抗葉酸受體α(FRA)抗體?藥物綴合物及其使用方法與流程

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技術領域：
本發明為癌癥治療的領域，且提供針對經抗體-藥物綴合物(ADC)形式遞送對癌細胞特異地具有細胞毒性藥物的效果及特異性。
背景技術：
：抗體-藥物綴合物(ADC)為一類將單克隆抗體(mAb)的特異性與細胞毒性分子的效力組合的治療劑。ADC的使用通過綴合細胞毒性劑賦予抗體的癌癥殺滅活性，同時靶標特異性遞送避免由暴露于游離毒性劑而引起的全身毒性。到2014年5月為止，FDA已經批準了兩種ADC用于治療人類癌癥。Adcetris(貝倫妥單抗維多汀(Brentuximabvedotin)或SGN-35)為一種與細胞毒性劑MMAE綴合的抗CD30抗體，其經設計以治療CD30陽性復發性淋巴瘤。Kadcyla(T-DM1)為一種與細胞毒性劑DM1綴合的抗HER2抗體，其經設計以治療HER2陽性轉移性乳腺癌。連接子技術顯著地影響ADC效力、特異性及安全性。酶不穩定連接子利用細胞內部與外部的蛋白酶的差異活性來達成對藥物釋放的控制。藥物可經由肽鍵綴合至抗體，且僅可通過細胞內部存在的溶酶體蛋白酶的作用且在某些腫瘤類型中以高水平特異地分裂(Koblinski等人(2000)Clin.Chem.Acta291：113-135)。這確保連接子于血流中的穩定性，以限制對健康組織的損傷。然而，一些酶不穩定連接子的增加的疏水性可導致ADC的聚集，尤其是在利用強疏水性藥物的情況下。親水性自消耗連接子可經由特定酶不穩定設計而提供較好血清穩定性，以及經由異源癌細胞上的旁觀者效應(bystandereffect)而達成較好功效。葉酸受體α(葉酸受體α；FRA)為一種膜蛋白質，其以高親和力結合葉酸且經由受體介導的胞吞作用介導葉酸的細胞攝取(Leamon等人，1991,PNAS88：5572-5576)。在90％上皮卵巢癌以及包括子宮內膜癌、腎癌、肺癌、間皮瘤、乳腺癌、腦癌及骨髓白血病的眾多其它癌癥中發現FRA的過表達，而大多數正常組織表達低水平至可忽略水平(Coney等人，1991,CancerRes.51：6125-6132)。FRA于癌癥中對比正常組織中的差異表達分布保證基于Ab的治療劑的開發。鼠類單克隆抗-FRA抗體的人源化形式經證實在臨床前研究中為有效的(Ebel等人，2007,CancerImmun7:1-8)，且當前正在具有表達FRA的腫瘤的患者中受評估(Kalli等人，2007,CurrOpinInvestig8:1067-1073)。此外，FRA介導胞吞作用的能力使其成為對癌癥靶向ADC的開發有吸引力的候選物。迄今為止，各種藥物綴合物及抗-FRA抗體正在臨床試驗中受測試，且具有已證明的安全性(Xia等人，2010,JMedChem.53:6811-6824；Zacchetti等人，2009,NuclMedBiol.36:759-770)。對具有改善功效的抗癌癥治療劑存在需要，所述抗癌癥治療劑可經由抗體-藥物綴合物(ADC)形式將細胞毒性藥物遞送至癌細胞。技術實現要素：本公開化合物包含藥物部分；靶向部分，其為能夠靶向選定細胞群體(諸如表達葉酸受體α(FRA)的細胞群體)的抗體；以及連接子，其含有酰基單元、用于在藥物部分與靶向部分(諸如抗-FRA抗體)之間提供距離的任選間隔基單元、可在適當條件下為可分裂的肽連接子、親水性自消耗連接子以及任選第二自消耗間隔基或環化自消除連接子。本公開提供式(I)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中：D為藥物部分；T為靶向部分，其為特異性結合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體；X為親水性自消耗連接子；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元。本公開提供式(II)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中：D為藥物部分；T為靶向部分，其為特異性結合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體；R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元。本公開提供式(Ia)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中：p為1至20；D為藥物部分；T為靶向部分，其為特異性結合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體；X為親水性自消耗連接子；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元。本公開提供式(IIa)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中：p為1至20；D為藥物部分；T為靶向部分，其為特異性結合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體；R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元。在上述化合物的某些實施方案中，p為1至4。在某些實施方案中，L1為鍵。在某些實施方案中，L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子。在某些實施方案中，L1為氨基芐基氧基羰基連接子。在某些實施方案中，L1選自其中n為1或2。在某些實施方案中，L1選自在上述化合物的某些實施方案中，L2為鍵。在某些實施方案中，L2為第二自消耗連接子。在某些實施方案中，L2為氨基芐基氧基羰基連接子。在某些實施方案中，L2選自其中n為1或2。在上述化合物的某些實施方案中，L3為1至10個氨基酸殘基的肽連接子。在某些實施方案中，L3為2至4個氨基酸殘基的肽連接子。在某些實施方案中，L3為包含至少一個賴氨酸或精氨酸殘基的肽連接子。在某些實施方案中，L3為包含選自以下的氨基酸殘基的肽連接子：賴氨酸、D-賴氨酸、瓜氨酸、精氨酸、脯氨酸、組氨酸、鳥氨酸及谷氨酰胺。在某些實施方案中，L3為包含選自以下的氨基酸殘基的肽連接子：纈氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸、色氨酸及酪氨酸。在某些實施方案中，L3為選自以下的二肽單元：纈氨酸-瓜氨酸、脯氨酸-賴氨酸、甲硫氨酸-D-賴氨酸、天冬酰胺-D-賴氨酸、異亮氨酸-脯氨酸、苯丙氨酸-賴氨酸及纈氨酸-賴氨酸。在某些實施方案中，L3為纈氨酸-瓜氨酸。在上述化合物的某些實施方案中，L4為鍵。在某些實施方案中，L4為間隔基。在某些實施方案中，所述間隔基為聚亞烷基二醇、亞烷基、亞烯基、亞炔基或聚胺。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)、L4a-C(O)-NH、L4a-S(O)2或L4a-S(O)2-NH，其中每個L4a獨立為聚亞烷基二醇、亞烷基、亞烯基、亞炔基或聚胺。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為聚亞烷基二醇、亞烷基、亞烯基、亞炔基或聚胺。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為聚亞烷基二醇。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為聚乙二醇。在某些實施方案中，所述間隔基具有式-CH2-(CH2-O-CH2)m-CH2-C(O)-，其中m為0至30的整數。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為亞烷基。在上述化合物的某些實施方案中，A選自其中每個Q2為NH或O，每個q獨立為1至10的整數，且每個q1獨立為1至10的整數。在某些實施方案中，q為2、3、4或5。在某些實施方案中，q1為2、3、4或5。在某些實施方案中，A選自其中每個Q2獨立為NH或O且每個q獨立為1至10的整數。在某些實施方案中，q為2、3、4或5。在某些實施方案中，A選自其中每個Q2獨立為NH或O。在上述化合物的某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體的重鏈的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(例如人IgG的重鏈恒定區)，其中所述重鏈恒定區中的一個或多個氨基酸殘基(例如CH1、CH2或CH3)用一個或多個半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(例如人IgG的重鏈恒定區)，其中在所述重鏈恒定區的選自位置155、157、165、169、197、199和442的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在某些實施方案中，所述抗體包含人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4或人IgG4p的重鏈恒定區，其中在所述重鏈恒定區的選自位置155、157、165、169、197、199和442的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在某些實施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區，其包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列，其中在所述重鏈恒定區的選自位置155、157、165、169、197、199和442的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在上述化合物的某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體的輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區(例如人κ輕鏈恒定區)，其中所述抗體的輕鏈恒定區中的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區，其中在所述輕鏈恒定區中的選自位置201和206的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在某些實施方案中，所述抗體包含人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4或人IgG4p的輕鏈恒定區(諸如κ輕鏈恒定區)，其中在所述輕鏈恒定區中的選自位置201和206的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代，且其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在某些實施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列，其中在所述輕鏈恒定區中的選自位置201和206的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在上述化合物的某些實施方案中，D經由(或經)所添加的半胱氨酸殘基連接至T。