專利名稱：酶解法分離提取馬尾藻多糖的生產工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及馬尾藻多糖的分離提取，尤其是一種酶解法分離提取馬尾藻多糖的生產工藝。
背景技術：
馬尾藻多糖(Sargassum Polysaccharide)作為雞的疫苗免疫增強劑，可顯著提高疫苗的保護率和抗病力，應用前景廣闊。據統計，目前國內每年雞的存欄數為40億只，若有 1. 0%的使用率，即每年應用雞4000萬只，以平均每只用量5克計，則年需求量達200噸。 按市場價格每公斤200元計，則年銷售額達4000萬元，純利潤可達為1200萬元(利潤率按 30%計)。然而，目前分離提取馬尾藻多糖的水提醇沉法、堿提法存在多糖得率低和總糖含量低的問題，以致于生產效率低、供應不足，難以滿足巨大的市場需求。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種多糖得率高和總糖含量高的酶解法分離提取馬尾藻多糖的生產工藝。為解決上述技術問題采用如下技術方案酶解法分離提取馬尾藻多糖的生產工藝，該工藝包括如下步驟<1>準確稱取馬尾藻粉，，按料液比1 15 1 35加入蒸餾水，加入木瓜蛋白酶使其質量體積濃度為0. 5% 1%，先40°C水浴溶解lh，再100°C水浴滅酶0. 5h，然后80°C水浴浸提；<2>步驟<1>中浸提后，離心取上清液備用，沉淀按料液比 1 20 1 35加入蒸餾水，繼續浸提，依法浸提1 3次；<3>合并步驟<2>各次上清液， 將其濃縮至原體積的1/4，濃縮液加入95 %的乙醇至最后醇沉濃度為65 85 %，醇沉過夜， 棄上清液，離心得沉淀；<4>取步驟<3>所得沉淀，加入馬尾藻粉重量10倍的蒸餾水，IOO0C 水浴溶解，溶液離心取上清液，往上清液中加入95%的乙醇至最后醇沉濃度為65 85%， 醇沉過夜，棄上清液，離心得沉淀；<5>將步驟<4>所得沉淀冷凍干燥，即得多糖樣品。多糖樣品經研磨得粉狀多糖樣品。離心 3000r/min 進行 IOmin。本發明的酶解法分離提取馬尾藻多糖的生產工藝的多糖得率和總糖含量明顯高于目前的水提醇沉法和堿提法，應用于生產馬尾藻多糖可提高效率、滿足市場需求。
具體實施例方式酶解法分離提取馬尾藻多糖的生產工藝的研究一、二次析因設計1. 二次析因設計方案選定出對實驗結果影響最大的6個主要因素為料液比、酶量、浸提溫度、浸提時間、浸提次數、醇沉濃度，對這6個主要因素，預留空白進行正交試驗析因分析。使用SAS軟件，選用N = 12的PB (Plackett-Burman)設計，路徑為SAS —解決方案一分析一實驗設計一文件一創建新的設計一2級水平。每個影響因素全部選取2個水平進行分析，低水平為-1，
高水平為1，實驗設計如表1。 表1 PB設計及結果(N = 12)
權利要求
1.一種酶解法分離提取馬尾藻多糖的生產工藝，其特征在于該工藝包括如下步驟 <1>準確稱取馬尾藻粉，按料液比1 15 1 35加入蒸餾水，加入木瓜蛋白酶使其質量體積濃度為0. 5% 1%，先40°C水浴溶解lh，再100°C水浴滅酶0.釙，然后80°C水浴浸提；<2>步驟<1>中浸提后，離心取上清液備用，沉淀按料液比1 20 1 35加入蒸餾水，繼續浸提，依法浸提1 3次；<3>合并步驟<2>各次上清液，將其濃縮至原體積的1/4，濃縮液加入95%的乙醇至最后醇沉濃度為65 85%，醇沉過夜，棄上清液，離心得沉淀；<4>取步驟<3>所得沉淀，加入馬尾藻粉重量10倍的蒸餾水，100°C水浴溶解，溶液離心取上清液，往上清液中加入95 %的乙醇至最后醇沉濃度為65 85 %，醇沉過夜，棄上清液， 離心得沉淀；<5>將步驟<4>所得沉淀冷凍干燥，即得多糖樣品。
2.根據權利要求1所述的酶解法分離提取馬尾藻多糖的生產工藝，其特征在于所述多糖樣品經研磨得粉狀多糖樣品。
3.根據權利要求1所述的酶解法分離提取馬尾藻多糖的生產工藝，其特征在于所述離心 3000r/min 進行 IOmin。
全文摘要
本發明公開了一種酶解法分離提取馬尾藻多糖的生產工藝，選用木瓜蛋白酶為去蛋白催化酶采用酶解法分離提取馬尾藻多糖，建立的較佳提取條件為料液比1:15～1:35，浸提次數2~4次，醇沉濃度65~85%。本法顯著地提高了粗多糖得率和總糖含量，為今后規模化生產馬尾藻多糖提供了很好的工藝路線，可有效保證禽類的疫苗免疫增強劑的市場供應。
文檔編號C08B37/00GK102382200SQ20111026130
公開日2012年3月21日 申請日期2011年9月6日 優先權日2011年9月6日
發明者崔月明, 胡庭俊, 藍仁龍, 韋現色 申請人:廣西大學