一種蛋白激酶抑制劑及其制備方法和醫藥用途與流程

本發明屬于醫藥領域，具體涉及一系列具有蛋白激酶抑制作用的取代2-(吡啶-2-基)氨基嘧啶類化合物及其制備方法和醫藥用途。
背景技術：
：細胞周期是細胞生命活動的重要部分，在正常的細胞生長過程中，細胞周期進程的實現有賴于各級調控因子對細胞周期精確而嚴密的調控。這些調控因子的核心是細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶(CyclinDependentKinase,CDK)及其正、負性調控因子———細胞周期蛋白(Cyclin)和細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶抑制劑(CDI)。細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶和細胞周期蛋白形成的CDK-Cyclin復合物，參與細胞的生長、增殖、休眠或者進入凋亡。細胞周期的過程中，細胞周期蛋白周期性連續的表達和降解，并分別結合到由它們瞬時活化的CDK上，通過CDK活性，催化不同底物磷酸化，實現對細胞周期不同時相的推進和轉化作用。目前CDK家族已經發現了13個成員，分別是CDK1-CDK13；其中CDK1、CDK2、CDK3、CDK4和CDK6與調節細胞增殖有關，CDK7、CDK8、CDK9、CDK11、CDK12和CDK13參與調控轉錄。Cyclin分為A-L，不同的CDK分別連接不同亞型的Cyclin。其中，CyclinD家族(CyclinD1，D2，D3)，在G1期開始表達，結合并激活CDK4和CDK6，形成CDK4/6-CyclinD復合物，使包括視網膜母細胞瘤蛋白(Retinoblastomaprotein,Rb)在內的一系列底物磷酸化。Rb磷酸化后釋放與其結合并被其抑制的蛋白，主要是轉錄因子E2F等，E2F激活并轉錄進入S期所必須的一些基因(馬珂，CDK4/6抑制劑抗腫瘤作用研究進展，《國外醫藥·抗生素分冊》，2013，34(5)：197-202)。如果由于各種因素使平衡被打破，無論是促進細胞增殖的信號增強，或者是抑制細胞增殖的信號減弱到某種程度，細胞增殖都會失控，進而出現腫瘤。研究發現，大約80％的人類腫瘤中存在CyclinD–CDK4/6–INK4–Rb通路的異常(1.MalumbresM,BarbacidM.,Tocycleornottocycle:acriticaldecisionincancer[J].NatureReviewsCancer,2001,1(3):222；2.ShapiroGI.,Cyclin-dependentkinasepathwaysastargetsforcancertreatment[J].JClinicalOncology,2006,24(11):1770)。這條通路的改變，加速了G1期進程，使得腫瘤細胞增殖加快而獲得生存優勢。因此，對其的干預成為一種治療策略，CDK4/6因此成為潛在的抗腫瘤的靶點之一。CDK4/6作為抗腫瘤靶點的優勢在于：(1)大多數增殖的細胞依賴CDK2或者CDK4/6增殖，但CDK4/6的抑制劑不表現出“泛-CDK抑制劑”的細胞毒性，如骨髓抑制和腸道反應。(2)臨床前實驗表明，如果細胞CyclinD水平升高或者p16INK4a失活，能夠增加細胞對藥物的敏感性，由于腫瘤細胞相對于正常細胞存在上述現象，所以一定程度上增加了藥物的靶向。除了抑制腫瘤生長，也有CDks抑制劑用于其它病癥的治療；如用于治療心血管障礙，包括動脈粥樣硬化、血管支架植入后再狹窄和其它由細胞異常增殖引起的心血管障礙；再如用于治療真菌、原生動物寄生蟲(如惡性瘧原蟲)和DNA與RNA病毒感染引起的疾病，包括瘧疾、艾滋病等。此外，還有研究發現CDKs抑制劑還可以用于自身免疫系統疾病(如牛皮癬、類風濕性關節炎、腎小球性腎炎和紅斑狼瘡等)，抑制炎癥細胞的增殖。自WO9811095中公開了一系列具有細胞激酶抑制活性的2-嘧啶胺類化合物后，基于 這樣的母核結構，現有技術陸續出現了很多宣稱具有CDK4/6抑制活性的化合物，有的已經成為有希望的候選藥物，甚至進入臨床III期試驗階段。如，化合物PD0332991在WO2003062236中被公開，又名Palbociclib，結構式如1所示，由輝瑞公司開發。PD0332991抑制CDK4和CDK6的IC50分別為11nmol/L和15nmol/L；而抑制CDK2、CDK1和CDK5的IC50則大于10μmol/L(FryDW,HarveyPJ,KellerPR,etal.Specificinhibitionofcyclin-dependentkinase4/6byPD0332991andassociatedantitumoractivityinhumantumorxenografts[J].MolecularCancerTherapeutics,2004,3(11):1427)。諾華公司在研的化合物LEE011(由WO2011101409公開)，結構式如2所示。化合物LY2835219(由WO2010075074公開)，又名Bemaciclib，結構式如3所示；據報道，它對CDK4和CDK6的抑制IC50分別為2nmol/L和9.9nmol/L(LawrenceM.G.,S.F.Cai,X.Linetal.PreclinicalcharacterizationoftheCDK4/6inhibitorLY2835219:in-vivocellcycle-dependent/independentanti-tumoractivitiesalone/incombinationwithgemcitabine[J].InvestNewDrugs,(2014),32:825)。目前LY2835219正在由禮來公司進行III期臨床實驗。由于這些化合物的出現，CDK4/6已經成為明確的抗腫瘤靶點。研發出選擇性、活性和生物利用度更好的CDK4/6抑制劑，從而可能為臨床提供更多治療癌癥等與細胞異常增殖相關疾病的新選擇，是十分必要和迫切的。技術實現要素：針對上述問題，本發明的一個目的在于提供一種新的取代2-氨基嘧啶類化合物。本發明提供的化合物，能夠選擇性抑制細胞周期蛋白激酶CDK4/6，使細胞停止在G1期，從而可以用于治療細胞增殖障礙性疾病。為了達到上述技術效果，本發明采用了如下的技術方案：一種結構式I的化合物或其互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體或其混合物形式，或結構式I的化合物、其互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體的藥學上可以接受的鹽或溶劑化物，A環是4-7元雜環，除與咪唑共用的N外，A環不含有其它雜原子，或者A環還含有一個或多個選自N、O或S的雜原子，并且所述A環被一個或多個選自烷基、環烷基、 鹵代烷基、烷氧基、羥基、鹵素、氰基、-NR5R6、的取代基所取代；R1和R2各自獨立地選自氫、鹵素，且R1和R2中至少一個是鹵素；R3選自氫原子、烷基、烷氧基、羥基；R4為其中，Z是羰基、O、S、亞胺基、磺酰基或n＝0-4的整數；W和Y各自獨立地是C、N、O或S，但W和Y不能同時是C，且當Z是O或S時，W是C；R8、R9、R10和R11各自獨立地選自氫原子、烷基、環烷基、羥基烷基、鹵代烷基、烷氧基、羥基、鹵素、氰基、-NR5R6、且Y＝N時，R8不能是-NR5R6；或者，R3和R4與其連接的C原子一起形成含一個或多個選自N、O或S的5-7元雜環，并且所述5-7元雜環被一個或多個選自烷基、環烷基、鹵代烷基、烷氧基、羥基烷基、羥基、鹵素、氰基、-NR5R6、的取代基所取代；R5、R6和R7各自獨立地選自氫原子、烷基、羥基烷基。優選的，A環是5-7元雜環。更優選的，A環是5-7元雜環，除與咪唑共用的N原子外，不含其它雜原子。優選的，A環被1-4個選自烷基、環烷基、鹵代烷基、烷氧基、羥基的取代基取代。更優選的，A環被1-2個烷基取代。優選的，A環和稠和的咪唑形成如下的化學結構：優選的，R1和R2各自獨立地是氫、氟或氯，且R1和R2中至少一個是氟或氯。更優選的，R1和R2各自獨立地是氫或氟，且R1和R2中至少一個是氟。最優選的，R1是氫或氟，R2是氟。優選的，R3選自氫原子或烷基。優選的，Z是羰基、O或n＝0-4的整數。更優選的，Z是n＝0-2的整數，進一步優選的，n＝0或1。優選的，W和Y各自獨立地選自C或N，但W和Y不能同時是C。優選的，R8、R9、R10和R11各自獨立地選自氫原子、烷基、環烷基、鹵代烷基、羥基烷基、烷氧基、羥基或-NR5R6，其中，R5和R6各自獨立地選自氫原子和烷基。進一步優選的，R4選自如下結構的取代基：其中，R12和R13各自獨立地選自氫原子、烷基、環烷基、鹵代烷基、羥基烷基、烷氧基或羥基，R14選自氫原子、烷基、環烷基、鹵代烷基、羥基烷基、烷氧基、羥基或-NR5R6，R5和R6各自獨立地選自氫原子和烷基。還優選的，R3和R4與其連接的C原子一起形成含一個或多個選自N、O或S的6元雜環。更優選的，R3和R4與其連接的C原子一起形成含一個N的6元雜環。進一步優選的，R3和R4與其連接的C原子一起形成如下的化學結構：其中R15選自羥基或烷氧基；進一步優選為羥基。作為的優選實施方式，本發明還提供結構式II、III、IV或V的化合物或各自的互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體或其混合物形式，或所述結構式II、III、IV或V的化合物、各自的互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體的藥學上可以接受的鹽或溶劑化物，其中，Z、W、Y、R1、R2、R3、R8、R9和R15的定義如前，R16和R17各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基或鹵代烷基。作為更優選的實施方式，本發明提供如下結構的化合物或其藥學上可以接受的鹽、溶劑化物或多晶型體，作為另一更優選的實施方式，本發明提供如下結構的化合物或其互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體或其混合物形式，或所述化合物、其互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體的藥學上可以接受的鹽或溶劑化物，本發明所述的化合物還包括同位素標記的上述所有化合物。本發明還提供一種結構式VI的化合物或其互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體或其混合物形式，或所述結構式VI的化合物、其互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體的藥學上可以接受的鹽或溶劑化物，其中，A環、R1和R2的定義如前，X為離去基團或氨基。優選的，X是鹵素或氨基，更優選是氟、氯或氨基。本發明還有一個目的在于提供結構式I-V的化合物的制備方法，包括結構式VI和結構式VII的化合物在非質子溶劑中，經鈀催化偶聯反應得到結構式I的化合物，其中，A環、R1、R2、R3和R4的定義如前，X和M各自獨立地為離去基團或氨基，X和M中只能有一個且必須有一個為氨基；優選的，所述離去基團為鹵素；更優選的，所述離去基團為氟或氯。本發明的另一個目的在于提供結構式I-V的化合物或其互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體或其混合物形式，或所述結構式I-V的化合物、其互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體的藥學上可以接受的鹽或溶劑化物在制備用于治療細胞增殖障礙性疾病的藥物制劑中的用途。優選的，所述藥物制劑包括藥學上可以接受的輔料。優選的，所述細胞增殖障礙性疾病是指哺乳動物或人的癌癥，更優選的是指人的癌癥，包括惡性實體瘤和惡性非實體瘤，具體包括但不限于乳腺癌、肺癌、前列腺癌、白血病、腦癌、胃癌等。還優選的，所述細胞增殖障礙性疾病還可以是指艾滋病、動脈粥樣硬化、血管支架植入后再狹窄。優選的，上述用途是指所述結構式I-V的化合物或其互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體或其混合物形式，或所述結構式I-V的化合物、其互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體的藥學上可以接受的鹽或溶劑化物作為唯一活性成分或聯合其它具有生物活性的物質在制備用于治療細胞增殖障礙性疾病的藥物制劑中的用途。所述其它具有生物活性的物質包括但不限于抗癌劑、免疫抑制劑、抗病毒劑等。其中，所述抗癌劑選自烷化劑(如環磷酰胺、異環磷酰胺、塞替派、司莫司汀、鹽酸氮芥、白消安、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、硝卡芥、氮甲、卡莫司汀、洛莫司汀、六甲蜜胺、二溴甘露醇等)，抗代謝類抗腫瘤藥(阿糖胞苷、氟尿嘧啶、甲氨喋呤、羥基脲、替加氟、甲異靛、巰嘌呤等)，鉑絡合劑(如順鉑、卡鉑、奧沙利鉑等)，抗生素類抗腫瘤藥(放線菌 素D、絲裂霉素、阿霉素、平陽霉素、表柔比星、吡柔比星、柔紅霉素、博來霉素等)，天然來源抗腫瘤藥(高三尖杉酯堿及其衍生物、長春新堿及其衍生物、羥喜樹堿及其衍生物、依托泊苷及其衍生物、長春地辛及其衍生物、長春堿及其衍生物、重酒石酸長春瑞賓、紫杉醇及其衍生物、秋水仙堿及其衍生物、欖香烯及其衍生物等)，激素類抗腫瘤藥(如氨魯米特、他莫昔芬、地塞米松、度他雄胺、氟他胺、戈那瑞林、醋酸亮丙瑞林、來曲唑等)，VEGFR或EGFR抑制劑(如舒尼替尼、索拉非尼、伊馬替尼、吉非替尼、埃羅替尼、凡德替尼、帕唑帕尼、拉帕替尼、卡奈替尼、阿法替尼、木利替尼、達沙替尼、來那替尼等)，抗體抗腫瘤藥(如曲妥單抗、帕妥珠單抗、利妥昔單抗、帕尼單抗、貝伐單抗、伊匹單抗、奧法木單抗、雷莫盧單抗等)，mTOR抑制劑(如依維莫司、西羅莫司、佐他莫司等)等。本發明還提供一種治療患有所述細胞增殖障礙性疾病的患者的方法，包括對所述患者通過口服或非口服途徑給予有效劑量的本發明所述化合物。優選的，上述治療患有所述細胞增殖障礙性疾病的患者的方法，包括對所述患者通過口服或非口服途徑給予有效劑量的本發明所述化合物和所述其它具有生物活性的物質。所述其它具有生物活性的物質包括但不限于抗癌劑、免疫抑制劑、抗病毒劑等。其中，所述抗癌劑選自烷化劑(如環磷酰胺、異環磷酰胺、塞替派、司莫司汀、鹽酸氮芥、白消安、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、硝卡芥、氮甲、卡莫司汀、洛莫司汀、六甲蜜胺、二溴甘露醇等)，抗代謝類抗腫瘤藥(阿糖胞苷、氟尿嘧啶、甲氨喋呤、羥基脲、替加氟、甲異靛、巰嘌呤等)，鉑絡合劑(如順鉑、卡鉑、奧沙利鉑等)，抗生素類抗腫瘤藥(放線菌素D、絲裂霉素、阿霉素、平陽霉素、表柔比星、吡柔比星、柔紅霉素、博來霉素等)，天然來源抗腫瘤藥(高三尖杉酯堿及其衍生物、長春新堿及其衍生物、羥喜樹堿及其衍生物、依托泊苷及其衍生物、長春地辛及其衍生物、長春堿及其衍生物、重酒石酸長春瑞賓、紫杉醇及其衍生物、秋水仙堿及其衍生物、欖香烯及其衍生物等)，激素類抗腫瘤藥(如氨魯米特、他莫昔芬、地塞米松、度他雄胺、氟他胺、戈那瑞林、醋酸亮丙瑞林、來曲唑等)，VEGFR或EGFR抑制劑(如舒尼替尼、索拉非尼、伊馬替尼、吉非替尼、埃羅替尼、凡德替尼、帕唑帕尼、拉帕替尼、卡奈替尼、阿法替尼、木利替尼、達沙替尼、來那替尼等)，抗體抗腫瘤藥(如曲妥單抗、帕妥珠單抗、利妥昔單抗、帕尼單抗、貝伐單抗、伊匹單抗、奧法木單抗、雷莫盧單抗等)，mTOR抑制劑(如依維莫司、西羅莫司、佐他莫司等)等。本發明的說明書中，如無特殊說明，所述“烷基”，指的是C1-C6的直鏈或支鏈烷基，優選為C1-C4的直鏈或支鏈烷基，進一步優選為甲基、乙基、丙基或異丙基。所述“烷氧基”，指的是C1-C6的直鏈或支鏈烷氧基，優選為C1-C4的直鏈或支鏈烷氧基，進一步優選為甲氧基、乙氧基、丙氧基或2-甲基乙氧基。所述“環烷基”，指的是未取代或烷基、烷氧基取代的C3-C7的環烷基，優選為未取代或烷基、烷氧基取代的C3-C6的環烷基，進一步優選為環丙烷、環丁烷、甲基環丙烷、環戊烷或環己烷。所述“鹵素”，指的是氯或氟。所述“鹵代烷基”指的是氯取代或氟取代C1-C6的直鏈或支鏈烷基，優選為氯取代或氟取代C1-C4的直鏈或支鏈烷基，進一步優選為一氟代甲基、二氟代甲基、三氟代甲基、一氯代甲基、二氯代甲基、三氯代甲基、1-氟乙基、1-氯丙基、1-氯乙基、1-氯丙基。現有研究認為，CDKs抑制劑的毒性主要與其抑制CDK1有關。因此，作為CDKs抑制劑類化合物，希望其對CDK4/CDK6和CDK1的作用差異越顯著越好，即選擇性抑制CDK4/CDK6。在平行試驗中，與現有技術公開的LY2835219(由WO2010075074公開，又名Bemaciclib)相比，本發明的化合物表現出更好的CDK4/CDK6選擇性。IC50(CDK4)/IC50(CDK1)和IC50(CDK6)/IC50(CKD1)可以體現化合物對于CDKs的選擇性——數值越小，對CDK4/6的選擇性越好，預示著化合物的泛CDK抑制的毒性可能越小。對照化合物(LY2835219)的IC50(CDK4)/IC50(CDK1)≈0.03，IC50(CDK6)/IC50(CKD1)≈0.139；而本發明實施例17、18、19、20、24、25、27、28、30、31、35、36、37、39、40、41、42、 43、46、47、53、55、57、59、60、65、72、74等的化合物都表現出比對照化合物更好的對CDK4/6的選擇性，具體見表2。大鼠和小鼠藥代動力學實驗也表明本發明代表化合物的口服吸收良好、半衰期長，具有顯著的口服吸收效果。具體實施方式以下參照具體的實施例來說明本發明。本領域技術人員能夠理解，這些實施例僅用于說明本發明，其不以任何方式限制本發明的范圍。本發明所述的結構式VI的化合物是合成結構式I的化合物的關鍵中間體，其和結構式VII的化合物在非質子溶劑中，經鈀催化偶聯反應得到結構式I的化合物。其中，A環、R1、R2、R3、R4、X和M的定義如前。優選的，A環為5-7元雜環，除與咪唑共用的N外，不含有其它的雜原子，并且所述A環優選無取代，或者被1-2個C1-C3的直鏈或支鏈烷基取代。R1和R2各自獨立地是氫或氟，且R1和R2中至少一個是氟。R3優選為C1-C3的直鏈或支鏈烷基，更優選為甲基或乙基。R4優選為如下結構的基團：其中，R12和R13如前定義，更優選地各自獨立地選自氫原子、C1-C3的直鏈或支鏈烷基、C3-C6的環烷基、羥基取代C1-C3的直鏈或支鏈烷基或鹵代C1-C3的直鏈或支鏈烷基；R14選自氫原子、C1-C3的直鏈或支鏈烷基、鹵代C1-C3的直鏈或支鏈烷基或-NR5R6，R5和R6獨立地選自氫原子、C1-C3的直鏈或支鏈烷基。或者，還優選的，R3和R4與其連接的C原子一起形成如下的化學結構：其中R15選自羥基或烷氧基；進一步優選為羥基。優選的，X為氟或氯，M為氨基；或，X為氨基，M為氟或氯。下述實施例1-11具體描述了作為關鍵中間體的結構式VI的化合物的合成，實施例12-74具體描述了上述中間體參與的結構式I的化合物的合成。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的藥材原料、試劑材料等，如無特殊說明，均為市售購買產品。以上對本發明具體實施方式的描述并不限制本發明，本領域技術人員可以根據本發明做出各種改變或變形，只要不脫離本發明的精神，均應屬于本發明所附權利要求的范圍。實施例17-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑第一步：(Z)-N-(4-溴-2,6-二氟苯基)-5,5-二甲基吡咯烷-2-亞胺向反應瓶中加入4-溴-2,6-二氟苯(4.5g,21.6mmol)，4,4-二甲基吡咯烷-2-酮(4.9g,43.3mol)，三乙胺(3.3g,32.7mmol)，三氯氧磷(5g,32.4mmol)和甲苯(100mL)，回流攪拌反應3小時。冷卻至室溫，減壓濃縮，加入二氯甲烷(100mL)，飽和碳酸鈉水溶液(30mL×2)洗滌.有機層用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法(DCM/MeOH＝50/1)純化所得殘余物，得到標題化合物(3.2g,黃色固體)，產率49％。MSm/z(ESI):303.0,305.0(M+H)第二步：7-溴-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑向微波反應瓶中加入第一步制備的(Z)-N-(4-溴-2,6-二氟苯基)-5,5-二甲基吡咯烷-2-亞胺(3.03g,10mmol)，碳酸銫(6.50g,20mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(30mL)，將該混合物在微波中210℃攪拌反應30分鐘。冷卻至室溫，在反應液中加入乙酸乙酯(150mL)，用飽和氯化鈉洗滌(30mL×3)。有機層用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)純化所得殘余物，得到標題化合物(1.50g,黃色固體)，產率53％。MSm/z(ESI):283.0,285.0(M+H)第三步：5-氟-1,1-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑向反應瓶中加入第二步制備的7-溴-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(1.5g,5.4mmol)，雙(頻哪醇)二硼(1.70g,6.5mmol),Pd(dppf)Cl2(490mg,0.60mmol),醋酸鉀(1.10g,11mmol)和二氧六環(50mL)。在氮氣環境中，該混合物在100℃攪拌反應12小時。冷卻至室溫，反應液減壓濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/2)純化所得殘余物，得到標題化合物(1.20g,黃色固體)，產率67％。