在某些實施方案中，D經所添加的半胱氨酸殘基的巰基連接至T，所述半胱氨酸殘基經連接子部分(-A-L4-L3-L2-X-L1-)連接。在某些實施方案中，D為含有氨基的藥物部分，其中所述藥物經所述氨基連接至L1或X。在某些實施方案中，D為倍癌霉素、多拉司他汀、微管結合素、多柔比星(DOX)、紫杉醇或絲裂霉素C(MMC)或其氨基衍生物。在某些實施方案中，D為選自以下的倍癌霉素的氨基衍生物：在某些實施方案中，D為多拉司他汀的氨基衍生物(例如單甲基多拉司他汀10)：在某些實施方案中，-A-L4-L3-L2-為在某些實施方案中，-A-L4-L3-L2-X-L1-D為：在某些實施方案中，-A-L4-L3-L2-X-L1-D為：在某些實施方案中，-A-L4-L3-L2-X-L1-D為：在上述化合物的某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體為人源化抗體、嵌合抗體或人抗體。在某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中：(1)所述重鏈可變區包含抗體hLK26的三個重鏈HVR(例如SEQIDNO:14、15和16)和/或所述輕鏈可變區包含抗體hLK26的三個輕鏈HVR(例如SEQIDNO:17、18和19)；(2)所述重鏈可變區包含抗體26B3的三個重鏈HVR(例如SEQIDNO:20、21和22)和/或所述輕鏈可變區包含抗體26B3的三個輕鏈HVR(例如SEQIDNO:23、24和25)；或(3)所述重鏈可變區包含抗體hMov19的三個重鏈HVR(例如SEQIDNO:26、27和28)和/或所述輕鏈可變區包含抗體hMov19的三個輕鏈HVR(例如SEQIDNO:29、30和31)。在某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中：(1)所述重鏈可變區包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的三個重鏈HVR(例如SEQIDNO:14、15和16)和/或所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的三個輕鏈HVR(例如SEQIDNO:17、18和19)；(2)所述重鏈可變區包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的三個重鏈HVR(例如SEQIDNO:20、21和22)和/或所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的三個輕鏈HVR(例如SEQIDNO:23、24和25)；或(3)所述重鏈可變區包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的三個重鏈HVR(例如SEQIDNO:26、27和28)和/或所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的三個輕鏈HVR(例如SEQIDNO:29、30和31)。在某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中(1)所述重鏈可變區包含SEQIDNO:8的氨基酸序列和/或所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9的氨基酸序列；(2)所述重鏈可變區包含SEQIDNO:10的氨基酸序列和/或所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:11的氨基酸序列；或(3)所述重鏈可變區包含SEQIDNO:12的氨基酸序列和/或所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。在某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈和輕鏈，其中(1)所述重鏈包含SEQIDNO:1的氨基酸序列和/或所述輕鏈包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；(2)所述重鏈包含SEQIDNO:2的氨基酸序列和/或所述輕鏈包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；(3)所述重鏈包含：可變區，其包含SEQIDNO:10的氨基酸序列，和恒定區，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列；和/或所述輕鏈包含：可變區，其包含SEQIDNO:11的氨基酸序列，和恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列；或(4)所述重鏈包含SEQIDNO:6的氨基酸序列和/或所述輕鏈包含SEQIDNO:7的氨基酸序列。在某些實施方案中，所述抗體包含：人重鏈恒定區，其包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列；和人κ輕鏈恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列，其中在所述重鏈恒定區的選自T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442的一個或多個氨基酸殘基和/或在所述輕鏈恒定區的選自L201和T206的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代，且其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在這些實施方案中的一些中，在所述重鏈恒定區中的選自T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442的至少一個(例如一個)氨基酸殘基和/或在所述輕鏈恒定區中的選自L201和T206的至少一個(例如一個)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，所述抗體為選自以下的抗原結合片段：Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv和ScFv。本公開提供藥物組合物，包含如上和本申請所述的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體以及藥用載體。本公開提供殺死表達人葉酸受體α(FRA)的細胞的方法，所述方法包括向所述細胞給予足以殺死所述細胞的量的本申請所述的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體。在某些實施方案中，所述細胞為癌細胞。在某些實施方案中，所述癌細胞在個體(例如人)中。在某些實施方案中，所述癌細胞為淋巴瘤或白血病細胞。在某些實施方案中，所述癌細胞為葉酸受體α(FRA)-陽性淋巴瘤或葉酸受體α(FRA)-陽性白血病細胞。本公開提供在個體中治療癌癥的方法，所述方法包括向所述個體給予有效量的本申請所述的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體。在某些實施方案中，所述個體具有癌癥或已經診斷有癌癥。在某些實施方案中，所述癌癥為卵巢癌、肺癌、子宮癌、睪丸絨毛膜癌、室管膜瘤、間皮瘤、乳腺癌、結腸癌或腎細胞癌。在某些實施方案中，所述癌癥為葉酸受體α(FRA)-陽性癌癥。在某些實施方案中，所述個體為人。本公開提供試劑盒，包含本申請所述的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體。在某些實施方案中，所述試劑盒還包含治療癌癥使用的說明書。本申請提供了制備式(II)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體的方法：其中：D為藥物部分；T為靶向部分，其為特異性結合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體；R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元；所述方法包括使所述抗體與化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構體反應：本申請提供了制備式(IIa)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體的方法：其中：p為1至20；D為藥物部分；T為靶向部分，其為特異性結合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體；R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元；所述方法包括使所述抗體與化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構體反應：在本申請的方法和制備方法的某些實施方案中，所述抗體包含一個或多個巰基。