本發明屬于醫藥化學領域，涉及具有抗腫瘤活性的5-溴-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物及其制備方法，以及含有它們的抗腫瘤藥物組合物。具體地說，涉及母核3-位取代基中酰胺鍵與仲胺基之間的連接子為C3～C5-次烷基的5-(5-溴代-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺類化合物及其制備方法。
背景技術：
：多靶點酪氨酸激酶抑制劑是近年來抗腫瘤領域的研究熱點，目前已有數個優秀品種獲準上市，多個候選物處于臨床或臨床前研究階段(JShenyangPharmUniv.2011,28,1005；ChinJOrgChem.2011,31,1595)。作為第一個被美國FDA批準上市的多靶點酪氨酸激酶抑制劑，舒尼替尼(Sunitinib)對多種實體瘤顯示明確的抑瘤活性(ChinJNewDrugsClinRem.2007,26,474)，其臨床適應癥為對標準療法沒有響應或不能耐受之胃腸道基質腫瘤和轉移性腎細胞癌。本品對其他實體瘤的研究目前處于II和/或III期臨床試驗階段。遺憾的是，舒尼替尼已有耐藥性的報道。近年來，本領域科學家對舒尼替尼進行了較全面的結構修飾，并篩選得到若干值得進一步評價的有苗頭的化合物或候選物(Bioorg.Med.Chem.Lett.2007,17,3814；Bioorg.Med.Chem.Lett.2007,17,3819；J.Med.Chem.2010,53,8140；Bioorg.Med.Chem.Lett.2011,21,3062；Med.Chem.Res.2013,22,1723)。然而，所有這些修飾均是在保留舒尼替尼母核結構(吲哚啉-2-酮)的基礎上，對其1-位、3-位和/或5-位上的取代基進行改造和優化，而未見對舒尼替尼母核結構本身進行修飾的報道。2015年，劉明亮等學者公開了母核3-位取代基中酰胺鍵與仲胺基之間的連接子為次乙基的5-鹵代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物的合成與抗腫瘤活性(CN201510229131.1)。未涉及連接子為C3～C5-次烷基的5-鹵代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物。為了克服上述現有技術所存在的缺陷，本發明人進行了廣泛的研究，設計合成了一系列母核3-位取代基中酰胺鍵與仲胺基之間具有不同連接子的5-鹵代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物，并測定和比較了它們的抗腫瘤活性。最終發現，不同于以往文獻報道的連接子為C3～C5-次烷基的5-(5-溴代-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺類化合物具有意想不到的強抗腫瘤活性，與相應的連接子為次乙基的5-鹵代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物或同類抗腫瘤藥物-舒尼替尼相比，具有更加優越的抗腫瘤活性。技術實現要素：本發明的目的是提供一類由通式(I)表示的5-溴代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物及其藥用鹽，其中：n代表3～5；R代表同時含有二個C1～C3－烷基的仲胺基，其中二個烷基可以是相同的，也可以是不同的，或者R代表環胺基。本發明的式(I)化合物的在藥學上可接受的非毒性的藥用鹽，包括與無機酸，如鹽酸、硫酸形成的鹽，與有機酸，如乙酸、三氟乙酸、檸檬酸、馬來酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、富馬酸、扁桃酸、抗壞血酸或蘋果酸形成的鹽，以及氨基酸，如丙氨酸、天冬氨酸、賴氨酸形成的鹽或與磺酸，如甲磺酸、對甲苯磺酸形成的鹽。本發明具體包括以下化合物，以及它們的藥用鹽：(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(二乙胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(吡咯烷-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(吡咯烷-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[5-(吡咯烷-1-基)戊基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-乙基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。優選的，本發明的化合物，如下：(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(吡咯烷-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[5-(吡咯烷-1-基)戊基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。本發明的另一個目的在于提供式(I)化合物及其藥用鹽的制備方法。如反應路線1所示。反應路線1：在反應路線1中，n和R如前述的定義。在質子溶劑中加入堿，使式(II)化合物與式(III)化合物通過縮合反應來制備式(I)化合物。用于本反應的質子溶劑選自水、醇或醇-水混合溶劑；所述的堿選自三乙胺、吡咯烷、哌啶、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、氫氧化鈉或氫氧化鉀。在本發明中用作起始物的式(II)化合物為已知化合物,國內有商品供應。式(III)化合物也為已知化合物,并參考現有出版物中已知的方法可容易地制得，例如劉明亮等，CN201510229131.1；LvK等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2011,21：3062；Med.Chem.Res.2013,22：1723以及WangMH等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2015,25:2782。本發明的另一個目的在于提供式(I)所示化合物及其藥用鹽的藥物用途。