MSm/z(ESI):330.9(M+H)第四步：7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑向反應瓶中加入第三步制備的5-氟-1,1-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(1.2g,3.6mmol)，2,4-二氯-5-氟嘧啶(0.664g,4.0mmol),Pd(PPh3)2Cl2(282mg,0.40mmol),碳酸鈉(763mg,7.2mmol)和DME/H2O(40mL/10mL)。在氮氣環境中，該混合物在80℃攪拌反應3小時。冷卻至室溫，反應液抽濾，濾液真空濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/3)純化所得殘余物，得到標 題化合物(0.51g,白色固體)，產率42％。MSm/z(ESI):334.9(M+H)實施例27-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑第一步：(Z)-N-(4-溴-2,6-二氟苯基)-5-甲基吡咯-2-亞胺向反應瓶中加入4-溴-2,6-二氟苯(5g,24mmol)，5-甲基吡咯烷-2-酮(4.8g,48mol)，三乙胺(7.2g,72mmol)，三氯氧磷(11g,72mmol)和甲苯(50mL)，回流攪拌反應3小時。冷卻至室溫，減壓濃縮，加入二氯甲烷(100mL)，飽和碳酸鈉水溶液(50mL×2)洗滌.有機層用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法(DCM/MeOH＝50/1)純化所得殘余物，得到標題化合物(3g,黃色固體)，產率43％。MSm/z(ESI):289.15(M+H)第二步：7-溴-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑向微波反應瓶中加入第一步制備的(Z)-N-(4-溴-2,6-二氟苯基)-5-甲基吡咯-2-亞胺(2.89g,10mmol)，碳酸銫(6.5g,20mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(20mL)，將該混合物在微波中210℃攪拌反應2小時。冷卻至室溫，在反應液中加入乙酸乙酯(150mL)，飽和氯化鈉洗滌(100mL×3)。有機層用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)純化所得殘余物，得到標題化合物(2.1g,黃色固體)，產率78％。MSm/z(ESI):270.14(M+H)第三步：5-氟-1-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑向反應瓶中加入第二步制備的7-溴-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(1.5g,5.57mmol)，雙(頻哪醇)二硼(1.3g,5.57mmol),Pd(dppf)Cl2(490mg,0.60mmol),醋酸鉀(1.10g,11mmol)和二氧六環(50mL)。在氮氣環境中，該混合物在100℃攪拌反應12小時。冷卻至室溫，反應液減壓濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)純化所得殘余物，得到標題化合物(0.83g,白色固體)，產率47％。MSm/z(ESI):317.2(M+H)第四步：7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑向反應瓶中加入第三步制備的5-氟-1-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(0.83g,2.63mmol)，2,4-二氯-5-氟嘧啶(0.44g,2.63mmol),Pd(PPh3)4(440mg,0.26mmol),K3PO4(1.1g,5.2mmol)和DME/H2O(40mL/10mL)。在氮氣環境中，該混合物在100℃攪拌反應12小時。反應結束，冷卻至室溫，加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有機層，飽和食鹽水洗滌(50mL×3)。抽濾，濾液用無水硫酸鈉干燥，真空濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)純化所得殘余物，得到標題化合物(0.3g,白色固體)，產率36％。MSm/z(ESI):321.75(M+H)實施例37-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實施例1類似的反應步驟，以5-乙基吡咯-2-酮為起始原料，得到標題化合物。實施例47-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實施例1類似的反應步驟，以4,4-二甲基吡咯-2-酮為起始原料，得到標題化合物。實施例57-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實施例1類似的反應步驟，以4-甲基吡咯-2-酮為起始原料，得到標題化合物。實施例67-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-乙基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實施例1類似的反應步驟，以4-乙基吡咯-2-酮為起始原料，得到標題化合物。實施例78-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶采用與實施例1類似的反應步驟，以哌啶-2-酮為起始原料，得到標題化合物。實施例82-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚烷采用與實施例1類似的反應步驟，以己內酰胺為起始原料，得到標題化合物。實施例97-(2-氯嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實施例1類似的反應步驟，在第四步反應中以2,4二氯嘧啶為原料，得到標題化合物。實施例107-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實施例1類似的反應步驟，以4-溴-2-氟苯胺為起始原料，得到標題化合物。實施例117-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實施例1類似的反應步驟，以吡咯-2-酮為起始原料，得到標題化合物。實施例12N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-2,3-二氫-1H-苯并 [d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺第一步：1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪向反應瓶中加入1-乙基哌嗪(1.8g,16mmol)，6-溴-吡啶-3-甲醛(3g,16mmol)和二氯甲烷(50mL)，攪拌下分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(3.7g,17.5mmol)，混合物在室溫下攪拌反應12小時。在反應液中加入二氯甲烷(20mL)和氫氧化鈉水溶液(2N,15mL).分液，水相用二氯甲烷(20mL×2)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮得到標題化合物(3.6g,黃色油狀物)，產率80％。MSm/z(ESI):285.2(M+H)第二步：5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺向反應瓶中加入第一步制備的1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪(2.84g,10mmol),2-二環己基膦基聯苯(0.7g,2mmol),Pd2(dba)3(915mg,1mmol)和無水甲苯(30mL)。混合物通過氮氣置換三次后，再加入LiHMDS(1MinTHF，20mL,20mmol)。在氮氣環境下，混合物在80℃下攪拌反應12小時。冷卻至室溫，加入水(50mL),乙酸乙酯(50mL×2).萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾。用柱層析色譜法(DCM/MeOH/Et3N＝10:1:0.5％)純化得到的殘留物，得到標題化合物(1.34g,棕色固體)，產率61％。MSm/z(ESI):221.3(M+H)第三步：N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.33mmol，實施例11制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(73mg,0.33mmol，第二步制備),叔丁醇鈉(64mg,0.66mmol),Pd2(dba)3(30mg,0.033mmol)，XantPhos(38mg,0.066mmol)和無水1,4-二氧六環(5mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(40mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(40mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(15mg,黃色固體)，產率9.3％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.97(s,1H),8.69(d,J＝3.6Hz,1H),8.19(s,1H),8.17(s,1H),8.07(s,1H),7.78-7.70(m,2H),4.24(t,J＝6.8Hz,2H),3.44(s,2H),3.05-3.01(m,2H),2.71-2.68(m,2H),2.39-2.33(m,8H),0.98(t,J＝7.2Hz,3H)MSm/z(ESI):491.1(M+H)實施例135-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯向反應瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(4.93g,24.3mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.97g,26.7mmol)，二異丙基乙基胺(4.65mL,26.7mmol)和乙腈(60mL),混合物在110℃下攪拌反應72小時。冷卻至室溫，減壓濃縮，用柱色譜分離法(DCM/MeOH＝10/1)純化所得殘留物，得到標題化合物(4.5g,白色固體)，產率60％。MSm/z(ESI):309.3(M+H)第二步：4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯向反應瓶中加入4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(3.4g,11mmol，第一步制備),以及鈀碳(10％,400mg)、乙酸乙酯/乙醇(100mL，1:1)。混合物在氫氣環境中室溫攪拌反應12小時。抽濾，減壓濃縮，得到標題化合物(2.8g,白色固體)，產率93％。MSm/z(ESI):279.3(M+H)第三步：4-(6-((5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯向反應瓶中加入8-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶(100mg,0.32mmol，實施例7制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(89mg,0.32mmol，第二步制備)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL).混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(50mg,黃色油狀物)，產率31％。MSm/z(ESI):563.2(M+H)第四步：5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(50mg,0.089mmol，第三步制備)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(20mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(22mg,黃色固體)，產率54％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.76(s,1H),8.63(s,1H),8.10(s,1H)，8.08(s,1H)，8.03(s,1H)，7.74(d,J＝12.4Hz,1H),7.52(d,J＝8.8Hz,1H),4.20(s,2H),3.26(brs,8H),3.02(s,2H),2.08(brs,2H),1.97(brs,2H)MSm/z(ESI):463.1(M+H)實施例14N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入8-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶(100mg,0.32mmol，實施例7制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(68mg,0.32mmol),Cs2CO3(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(33mg,淡黃色固體)，產率20.5％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.00(s,1H),8.70(s,1H),8.23(s,1H)，8.20(s,1H)，8.06(s,1H),7.79-7.73(m,2H),4.23-4.21(m,2H),3.55(s,2H),3.05-3.02(m,2H),2.95-2.91(m,10H),2.09-1.97(m,4H),1.23-1.15(m,3H)MSm/z(ESI):505.1(M+H)實施例151-(2-((5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-亞奈-6(5H)-基)-2-羥基乙基-1-酮第一步：2-(2-氯-7,8-二氫-1,6--萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸鹽向反應瓶中加入2-氯-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶(1g,5.9mmol)，二異丙基乙基胺(903mg,7mmol),2,5-二氧吡咯-1-基2-乙酰氧醋酸乙酯(1.27g,5.9mmol)和二氯甲烷(20mL)。在氮氣環境中，混合物在室溫下攪拌1小時，加入水(10mL)稀釋，乙酸乙酯萃取(40mL×3)，合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(40mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(600mg,黃色固體)，產率46％。MSm/z(ESI):267.2(M+H)第二步：5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入8-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶(600mg,0.18mmol，實施例7制備)，氨水(20mL),和異丙醇(20mL)。在氮氣環境中，混合物在110℃攪拌12小時，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(500mg,黃色固體)，產率88％。MSm/z(ESI):302.1(M+H)第三步：2-(2-((5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸酯向微波反應瓶中加入5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-胺(100mg,0.33mmol，第二步制備)，2-(2-氯-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸鹽(89mg,0.33mmol，第一步制備)，碳酸銫(215mg,0.66mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時，冷卻至室溫，加入水(10mL)稀釋。乙酸乙酯萃取(40mL×3).合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(40mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(20mg,黃色固體)，產率19％。MSm/z(ESI):534.2(M+H)第四步：1-(2-((5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羥基乙基-1-酮向反應瓶中加入2-(2-((5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸酯(10mg,0.018mmol，第三步制備)，甲醇鈉(0.2mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水(10mL)稀釋，二氯甲烷萃取(20mL×2).合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(40mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝5:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(10mg,黃色固體)，產率50％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.93(s,1H),8.67(s,1H),8.07(s,2H),7.78(d,J＝12.4Hz,1H),7.65(d,J＝8.8Hz,1H),4.62-4.55(m,2H),4.21-4.19(m,4H),3.81-3.75(m,4H),3.04-3.01(m,2H),2.09-2.07(m,2H),1.98-1.97(m,2H)MSm/z(ESI):492.1(M+H)實施例16N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚-2-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入2-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚烷(100mg,0.3mmol，實施例8制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),Cs2CO3(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(20mg,黃色固體)，產率13％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.09(s,1H),8.71(s,1H),8.27-8.20(m,2H),8.07(s,1H),7.79-7.73(m,2H),4.23-4.20(m,2H),3.52(s,2H),3.12-2.85(m,10H),2.39-2.37(m,2H),2.09-2.08(m,2H),1.98-1.96(m,2H),1.15-1.06(m,5H)MSm/z(ESI):519.3(M+H)實施例175-氟-4-(4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚-2-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚-2-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入2-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚烷(100mg,0.3mmol，實施例8制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(83mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL).混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(45mg,黃色油)，產率26％。