在某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體的重鏈的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，所述重鏈恒定區中的一個或多個氨基酸殘基(例如CH1、CH2或CH3)用一個或多個半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(例如人IgG的重鏈恒定區)，其中在所述重鏈恒定區的選自位置155、157、165、169、197、199和442的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在某些實施方案中，所述抗體包含人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4或人IgG4p的重鏈恒定區，其中在所述重鏈恒定區的選自位置155、157、165、169、197、199和442的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在某些實施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區，其包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列，其中在所述重鏈恒定區的選自位置155、157、165、169、197、199和442的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在本申請的方法和制備方法的某些實施方案中，所述抗體的輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，所述抗體的輕鏈恒定區中的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區(諸如人κ輕鏈恒定區)，其中在所述輕鏈恒定區中的選自位置201和206的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在某些實施方案中，所述抗體包含人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4或人IgG4p的輕鏈恒定區，其中在所述輕鏈恒定區中的選自位置201和206的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在某些實施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列，其中在所述輕鏈恒定區中的選自位置201和206的一個或多個氨基酸殘基用一個或多個半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在本申請的方法或制備方法的某些實施方案中，D經由(或經)所添加的半胱氨酸殘基連接至T。在某些實施方案中，D經所添加的半胱氨酸殘基的巰基連接至T，所述半胱氨酸殘基經連接子部分(-A-L4-L3-L2-X-L1-)連接。在本申請的方法或制備方法的某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體為人源化抗體、嵌合抗體或人抗體。在某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中：(1)所述重鏈可變區包含抗體hLK26的三個重鏈HVR(例如SEQIDNO:14、15和16)和/或所述輕鏈可變區包含抗體hLK26的三個輕鏈HVR(例如SEQIDNO:17、18和19)；(2)所述重鏈可變區包含抗體26B3的三個重鏈HVR(例如SEQIDNO:20、21和22)和/或所述輕鏈可變區包含抗體26B3的三個輕鏈HVR(例如SEQIDNO:23、24和25)；或(3)所述重鏈可變區包含抗體hMov19的三個重鏈HVR(例如SEQIDNO:26、27和28)和/或所述輕鏈可變區包含抗體hMov19的三個輕鏈HVR(例如SEQIDNO:29、30和31)。在本申請的方法或制備方法的某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體為人源化抗體、嵌合抗體或人抗體。在某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中：(1)所述重鏈可變區包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的三個重鏈HVR(例如SEQIDNO:14、15和16)和/或所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的三個輕鏈HVR(例如SEQIDNO:17、18和19)；(2)所述重鏈可變區包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的三個重鏈HVR(例如SEQIDNO:20、21和22)和/或所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的三個輕鏈HVR(例如SEQIDNO:23、24和25)；或(3)所述重鏈可變區包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的三個重鏈HVR(例如SEQIDNO:26、27和28)和/或所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的三個輕鏈HVR(例如SEQIDNO:29、30和31)。在本申請的方法和制備方法的某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中：(1)所述重鏈可變區包含SEQIDNO:8的氨基酸序列和/或所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9的氨基酸序列；(2)所述重鏈可變區包含SEQIDNO:10的氨基酸序列和/或所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:11的氨基酸序列；或(3)所述重鏈可變區包含SEQIDNO:12的氨基酸序列和/或所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。在某些實施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈和輕鏈，其中(1)所述重鏈包含SEQIDNO:1的氨基酸序列和/或所述輕鏈包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；(2)所述重鏈包含SEQIDNO:2的氨基酸序列和/或所述輕鏈包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；(3)所述重鏈包含可變區，其包含SEQIDNO:10的氨基酸序列，和恒定區，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列；和/或所述輕鏈包含可變區，其包含SEQIDNO:11的氨基酸序列，和恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列；或(4)所述重鏈包含SEQIDNO:6的氨基酸序列和/或所述輕鏈包含SEQIDNO:7的氨基酸序列。在本申請的方法和制備方法的一些實施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區，其包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列，和人κ輕鏈恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列，其中在所述重鏈恒定區中的選自T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442的一個或多個氨基酸殘基和/或在所述κ輕鏈恒定區中的選自L201和T206的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代，且其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在這些實施方案中的一些中，在所述重鏈恒定區中的選自T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442的至少一個(例如一個)氨基酸殘基和/或在所述輕鏈恒定區中的選自L201和T206的至少一個(例如一個)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。本公開提供化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體，其中所述化合物通過本申請所述的方法或制備方法制備，其中所述抗體包含一個或多個巰基。本公開提供藥物組合物，其包含化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體以及藥用載體，其中所述化合物通過本申請所述的方法制備，其中所述抗體包含一個或多個巰基。應當理解的是，本申請所述的各個實施方案的一種、一些或所有性質可組合構成本發明的其它實施方案。本發明的這些和其它方面將對于本領域技術人員而言變得顯而易見。附圖說明圖1顯示Tap-18H的NMR譜。圖2顯示Tap-18Hr1的NMR譜。圖3顯示Tap-18Hr2的NMR譜。圖4顯示hLK26-IgG1-Tap18Hr1針對衍生自卵巢癌細胞系SK-OV-3的異種移植物的體內抗腫瘤活性。圖5顯示位點特異性綴合的hLK26-Tap18Hr1ADChLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1、hLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr1和hLK26-S442C-IgG4p-Tap18Hr1針對衍生自卵巢癌細胞系SK-OV-3的異種移植物的體內抗腫瘤活性。圖6顯示常規的hLK26-IgG1-Tap18Hr1以及位點特異性綴合的hLK26-Tap18Hr1ADChLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr1、hLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr1、hLK26-T199C-IgG4p-Tap18Hr1和hLK26-L201C-IgG4p-Tap18Hr針對衍生自肺癌細胞系NCI-H2110的異種移植物體內抗腫瘤活性。