陶瓷膜提取蠅蛆蛋白的方法，其特征在于:所述的第四步中，陶瓷超濾膜平均孔徑的范圍是20~50nm，陶瓷超濾膜的材質是氧化鋯、氧化鈦中的一種。
6.根據權利要求1所述的采用陶瓷膜提取蠅蛆蛋白的方法，其特征在于:所述的第四步中，超濾步驟中，將料液的pH調節至5.0~6.0，超濾的跨膜壓差范圍是0.2~0.4MPa，膜面流速范圍是I~3m/s，過濾溫度是40~50°C，濃縮比是料液濃縮5~7倍。
7.根據權利要求1所述的采用陶瓷膜提取蠅蛆蛋白的方法，其特征在于:所述的第五步中采用的是噴霧干燥。
8.根據權利要求1所述的采用陶瓷膜提取蠅蛆蛋白的方法，其特征在于，所述的第六步中，納濾工藝是:操作壓力為0.8~I MPa，循環流量為2.0~3.0m3/h，濃縮倍數是7~10倍。
9.根據權利要求1所述的采用陶瓷膜提取蠅蛆蛋白的方法，其特征在于，所述的第六步中，干燥方法是真空干燥。
【文檔編號】C07K1/34GK103555798SQ201310509107
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月25日 優先權日:2013年10月25日
【發明者】彭文博, 張桂花, 寇琴, 熊福軍, 張宏, 范克銀 申請人:江蘇久吾高科技股份有限公司