MSm/z(ESI):577.3(M+H)第二步：5-氟-4-(4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚-2-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚-2-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(45mg,0.078mmol，第一步制備)，三氟乙酸 (0.5mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(10mg,黃色固體)，產率27％.1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.85(s,1H),8.65(s,1H),8.10-8.08(m,3H),7.69(d,J＝12.4Hz,1H),7.53-7.50(m,1H),4.35(s,2H),3.56-3.50(m,4H),3.28-3.23(m,4H),3.04-3.03(m,2H),1.98(s,2H),1.90(s,2H),1.78(s,2H)MSm/z(ESI):477.3(M+H)實施例18N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，實施例1制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(5mL)。混合物在120℃下加熱攪拌反應12小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(50mg,白色固體)，產率32％。1HNMR(DMSO,400MHz)δ10.14(s,1H),8.71(d,J＝3.6Hz,1H),8.23-8.20(m,3H),7.73-7.70(m,2H),3.54(brs,2H),3.13-3.09(m,3H),2.92-2.90(m,4H),2.59-2.56(m,4H),2.50-2.48(m,2H),1.67(s,6H),1.23-1.20(m,4H)MSm/z(ESI):519.6(M+H)實施例195-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑并-7- 基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，實施例1制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(83mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL).混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(92mg,黃色固體)，產率53％。MSm/z(ESI):577.3(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑并-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(92mg,0.16mmol，第一步制備)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(20mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(37mg,黃色固體)，產率49％。1HNMR(MeOD,400MHz),δ8.50(s,1H),8.22(s,1H),8.19(s,1H),8.04(d,J＝2.8Hz,1H),7.82(d,J＝12.4Hz,1H),7.53(dd,J1＝2.8Hz,J2＝8.4Hz,1H),3.23-3.16(m,10H),2.68(t,J＝7.6Hz,2H),1.76(s,6H)MSm/z(ESI):477.2(M+H)實施例205-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪向反應瓶中加入6-溴-吡啶3-甲醛(10g,53.7mmol),1-溴哌嗪(7.0g,70mmol)和二氯甲烷(100mL),攪拌下分批加入三乙酰氧硼氫化鈉(17g,81mmol).混合物在室溫下攪拌反應12小時。然后在反應液中加入二氯甲烷(50mL)和氫氧化鈉水溶液(2N,15mL).分液，水相用二氯甲烷(50mL×2)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(50mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮得到標題化合物(12.3g,黃色油狀物)，產率85％。MSm/z(ESI):271.2(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2- 胺向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(500mg,1.5mmol)，氨水(5mL)和異丙醇(5mL)，100℃下悶罐反應12小時。冷卻至室溫，反應液減壓濃縮,得標題化合物的粗產品(450mg,黃色油狀物)直接用于下一步反應。MSm/z(ESI):316.1(M+H)第三步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(100mg,0.31mmol，第二步制備)，1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪(88mg,0.31mmol),碳酸銫(194mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(65mg,白色固體)，產率42％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.09(s,1H),8.70(d,J＝3.6Hz,1H),8.23-8.21(m,3H),7.73-7.68(m,2H),3.53(s,2H),3.12-3.09(m,2H),2.97-2.95(m,4H),2.66-2.50(m,9H),1.67(s,6H)MSm/z(ESI):505.2(M+H)實施例211-(2-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羥乙基-1-酮第一步：2-(2-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸乙酯向反應瓶中加入2-(2-氯-7,8-二氫-1,6--萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸鹽(85mg,0.32mmol),5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(100mg,0.32mmol),Cs2CO3(208mg,0.64mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(20mg,黃色油)，產率11％。MSm/z(ESI):548.0(M+H)第二步：1-(2-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羥乙基-1-酮在反應瓶中加入2-(2-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸乙酯(20mg,0.37mmol，第一步制備)，甲醇鈉(1M甲醇溶液，2mL)和二氯甲烷(6mL)。在氮氣環境中，混合物在 室溫下攪拌1小時。加入水(10mL),乙酸乙酯萃取(10mL×3).合并有機相，飽和食鹽水(40mL),無水硫酸鈉干燥。抽濾，濾液減壓濃縮，用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(10mg,黃色固體)，產率54％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.99(s,1H),8.68(s,1H),8.23(s,1H),8.11(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(d,J＝12.4Hz,1H),7.63-7.55(m,1H),4.66-4.56(m,2H),4.21(brs,2H),3.82-3.70(m,2H),3.11(t,J＝7.2Hz,2H),2.89-2.82(m,2H),2.57(t,J＝7.6Hz,2H),1.68(s,6H)MSm/z(ESI):506.1(M+H)實施例22N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.32mmol，實施例9制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(70mg,0.32mmol),碳酸銫(208mg,0.64mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(16mg,淡黃色固體)，產率10％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.89(s,1H),8.61(d,J＝5.2Hz,1H),8.35(s,1H),8.33(s,1H),8.24(s,1H),7.89(d,J＝12.8Hz,1H),7.74-7.72(m,2H),3.56(s,2H),3.09(t,J＝7.2Hz,2H),2.93-2.90(m,4H),2.57-2.54(m,4H),2.39-2.35(m,2H),1.70(s,6H),0.86-0.83(m,5H)MSm/z(ESI):501.2(M+H)實施例234-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.32mmol，實施例9制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(89mg,0.32mmol)，碳酸銫(208mg,0.64mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL).混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(45mg,黃色油狀物)，產率25％。MSm/z(ESI):559.1(M+H)第二步：4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(45mg,0.08mmol，第一步制備)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(20mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(18mg,黃色固體)，產率49％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.62(s,1H),8.55(d,J＝5.6Hz,1H),8.30(s,1H),8.18(d,J＝9.2Hz,1H),8.05(s,1H),7.87(d,J＝12.4Hz,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.48-7.46(m,1H),3.22(brs,4H),3.10-3.06(m,6H),2.57-2.54(m,3H),1.69(s,6H)MSm/z(ESI):459.2(M+H)實施例244-(1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(200mg,0.63mmol，按照實施例10方法制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(139mg,0.63mmol),碳酸銫(410mg,1.26mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，BINAP (37mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(5mL)。混合物在120℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(134mg,淡黃色固體)，產率43％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.08(s,1H),8.67(s,1H),8.39(s,1H),8.28-8.23(m,2H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.72-7.67(m,2H),3.55(s,2H),3.42-3.39(m,2H),3.10-3.07(m,4H),2.93-2.90(m,4H),2.56-2.52(m,2H),2.43-2.41(m,2H),1.67(s,6H),1.21(t,J＝6.8Hz,3H)MSm/z(ESI):501.1(M+H)實施例254-(1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((4-(1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(300mg,0.95mmol，按照實施例10方法制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(264mg,0.95mmol)，碳酸銫(618mg,1.9mmol),Pd2(dba)3(87mg,0.095mmol)，BINAP(124mg,0.2mmol)和無水1,4-二氧六環(4mL).混合物在120℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(50mg,黃色固體)，產率9.4％。MSm/z(ESI):559.3(M+H)第二步：4-(1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(50mg,0.09mmol，第一步制備)，三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(5mL).混合物在室溫下攪拌反應3小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(20mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(22mg,黃色固體)，產率54％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.31(s,1H),8.71(s,1H),8.43(s,1H),8.06-8.02(m,3H),7.93(d,J＝7.2Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),4.75(brs,1H),3.40-3.28(m,10H),2.63-2.59(m,2H),1.73(s,6H)MSm/z(ESI):477.1(M+H)實施例265-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7- 基)-N-(5-(哌嗪-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：6-硝基-3',6'-二氫-[3,4'-雙吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(20.3g,0.1mol)，4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼-2-基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(30.9g,0.1mol)，碳酸銫(65g,0.2mol)，Pd(dppf)Cl2(7.33g,0.01mol)和二氧六環/水(250mL/30mL)。混合物在85℃下攪拌反應12小時，冷卻至室溫，減壓濃縮，用柱層析色譜法(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(11g,白色固體)，產率36％。MSm/z(ESI):306.1(M+H)第二步：4-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入6-硝基-3',6'-二氫-[3,4'-雙吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(0.9g,3mmol，第一步制備)，鈀碳(10％，90mg)和乙酸乙酯/甲醇(10mL/10mL)，混合物在氫氣下攪拌反應12小時。過濾，濾液濃縮直接得到標題化合物(790mg,白色固體)，產率95％。MSm/z(ESI):278.2(M+H)第三步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實施例1方法制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(83mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL).混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(45mg,黃色固體)，產率26％。MSm/z(ESI):576.2(M+H)第四步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(45mg,0.078mmol，第三步制備)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(25mg,黃色固體)，產率68％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.06(s,1H),8.69(s,1H),8.20-8.17(m,3H),7.72(d,J＝12.4Hz,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,1H),3.12-3.09(m,2H),3.03-3.01(m,2H),2.98-2.95(m,3H),2.58-2.55(m,2H),1.97-1.94(m,2H),1.85-1.82(m,2H),1.67 (s,6H)MSm/z(ESI):476.1(M+H)實施例275-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-((6-溴吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入6-溴-3-醛基吡啶(5.0g,26.88mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.5g,35mmol)和二氯甲烷(30mL),再分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(8.6g,40mmol).化合物在室溫下攪拌反應12小時，加入飽和碳酸鈉溶液(15mL)，二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(3.4g,淡黃色固體)，產率36％。MSm/z(ESI):357.2(M+H)第二步：4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向微波反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(95mg,0.3mmol，按照實施例1方法制備),4-((6-溴吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(107mg,0.3mmol),碳酸銫(195mg,0.6mmol)，Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xant-phos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(2mL)。混合物在120℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),二氯甲烷(10mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(62mg,黃色油)，產率35％。MSm/z(ESI):591.2(M+H)第三步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(62mg,0.1mmol，第二步制備)，鹽酸(2N,2mL)和1,4-二氧六環(2mL).混合物在室溫下攪拌反應2小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(5mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(22mg,黃色固體)，產率45％。1H-NMR(DMSO-d6,400MHz),δ10.08(s,1H),8.69(s,1H),8.23-8.2(m,3H),7.73-7.68(m,2H),3.54(s,2H),3.12-3.06(m,6H),2.58-2.55(m,6H),1.68(s,6H)MSm/z(ESI):491.1(M+H)實施例28N-(5-(4-氨基哌啶-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H- 苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺第一步：(1-(6-硝基吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯向反應瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(2.0g,9.9mmol)，哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(1.98g,9.9mmol)，三乙胺(1.31g,12.87mmol)和二甲基亞砜(8mL)。