定義除非另有指示，否則以下術語具有以下意義。任何未定義術語具有其領域公認的意義。“烷基”指單價飽和脂肪烴基，具有1至10個碳原子且優選地具有1至6個碳原子。例如，本術語包括直鏈及支鏈烴基諸如甲基(CH3-)、乙基(CH3CH2-)、正丙基(CH3CH2CH2-)、異丙基((CH3)2CH-)、正丁基(CH3CH2CH2CH2-)、異丁基((CH3)2CHCH2-)、仲丁基((CH3)(CH3CH2)CH-)、叔丁基((CH3)3C-)、正戊基(CH3CH2CH2CH2CH2-)、新戊基((CH3)3CCH2-)及正己基(CH3(CH2)5-)。“亞烷基”指二價脂肪亞烴基，優選地具有1至10個碳原子且更優選地具有1至3個碳原子，為直鏈或支鏈。例如，本術語包括亞甲基(-CH2-)、亞乙基(-CH2CH2-)、亞正丙基(-CH2CH2CH2-)、亞異丙基(-CH2CH(CH3)-)、(-C(CH3)2CH2CH2-)、(-C(CH3)2CH2C(O)-)、(-C(CH3)2CH2C(O)NH-)、(-CH(CH3)CH2-)等。“烯基”指直鏈或支鏈烴基，具有2至10個碳原子且優選地具有2至4個碳原子及具有至少1個位點的雙鍵不飽和性且優選地具有1至2個位點的雙鍵不飽和性。例如，本術語包括二乙烯基(bi-vinyl)、烯丙基及丁-3-烯-1-基。本術語包括順式和反式異構體或這些異構體的混合物。“亞烯基”指直鏈或支鏈亞烴基，具有2至10個碳原子且優選地具有2至4個碳原子及具有至少1個位點的雙鍵不飽和性且優選地具有1至2個位點的雙鍵不飽和性。亞烯基的實例包括但不限于亞乙烯基(-CH＝CH-)、亞烯丙基(-CH2C＝C-)和丁-3-烯-1-亞基(-CH2CH2C＝CH-)。本術語包括順式和反式異構體或這些異構體的混合物。“炔基”指直鏈或支鏈烴基，具有2至6個碳原子且優選地具有2至3個碳原子及具有至少1個位點的叁鍵不飽和性且優選地具有1至2個位點的叁鍵不飽和性。此類炔基的實例包括乙炔基(-C≡CH)及炔丙基(-CH2C≡CH)。“亞炔基”指直鏈或支鏈亞烴基，具有2至6個碳原子且優選地具有2至3個碳原子及具有至少1個位點的叁鍵不飽和性且優選地具有1至2個位點的叁鍵不飽和性。亞炔基的實例包括但不限于亞乙炔基(-C≡CH)及炔丙基(-CH2C≡CH)。“氨基”指基團-NH2。“經取代的氨基”指基團-NRR，其中每個R獨立選自由以下基團組成的群組中：氫、烷基、經取代的烷基、環烷基、經取代的環烷基、烯基、經取代的烯基、環烯基、經取代的環烯基、炔基、經取代的炔基、芳基、雜芳基及雜環基，前提條件是至少一個R不為氫。“芳基”指6至18個碳原子的單價芳族碳環基團，具有單環(諸如苯基中所呈現)或具有多個稠環的環系(此類芳族環系統的實例包括萘基、蒽基及二氫茚基)，所述稠環可或不可為芳族，前提條件是接附點通過芳族環的原子。例如，本術語包括苯基及萘基。除非對于芳基取代基的定義另有約束，否則此類芳基可任選用1至5個取代基或1至3個取代基取代，這些取代基選自酰氧基、羥基、巰基、酰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、經取代的烷基、經取代的烷氧基、經取代的烯基、經取代的炔基、經取代的環烷基、經取代的環烯基、氨基、經取代的氨基、氨酰基、酰氨基、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧基酯、氰基、鹵素、硝基、雜芳基、雜芳氧基、雜環基、雜環氧基、氨酰氧基、氧酰氨基、硫代烷氧基、經取代的硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-經取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-經取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-雜芳基及三鹵代甲基。“環烷基”指3至10個碳原子的環狀烷基，具有單個環狀環或包括稠合、橋式及螺環系的多個環狀環。適宜環烷基的實例包括例如金剛烷基、環丙基、環丁基、環戊基、環辛基等。例如，此類環烷基包括諸如環丙基、環丁基、環戊基、環辛基等的單環結構或諸如金剛烷基等的多環結構。“雜芳基”指1至15個碳原子諸如1至10個碳原子及1至10個選自由環內的氧、氮及硫組成的群組的雜原子的芳族基團。此類雜芳基可具有單個環(諸如吡啶基、咪唑基或呋喃基)或環系中的多個稠環(例如諸如吲嗪基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并咪唑基或苯并噻吩基那樣的基團)，其中環系內的至少一個環為芳族且環系內的至少一個環為芳族，前提條件是接附點通過芳族環的原子。在某些實施方案中，雜芳基的氮和/或硫環原子任選經氧化以提供N-氧化物(N→O)、亞磺酰基或磺酰基部分。例如，本術語包括吡啶基、吡咯基、吲哚基、硫苯基及呋喃基。除非對于雜芳基取代基的定義另有約束，否則此類雜芳基可任選用1至5個取代基或1至3個取代基取代，這些取代基選自酰氧基、羥基、巰基、酰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、經取代的烷基、經取代的烷氧基、經取代的烯基、經取代的炔基、經取代的環烷基、經取代的環烯基、氨基、經取代的氨基、氨酰基、酰氨基、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧基酯、氰基、鹵素、硝基、雜芳基、雜芳氧基、雜環基、雜環氧基、氨酰氧基、氧酰氨基、硫代烷氧基、經取代的硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-經取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-經取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-雜芳基及三鹵代甲基。雜芳基的實例包括但不限于吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲嗪基、異吲哚基、吲哚基、嘌呤基、異喹啉基、喹啉基、呔嗪基、二氮雜萘基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、喋啶基、咔唑基、咔啉基、啡啶基、吖啶基、啡啉基、異噻唑基、啡嗪基、異噁唑基、啡噁嗪基、啡噻嗪基、哌啶基、哌嗪基、鄰苯二甲酰亞氨基、4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩基、噻唑基、噻吩基、苯并[b]噻吩基等。“雜環”、“雜環的”、“雜環烷基”或“雜環基”指飽和或部分不飽和基團，具有單個環或包括稠合、橋式或螺環系的多個稠環及具有3至20個環原子，包括1至10個雜原子。這些環原子選自由碳、氮、硫或氧組成的群組中，其中在稠環系統中，環中的一或多個可為環烷基、芳基或雜芳基，前提條件是接附點通過非芳族環。在某些實施方案中，雜環基的氮和/或硫原子任選經氧化以提供N-氧化物、-S(O)-或-SO2-部分。雜環的實例包括但不限于氮雜環丁烷基、二氫吲哚基、吲唑基、喹嗪基、咪唑烷基、咪唑啉基、哌啶基、哌嗪基、吲哚啉基、1,2,3,4-四氫異喹啉基、噻唑烷基、嗎啉基、硫嗎啉基、1,1-二氧代硫嗎啉基、哌啶基、吡咯烷基、四氫呋喃基等。在雜芳基或雜環基為“經取代”的情況下，除非對于雜芳基或雜環取代基的定義另有約束，否則此類雜芳基或雜環基可用1至5個取代基或1至3個取代基取代，這些取代基選自烷基、經取代的烷基、烷氧基、經取代的烷氧基、環烷基、經取代的環烷基、環烯基、經取代的環烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、經取代的氨基、氨酰基、氨酰氧基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、巰基、硫代烷氧基、經取代的硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環基、雜環氧基、羥氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-經取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO-雜環基、-SO2-烷基、-SO2-經取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-雜芳基及-SO2-雜環基。“聚亞烷基二醇”指直鏈或支鏈聚亞烷基二醇聚合物諸如聚乙二醇、聚丙二醇及聚丁二醇。聚亞烷基二醇亞單元為單個聚亞烷基二醇單元。例如，聚乙二醇亞單元的實例將為乙二醇-O-CH2-CH2-O-或丙二醇-O-CH2-CH2-CH2-O-，該鏈終點處用氫封端。聚(亞烷基二醇)的其它實例包括但不限于PEG、諸如甲氧基聚(乙二醇)(mPEG)那樣的PEG衍生物、聚(氧化乙烯)、PPG、聚(丁二醇)、聚(氧化乙烯共氧化丙烯)或其共聚物及組合。“聚胺”指在單體單元中具有胺官能團的聚合物，將這些胺官能團合并至主鏈中(如在聚亞烷基亞胺中)或在側基中(如在聚乙烯基胺中)。除本申請所公開的內容之外，當術語“經取代”用于修飾指定基團或殘基時，該術語也可意指指定基團或殘基的一或多個氫原子各自彼此獨立地用如下文所定義的相同或不同的取代基替代。除本申請關于各個術語所公開的基團的外，除另有規定外，用于在指定基團或殘基中的飽和碳原子上取代一或多個氫(可用＝O、＝NR70、＝N-OR70、＝N2或＝S替代單個碳上的任何兩個氫)的取代基為-R60、鹵素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三鹵代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-S(O)2R70、-SO3–M+、-S(O)2OR70、-OS(O)2R70、-OSO3–M+、-OS(O)2OR70、-PO32–(M+)2、-P(O)(OR70)O–M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O–M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2–M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60選自由以下基團組成的群組中：任選取代的烷基、環烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、環烷基烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基及雜芳基烷基；每個R70獨立為氫或R60；每個R80獨立為R70或可選擇地，兩個R80’與它們所鍵合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元雜環烷基，該雜環烷基可任選包括1至4個選自由O、N及S組成的群組中的相同或不同的額外雜原子，其中N可具有–H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-S(O)2C1-4烷基取代；且每個M+為具有凈單個正電荷的抗衡離子。