本發明式(I)所示化合物及其藥用鹽在制備治療實體瘤和非實體瘤的藥物中的應用。本發明所述實體瘤包括肺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌、頭頸癌、食道癌、結腸癌、胰腺癌、腎癌、前列腺癌、骨癌和腦癌；所述非實體瘤指白血病。本發明的另一個目的在于提供一種含有式(I)所示化合物及其藥用鹽的藥物組合物。本發明所述的藥物組合物，還含有藥物上可接受的載體。本發明所述的藥物組合物，以式(I)所示化合物及其藥用鹽作為抗腫瘤藥物的活性成分。藥物組合物含有的式(I)所示化合物及其藥用鹽在組合物中的重量比為0.1～99.9％，藥物可接受的載體在組合物中的重量比為0.1～99.9％。藥物組合物以適合藥用的制劑形式存在。藥用的制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、膏劑、混懸劑、注射劑、粉針劑、栓劑、霜劑、滴劑或貼劑。其中，所述片劑為糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑或緩釋片劑；所述膠囊劑為硬膠囊劑、軟膠囊劑、緩釋膠囊劑；所述粉針劑為凍干粉針劑。本發明的藥物組合物，作為制劑形式，每劑中含有的發明化合物的有效量為0.1～1000mg，所述每劑指的是，每一制劑單位，如片劑的每片，膠囊的每粒，也可指每次服用劑量，如每次服用100mg。本發明的藥物組合物在制備成粉劑、片劑、可分散粉劑、膠囊、扁囊劑、栓劑和軟膏形式的固體或半固體藥物制劑時，可使用固體載體。可使用的固體載體優選為選自稀釋劑、調味劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑、膨脹劑等中的一種或多種物質，或可為包封物質。在粉狀制劑中，在載體中含有5～70％的微粒化活性成分。適宜的固體載體包括碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、蔗糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低沸點蠟、可可脂等。由于它們易于給藥，片劑，粉劑、扁囊劑和膠囊等代表最有利的口服固體制劑。本發明的液體制劑包括溶液、懸液和乳液。例如，非胃腸道給藥的注射制劑可為水或水-丙二醇溶液形式，調節其等滲度，pH等使適于活體的生理條件。液體制劑還可制成在聚乙二醇、水溶液中的溶液形式。可通過將活性成分溶解在水中，再加入適量的著色劑、調味劑、穩定劑和增稠劑，來制備口服水溶液。可將微粒化的活性成分分散在粘性物質如天然和合成膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和其它已知懸浮劑中制備適于口服的水懸液。為了易于給藥及劑量均一，將上述藥物制劑配制成劑量單位形式是特別有利的。制劑的劑量單位形式指適于作為單一劑量的物理分離單位，每個單位含有產生所期望的治療效果的計算好的預定量的活性成分。這種劑量單位形式可為包裝形式，如片劑、膠囊或裝在小管或小瓶中的粉劑，或裝在管或瓶中的軟膏、凝膠或霜劑。雖然劑量單位形式中所含活性成分的量可以變化，但一般根據所選擇活性成分的效力，調節在1～800mg范圍內。本領域技術人員可按常規方法確定適于某種情況的優選劑量。一般，開始治療的量低于活性成分的最佳劑量，然后逐漸增加給藥劑量，直到達到最佳治療效果。為治療需要，總的日劑量可一次給藥或分數次給藥。本發明式(I)所示5-溴-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物，與現有的同類抗腫瘤藥物-舒尼替尼相比，具有更加優越的抗腫瘤活性。而且，本發明的藥物安全性更高，有效的降低藥物的毒副作用。同時，本發明的制備方法工藝簡單，用時短，大大降低藥品的成本，適合大規模生產。具體實施方式以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。實施例1(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸(167mg,1mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(230mg,1.2mmol)、1-羥基苯并三唑(162mg，1.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)攪拌反應20min后，加入N,N-二異丙基乙胺(365ml，2.2mmol)，N,N-二甲氨基丙胺(205mg，2mmol)，室溫反應12h以上。加10ml蒸餾水稀釋，10ml飽和食鹽水，10ml飽和碳酸鈉,用氫氧化鈉溶液調pH＝10-11，用含10％甲醇的二氯甲烷萃取15mLx3次，水洗1次，飽和食鹽水洗1次，無水硫酸鈉干燥。抽濾，濾液減壓濃縮得紅色油狀液體(收率57％)。將上述油狀液體和5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮(100mg,0.46mmol)溶于無水乙醇(8mL)，加入6滴哌啶于室溫攪拌反應2h。過濾,濾餅用乙醇洗滌，后經硅膠柱(二氯甲烷：甲醇＝20:1，加少量三乙胺)分離純化，得橘黃色固體(收率：54％)，mp:258-260℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.61(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.73(t,J＝5.2Hz,1H),3.25(q,J＝12.4Hz,2H),2.45(s,3H),2.42(s,3H),2.30(t,J＝6.5Hz,2H),2.16(s,6H),1.62-1.68(m,2H).MS-ESI(m/z):446.3(M+H)+,448.3(M+H)+.(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺鹽酸鹽攪拌下,向上述橘黃色固體(100mg，0.224mmol)的甲醇混懸液中，通入干燥鹽酸氣30min，后回流攪拌30min。降至室溫，抽濾，干燥，得類白色固體(收率40％)。C20H24BrN5O2·HClCHNBrCl計算值49.755.2214.5116.557.34實測值49.745.2314.5016.537.34類似地也可以制備下述的鹽，例如：(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽。實施例2(Z)-N-[3-(二乙胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與3-二乙胺基丙胺發生縮合反應，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：56％)，mp:234-236℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.45(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.0Hz,1H),8.11(d,J＝2.0Hz,1H),7.86(s,1H),7.74(t,J＝5.3Hz,1H),3.25-3.31(m,2H),3.06-3.15(m,6H),2.47(s,3H),2.44(s,3H),1.86-1.92(m,2H),1.21(t,J＝7.2Hz,6H).MS-ESI(m/z):474.3(M+H)+,476.3(M+H)+.實施例3(Z)-N-[3-(吡咯烷-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)吡咯烷發生縮合反應，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：54％)，mp:222-224℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.0Hz,1H),8.10(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(s,1H),7.74(t,J＝5.4Hz,1H),3.26(q,J＝12.6Hz,2H),2.46-2.47(m,6H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),1.65-1.71(m,6H).MS-ESI(m/z):472.3(M+H)+,474.3(M+H)+.實施例4(Z)-N-[4-(吡咯烷-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(4-氨丁基)吡咯烷發生縮合反應，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：56％)，mp:230-232℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.74(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.3Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.37-2.40(m,6H),1.65-1.67(m,4H),1.48-1.53(m,4H).MS-ESI(m/z):486.3(M+H)+,488.3(M+H)+.實施例5(Z)-N-[5-(吡咯烷-1-基)戊基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(5-氨戊基)吡咯烷發生縮合反應，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：55％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.43(s,1H),11.64(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.76(t,J＝6.5Hz,1H),3.24(q,J＝12.6Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.33-2.40(m,8H),1.66-1.68(m,4H),1.48-1.52(m,4H).MS-ESI(m/z):500.3(M+H)+,502.3(M+H)+.實施例6(Z)-N-[3-(哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)哌啶發生縮合反應，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：56％)，mp:236-238℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.64(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.56(t,J＝6.3Hz,1H),3.24(q,J＝12.6Hz,2H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.17-2.37(m,6H),1.38-1.67(m,8H).MS-ESI(m/z):486.3(M+H)+,488.3(M+H)+.實施例7(Z)-N-[4-(哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(4-氨丁基)哌啶發生縮合反應，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：58％)，mp:238-240℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.64(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.73(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.1Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.22-2.37(m,6H),1.43-1.53(m,8H),1.33-1.40(m,2H).MS-ESI(m/z):500.3(M+H)+,502.3(M+H)+.