混合物在120℃下微波反應1.5小時，冷卻至室溫，乙酸乙酯萃取(25mL×3).合并有機相，飽和食鹽水洗滌(25mL),無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/5)純化得到的殘留物，得到標題化合物(1.4g,黃色固體)，產率44.1％。MSm/z(ESI):323.1(M+H)第二步：(1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯向反應瓶中加入(1-(6-硝基吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g,3.1mmol，第一步制備)，Pd/C(0.1g),乙酸乙酯(2mL)和乙醇(8mL)。在氫氣中，混合物室溫攪拌反應12小時。反應液抽濾，濾餅用乙酸乙酯(20mL)洗滌，合并有機相，濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝50/1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(0.87g,類白色固體)，產率95％。MSm/z(ESI):293.2(M+H)第三步：(1-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯向微波反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(150mg,0.45mmol，實施例1制備),(1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(131mg,0.45mmol),碳酸銫(292mg,0.90mmol)，Pd2(dba)3(41mg,0.045mmol)，Xant-phos(26mg,0.045mmol)和1,4-二氧六環(10mL)。混合物在120℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),二氯甲烷(10mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(39mg,黃色油)，產率14.7％。MSm/z(ESI):591.3(M+H)第四步：N-(5-(4-氨基哌啶-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入(1-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(30.0mg,0.05mmol，第三步制備)，鹽酸(2N,2mL)和1,4-二氧六環(2mL).混合物在室溫下攪拌反應2小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(5mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標 題化合物(18mg,黃色固體)，產率73％。1H-NMR(DMSO-d6,400MHz),δ11.06(s,1H),8.78(d,J＝2.4Hz,1H),8.16(s,1H),8.04-8.01(m,2H),7.94-7.91(m,2H),7.82(d,J＝6.9Hz,1H),7.72(d,J＝9.0Hz,1H),3.74(d,J＝9.0Hz,2H),3.22-3.20(m,1H),3.13(t,J＝5.4Hz,2H),2.86(t,J＝8.4Hz,2H),2.58((t,J＝5.7Hz,2H),2.00-1.98(m,2H),1.66-1.60(m,8H)MSm/z(ESI):491.2(M+H)實施例295-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：6-溴-2-甲基-3-醛吡啶向反應瓶中加入3,6-二溴-2-甲基吡啶(1.0g,3.9mmol)和無水乙醚(10mL)冷卻至-78℃，滴加n-BuLi(1.6Minhexanes,2.4mL,3.9mmol),攪拌1小時，加入無水DMF(307mg,4.2mmol),室溫下攪拌反應1小時。加入飽和氯化銨溶液(10mL)，乙酸乙酯萃取(20mL×3)。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1:10)純化得到的殘留物，得到標題化合物(0.4g,白色固體)，產率51％。MSm/z(ESI):202.1(M+H)第二步:4-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入6-溴-2-甲基-3-醛吡啶(0.4g,2mmol,第一步制備)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.37g,2mmol)，三乙酰基硼氫化鈉(0.53g,2.5mmol)和二氯甲烷(35mL),混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(500mg,白色固體)，產率75％。MSm/z(ESI):372.2(M+H)第三步：4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(95mg,0.3mmol，按照實施例20的第二步反應制備)，4-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(111mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(30mg,黃色固體)，產率17％。MSm/z(ESI):605.3(M+H)第四步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg,0.05mmol，第三步制備)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(4mL).混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(17mg,黃色固體)，產率68％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.96(s,1H),8.67(s,1H),8.24(s,1H),8.04(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝12.8Hz,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,1H),3.42(s,2H),3.21-3.18(m,2H),2.87(brs,4H),2.72(brs,2H),2.58-2.54(m,2H),2.38(s,3H),2.34-2.32(m,2H),1.68(s,6H)MSm/z(ESI):505.3(M+H)實施例305-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌啶-4-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-((6-氨基-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入4-甲基乙烯哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.0g,5mmol)和四氫呋喃(10mL)，再加入9-BBN(0.5MinTHF,15mL,7.5mmol),混合物在75℃下攪拌1小時。冷卻至室溫，再加入5-溴-6-甲基吡啶-2-胺(748mg,4mmol),碳酸鉀(0.8g,5.5mmol),DMF(10mL)和水(1mL),混合物在60℃下攪拌反應4小時。加入水稀釋(10mL),乙酸乙酯萃取(20mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(1g,黃色固體)，產率84％.MSm/z(ESI):306.2(M+H)第二步：4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯向微波反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實施例1方法制備),4-((6-氨基-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(92mg,0.3mmol，第一步制備),碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(27mg,0.03mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(65mg,黃色固體)，產率36％。MSm/z(ESI):604.2(M+H)第三步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6- 甲基-5-(哌啶-4-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(65mg,0.1mmol，第二步制備)，三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(4mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(25mg,黃色固體)，產率50％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.92(s,1H),8.83(brs,1H),8.67(s,1H),8.23(s,1H),8.01(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(d,J＝12.8Hz,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),3.35(s,2H),3.24-3.21(m,2H),3.12-3.10(m,2H),2.58-2.53(m,4H),2.43(s,3H),1.78-1.74(m,3H),1.67(s,6H),1.43-1.40(m,2H)MSm/z(ESI):505.2(M+H)實施例315-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-氯-2-甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入3-溴-6-氯-2-甲基吡啶(1.5g,7.2mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.2g,6.4mmol),叔丁醇鈉(1.4g,14.4mmol),Pd2(dba)3(659mg,0.72mmol)，Xantphos(832mg,1.44mmol)和甲苯(20mL)，混合物在100℃下加熱攪拌反應16小時。冷卻至室溫，過濾，濾液濃縮，用柱層析色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1:5)純化得到的殘留物，得到標題化合物(698mg,黃色油)，產率31％。MSm/z(ESI):312.3(M+H)第二步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(95mg,0.3mmol，按照實施例20的第二步反應制備)，4-(6-氯-2-甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(93mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(69mg,0.12mmol)和1,4-二氧六環(2mL),混合物150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(56mg,黃色固體)，產率32％。MSm/z(ESI):591.3(M+H)第三步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入(56mg,0.095mmol)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(4mL).混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(25mg,黃色固體)，產率54％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.43(s,1H),8.94(brs,1H),8.73(s,1H),8.22(s,1H),7.96(d,J＝8.8Hz,1H),7.74-7.65(m,2H),3.28(brs,4H),3.13-3.09(m,2H),3.09-3.05(m,4H),2.56(t,J＝7.6Hz,2H),2.48(s,3H),1.67(s,6H)MSm/z(ESI):491.3(M+H)實施例32(4-乙基哌嗪-1-基)(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基酮第一步：6-((叔丁氧基羰基)氨基)煙酸乙酯向反應瓶中加入6-氨基煙酸乙酯(10g,60mmol)，DMAP(0.72g,6mmol),(Boc)2O(19.5g,90mmol)和四氫呋喃(600mL)。混合物在室溫下攪拌反應12小時，再加入二氯甲烷(100mL)，鹽酸(0.5N，20mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥。抽濾，濃縮，即得到標題化合物(15g，白色固體)，產率94％。MSm/z(ESI):267.2(M+H)第二步：6-((叔丁氧基羰基)氨基)煙酸向反應瓶中加入6-((叔丁氧基羰基)氨基)煙酸乙酯(10g,37.6mmol，第一步制備),氫氧化鈉(1M，75mL)和MeOH(100mL)，混合物在室溫下攪拌反應12小時。減壓濃縮，殘留物用鹽酸(2N)中和至pH為3,過濾，得到標題化合物(6.5g,白色固體)，產率73％。MSm/z(ESI):239.2(M+H)第三步：(5-(4-乙基哌-1-羰基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯向反應瓶中加入6-((叔丁氧基羰基)氨基)煙酸(5g,21mmol，第二步制備)，1-乙基哌嗪(4.8g，42mmol)，HOBt(4.3g,31.5mmol),三乙胺(6.4g,63mmol)，EDCI(6.0g,31.5mmol和DMF(100mL).混合物在室溫下攪拌反應12小時.反應液濃縮，加入二氯甲烷(50mL)，鹽酸(0.1N，10mL)洗滌，合并有機相，飽和食鹽水洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥。抽濾，濾液濃縮得標題化合物(4.0g,白色固體)，產率57％。MSm/z(ESI):335.2(M+H)第四步：(6-氨基吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲基酮向反應瓶中加入(5-(4-乙基哌-1-羰基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2g,6mmol，第三步制備)，三氟乙酸(5mL)和DMF(20mL).混合物在室溫下攪拌反應12小時.加入二氯 甲烷(20mL)，飽和碳酸鈉溶液洗滌(20mL)，飽和食鹽水(20mL)洗滌。無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液濃縮，得到標題化合物(1.0g,白色固體)，產率71％.MSm/z(ESI):235.1(M+H)第五步：(4-乙基哌嗪-1-基)(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基酮向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(200mg,0.6mmol，實施例1制備)，(6-氨基吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲基酮(140mg,0.6mmol),碳酸銫(391mg,1.2mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(69mg,0.12mmol)和無水1,4-二氧六環(5mL)。混合物在120℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(75mg,黃色固體)，產率24％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.44(s,1H),8.75(s,1H),8.37(s,1H),8.31(d,J＝8.8Hz,1H),8.22(s,1H),7.82-7.97(m,1H),7.71(d,1H),3.37-3.34(m,2H),3.16-3.12(m,2H),3.10-3.08(m,2H),2.56(q,J＝7.6Hz,2H),2.39-2.34(m,6H),1.67(s,6H),0.86(t,J＝7.6Hz,3H)MSm/z(ESI):533.3(M+H)實施例33N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)氧)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺第一步：2-溴-5-((1-乙基哌啶-4-基)氧)吡啶向反應瓶中加入1-乙基哌啶-4-醇(1.0g,7.7mmol)，2,5-二溴吡啶(2g,8.5mmol)和二甲亞砜(30mL),再加入叔丁醇鈉(1.7g,15.4mmol).混合物在室溫下攪拌反應3小時，加入水(30mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(20mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(702mg,黑色固體)，產率32％。MSm/z(ESI):287.2(M+H)第二步:N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)氧)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(100mg,0.32mmol，按照實施例20的第二步方法制備)，2-溴-5-((1-乙基哌啶-4-基)氧)吡啶(91mg,0.32mmol),碳酸銫(208mg,0.64mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(5mL)。混合物在150℃下微波反應1小 時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(50mg,白色固體)，產率30％。1HNMR(DMSO,400MHz)δ9.67(s,1H),8.61(d,J＝3.6Hz,1H),8.57(s,1H),8.12(s,1H),8.00-7.97(m,1H),7.64(d,J＝12.8Hz,1H),4.94-4.91(m,1H),3.10(t,J＝7.2Hz,2H),2.73-2.71(m,2H),2.58-2.56(m,2H),2.37-2.32(m,2H),2.17-2.13(m,2H),1.99-1.97(m,2H),1.66(s,6H),1.62(s,2H),1.02t,J＝6.4Hz,3H)MSm/z(ESI):520.3(M+H)實施例345-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌啶-4-基氧)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-((6-溴吡啶-3-基)氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入4-羥基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g,5mmol)，2,5-二溴吡啶(1.2g,5mmol),叔丁醇鈉(0.72g,7.5mmol)和DMSO(10mL)，混合物在室溫下攪拌反應3小時。加入水(10mL)和二氯甲烷(30mL)，有機相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾，濾液濃縮，用柱層析色譜法(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(0.8g,白色固體)，產率45％。MSm/z(ESI):358.2(M+H)第二步：4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(200mg,0.64mmol，按照實施例20的第二步方法制備)，4-((6-溴吡啶-3-基)氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯(227mg,0.64mmol，第一步制備),叔丁醇鈉(92mg,0.96mmol),Pd2(dba)3(59mg,0.064mmol)，XantPhos(74mg,0.128mmol)和無水1,4-二氧六環(5mL)。