例如，每個M+可獨立為堿離子，諸如K+、Na+、Li+；銨根離子，諸如+N(R60)4；或堿土離子，諸如[Ca2+]0.5、[Mg2+]0.5或[Ba2+]0.5(下標0.5意指對于此類二價堿土離子的抗衡離子中的一個可為實施方案的化合物的離子化形式及諸如氯離子那樣的其它典型抗衡離子，或本申請所公開的兩個離子化化合物可充當對于此類二價堿土離子的抗衡離子，或實施方案的一個雙重離子化化合物可充當對于此類二價堿土離子的抗衡離子)。除本申請所公開的內容之外，除另有規定外，用于在“經取代的”烯基、炔基、芳基及雜芳基中的不飽和碳原子上的氫的取代基為-R60、鹵素、-O–M+、-OR70、-SR70、-S–M+、-NR80R80、三鹵代甲基、-CF3、―CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、-N3、-S(O)R70、-S(O)2R70、-SO3–M+、-SO3R70、-OS(O)2R70、-OSO3–M+、-OSO3R70、-PO32–(M+)2、-P(O)(OR70)O–M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-CO2–M+、-CO2R70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OCO2–M+、-OCO2R70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2–M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60、R70、R80及M+如先前所定義，前提條件是在經取代的烯基或炔基的情況下，取代基不為-O-M+、-OR70、-SR70或-S-M+。除本申請關于各個術語所公開的取代基之外，除另有規定外，用于在“經取代的”雜環烷基及環烷基中的氮原子上的氫的取代基為-R60、-O–M+、-OR70、-SR70、-S–M+、-NR80R80、三鹵代甲基、-CF3、-CN、-NO、-NO2、-S(O)R70、-S(O)2R70、-S(O)2O–M+、-S(O)2OR70、-OS(O)2R70、-OS(O)2O–M+、-OS(O)2OR70、-PO32–(M+)2、-P(O)(OR70)O–M+、-P(O)(OR70)(OR70)、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70C(O)OR70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60、R70、R80及M+如先前所定義。除本申請所公開的內容之外，在某一實施方案中，經取代的基團具有1、2、3或4個取代基、1、2或3個取代基、1或2個取代基或1個取代基。應理解在上文所定義的所有經取代的基團中，本申請不意欲包括通過將具有進一步取代基的取代基定義成其本身所獲得的聚合物(例如經取代的芳基具有作為取代基的經取代的芳基基團，該經取代的芳基基團本身用經取代的芳基基團取代，該經取代的芳基基團進一步被經取代的芳基基團取代等)。在此情況下，此類取代的最大數目為三層。例如，本申請所特定涵蓋的經取代的芳基基團的連續取代被限于經取代的芳基-(經取代的芳基)-經取代的芳基。除非另有指示，否則本申請未明確定義的取代基的命名如下進行：命名末端部分的官能團，接著命名朝向接附點的相鄰官能團。例如，取代基“芳基烷基氧羰基”指基團(芳基)-(烷基)-O-C(O)-。關于本申請所公開的含有一或多個取代基的任何基團，毫無疑問應理解此類基團不含有在空間上不實用和/或在合成上不可行的任何取代或取代模式。另外，本申請化合物包括由于這些化合物的取代而出現的所有立體化學異構體。術語“藥用鹽”意指就給藥于諸如哺乳動物那樣的患者而言可接受的鹽(具有抗衡離子的對于給定劑量療法具有可接受的哺乳動物安全性的鹽)。此類鹽可衍生自藥用無機或有機堿及衍生自藥用無機或有機酸。“藥用鹽”指化合物的藥用鹽，這些鹽衍生自本領域所熟知的各種有機及無機抗衡離子且僅例如包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、銨鹽、四烷基銨鹽等；且當分子含有堿性官能團時，有機或無機酸的鹽諸如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、甲酸鹽、酒石酸鹽、苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、馬來酸鹽、草酸鹽等。繪制基團的結構中的波浪線表示該基團與母體結構的連接點。術語“其鹽”意指當酸的質子由陽離子替代時所形成的化合物，該陽離子為諸如金屬陽離子或有機陽離子等。在可適用的情況下，鹽為藥用鹽，但是對于不意欲給藥于患者的中間體化合物的鹽不需要為藥用鹽。例如，本申請化合物的鹽包括以下那些鹽，其中由無機或有機酸使化合物質子化以形成陽離子且無機或有機酸的共軛堿作為鹽的陰離子組分。“溶劑化物”指由溶劑分子與溶質的分子或離亞組合形成的復合物。溶劑可為有機化合物、無機化合物或兩者的混合物。溶劑的一些實例包括但不限于甲醇、N,N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二甲亞砜及水。當溶劑為水時，所形成的溶劑化物為水合物。“立體異構體”指具有相同原子連接性但空間上具有不同原子排列的化合物。立體異構體包括順式-反式異構體、E與Z異構體、對映異構體及非對映異構體。“互變異構體”指不同僅在于原子的電子鍵合方面和/或在于質子的位置方面的分子的替代形式，諸如烯醇-酮及亞胺-烯胺互變異構體；或含有-N＝C(H)-NH-環原子排列的雜芳基的互變異構形式，諸如吡唑、咪唑、苯并咪唑、三唑及四唑。本領域技術人員將辨識出其它互變異構環原子排列是可能的。將了解的是，術語“或其鹽或溶劑化物或立體異構體”意欲包括鹽、溶劑化物及立體異構體的所有排列，諸如本申請化合物的立體異構體的藥用鹽的溶劑化物。如本申請所使用，藥物、化合物、綴合物、藥物綴合物、抗體-藥物綴合物或藥物組合物的“有效劑量”或“有效量”為足以實現有益或期望結果的量。對于預防性使用，有益或期望結果包括諸如消除或減小疾病風險、減輕疾病嚴重程度或延遲疾病發作那樣的結果，包括疾病的生物化學癥狀、組織學癥狀和/或行為癥狀、其并發癥及疾病發展期間呈現的中間病理表型。對于治療性使用，有益或期望結果包括諸如減少由疾病引起的一或多個癥狀、提高罹患疾病的那些患者的生活質量、減少治療疾病所需其它藥物的劑量、諸如經由靶向增強另一藥物的功效、延遲疾病進程和/或延長存活時間那樣的臨床結果。在癌癥或腫瘤的情況下，藥物的有效量可在以下方面具有效果：減少癌細胞數目；減小腫瘤大小；抑制(即在某種程度上放緩且優選地停止)癌細胞浸潤至周邊器官中；抑制(即在某種程度上放緩且優選地停止)腫瘤轉移；在某種程度上抑制腫瘤生長；和/或在某種程度上減輕與障礙關聯的癥狀中的一或多個。可在一或多次給藥中給藥有效劑量。針對本申請的目的，藥物、化合物或藥物組合物的有效劑量為足以直接或間接實現預防性或治療性處置的量。如臨床情境中所理解的那樣，藥物、化合物或藥物組合物的有效劑量可或不可聯用另一藥物、化合物或藥物組合物來實現。因此，可在給藥一或多種治療劑的情境中考慮“有效劑量”且若聯用一或多種其它藥物可實現或實現理想結果，則可考慮以有效量給藥單個藥物。如本申請所使用，“聯用”指給藥一種治療模態外加另一治療模態。因此，“聯用”指在另一種治療模態給予前、給予期間或給予后將一種治療模態給予個體。如本申請所使用，“治療”為用于獲得有益或期望結果的途徑，這些結果包括且優選為臨床結果。針對本申請的目的，有益或期望臨床結果包括但不限于以下結果中的一或多個：減少癌細胞的增殖(或消滅癌細胞)、減少由疾病引起的癥狀、提高罹患疾病的那些患者的生活質量、減少治療疾病所需其它藥物的劑量、延遲疾病進程和/或延長個體的存活時間。如本申請所使用，“延遲疾病的發展”意指延緩、阻礙、減緩、阻滯、穩定化和/或推遲疾病(諸如癌癥)的發展。此延遲可具有不同的時間長度，取決于疾病史和/或正經治療的個體。如對本領域技術人員顯而易見的那樣，足夠或明顯的延遲可有效含有預防之意，即個體并未發展疾病。例如，可延遲晚期癌癥諸如轉移的發展。“個體”或“受試者”為哺乳動物，更優選地為人類。哺乳動物也包括但不限于家畜、競技動物、寵物(諸如貓類、犬類、馬匹)、靈長類動物、小鼠及大鼠。如本申請所使用，術語“特異性識別”或“特異性結合”指可量測及可再現的相互作用諸如靶標與抗體(或分子或部分)之間的吸引或結合，其在有包括生物分子在內的分子的異質群體參與的情況下決定靶標的呈現。例如，特異性或優先結合至抗原決定部位的抗體為結合至此抗原決定部位比結合至靶標其它抗原決定部位或非靶標抗原決定部位具有較大親合力、較大活動性、較輕易和/或具有較長持續時間的抗體。例如，也應理解的是，特異性或優先結合至第一靶標的抗體(或部分或抗原決定部位)可或不可特異性或優先結合至第二靶標。因此，“特異性結合”或“優先結合”不一定需要(盡管可包括)獨占結合。特異性結合至靶標的抗體可具有至少約103M-1或104M-1的締合常數，該締合常數有時約105M-1或106M-1，在其它情況下約106M-1或107M-1、約108M-1至109M-1或約1010M-1至1011M-1或更高。各種免疫測定方式可用于通過特定蛋白質來選擇具有特異性免疫活性的抗體。例如，固相ELISA免疫測定常用于通過蛋白質來選擇具有特異性免疫活性的單克隆抗體。請參見例如HarlowandLane(1988)Antibodies,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborPublications,NewYork，用于描述可用于確定特異性免疫反應性的免疫測定方式及條件。如本申請所使用，術語“癌癥”、“腫瘤”、“癌性”及“惡性”是指或描述哺乳動物中的生理病癥，該病癥通常以無限制細胞生長為特征。癌癥的實例包括但不限于癌瘤，包括腺癌、淋巴瘤、胚細胞瘤、黑素瘤及肉瘤。此類癌癥的更具體實例包括鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、胃腸癌、霍奇金氏淋巴瘤及非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、成膠質細胞瘤、宮頸癌、神經膠質瘤、卵巢癌、諸如肝癌瘤及肝細胞瘤那樣的肝癌、膀胱癌、乳腺癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌瘤、唾液腺癌瘤、諸如腎細胞癌瘤及韋爾姆斯腫瘤那樣的腎癌、基底細胞癌、黑素瘤、間皮瘤、前列腺癌、甲狀腺癌、睪丸癌、食道癌、膽囊癌及各種類型頭頸癌。如本申請及所附權利要求書所使用，除非上下文另有清楚指示，否則單數形式“一”及“該”包括復數指代。例如，“抗體”的提及為一至多個抗體諸如摩爾量的提及且包括為本領域技術人員所知的其等價形式等。本申請提及的“約”值或參數包括(及描述)針對該值或參數本身的實施方案。例如，提及“約X”的描述包括“X”的描述。應理解本申請所描述的本發明的方面及變化包括“包含”和/或“基本包含”方面及變化。除非另有定義，否則本申請所使用的所有技術術語及科學術語具有與本發明所屬的