實施例8(Z)-N-[3-(哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)哌嗪發生縮合反應，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：50％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6+D2O)δ:8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),3.22(q,J＝12.8Hz,2H),2.42(s,3H),2.22-2.35(m,10H),2.13(s,3H),1.62-1.68(m,2H).MS-ESI(m/z):487.3(M+H)+,489.3(M+H)+.實施例9(Z)-N-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)-4-甲基哌嗪發生縮合反應，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：57％)，mp:238-240℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.62(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.8Hz,2H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.22-2.35(m,10H),2.13(s,3H),1.62-1.68(m,2H).MS-ESI(m/z):501.3(M+H)+,503.3(M+H)+.實施例10(Z)-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(4-氨丁基)-4-甲基哌嗪發生縮合反應，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：55％)，mp:238-240℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.43(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.73(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.0Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.16-2.37(m,10H),2.13(s,3H),1.45-1.50(m,4H).MS-ESI(m/z):515.3(M+H)+,517.3(M+H)+.實施例11(Z)-N-[3-(4-乙基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)-4-乙基哌嗪發生縮合反應，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：53％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.62(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.5Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.22-2.35(m,12H),1.62-1.68(m,2H),1.16(t,J＝7.0HZ,3H).MS-ESI(m/z):515.3(M+H)+,517.3(M+H)+.試驗例1對實體瘤細胞的抗腫瘤活性(IC50：μM)本實驗例在于研究本發明化合物對實體瘤細胞的抗腫瘤活性，試驗方法采用SRB(磺酰羅丹明)法。根據腫瘤細胞生長速率，將處于對數生長期的貼壁實體瘤細胞以170μL/孔接種于96孔培養板，貼壁生長24h后加藥(30μL/孔)，每個濃度設3復孔。并設相應濃度的生理鹽水溶媒對照及無細胞調零孔。腫瘤細胞在37℃、5％CO2條件下培養48h。培養后，取出培養板，每孔加入50％(m/v)的三氯乙酸(TCA)50uL4℃放置lh，固定細胞。棄固定液，用蒸餾水洗滌5次，在空氣中干燥后，每孔加SRB溶液100uL，室溫下放置10-30min，進行染色。去上清液，用1％醋酸洗滌5次，空氣中自然干燥后，加入150μL/孔的Tris溶液，在平板振蕩器上振蕩10min。用酶聯免疫檢測儀測定570nm處的OD值，用空白對照調零。按以下公式計算腫瘤細胞生長的抑制率：抑制率＝[(OD570對照孔－OD570給藥孔)/OD570對照孔]×100％。根據各濃度抑制率，采用Logit法計算半數抑制濃度IC50。以上每個實驗重復2～3次，求出2～3次實驗的平均IC50值作為最終指標。表1列出了本申請的式(Ⅰ)化合物中的若干代表化合物對三種實體瘤細胞(HepG2/肝癌,A549/肺癌，SKOV-3/卵巢癌)的抗腫瘤活性，并與同類抗腫瘤藥物-舒尼替尼以及CN201510229131.1中描述的結構近似的代表化合物進行比較。表1實施例1、3、5、6、7、9、10化合物對實體瘤細胞的抗腫瘤活性(IC50：μM)*化合物A為CN201510229131.1中描述的實施例1化合物，即(Z)-N-[2-(二甲胺基)乙基]-5-(5-氟-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。*化合物B為CN201510229131.1中描述的實施例8化合物，即(Z)-N-[2-(吡咯烷-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。由表1可見，本申請的式(Ⅰ)化合物中的實施例1、3、5、6、7、9、10化合物對三種實體瘤細胞(HepG2/肝癌,A549/肺癌，SKOV-3/卵巢癌)的抗腫瘤活性(IC50：4.075–11.229μM)均優于CN201510229131.1中描述的兩個結構近似化合物(IC50：11.836–14.922μM)以及舒尼替尼(IC50：31.594–49.036μM)。其中，活性最強的式(Ⅰ)化合物中的實施例5化合物對三種實體瘤細胞的活性是CN201510229131.1中描述的兩個結構近似化合物的1.9–3.7倍，而是舒尼替尼的5.2–12.1倍。盡管上述實驗中，本發明只選取部分實施例進行實驗測試，但是實際上，本發明的其他藥物也能取得和上述藥物相同或者相近的治療效果。雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發明要求保護的范圍。當前第1頁1 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