混合物在120℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(50mg,黃色固體)，產率13.2％。MSm/z(ESI):592.3(M+H)第三步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌啶-4-基氧)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg,0.084mmol，第二步制備)， TFA(2mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應3小時,再加入水(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×2).合并有機相，飽和食鹽水洗滌(20mL),無水硫酸鈉干燥。減壓濃縮，用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(25mg,黃色固體)，產率60.5％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.73(s,1H),8.63(s,1H),8.61(s,1H),8.10(s,1H),8.06-8.03(m,1H),7.65(d,J＝12.4Hz,1H),6.82(d,J＝8.8Hz,1H),5.16-5.13(m,1H),3.26-3.24(m,3H),3.12-3.05(m,4H),2.58-2.50(m,2H),2.11-2.09(m,2H),1.98-1.96(m,2H),1.81(s,6H)MSm/z(ESI):492.2(M+H)實施例35N-(5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺第一步：1-乙基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪向反應瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(4.0g,19.7mmol)，1-乙基哌嗪(3.4g,29.8mmol)，K2CO3(4.1g,29.6mmol)，TBAI(0.42g,1.2mmol)和二甲亞砜(40mL),混合物在80℃下加熱攪拌反應16小時。冷卻至室溫，將反應液倒入冰水中，二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(20mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(3.59g,棕色固體)，產率77％。MSm/z(ESI):237.1(M+H)第二步：5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺向反應瓶中加入1-乙基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪(0.9g,3.8mmol，第一步制備)，鈀-碳(10％，18mg)和乙酸乙酯/甲醇(9mL/9mL)。在氫氣環境中，混合物在室溫下攪拌反應12小時。過濾，濾液濃縮得標題化合物(720mg,黃色固體)，產率92％。MSm/z(ESI):207.1(M+H)第三步：N-(5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(200mg,0.6mmol，按照實施例1方法制備)，5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺(123mg,0.6mmol，第二步制備),碳酸銫(390mg,1.2mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(5mL)。混合物在120℃下攪拌反應12小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化 得到的殘留物，得到標題化合物(50mg,白色固體)，產率17％。1HNMR(DMSO,400MHz)δ9.80(s,1H),8.62(d,J＝4.0Hz,1H),8.18(s,1H)，8.05-8.02(m,2H),7.68(d,J＝12.4Hz,1H),7.42-7.39(m,1H),3.11-3.08(m,6H),2.57-2.50(m,6H),2.40-2.39(m,2H),1.66(s,6H),0.86(t,J＝6.4Hz,1H)MSm/z(ESI):505.2(M+H)實施例365-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-((4-(2-氟乙基)哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-((6-溴吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入2-溴-5-醛基吡啶(5.0g,27mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.5g,35mmol)和二氯甲烷(30mL),分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(8.6g,40mmol)。混合物在室溫下攪拌反應12小時，加入水(20mL),二氯甲烷萃取(30mL×3).合并有機相，飽和碳酸鈉溶液(40mL)和飽和氯化鈉溶液(40mL)依次洗滌,無水硫酸鈉干燥。抽濾，濾液濃縮，柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(5.3g,白色固體)，產率55％.MSm/z(ESI):358.2(M+H)第二步：1-(4-溴苯基)哌嗪向反應瓶中加入4-((6-溴吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.3g,14.9mmol，第一步制備)，三氟乙酸(5mL)和二氯甲烷(30mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入飽和碳酸鈉溶液(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(3.1g,黃色固體)，產率81％。MSm/z(ESI):257.2(M+H)第三步：1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-(2-氟乙基)哌嗪向反應瓶中加入1-(4-溴苯基)哌嗪(1.4g,5.4mmol，第二步制備)，1-溴-2-氟乙烷(1.4g,10.8mmol)，碳酸鉀(3.0g,21.6mmol)和乙腈(15mL)。混合物在60℃下攪拌反應12小時，冷卻至室溫，過濾，濾餅用乙酸乙酯洗滌，濃縮得標題化合物(813mg,白色固體)，產率50％。MSm/z(ESI):304.1(M+H)第四步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-((4-(2-氟乙基)哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基) 嘧啶-2-胺(200mg,0.63mmol，按照實施例20的第二步方法制備),1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-(2-氟乙基)哌嗪(191mg,0.63mmol),碳酸銫(410mg,1.26mmol)，Pd2(dba)3(58mg,0.063mmol)，BINAP(40mg,0.063mmol)和1,4-二氧六環(4mL)。混合物在120℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(78mg,白色固體)，產率23％。1HNMR(DMSO,400MHz)，δ10.12(s,1H),8.69(d,J＝3.6Hz,1H),8.21-8.19(m,3H),7.72-7.65(m,2H),4.58-4.44(m,2H),3.45(s,2H),3.34(s,2H),3.10(t,J＝7.2Hz,2H),2.57-2.44(m,10H),1.67(s,6H)MSm/z(ESI):537.3(M+H)實施例37N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-6-甲基吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺第一步：1-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪向反應瓶中加入6-溴-2-甲基-3-醛基吡啶(1.5g,7.5mmol)，1-乙基哌嗪(1.1g,9.7mmol)和二氯甲烷(15mL),分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(2.4g,11.25mmol)。混合物在室溫下攪拌反應12小時，過濾，濃縮，用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20/1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(782mg,白色固體)，產率35％。MSm/z(ESI):299.2(M+H)第二步：N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-6-甲基吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(50mg,0.16mmol，按照實施例20的第二步方法制備)，1-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪(47mg,0.16mmol),碳酸銫(104mg,0.32mmol),Pd2(dba)3(29mg,0.032mmol)，BINAP(20mg,0.032mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在120℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(30mg,黃色固體)，產率35％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.95(s,1H),8.67(s,1H),8.23(s,1H),8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(d,J＝12.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),3.51(s,2H),3.35(s,2H),3.12-3.08(m,4H),2.91(brs,4H),2.58-2.54(m,2H),2.50-2.46(m,8H),1.67(s,6H)MSm/z(ESI):533.3(M+H)實施例385-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：1-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪向反應瓶中加入6-溴-2-甲基-3-醛基吡啶(1.5g,7.5mmol)，1-甲基哌嗪(0.97g,9.7mmol)和二氯甲烷(15mL),分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(2.37g,11.25mmol)。混合物在室溫下攪拌反應12小時，過濾，濃縮，用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20/1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(809mg,白色固體)，產率38％。MSm/z(ESI):285.2(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(50mg,0.16mmol，按照實施例20的第二步方法制備),1-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪(45mg,0.16mmol，第一步制備),Pd2(dba)3(29mg,0.032mmol),BINAP(20mg,0.032mmol),Cs2CO3(103mg,0.32mmol)和1,4-二氧六環(2mL)。混合物在120℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(37mg,黃色固體)，產率45％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.94(s,1H),8.67(s,1H),8.23(s,1H),8.04(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(d,J＝12.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),3.51(s,2H),3.12-3.08(m,6H),2.72(s,3H),2.58-2.47(m,9H),1.67(s,6H)MSm/z(ESI):519.3(M+H)實施例39(S)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：(S)-2-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(4.0g,19.7mmol)，(S)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.9g,29.6mmol),碳酸鉀(4.1g,29.6mmol)，TBAI(0.42g,1.2mmol)和DMSO(40mL)。混合物在80℃下攪拌反應16小時，將反應液倒入冰水中，二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(3.5g,白色固體)，產率55％。MSm/z(ESI):323.2(M+H)第二步：(S)-4-(6-氨基吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入(S)-2-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.9g,2.8mmol，第一步制備)，鈀碳(10％，90mg)和乙酸乙酯/甲醇(9mL/9mL)。在氫氣環境中，混合物在室溫下攪拌2小時，過濾，濾液濃縮，得到標題化合物(776mg,白色固體)，產率95％.MSm/z(ESI):293.2(M+H)第三步：(S)-4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(150mg,0.45mmol，按照實施例1方法制備),(S)-4-(5-氨基吡啶-2-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(132mg,0.45mmol，第二步制備),Pd2(dba)3(41mg,0.045mmol),BINAP(56mg,0.09mmol),碳酸銫(294mg,0.9mmol)和1,4-二氧六環(2mL).混合物在120℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(65mg,黃色固體)，產率25％。MSm/z(ESI):591.3(M+H)第四步：(S)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入(S)-4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(65mg,0.11mmol，第三步制備)，TFA(1mL)和二氯甲烷(5mL)。混合物在室溫下攪拌反應3小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(30mg,淡黃色固體)，產率56％。1HNMR(DMSO,400MHz)，δ9.76(s,1H),8.63(s,1H),8.18(s,1H),8.04-8.01(m,2H),7.69(d,J＝12Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,1H),3.49-3.43(m,2H),3.12-3.08(m,2H),2.97-2.95(m,1H),2.84-2.78(m,2H),2.58-2.54(m,4H),2.22-2.17(m,1H),1.67(s,6H),1.02(d,J＝6.0Hz,3H)MSm/z(ESI):491.3(M+H)實施例40(R)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺采用和實施例39類似的方法，以(S)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯為起始原料，經過四步反應合成，得到標題化合物(R)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.76(s,1H),8.61(s,1H),8.17(s,1H),8.04-8.02(m,2H),7.68(d,J＝12.4Hz,1H),7.38(d,J＝6.4Hz,1H),3.48-3.45(m,2H),3.11-3.07(m,2H),2.97-2.95(m,1H),2.83-2.78(m,2H),2.57-2.50(m,3H),2.32-2.17(m,2H),1.66(s,6H),1.02(d,J＝6.0Hz,3H)MSm/z(ESI):491.2(M+H)實施例415-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(150mg,0.5mmol，按照實施例58第一步的方法制備),1-(6-氯-2-甲基吡啶-3-基)-4-甲基哌嗪(135mg,0.5mmol),Pd2(dba)3(46mg,0.05mmol),BINAP(62mg,0.1mmol),叔丁醇鈉(96mg,1.0mmol)和1,4-二氧六環(2mL),混合物在120℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(113mg,黃色固體)，產率46％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.70(s,1H),8.63(s,1H),8.16(s,1H),7.98(d,J＝8.8Hz,1H),7.72(d,J＝12.4Hz,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),4.78-4.74(m,1H),3.14-3.08(m,4H),2.97-2.92(m,5H),2.40(s,3H),2.38-2.29(m,6H),1.58(d,J＝6.4Hz,3H)MSm/z(ESI):491.2(M+H)實施例422-(4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙基-1-醇向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(20mg,0.042mmol，按照實施例19制備),2-溴乙醇(26mg,0.21mmol),碳酸鉀(29mg,0.21mmol)和DMF(2mL)。混合物在90℃下攪拌反應2小時。冷卻至室溫，加入水(10mL)，二氯甲烷萃取(5mL×3),合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，(9mg,黃色固體)，產率43％。1HNMR(D2O-ex,400MHz),δ8.58(d,J＝3.6Hz,1H),8.15(s,1H),8.01(s,1H),7.99(s,1H),7.67(d,J＝12.4Hz,1H),7.41-7.38(m,1H),3.54(t,J＝6Hz,1H),3.11-3.05(m,6H),2.60-2.56(m,6H),2.54-2.52(m,2H),1.64(s,6H)MSm/z(ESI):521.3(M+H)實施例435-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺采用與實施例39相似的方法，以5-溴-2-硝基吡啶和1-甲基哌嗪為起始原料，經過三步反應合成得到標題化合物。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.77(s,1H),8.63(d,J＝3.6Hz,1H),8.18(s,1H),8.06(s,1H),8.03(s,1H),7.69(d,J＝12.4Hz,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),3.14-3.08(m,6H),2.58-2.54(m,6H),2.28(s,3H),1.67(s,6H)MSm/z(ESI):491.3(M+H)實施例445-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：1'-甲基-6-硝基-1',2',3',6'-四氫-3,4'-聯吡啶向反應瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(20.3g,0.1mol)，1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧噁硼-2-基)-1,2,3,6-四氫吡啶(22.3g,0.1mol)，碳酸銫(65g,0.2mol)，Pd(dppf)Cl2(7.33g,0.01mol)和二氧六環/水(250mL/30mL)。