技術領域：
中的技術人員通常所理解的相同的意義。盡管也可將與本申請所描述的那些方法及材料類似或等價的任何方法及材料用于本發明的實施或測試中，但現描述優選的方法及材料。本申請所論及的所有公開出版物以引用的方式引入本申請以結合這些公開出版物所記載的內容揭示及描述方法和/或材料。除非另有說明，通常根據本領域熟知的常規方法及如在本說明書通篇中記載及論述的各種一般及較具體的實施方案所描述的那樣實施本發明的方法及技術。請參見例如Loudon,OrganicChemistry,第4版,NewYork:OxfordUniversityPress,2002,第360-361頁,第1084-1085頁；SmithandMarch,March’sAdvancedOrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure,第5版,Wiley-Interscience,2001。在本申請的實施例中說明本申請用于命名本申請化合物的命名法。大體上已使用市售AutoNom軟件(MDL,SanLeandro,Calif)衍生此命名法。應了解的是，出于清晰的目的在不同實施方案的上下文中所描述的本發明的某些特征也可在另一個實施方案中組合提供。相反地，出于簡潔的目的在單個實施方案的上下文中所描述的本發明的各個特征也可單獨或以任何適宜的亞組合提供。本發明具體包含關于由變量表示的化學基團的實施方案的所有組合且本申請揭示這些組合恰如分別及明確揭示每個及每一組合，其程度是此類組合包含作為穩定化合物的化合物(即可被分離、表征及針對生物活性進行測試的化合物)。另外，本發明也具體包含描述此類變量的實施方案中所列出的化學基團的所有亞組合且本申請揭示這些亞組合恰如本申請分別及明確揭示化學基團的每個及每一此類亞組合。具體實施方式本申請提供具有親水性自消耗連接子的化合物(抗-FRA抗體-藥物綴合物)，該連接子在適宜條件下可被裂解及合并親水性基團以提供綴合物的較好的可溶性。親水性自消耗連接子可為通常疏水的細胞毒性藥物提供藥物綴合物的增加的可溶性。在藥物綴合物中使用親水性自消耗連接子的其它優勢包括藥物綴合物的增加的穩定性及藥物綴合物的減少的聚集性。本申請提供可具有優越血清穩定性的抗體-藥物綴合物。例如，與經由在水性緩沖液或人類血清中對快速水解敏感的不穩定碳酸酯連接方式將藥物的羥基連接至間隔基的抗體-藥物綴合物相比，使用芐基氧基羰基連接方式的本發明實施方案的抗體-藥物綴合物可在相同條件下是相對較穩定的且可在使用蛋白酶例如組織蛋白酶B進行處理后選擇性地經歷斷裂以釋放藥物。血清穩定性為抗體-藥物綴合物的理想特性，其中需要將非活性藥物給藥至患者血清，使得該非活性藥物作為配體集中于靶標及隨后使得該抗體-藥物綴合物僅在靶標附近轉化成活性形式。本申請提供可具有減少的聚集的抗體-藥物綴合物。一些酶不穩定連接子的增加的關聯疏水性可導致抗體-藥物綴合物的聚集，尤其是使用強疏水性藥物。隨著親水性基團合并至連接子中，可存在抗體-藥物綴合物的減少的聚集。本申請的化合物(抗體-藥物綴合物)包含藥物部分、能夠靶向選定細胞群落(例如FRA表達細胞)的靶向部分及連接子，該連接子含有酰基單元、用于在藥物部分與靶向部分之間提供距離的任選間隔基單元、可在適宜條件下可裂解的肽連接子、親水性自消耗連接子及任選第二自消耗間隔基或環化自消除連接子。下文論述這些特征中的每個。本公開提供式(I)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中：D為藥物部分；T為靶向部分；X為親水性自消耗連接子；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元。在某些實施方案中，所述靶向部分為特異性結合FRA(例如人FRA)的抗體。在某些實施方案中，所述靶向部分為抗-FRA抗體，其具有一個或多個連接位點用于連接至所述藥物部分。例如，靶向部分T可具有多個位點用于連接至連接子-藥物部分(例如A-L4-L3-L2-X-L1-D)。因此，還提供式(Ia)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中D、T、X、L1、L2、L3、L4和A如式(I)所定義，且p為1至20。在某些實施方案中，p為1至8。在某些實施方案中，p為1至6。在某些實施方案中，p為1至4。在某些實施方案中，p為2至4。在某些實施方案中，p為1、2、3或4。在某些實施方案中，p為2。在某些實施方案中，p為3。在某些實施方案中，p為4。肽連接子在式(I)中，L3為肽連接子。在某些實施方案中，L3為1至10個氨基酸殘基的肽連接子。在某些實施方案中，L3為2至4個氨基酸殘基的肽連接子。在某些實施方案中，L3為二肽連接子。氨基酸殘基可為天然存在的氨基酸殘基或非天然氨基酸殘基。術語“天然氨基酸”及“天然存在的氨基酸”指Ala、Asp、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp及Tyr。“非天然氨基酸”(即非天然存在的氨基酸)包括作為非限制性實例的高絲氨酸、高精氨酸、瓜氨酸、苯基甘氨酸、牛磺酸、碘酪氨酸、硒基-半胱氨酸、正亮氨酸(“Nle”)、正纈氨酸(“Nva”)、β-丙氨酸、L-或D-萘氨酸、鳥氨酸(“Orn”)等。氨基酸也包括D-形式的天然及非天然氨基酸。”D-”指定具有“D”(右旋)構型的氨基酸，與天然存在的(“L-”)氨基酸中的構型相反。在沒有指示特定構型的情況下，本領域技術人員將理解的是，氨基酸為L-氨基酸。然而，氨基酸也可為D-及L-構型的外消旋混合物。可購得天然及非天然氨基酸(SigmaChemicalCo.；AdvancedChemtech)或使用本領域的已知方法合成這些氨基酸。只要保持其生物活性，便可基于殘基的極性、電荷、可溶性、疏水性、親水性和/或兩親性的相似性進行氨基酸代替。可特制氨基酸殘基序列，使得其將通過腫瘤相關蛋白酶中的一或多個從所得肽基衍生藥物綴合物中選擇性地酶性裂解。在某些實施方案中，L3為包含至少一個賴氨酸或精氨酸殘基的肽連接子。在某些實施方案中，L3為包含選自以下的氨基酸殘基的肽連接子：賴氨酸、D-賴氨酸、瓜氨酸、精氨酸、脯氨酸、組氨酸、鳥氨酸及谷氨酰胺。在某些實施方案中，L3為包含選自以下的氨基酸殘基的肽連接子：纈氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸、色氨酸及酪氨酸。在某些實施方案中，L3選自以下的二肽連接子：纈氨酸-瓜氨酸、脯氨酸-賴氨酸、甲硫氨酸-D-賴氨酸、天冬酰胺-D-賴氨酸、異亮氨酸-脯氨酸、苯丙氨酸-賴氨酸及纈氨酸-賴氨酸。在某些實施方案中，L3為纈氨酸-瓜氨酸。可設計適合于本申請使用的多種具體肽連接子分子及可最佳化這些肽連接子分子通過特定腫瘤相關蛋白酶的酶性裂解選擇性。本申請中所使用的某些肽連接子為對于蛋白酶即組織蛋白酶B及D經最佳化的那些肽連接子。親水性自消耗連接子在式(I)中，X為親水性自消耗連接子。本申請的化合物使用親水性自消耗間隔基部分，該間隔基部分間隔且共價連接藥物部分及靶向部分及合并親水性基團，此舉提供化合物的較好的可溶性。一些酶不穩定連接子的增加的關聯疏水性可導致藥物綴合物的聚集，尤其是使用強疏水性藥物。隨著親水性基團合并至連接子中，可存在藥物綴合物的減少的聚集。可將自消耗間隔基定義為雙官能化學部分，該雙官能化學部分能夠共價連接兩個間隔的化學部分成為通常穩定的三部分分子，該自消耗間隔基可經由酶性裂解從三部分分子中釋放間隔的化學部分中的一個；且在酶性裂解后，該自消耗間隔基可自分子的剩余部分自發裂解以釋放間隔的化學部分中的另一個。在某些實施方案中，X為芐基氧基羰基。在某些實施方案中，X為其中R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基。在所述情況下，本公開提供式(II)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中：D為藥物部分；T為靶向部分；R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵、第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元。在某些實施方案中，本申請提供式(IIa)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中D、T、L1、L2、L3、L4和A如式(II)所定義，且p為1至20。在某些實施方案中，p為1至8。在某些實施方案中，p為1至6。在某些實施方案中，p為1至4。在某些實施方案中，p為2至4。在某些實施方案中，p為1、2、3或4。在某些實施方案中，p為2。在某些實施方案中，p為3。在某些實施方案中，p為4。在式(II)或(IIa)的某些實施方案中，R1為氫。在某些情況下，R1為甲基。意欲且應理解的是，對式(I)或(Ia)描述的D、T、L1、L2、L3、L4和A的每個和每種變量可應用于式(II)或(IIa)，就如同每個和每種變量及其組合被單獨描述的那樣。例如，在一些實施方案中，式(II)或(IIa)的靶向部分為特異性結合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體。