混合物在85℃下加熱攪拌反應12小時，冷卻至室溫，減壓濃縮，柱層析色譜法(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(5.7g,白色固體)，產率26％.MSm/z(ESI):220.2(M+H)第二步：5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-胺向反應瓶中加入1'-甲基-6-硝基-1',2',3',6'-四氫-3,4'-聯吡啶(657mg,3.0mmol，第一步制備)，鈀碳(10％，66mg)和乙酸乙酯/甲醇(10mL/10mL)。在氫氣環境中，混合物室溫下攪拌反應2小時，過濾，濾液減壓濃縮，得到標題化合物(550mg,白色固體)，產率96％.MSm/z(ESI):192.1(M+H)第三步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(150mg,0.45mmol，按照實施例1制備),5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-胺(86mg,0.45mmol),Pd2(dba)3(42mg,0.045mmol),BINAP(56mg,0.09mmol),Cs2CO3(293mg,0.9mmol)和無水1,4-二氧六環(4mL)。混合物150℃下微波反應1小時,冷卻至室溫.減壓濃縮，用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(90mg,黃色固體)，產率41％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.02(s,1H),8.69(s,1H),8.21-8.18(m,3H),7.71(d,J＝12.8Hz,1H),7.65(d,J＝6.8Hz,1H),3.45(s,2H),3.13-3.04(m,4H),2.84-2.80(m,4H),2.59-2.55(m,2H),1.99-1.97(m,4H),1.69(s,6H)MSm/z(ESI):490.3(M+H)實施例45N-(5-(1-乙基哌啶-4-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺采用與實施例44相似的合成方法，以5-溴-2-硝基吡啶和1-乙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧噁硼-2-基)-1,2,3,6-四氫吡啶為起始原料，經過三步反應合成得到標題化合物。.1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.07(s,1H),8.69(s,1H),8.27-8.19(m,3H),7.71(d,J＝12.4Hz,1H),7.65(d,J＝6.4Hz,1H),3.57-3.54(m,2H),3.12-3.09(m,4H),2.99-2.97(m,3H),2.58-2.55(m,2H),2.03-2.01(m,4H),1.69(s,6H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H)MSm/z(ESI):504.3(M+H)實施例46(S)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：(S)-4-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入6-溴-3-醛基吡啶(2.43g,13mmol)and(S)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)(3.4g,17mmol)和二氯甲烷(30mL),再分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(4.3g,20mmol)。混合物在室溫下攪拌反應12小時，加入水(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).有機相用飽和Na2CO3溶液洗滌(40mL),飽和食鹽水(40mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(2.2g,白色固體)，產率45％。MSm/z(ESI):372.1(M+H)第二步：(S)-4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(315mg,1mmol，按照實施例20的第二步方法制備),(S)-4-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(369mg,1mmol第一步制備),Pd2(dba)3(92mg,0.1mmol),BINAP(125mg,0.2mmol),叔丁醇鈉(200mg,2.0mmol)和1,4-二氧六環(15mL)。混合物在130℃下攪拌反應3小時，冷卻至室溫，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(100mg,黃色油)，產率17％。MSm/z(ESI):605.3(M+H)第三步：(S)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入(S)-4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.17mmol，第二步制備)，三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(15mL)。混合物在室溫下攪拌反應3小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有機層，飽和食鹽水洗滌(20mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(55mg,黃色固體)，產率64％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.03(s,1H),8.69(s,1H),8.22-8.18(m,3H),7.73-7.65(m,2H),3.41(s,2H),3.12-3.08(m,2H),2.80-2.77(m,1H),2.68-2.63(m,4H),2.59-2.55(m,2H),1.93-1.87(m,2H),1.67(s,6H)，1.59-1.54(m,1H)，0.89(t,J＝6.4Hz,3H)MSm/z(ESI):505.3(M+H)實施例47(S)-N-(5-((3,4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入(S)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(51mg,0.1mmol，按照實施例46制備),甲醛(5mg,0.15mmol)，三乙酰氧基硼氫化鈉(41mg,0.5mmol)和二氯甲烷(4mL)。混合物在室溫下攪拌反應3小時，加入水(4mL)，二氯甲烷萃取(5mL×3)，合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(19mg,黃色固體)，產率37％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.03(s,1H),8.69(s,1H),8.21-8.19(m,3H),7.73-7.65(m,2H),3.41(s,2H),3.11(t,J＝7.6Hz,2H),2.66-2.57(m,5H),2.14-2.11(m,5H),2.00(brs,1H),1.79-1.74(m,1H),1.68(s,6H)，0.92(t,J＝6.0Hz,3H)MSm/z(ESI):519.3(M+H)實施例48N-(5-((4-環丙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(50mg,0.1mmol，按照實施例27制備)，碳酸鉀(71mg,0.51mmol),環丙基溴(37mg,0.3mmol)和DMF(4mL)，混合液在50℃攪拌反應5小時,冷卻至室溫,加入水(10mL)，二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(17mg,黃色固體)，產率32％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.032(s,1H),8.69(s,1H),8.22-8.19(m,3H),7.73-7.65(m,2H),5.84-5.74(m,1H),5.18-5.09(m,2H),3.45(s,2H),3.11(t,J＝7.6Hz,2H),2.92(d,J＝6.4Hz,2H),2.59-2.55(m,3H),2.39-2.37(m,7H),1.68(s,6H)MSm/z(ESI):531.3(M+H)實施例49N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(96mg,0.3mmol，按照實施例5制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL),混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物胺(30mg,黃色固體)，產率20％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.01(s,1H),8.70(s,1H),8.20-8.18(m,2H),8.05(s,1H),7.78-7.71(m,2H),4.44-4.40(m,1H),3.83-3.78(m,1H),3.48(s,2H),3.25-3.20(m,3H),2.72-2.65(m,3H),2.37-2.32(m,6H),1.29-1.23(m,7H)MSm/z(ESI):505.2(M+H)實施例505-氟-4-(5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(96mg,0.3mmol),4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(84mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環 (2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(30mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(28mg,黃色固體)，產率17％。MSm/z(ESI):563.1(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(28mg,0.05mmol，第一步制備)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(4mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(10mg,黃色固體)，產率44％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.75(s,1H),8.64(s,1H),8.08-8.02(m,3H),7.73(d,J＝12.4Hz,1H),7.48(d,J＝12.4Hz,1H),4.39(q,J＝6.4Hz,1H),3.82-3.78(m,1H),3.32-3.25(m,2H),3.23-3.20(m,2H),3.09-3.07(m,2H),2.69-2.67(m,2H),1.29-1.23(m,7H)MSm/z(ESI):463.1M+H)實施例514-(2-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實施例6制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(30mg,黃色固體)，產率20％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.96(s,1H),8.68(s,1H),8.19(s,1H),8.17(s,1H),8.05(s,1H),7.77-7.07(m,2H),4.44-4.40(m,1H),3.88-3.84(m,1H),3.46(s,2H),3.23-3.21(m,3H),3.08-3.04(m,2H),2.76-2.70(m,2H),2.35-2.32(m,6H),1.68-1.63(m,2H),1.00-0.97(m,6H)MSm/z(ESI):519.1(M+H)實施例524-(2-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟 -N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((4-(2-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實施例6制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(83mg,0.3mmol),碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(40mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(30mg,黃色固體)，產率17.4％。MSm/z(ESI):577.2(M+H)第二步：4-(2-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((4-(2-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg,0.05mmol，第一步制備)，TFA(0.5mL)和二氯甲烷(3mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(15mg,白色固體)，產率63％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.52(s,1H),8.78(s,1H),8.73(s,1H),8.06-8.03(m,2H),7.95(d,J＝9.2Hz,1H),7.77-7.74(m,2H),4.44(t,J＝8.4Hz,1H),3.87(t,J＝7.2Hz,1H),3.36-3.28(m,4H),3.24-3.22(m,4H),3.20-3.18(m,1H),3.10-3.06(m,1H),2.77-2.71(m,1H),1.70-1.63(m,2H),0.99(t,J＝7.2Hz,3H)m/z(ESI):477.1(M+H)實施例535-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.31mmol，按照實施例2制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(91mg,0.31mmol)，碳酸銫(202mg,0.62mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫,加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物,得到標題化合物(62mg,黃色固體)，產率35％。MSm/z(ESI):577.6(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(62mg,0.1mmol，第一步制備)，三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(6mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),乙酸乙酯萃取(10mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物,得到標題化合物(26mg,黃色固體)，產率54.6％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.47(s,1H)，9.25(s,1H),8.72(s,1H),8.13(s,1H),8.05(s,1H),7.98(d,J＝8.8Hz,1H),7.75-7.72(m,2H),4.78-4.76(m,1H),3.80-3.74(m,2H),3.45-3.42(m,2H),3.17-3.10(m,2H),3.08-2.97(m,3H),2.78-2.72(m,1H),2.29-2.28(m,1H),1.56(d,J＝6.4Hz,3H),1.28(d,J＝6.4Hz,3H)MSm/z(ESI):477.5(M+H)實施例544-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((4-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟嘧啶 -2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.30mmol，實施例3制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(83mg,0.30mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(72mg，黃色固體)，產率41.7％。MSm/z(ESI):577.61(M+H)第二步：4-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((4-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(72mg,0.13mmol，第一步制備)，三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(6mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),乙酸乙酯萃取(40mL×3)，合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(31mg,黃色固體)，產率50％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.45(s,1H),8.72(s,1H),8.12(s,1H)，8.02(s,1H)，7.99-7.97(m,1H)，7.74-7.70(m,2H)，4.70-4.68(m,1H),3.35-3.34(m,4H),3.28-3.26(m,4H),3.11-3.09(m,1H),3.09-3.02(m,1H),2.85-2.80(m,1H),2.42-2.38(m,1H),2.11-2.09(m,1H),1.85-1.82(m,1H),0.91(t,J＝7.2Hz,3H)MSm/z(ESI):477.3(M+H)實施例555-氟-4-(5-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,2-二甲基-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(200mg,0.6mmol，按照實施例4制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(167mg,0.6mmol)，碳酸銫(390mg,1.2mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(69mg,0.12mmol)和1,4-二氧六環(4mL)。混合物在150℃下微波反應45分鐘。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(80mg,黃色固體)，產率23％。MSm/z(ESI):577.2(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg,0.14mmol，第一步制備)，三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(6mL)。混合物在室溫下攪拌反應3小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝5:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(40mg,黃色固體)，產率60％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.67(s,1H),8.63(s,1H),8.04-8.00(m,3H),7.73(d,J＝12.4Hz,1H),7.45-7.42(m,1H),4.00(s,2H),3.03-3.01(m,4H),2.89(s,2H),2(m,4H),2.85(brs,4H),1.30(s,6H)MSm/z(ESI):477.1(M+H)實施例56N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,2-二甲基-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實施例4制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(27mg,0.03mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應45分鐘。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(20mg,黃色固體)，產率14％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.94(s,1H),8.69(s,1H),8.19(s,1H),8.17(s,1H),8.04(s,1H),7.78-7.70(m,2H),4.02(s,2H),3.44(s,2H),2.90(s,2H),2.33-2.29(m,10H),1.31(s,6H),0.97(t,J＝7.2Hz,3H)MSm/z(ESI):519.2(M+H)實施例575-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實施例1制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(88mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(40mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(40mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(52mg,黃色固體)，產率29.4％。MSm/z(ESI):591.3(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(52mg,0.09mmol，第一步制備)，三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(6mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(20mg,黃色固體)，產率45.4％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.95(s,1H),8.66(s,1H),8.17(s,1H),8.09-8.08(m,2H),7.69(d,J＝12.4Hz,1H)，52-7.49(m,1H),3.75-3.72(m,2H)，3.44-3.38(m,2H),3.35-3.33(m,1H),3.11-3.08(m,2H),2.97-2.91(m,1H),2.75-2.70(m,1H)，2.57-2.73(m,2H)，1.66(s,6H),1.28(d,J＝6.4Hz,3H)MSm/z(ESI):491.3(M+H)實施例581-(2-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羥基乙基-1-酮第一步：5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(500mg,1.56mmol，按照實施例2制備)，氨水(5mL)和異丙醇(5mL)，100℃下悶罐反應12小時。冷卻至室溫，反應液減壓濃縮,得標題化合物的粗產品(420mg,黃色油狀物)直接用于下一步反應。MSm/z(ESI):302.1(M+H)第二步：2-(2-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸酯向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(200mg,0.66mmol，第一步制備)，2-(2-氯-7,8-二氫-1,6--萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸鹽(176mg,0.66mmol),碳酸銫(423mg,1.3mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(4mL)。混合物150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(80mg,黃色固體)，產率22.8％。MSm/z(ESI):534.1(M+H)第三步：1-(2-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羥基乙基-1-酮向反應瓶中加入2-(2-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸酯(80mg,0.15mmol，第二步制備)，甲醇鈉(0.2mL)和二氯甲烷(6mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水(10mL)稀釋，二氯甲烷萃取(20mL×2)，合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝5:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(20mg,黃色固體)，產率27.4％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.98(s,1H),8.68(s,1H),8.17(s,1H),8.09(d,J＝8.4Hz,1H),7.75(d,J＝12.8Hz,1H),7.65-7.57(m,1H),4.79-4.56(m,4H),4.22-4.19(m,2H),3.82-3.69(m,2H),3.11-2.81(m,5H),1.58(d,J＝6.4Hz,3H)MSm/z(ESI):492.1(M+H)實施例595-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(96mg,0.3mmol，實施例2制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(83mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(51mg,黃色固體)，產率30％。MSm/z(ESI):563.2(M+H)第二步:5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(51mg,0.09mmol,第一步制備)，三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(6mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(21mg,黃色固體)，產率51.2％。1HNMR(DMSO,300MHz),δ10.21(s,1H),8.69(s,1H),8.14(s,1H),8.06-8.00(m,2H),7.74(d,J＝12.4Hz,1H),7.66-7.63(m,1H),4.77(q,J＝6.4Hz,1H),3.19-3.16(m,6H),3.15-3.11(m,2H),2.98-2.90(m,3H),2.35-2.31(m,1H),1.57(d,J＝4.5Hz,3H)MSm/z(ESI):463.1(M+H)實施例60N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(96mg,0.3mmol,實施例2制備),5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(27mg,0.03mmol),XantPhos(35mg,0.06mmol)和1,4-二 氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫,加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(45mg,白色固體)，產率29.8％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.03(s,1H),8.70(d,J＝4.0Hz,1H),8.22(s,1H),8.20(s,1H),8.16(s,1H),7.76-7.71(m,2H),4.78(q,J＝6.4Hz,1H),3.54(s,2H),3.11-2.85(m,12H),2.32-2.28(m,2H),1.58(d,J＝6.4Hz,3H),1.24(s,3H)MSm/z(ESI):505.1(M+H)實施例615-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.31mmol，按照實施例2制備)，叔丁基-4-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸(85mg,0.31mmol)，碳酸銫(201mg,0.62mmol),Pd2(dba)3(27mg,0.03mmol),Xantphos(17mg,0.03mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(20mg,黃色固體)，產率11.5％。MSm/z(ESI):562.1(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(20mg,0.03mmol，第一步制備)，TFA(0.5mL)和二氯甲烷(6mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(15mg,黃色固體)，產率91％.1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.98(s,1H),8.69-8.68(m,1H),8.29-8.16(m,3H),7.75-7.64(m,2H),4.79(q,J＝4Hz,1H),3.32-3.03(m,2H),3.01-2.93(m,1H),2.93-2.86(m,3H),2.50-2.32(m,1H),2.32-2.30(m,2H),2.30-1.92(m,2H),1.92-1.88(m,2H),1.80-1.77(m,3H)MSm/z(ESI):462.1(M+H)實施例625-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌啶-4-亞甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：叔丁基4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.31mmol，實施例2制備)，叔丁基4-((6-氨基-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(94mg,0.31mmol),碳酸銫(201mg,0.62mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(18mg,黃色固體)，產率10％。MSm/z(ESI):590.2(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌啶-4-亞甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌啶-4-亞甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(18mg,0.03mmol，第一步制備)，TFA(0.5mL)和二氯甲烷(3mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(10mg,黃色固體)，產率66％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.98(s,1H),8.69-8.68(m,1H),8.29-8.16(m,3H),7.75-7.64(m,2H),4.79(q,J＝4Hz,1H),3.32-3.03(m,2H),3.01-2.93(m,1H),2.93-2.86(m,3H),2.50-2.32(m,1H),2.32-2.30(m,2H),2.30-1.92(m,2H),1.92-1.88(m,2H),1.80-1.77(m,3H)MSm/z(ESI):490.2(M+H)實施例635-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(100mg,0.33mmol，按照實施例58第一步的方法制備)，1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪(87.7mg,0.33mmol),Cs2CO3(214mg,0.66mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(35mg,黃色固體)，產率22％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.10(s,1H),8.71-8.70(m,1H),8.24-8.16(m,2H),7.76-7.71(m,2H),7.40-7.38(m,1H),4.79(q,J＝4Hz,1H),3.60-3.58(m,4H),3.33-2.90(m,6H),2.90-2.70(m,2H),2.70-2.50(m,4H),2.32-2.29(m,1H),1.59-1.57(m,3H)MSm/z(ESI):491.2(M+H)實施例64N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-6-甲基吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(200mg,0.66mmol，按照實施例58第一步的方法制備)，1-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪(198mg,0.66mmol),Cs2CO3(429mg,1.32mmol),Pd2(dba)3(118mg,0.13mmol),Xantphos(75mg,0.13mmol)和無水1,4-二氧六環(4mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(88mg,黃色固體)，產率26％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ8.63(s,1H),8.12-8.00(m,1H),8.00-7.98(m,1H),7.73-7.71(m,1H),7.60-7.58(m,1H),4.76(q,J＝6.5Hz,1H),3.70(s,2H),3.12-2.83(m,10H),2.50(s,3H),2.44-2.30(m,1H),1.56-1.54(m,3H),2.23-1.15(m,3H)MSm/z(ESI):519.2(M+H)實施例655-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-((4-異丙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(150mg,0.5mmol，按照實施例58第一步的方法制備)，1-((6-溴吡啶-3-yl)甲基)-4-異丙基哌嗪(149mg,0.5mmol),Cs2CO3(325mg,1mmol),Pd2(dba)3(91mg,0.1mmol),Xantphos(57mg,0.1mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(93mg,黃色固體)，產率36％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ8.65(s,1H),8.19-8.11(m,3H),7.73-7.69(m,2H),4.76(q,J＝6.6Hz,1H),3.70-3.50(m,2H),3.08-2.82(m,9H),2.50-2.27(m,4H),1.56-1.54(m,3H),1.09-1.07(m,6H)MSm/z(ESI):519.3(M+H)實施例665-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基-N-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(200mg,0.63mmol，實施例2制備)，5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-胺(120mg,0.63mmol),Cs2CO3(406mg,1.25mmol),Pd2(dba)3(119mg,0.13mmol),Xantphos(75mg,0.13mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(100mg,黃色固體)，產率33％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.98(s,1H),8.69-8.68(m,1H),8.29-8.16(m,3H),7.75-7.64(m,2H),4.77(q,J＝4Hz, 1H),3.32-3.03(m,6H),3.03-2.89(m,3H),2.72-2.50(m,2H),2.29-2.28(m,1H),1.99-1.97(m,4H),1.59-1.57(m,3H)MSm/z(ESI):476.3(M+H)實施例674-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟-N-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1-乙基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(200mg,0.63mmol)，1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪(171mg,0.63mmol),Cs2CO3(406mg,1.25mmol),Pd2(dba)3(119mg,0.13mmol),Xantphos(75mg,0.13mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(80mg,黃色固體)，產率25％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.06(s,1H),8.70(s,1H),8.23-8.21(d,2H),8.15(s,1H),7.77-7.71(m,2H),4.70-4.68(m,1H),3.56-3.33(m,4H),3.15-2.97(m,6H),2.86-2.81(m,2H),2.97(s,4H),2.43-2.39(m,1H),1.87-1.83(m,1H),0.95-0.91(m,3H)MSm/z(ESI):505.3(M+H)實施例684-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑l-7-基)-5-氟-N-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-乙基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(200mg,0.6mmol，按照實施例3制備)，5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-胺 (114mg,0.6mmol),Cs2CO3(390mg,1.2mmol),Pd2(dba)3(110mg,0.12mmol),Xantphos(69mg,0.12mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(90mg,黃色固體)，產率30％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.01(s,1H),8.69(s,1H),8.21-8.15(m,3H),7.75-7.58(m,2H),4.73-4.69(m,1H),3.47-3.38(m,2H),3.10-3.01(m,4H),2.86-2.80(m,3H),2.50-2.30(d,1H),2.01-1.86(d,6H),1.26-1.18(m,2H),0.95-0.91(m,3H)MSm/z(ESI):490.2(M+H)實施例69N-(5-(1-乙基哌啶-4-yl)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(50mg,0.16mmol，實施例2制備)，5-(1-乙基哌啶-4-基)吡啶-2-胺(32mg,0.16mmol),Cs2CO3(104mg,0.32mmol),Pd2(dba)3(27mg,0.03mmol),Xantphos(17mg,0.03mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL),混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(17mg,黃色固體)，產率22％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.90(s,1H),8.68-8.67(m,1H),8.20-8.16(m,3H),7.60-7.70(m,2H),4.72-4.65(s,1H),3.16-2.89(m,2H),2.36-2.33(m,2H),2.03-1.96(m,1H),1.74(s,2H),1.59-1.58(m,2H),1.46-1.39(m,3H),1.35-1.34(m,3H),1.08-0.01(m,3H),0.87-0.84(m,3H)MSm/z(ESI):490.2(M+H)實施例704-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-((4-乙基哌嗪-1-yl)甲基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-乙基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，實施例3制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),Cs2CO3(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(31mg,黃色固體)，產率20％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.07(s,1H),8.70(s,1H),8.20-8.22(m,2H),8.06(s,1H),7.73-7.79(m,2H),4.69(q,J＝4.8Hz,1H),3.49-3.10(m,8H),3.10-2.97(m,3H),2.97-2.80(m,2H),2.50-2.39(m,3H),2.14-2.11(m,1H),1.85-1.82(m,1H),1.06-0.94(m,H),0.93-0.91(m,3H)MSm/z(ESI):519.3(M+H)實施例71N-(5-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實施例1制備)，5-(4-(二甲氨基)環己基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),Cs2CO3(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(30mg,黃色固體)，產率20％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.84(s,1H),8.64-8.63(m,1H),8.17-8.11(m,1H),8.06-8.04(m,2H),7.70-7.67(m,1H),7.46-7.43(m,1H),3.78-3.75(m,2H),3.36-3.08(m,4H),2.69-2.57(m,8H),2.55-2.54(m,2H),2.07-1.90(m,2H),1.74-1.66(m,7H)MSm/z(ESI):519.3(M+H)實施例724-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：叔丁基4-(6-((4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)哌嗪-2-基)氨)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯向反應瓶中加入7-(2-氯-嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.33mmol，按照實施例9類似的方法制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(92mg,0.33mmol)，碳酸銫(215mg,0.66mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(30mg,黃色固體)，產率16.5％。MSm/z(ESI):545.3(M+H)第二步：4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入叔丁基4-(6-((4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)哌嗪-2-基)氨)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯(30mg,0.055mmol，第一步制備)，TFA(0.5mL)和二氯甲烷(6mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(15mg,黃色固體)，產率63％.1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.77(s,1H),8.90(s,2H),8.64-8.31(m,2H),8.04-8.03(m,1H),7.94-7.79(m,4H),4.77-4.72(m,1H),3.38-3.30(m,8H),3.13-2.81(m,3H),2.29-2.26(m,1H),1.61-1.60(m,3H)MSm/z(ESI):445.3(M+H)實施例73N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應瓶中加入7-(2-氯-嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.33mmol，按照實施例9相似的方法制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(73mg,0.33mmol),Cs2CO3(195mg,0.66mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(62mg,黃色固體)，產率39％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.03(s,1H),8.60(s,1H),8.62-8.40(m,2H),8.40-8.32(m,1H),7.91-7.88(m,1H),7.76-7.68(m,2H),4.77-4.71(m,1H),3.56-3.44(m,2H),3.41-3.35(m,8H),3.09-2.89(m,3H),2.50-2.30(m,2H),2.29-2.28(m,1H),1.62-1.61(m,3H),1.23-1.16(m,3H)MSm/z(ESI):487.3(M+H)實施例74N-(5-(3,5-二甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺第一步：2,6-二甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(2.0g,9.33mmol)，2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.0g,14mmol),碳酸鉀(2.0g,14mmol)，TBAI(0.22g,0.6mmol)和二甲亞砜(20mL)，混合物在80℃下攪拌反應16小時。冷卻至室溫，將反應液倒入冰水中，二氯甲烷萃取(50mL×3)。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物,得到標題化合物(1.7g,白色固體)，產率 54％。MSm/z(ESI):337.1(M+H)第二步：4-(6-氨基吡啶-3-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應瓶中加入2,6-二甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.0g,3.0mmol,第一步制備)，鈀碳(10％，0.1g)和乙酸乙酯/甲醇(10mL/10mL),混合物在氫氣環境中室溫攪拌反應2小時。過濾，濾液濃縮，得到標題化合物(872mg,白色固體)，產率95％。MSm/z(ESI):307.2(M+H)第三步：叔丁基4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨)吡啶-3-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸酯向反應瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(200mg,0.6mmol，按照實施例1制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(183mg,0.6mmol，第二步制備)，碳酸銫(390mg,1.2mmol),Pd2(dba)3(110mg,0.12mmol)，Xantphos(69mg,0.12mmol)和無水1,4-二氧六環(2mL)。混合物在150℃下微波反應1小時。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(40mL×3)萃取分液。合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(50mg,黃色固體)，產率13％。MSm/z(ESI):605.2(M+H)第四步：N-(5-(3,5-二甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨)吡啶-3-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(50mg,0.1mmol，第三步制備)，TFA(0.5mL)和二氯甲烷(6mL)。混合物在室溫下攪拌反應1小時，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有機層，飽和食鹽水洗滌(10mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標題化合物(20mg,黃色固體)，產率50％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.76(s,1H),8.63(s,1H),8.18(s,1H),8.04-8.02(d,2H),7.71-7.68(d,1H),7.40-7.37(m,1H),5.76(s,1H),3.49-3.48(d,2H),3.12-3.08(m,2H),2.89-2.84(m,2H),2.58-2.50(m,2H),2.14-2.09(m,3H),1.66(s,6H),1.03-1.01(m,6H)MSm/z(ESI):505.3(M+H)以下實驗例中所用的對照品，編號為LY2835219,參考專利WO2010075074制備方法制備，其結構式如”
背景技術：
”部分結構式3所示。實驗例1本發明化合物的CDKs激酶抑制活性測定本發明所述化合物體外對CDK(CDK1、CDK4、CDK6)激酶活性的抑制作用通過以下的方法進行測試。本實驗例所用儀器和試劑盒信息實驗準備：1.激酶反應緩沖液Ⅰ的配制：將試劑盒中給出的5×ReactionBufferA(Promega；V307A-C)用MilliQH2O和0.1MDTT(二硫蘇糖醇)混合稀釋成4×激酶緩沖液；再按比例加入MilliQH2O，最終配制成1x激酶緩沖液。激酶反應緩沖液Ⅱ的配制：在1x激酶反應緩沖液中加入0.5％DMSO(二甲基亞砜)混勻即可。2.激酶溶液的配制：用1x激酶反應緩沖液將100ng/μl激酶儲液配制每個反應體系所需濃度的激酶溶液。3.供試化合物和對照品LY2835219溶液的配制:(1)配制對照品LY2835219溶液a.分別取1μl的10mM標準品儲液，加入到9μl的激酶反應緩沖液I中，混勻；再加入90μl的激酶反應緩沖液Ⅰ，混勻；再加入100μl的激酶反應緩沖液Ⅰ，混勻；得到終濃度為50μM。b.在96-孔板的B2-B10中加入40μl的激酶反應緩沖液Ⅱ；在B1中加入50μl上述溶液；c.從孔B1中取出10μl加入B2，混勻，然后取10μl加入到B3，依次稀釋B9；得到依次5倍稀釋的對照品溶液。(2)準備供試化合物溶液：a.分別取一定濃度的供試化合物溶液，用激酶反應緩沖液Ⅰ稀釋到終濃度為50μM的化合物溶液；b.在96-孔板的H2-H10中加入40μl的激酶反應緩沖液Ⅱ；在H1中加入50μl上述溶液；c.從孔H1中取出10μl加入H2，混勻，然后取10μl加入到H3，依次稀釋H9；得到依次5倍稀釋的供試化合物溶液。4.準備反應底物和ATP混合溶液：a.準備ATP溶液：200μl0.1mMATP溶液:2μl10mMATP加入198μl激酶反應緩沖液Ⅰ；300μl50μMATP溶液：加150μl的激酶反應緩沖液Ⅰ到150μl上述0.1mMATP溶液中；b.準備300μl的反應底物溶液：將150μl1μg/μl的反應底物儲液，加入150μl激酶反應緩沖液Ⅰ混勻；c.將上述a/b兩種溶液混合分別得到混合溶液。實驗過程：1.取2μl各濃度的化合物溶液加入到384孔板中，離心3min；2.每孔加入4μl激酶溶液，18℃，5000rpm離心10min，搖板機上搖勻10min；3.每孔加入4ul底物和ATP混合溶液，18℃，5000rpm離心10min，搖板機37℃搖勻90min；4.取出384孔板，放置至室溫；5.每孔加入10μl的ADP-Glo試劑，18℃、5000rpm離心10min，搖板機25℃搖勻40min，終止反應；6.每孔加入20μl的激酶檢測試劑，18℃、5000rpm離心10min，搖板機25℃搖勻30min；7.M1000pro酶標儀讀取熒光數值。數據處理：按如下公式計算各化合物在各濃度點的抑制率，并通過軟件GraphPadPrism5進行曲線擬合得到IC50值。檢測結果：由WO2010075074公開的LY2835219以及實施例12-74的化合物對CDK4和CDK6的抑制作用，以IC50表示，具體結果見表1。LY2835219和本發明代表化合物對CDK1的抑制作用及CDKs選擇性見表2。表1CDKs抑制活性檢測結果(IC50：nM)表2本發明代表化合物的CDK1活性及CDKs選擇性試驗結論：由表1可知，本發明化合物對CDK4和CDK6激酶的抑制活性與對照化合物相當，表現出足夠的抑制活性。IC50(CDK4)/IC50(CDK1)和IC50(CDK6)/IC50(CDK1)可以體現化合物對于CDKs的選擇性：數值越小，對CDK4/6的選擇性越好，預示著化合物的泛CDKs抑制的毒性可能越小。對照化合物(LY2835219)的IC50(CDK4)/IC50(CDK1)≈0.03，IC50(CDK6)/IC50(CDK1)≈0.139。而表2中所列本發明代表化合物都表現出比對照化合物更好的對CDK4/6的選擇性。實驗例2本發明化合物對人乳腺癌細胞MDB-MA-231的增殖抑制測定實驗材料：人乳腺癌細胞MDA-MB-231購于北京協和細胞資源中心，DAPI(5mg/mL,碧云天，c1002)，4％多聚甲醛(鼎國生物，AR-0211)，黑色透明底96孔板(PE，6005182)，InCellAnalyzer2200(GEHealthcare)實驗準備：1.人乳腺癌細胞MDA-MB-231培養基的配制:RPIM1640+10％FBS+1％青霉素/ 鏈霉素2.供試化合物和標準品LY2835219溶液的配制:(1)配制標準品LY2835219,PD0332992溶液a.分別取3.6μl的10mM標準品儲液，加入到6.4ul培養基中，混勻；再加入90μl的培養基，混勻；再加入200μl的培養基，混勻；配制成20uM起始濃度。b.在96-孔板的B2-B10中加入200μl的含0.2％DMSO(二甲基亞砜)的培養基；在B1中加入300μl上述溶液；c.從孔B1中取出100μl加入B2，混勻，然后取100μl加入到B3，依次稀釋B9；得到依次3倍稀釋的標準品溶液。(2)準備供試化合物溶液：a.分別取一定濃度的供試化合物溶液，用培養基稀釋到終濃度為20μM的化合物溶液；b.在96-孔板的H2-H10中加入200μl的含0.2％DMSO(二甲基亞砜)的培養基；在H1中加入300μl上述溶液；c.從孔H1中取出100μl加入H2，混勻，然后取100μl加入到H3，依次稀釋H9；得到依次3倍稀釋的供試化合物溶液。實驗過程：1.MDA-MB-231細胞分別以4000cells/100ul/well接種至96孔黑色透明底細胞板，37℃培養過夜；2.上述樣品分別以100μl/孔加入接種有細胞的培養板中，輕拍使混勻，37℃孵育72h；3.固定：取出細胞板，去除培養基，每孔加入50μl4％多聚甲醛固定10min；4.加入50μl0.1Mglycine(甘氨酸)中和10min；5.1×PBS(磷酸鹽緩沖液PH7.2)洗兩次；6.通透：每孔加50ul0.2％TritonX-100(曲拉通)室溫通透10min；7.1×PBS(磷酸鹽緩沖液PH7.2)洗兩次；8.5mg/mL的DAPI儲備液1:5000稀釋(終濃度1μg/ml)室溫染色20min。9.1×PBS(磷酸鹽緩沖液PH7.2)洗三次；10.Incellanalyser掃描并分析。數據處理：1.按如下公式計算各化合物在各濃度點的抑制率，并通過軟件GraphPadPrism5進行曲線擬合得到IC50值。測定結果：由WO2010075074公開的LY2835219以及實施例12-74的化合物的細胞學活性測定結果，以IC50表示，具體結果見表3表3本發明化合物抑制人乳腺癌細胞MDB-MA-231增殖的IC50(nM)實施例IC50實施例IC50LY283521919139171220276406313116641549148882424615123043581666204421實施例IC50實施例IC501755545301840248391974495879202175036532192521678224835360023543542522425155377251455739262145845827768591313281006021082921266115323030062132031129633339325796426823320651159343570252735527146369677281737330373361738220574174試驗結論：本發明的化合物大部分表現出與對照化合物相當、甚至更強地抑制對人乳腺癌細胞MDB-MA-231的增殖的活性。實驗例3實施例18、20和24化合物的大鼠藥代動力學測定1.實驗摘要以SD大鼠為受試動物，應用LC/MS/MS方法測定大鼠灌胃給予優選化合物后不同時刻血漿中的藥物濃度，以研究本發明化合物在大鼠體內的藥代動力學行為，評價其藥動學特征。2.實驗方案2.1供試藥品：本發明實施例18、20和24制備的化合物；對照藥LY2835219,自制。2.2供試動物：健康成年SD大鼠，每個供試化合物各3只，雄性，6-8周齡，體重200-250g,購自蘇州昭衍新藥研究中心有限公司，動物生產許可證號：SCXK(蘇)2013-00032.3供試藥物配制稱取適量樣品，加入0.1％羥乙基纖維素/0.5％吐溫80至終體積，配成1mg/ml溶液。2.4供試藥品給藥雄性SD大鼠每個供試化合物各3只，禁食一夜后分別灌胃給藥，劑量為5mg/kg,給藥體積為5ml/kg.3.實驗操作在給藥前及給藥后0.25、0.5、1、2、4、8、12、24小時后，經過頸動脈插管取血。全血EDTA-K2抗凝，離心去上清，-20℃冷凍保存，直至樣品分析。用LC-MS/MS進行血漿樣品分析，蛋白沉淀法進行樣品前處理，樣品分析線性范圍1-2000ng/ml.最低定量 限為1ng/ml.4.藥代動力學數據結果本發明化合物的藥代動力學參數見表4表4本發明化合物的大鼠藥代動力學參數5.實驗結論：本發明優選化合物的給藥劑量為5mg/kg時，與LY2835219比較，大鼠藥代吸收良好，半衰期長，具有明顯的口服吸收效果。實驗例4實施例20和60化合物的小鼠藥代動力學測定1.實驗摘要以ICR小鼠為受試動物，應用LC/MS/MS方法測定小鼠灌胃后給予優選化合物后不同時刻血漿中的藥物濃度，以研究本發明化合物在小鼠體內的藥代動力學行為，評價其藥動學特征。2.實驗方案2.1供試藥品：本發明實施例20和60制備的化合物；對照藥LY2835219,自制。2.2供試動物：健康成年ICR小鼠，每個供試藥品灌胃和靜脈注射各3只，雄性，6-8周齡，體重20-25g,購自蘇州昭衍新藥研究中心有限公司，動物生產許可證號：SCXK(蘇)2013-00032.3供試藥物配制稱取適量樣品，加入0.1％羥乙基纖維素/0.5％吐溫80至終體積，配成0.5mg/ml溶液，供灌胃給藥。稱取適量樣品，加入10％的N-甲基-2-吡咯烷酮和90％的18％磺丁基-β-環糊精至終體積，配成0.2mg/ml溶液，供靜脈注射給藥。2.4供試藥品給藥每個供試藥品雄性ICR小鼠3只，禁食一夜后分別灌胃給藥，劑量為5mg/kg,給藥體積為10ml/kg；每個供試品雄性ICR小鼠3只，禁食一夜后分別靜脈注射給藥，劑量為2mg/kg，給藥體積為10ml/kg.3.實驗操作灌胃給藥組于給藥前及給藥后在0.25、0.5、1、2、4、8、12、24小時后，經過頸動脈插管取血。全血EDTA-K2抗凝，離心去上清，-20攝氏度冷凍保存，直至樣品分析。靜脈注射給藥組于給藥前及給藥后在0.083h、0.25、0.5、1、2、4、8、12、24小時后，經過頸動脈插管取血。血漿樣品處理同灌胃給藥。用LC-MS/MS進行血漿樣品分析，蛋白沉淀法進行樣品前處理，樣品分析線性范圍1-2000ng/ml.最低定量限為1ng/ml.4.藥代動力學數據結果：見表5。表5本發明化合物小鼠藥代動力學參數5.實驗結論：本發明優選化合物的給藥劑量為5mg/kg時，與LY2835219比較，小鼠藥代吸收良好，具有更好的生物利用度。總之，本發明提供了一系列新的具有選擇性CDK4/6激酶抑制活性的化合物，其活性與目前處于III期臨床試驗的候選藥物LY2835219相當，部分化合物表現出甚至更好的選擇性。而且優選的化合物的口服吸收良好，預示著本發明的化合物有希望被開發成新的治療細胞增殖相關疾病，尤其是惡性腫瘤的藥物，為臨床醫生和患者提供新的選擇。當前第1頁1 2 3