其還意欲且應理解的是，對式(I)描述的D、T、L1、L2、L3、L4和A中的一個的每個和每種變量可與對式(I)描述的D、T、L1、L2、L3、L4和A中的另一個的每個和每種變量組合，就如同每個和每種組合被單獨描述的那樣。藥物部分的釋放是基于氨基芐基氧基羰基的自消除反應。出于說明的目的，下文圖示具有藥物及肽接附的氨基芐基氧基羰基的反應方案。方案1參見方案1，在自肽裂解后，形成氨基芐基氧基羰基且氨基芐基氧基羰基能夠經歷自發的1,6消除以形成環己-2,5-二烯亞胺衍生物及二氧化碳并釋放藥物。任選第二自消耗連接子或環化自消除連接子第二自消耗連接子或環化自消除連接子提供額外連接子用于允許精細調節化合物的裂解以釋放藥物部分。在式(I)或(Ia)中，L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；且其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵。存在與親水性自消耗連接子相鄰的任選第二自消耗連接子或環化自消除連接子。在某些實施方案中，L1為鍵且L2為鍵。在某些實施方案中，L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子且L2為鍵。在某些實施方案中，L1為鍵且L2為第二自消耗連接子。在式(I)或(Ia)中，在某些實施方案中，L1為鍵。在某些實施方案中，L1為第二自消耗間隔基或環化自消除連接子，該間隔基或連接子將親水性自消耗連接子與藥物部分分開。在某些實施方案中，L1為氨基芐基氧基羰基連接子。在某些實施方案中，L1選自：其中n為1或2。在某些實施方案中，第二自消耗連接子或環化自消除連接子提供設計潛力用于可使用的更多種類的部分。例如，在式(II)或(IIa)中，在親水性自消耗連接子與藥物部分之間的氨基甲酸酯連接基(-O-C(O)-N(H)-)將提供穩定的藥物綴合物及將易于裂解以提供游離藥物部分。親水性自消耗連接子通常將使用氧羰基(-O-C(O)-)終止。若藥物部分具有氨基反應性基團，該氨基反應性基團可用于反應以形成氨基甲酸酯基團，則不需要第二自消耗單元或環化自消除連接子；但是仍可使用第二自消耗單元或環化自消除連接子。然而，若藥物不含有氨基，但反而含有一些其它反應性官能團，則此類藥物仍可通過在藥物部分與氨基芐基氧基羰基之間包括第二中間體自消耗間隔基或環化自消除連接子被合并至本發明實施方案的含有氨基芐基氧基羰基的化合物中。以下L1的環化自消除連接子提供含有羥基或含有巰基的藥物部分與親水性自消耗連接子的氨基芐基氧基羰基的連接：實施方案的化合物中的環化自消除連接子提供化合物的裂解以釋放藥物部分。相鄰親水性自消耗連接子的消除機制將暴露L1的氨基。所述氨基隨后可在環化反應中與L1的氨基甲酸酯基團或硫代氨基甲酸酯連接基及藥物部分反應以釋放含有羥基或含有巰基的藥物部分。在式(I)或(Ia)中，在某些實施方案中，L2為鍵。在某些實施方案中，L2為第二自消耗間隔基，該第二自消耗間隔基將親水性自消耗連接子與肽連接子分開。在某些實施方案中，L2為氨基芐基氧基羰基連接子。在某些實施方案中，L2選自其中n為1或2。任選間隔基在式(I)或(Ia)中，L4為鍵或間隔基。在某些實施方案中，L4為鍵。在某些實施方案中，L4為間隔基，該間隔基可提供在藥物部分與靶向部分之間的距離。在某些實施方案中，間隔基選自烷基、經取代的烷基、烯基、經取代的烯基、炔基、經取代的炔基、芳基、經取代的芳基、環烷基、經取代的環烷基、雜芳基、經取代的雜芳基、雜環基、經取代的雜環基及雜原子及其組合。間隔基在其原子組成上可為均勻或不均勻(例如間隔基僅含有碳原子或間隔基含有碳原子及間隔基上所呈現的一或多個雜原子)。優選地，間隔基含有1至50個碳原子及選自氧、氮及硫的0至30個雜原子。間隔基也可為手性或非手性、直鏈、支鏈或環狀。在某些實施方案中，L4為選自聚亞烷基二醇、亞烷基、亞烯基、亞炔基及聚胺的間隔基。亞烯基的實例包括但不限于亞乙烯基(-CH＝CH-)、亞丙烯基(-CH2C＝C-)及丁-3-烯亞基(-CH2CH2C＝CH-)。亞炔基的實例包括但不限于亞乙炔基(-C≡C-)及亞丙炔基(-CH2C≡C-)。在某些實施方案中，L4為包含官能團的間隔基，該官能團可提供與肽連接基的終端的連接。諸如C(O)、C(O)-NH、S(O)2及S(O)2-NH那樣的官能團可提供與肽連接基的終端的連接。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)、L4a-C(O)-NH、L4a-S(O)2、L4a-S(O)2-NH，其中L4a選自聚亞烷基二醇、亞烷基、亞烯基、亞炔基及聚胺。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a選自聚亞烷基二醇、亞烷基、亞烯基、亞炔基及聚胺。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為聚亞烷基二醇。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為聚乙二醇。在某些實施方案中，間隔基具有式-CH2-(CH2-O-CH2)m-CH2-C(O)-，其中m為0至30的整數。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為亞烷基。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為C1-10亞烷基、C1-8亞烷基或C1-6亞烷基。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為C4亞烷基、C5亞烷基或C6亞烷基。在某些實施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為C5亞烷基。酰基單元在式(I)或(Ia)中，A為酰基單元。在某些實施方案中，酰基單元”A”包含硫原子及經由自靶向部分衍生的硫原子連接至靶向部分。在所述實例中，在酰基單元與靶向部分之間形成二硫鍵。在某些實施方案中，A選自其中Q2為NH或O，每個q獨立為1至10的整數，且每個q1獨立為1至10的整數。在一些實施方案中，q為2至5的整數，諸如2、3、4或5。在一些實施方案中，q1為2至5的整數，諸如2、3、4或5。在某些實施方案中，A為其中Q2為NH或O且q為1至10的整數。在某些情況下，q為2至5的數字，諸如2、3、4或5。在某些實施方案中，A為其中Q2為NH或O且q為1至10的整數。在某些情況下，q為2至5的數字，諸如2、3、4或5。在某些實施方案中，A選自其中Q2為NH或O。藥物部分本發明實施方案的藥物綴合物在對應藥物有效的情況下對于通常目的有效且具有優良的功效，因為靶向部分中所固有的能力能夠將藥物遞送至期望細胞，該藥物在期望細胞中具有特定益處。本發明實施方案中所使用的優選藥物為細胞毒性藥物，諸如用于癌癥治療的那些細胞毒性藥物。此類藥物大體上包括DNA損傷劑、抗代謝劑、天然產物及其類似物。細胞毒性劑的某些類別包括例如酶抑制劑諸如二氫葉酸還原酶抑制劑、胸苷酸合成酶抑制劑、DNA嵌入劑、DNA裂解劑、拓撲異構酶抑制劑、蒽環類藥物、長春花類藥物、絲裂霉素類、博來霉素類、細胞毒性核苷、喋啶類藥物、亞二炔類、鬼臼毒素類、分化誘導劑及紫杉醇類。那些類別的某些有用成員包括例如甲胺喋呤、甲基葉酸、二氯甲胺喋呤、5-氟脲嘧啶、6-巰基嘌呤、阿糖胞苷、美法侖、環氧長春堿、leurosideine、放線菌素、柔紅霉素、多柔比星、絲裂霉素C、絲裂霉素A、洋紅霉素、氨基蝶呤、他利霉素、鬼臼毒素及鬼臼毒素衍生物諸如依托泊苷或磷酸依托泊苷、長春堿、長春新堿、長春地辛、紫杉醇、多西紫杉醇維甲酸、丁酸、N8-乙酰基亞精胺、喜樹堿及其類似物。其它藥物包括多拉司他汀(dolastatin)及倍癌霉素(duocarmycin)。本領域技術人員可對期望化合物進行化學修飾以便使得該化合物的反應更加便利以意欲用于制備本發明的綴合物。在某些實施方案中，D為具有化學反應性官能團的藥物部分，經由該官能團將藥物鍵合至L1或X。在某些實施方案中，所述官能團選自伯胺、仲胺、羥基及巰基。在某些實施方案中，所述官能團為伯胺或仲胺。在某些實施方案中，所述官能團為羥基。在某些實施方案中，所述官能團為巰基。如上文所論述的那樣，親水性自消耗連接子通常將使用氧羰基(-O-C(O)-)終止。因此，含有氨基的藥物部分將易于與氧羰基反應以形成氨基甲酸酯基團。在某些實施方案中，D為含有氨基的藥物部分，其中將該藥物經由氨基連接至L1或X。然而，若藥物部分不含有氨基，則L1的第二自消耗連接子或環化自消除連接子可提供設計潛力用于可使用的更多種類的部分。在某些實施方案中，D為含有羥基或含有巰基的藥物部分，其中將該藥物經由羥基或巰基連接至L1。代表性含有氨基的藥物包括絲裂霉素-C、絲裂霉素-A、柔紅霉素、多柔比星、氨基蝶呤、放線菌素、博來霉素、9-氨基喜樹堿、N8-乙酰基亞精胺、1-(2-氯乙基)-1,2-二甲磺酰基肼、他利霉素、阿糖胞苷、多拉司他汀及其衍生物。含有氨基的藥物也包括非天然含有氨基的藥物的氨基衍生物。在某些實施方案中，D為倍癌霉素、多拉司他汀、微管結合素(tubulysin)、多柔比星(DOX)、紫杉醇或絲裂霉素C(MMC)或其氨基衍生物。代表性含有羥基的藥物包括依托泊苷、喜樹堿、紫杉醇、埃斯培拉霉素、1,8-二羥基-二環[7.3.1]十三碳-4,9-二烯-2,6-二炔-13-酮(美國專利第5,198,560號)、鬼臼毒素、蛇形菌素、長春新堿、長春堿、嗎啉-多柔比星、N-(5,5-二乙酰氧基-戊基)多柔比星、倍癌霉素及其衍生物。代表性含有巰基的藥物包括埃斯培拉霉素及6-巰基嘌呤及其衍生物。用作本發明實施方案中的藥物的一組細胞毒性劑包括具有以下式的藥物：靶向部分本申請中所描述的靶向部分指與給定細胞群落(例如FRA表達細胞)特異性結合、復合、反應或關聯的部分或分子。在本申請所描述的綴合物中，本申請所描述的靶向部分經由連接子連接至綴合物中的藥物部分。在一些實施方案中，靶向部分能夠遞送藥物部分(例如用于治療性目的的藥物部分)至特定靶細胞群落，該特定靶細胞群落與該靶向部分鍵合、復合、反應或關聯。在一些實施方案中，靶向部分為抗體(或抗體部分或抗體靶向部分)。在一些實施方案中，靶向部分包含巰基(-SH)基團(例如游離反應性巰基(-SH)基團)或可經修飾以包含此巰基。在一些實施方案中，靶向部分包含具有巰基(例如游離反應性巰基)的抗體。在一些實施方案中，靶向部分包含游離硫基諸如具有游離巰基的抗體或可經修飾以包含此硫醇基團。在一些實施方案中，包含巰基或硫醇基團的靶向部分經由巰基中的硫原子鍵合至連接子。在一些實施方案中，靶向部分(例如抗體靶向部分)具有一或多個接附位點用于連接至藥物部分。例如，靶向部分T(例如抗體)可具有多個位點(例如多個巰基)用于連接至連接子-藥物部分(例如A-L4-L3-L2-X-L1-D，其中A適合于鍵合至靶向抗體的巰基)。在一些實施方案中，靶向部分可具有1至20個接附的位點。在一些實施方案中，靶向部分可具有1至20、1至10、1至8、1至6、1至4、2至8、2至6或2至4個接附的位點。在一些實施方案中，靶向部分具有1、2、3、4、5、6、7或8個接附的位點。在一些實施方案中，靶向部分具有2個接附的位點。在一些實施方案中，靶向部分具有1個接附的位點。在一些實施方案中，靶向部分具有4個接附的位點。在一些實施方案中，接附的某些潛在位點不可易于鍵合至藥物部分。因此，靶向部分T中的接附位點的數目可導致其中接附的藥物部分的數目比接附的潛在位點的數目更少的藥物綴合物。在一些實施方案中，接附的位點中的一或多個可易于鍵合藥物部分。例如，抗體靶向部分可在抗體的每個鏈上具有一或兩個可易于經由連接子鍵合至藥物部分的巰基。本申請所描述的抗體指經由至少一個抗原識別位點能夠特異性結合至靶標(即FRA)的免疫球蛋白分子，所述抗原識別位點位于免疫球蛋白分子的可變區中。如本申請所使用，術語“抗體”不僅涵蓋完整多克隆抗體或單克隆抗體，而且涵蓋其抗原結合片段(諸如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv)、單鏈(ScFv)、其突變體、包含抗體部分的融合蛋白質及包含抗原識別位點的免疫球蛋白分子的任何其它修飾構型。抗體包括任何類別的抗體諸如IgG、IgA或IgM(或其子類別)且該抗體不必具有任何特定類別。取決于其重鏈的恒定域的抗體氨基酸序列，可將免疫球蛋白指定給不同類別。存在五個主要類別的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且幾種這些免疫球蛋白可進一步分為子類別(同工型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應于免疫球蛋白的不同類別的重鏈恒定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。免疫球蛋白的不同類別的亞單位結構及三維構型是已知的。本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)可含有單克隆抗體、多克隆抗體、抗體片段(例如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、Fc等)、嵌合抗體、人源化抗體、人類抗體(例如完整人類抗體)、單鏈(ScFv)、雙特異性抗體、多特異性抗體、其突變體、包含抗體部分的融合蛋白質及包含所需特異性的抗原識別位點的免疫球蛋白分子的任何其它修飾構型。抗體可為鼠類、大鼠、駱駝、人類或任何其它來源(包括人源化抗體)。在一些實施方案中，本申請所描述的靶向部分中所使用的抗體(或抗體靶向部分)為以下抗體中的任一個：雙特異性抗體、多特異性抗體、單鏈、雙官能及嵌合和人源化分子，其對由抗體的至少一個高變區(HVR)或互補決定區(CDR)授予的多肽具有親合力。本申請中所使用的抗體也包括單域抗體，這些抗體為抗體重鏈的可變域或者抗體輕鏈的可變域。Holt等人,TrendsBiotechnol.21:484-490,2003。在本領域中也已知制備包含抗體重鏈的可變域或者抗體輕鏈的可變域的域抗體的方法，這些域抗體含有抗體中六個天然存在的HVR或CDR中的三個。請參見例如Muyldermans,Rev.Mol.Biotechnol.74:277-302,2001。在一些實施方案中，本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)為單克隆抗體。如本申請所使用，單克隆抗體指大體上均勻的抗體的抗體，即除可能天然存在的可少量呈現的突變外，構成群體的各個抗體是相同的。此外，與通常針對不同決定因素(抗原決定部位)包括不同抗體的多克隆抗體制品對比，單克隆抗體并非分散抗體的混合物。修飾語“單克隆”指示抗體的特征為從抗體的大體均勻群體中獲得且不被看作需要通過任何特定方法生產抗體。例如，本申請中所使用的單克隆抗體可通過Kohler及Milstein,1975,Nature,256:495首次描述的雜交瘤方法制備或可通過諸如美國專利第4,816,567號中所描述的重組DNA方法制備。單克隆抗體也可使用例如McCafferty等人,1990,Nature,348:552-554中所描述的技術與所產生的噬菌體抗體庫分離。在一些實施方案中，本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)為嵌合抗體。如本申請所使用，嵌合抗體指具有來自第一物種的可變區或可變區的部分及來自第二物種的恒定區的抗體。完整嵌合抗體包含嵌合輕鏈的兩個復本及嵌合重鏈的兩個復本。在本領域中已知嵌合抗體的生產(Cabilly等人(1984),Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:3273-3277；Harlow及Lane(1988),Antibodies:aLaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory)。通常，在這些嵌合抗體中，輕鏈及重鏈兩者的可變區模擬自哺乳動物的一個物種衍生的抗體的可變區，而恒定部分與自另一物種衍生的抗體中的序列同源。此類嵌合形式的一種明顯優勢在于例如可使用可易于取得的雜交瘤或來自非人類宿主有機體的B細胞與自例如人類細胞制品衍生的恒定區的結合便于自目前已知的來源衍生可變區。盡管可變區具有易于制備的優勢且特異性不受其來源影響，但是當注射抗體時人類恒定區在人類受試者中引起免疫反應的可能性比非人類來源的恒定區更小。然而，該定義并不被限于此特定實例。在一些實施方案中，本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)為人源化抗體。如本申請所使用，人源化抗體指非人類(例如鼠類)抗體的形式，這些非人類抗體為特定嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其含有自非人類免疫球蛋白衍生的最小序列的片段(諸如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或抗體的其它抗原結合子序列)。在很大部分上，人源化抗體為人類免疫球蛋白(接受體抗體)，其中來自接受體的HVR或CDR的殘基由來自諸如小鼠、大鼠或兔那樣的非人類物種(供體抗體)的HVR或CDR的殘基替代，該人源化抗體具有期望特異性、親合力及能力。在一些實施方案中，人類免疫球蛋白的Fv框架區(FR)殘基由對應的非人類殘基替代。此外，人源化抗體可包含在接受體抗體及輸入HVR或CDR或框架序列中皆無法找到的殘基，但包括這些殘基以進一步改善及最佳化抗體效能。大體而言，人源化抗體將包含大體所有至少一個且通常兩個可變域，其中所有或大體所有HVR或CDR區對應于非人類免疫球蛋白的那些區且所有或大體所有FR區為人類免疫球蛋白一致序列的那些區。人源化抗體最佳也將包含免疫球蛋白恒定區或恒定域(Fc)中的至少一部分，通常為人類免疫球蛋白的恒定區或恒定域。抗體可具有如WO99/58572中所描述的修飾的Fc區。人源化抗體的其它形式具有一或多個HVR或CDR(一個、兩個、三個、四個、五個、六個)，關于原始抗體改變這些HVR或CDR，此也稱為“衍生自”原始抗體中的一或多個HVR或CDR的一或多個HVR或CDR。在一些實施方案中，本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)為人類抗體。如本申請所使用，人類抗體意指具有氨基酸序列的抗體，該氨基酸序列對應于由人類產生的抗體和/或已使用本領域中已知的制備人類抗體的任何技術制備。本申請所使用的人類抗體包括包含至少一個人類重鏈多肽或至少一個人類輕鏈多肽的抗體。一個此類實例為包含鼠類輕鏈及人類重鏈多肽的抗體。可使用本領域中已知的各種技術產生人類抗體。在一個實施方案中，人類抗體選自噬菌體抗體庫，其中該噬菌體抗體庫表達人類抗體(Vaughan等人,1996,NatureBiotechnology,14:309-314；Sheets等人,1998,PNAS,(USA)95:6157-6162；Hoogenboom及Winter,1991,J.Mol.Biol.,227:381；Marks等人,1991,J.Mol.Biol.,222:581)。也可通過將人類免疫球蛋白基因座引入轉基因動物(例如小鼠)中來制備人類抗體，在這些轉基因動物體內已部分或完全滅活內源性免疫球蛋白基因。在美國專利第5,545,807號、第5,545,806號、第5,569,825號、第5,625,126號、第5,633,425號及第5,661,016號中描述此方法。可選擇地，可通過永生化針對靶抗原產生抗體的人類B淋巴細胞制備人類抗體(此類B淋巴細胞可自個體回收或可在體外已被免疫)。參見例如Cole等人,MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,第77頁(1985)；Boerner等人,1991,J.Immunol.,147(1):86-95；及美國專利第5,750,373號。在某些實施方案中，本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)特異性結合至葉酸受體α(即FRA)(例如人FRA)。在一些實施方案中，本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)特異性結合至FRA的胞外域(例如人FRA的胞外域)。本申請使用的“FRA”是指野生型序列以及天然存在的變體序列兩者。由本發明的抗體所識別的FRA的非限制性實例為人FRA(AccessionNo.P15328)。如下提供了人葉酸受體α的氨基酸序列：SEQIDNO:35(人FRA)在一些實施方案中，本申請所述的抗-FRA抗體結合至人細胞(例如，人癌細胞)的細胞表面上表達的成熟FRA(例如人FRA)。在某些實施方案中，本申請所述的抗-FRA抗體結合人癌細胞(例如卵巢癌細胞、肺癌細胞、子宮癌細胞、睪丸絨毛膜癌細胞、室管膜瘤細胞、間皮瘤細胞、乳腺癌細胞、結腸癌細胞或腎細胞癌瘤細胞)的細胞表面上表達的成熟FRA。抗-FRA抗體及其氨基酸序列的實例如下在表1中提供。表1:抗-FRA抗體的氨基酸序列IgG4p表示具有Ser228至Pro的突變(S228P)的人類IgG4抗體，該突變將防止Fab臂與另一IgG4在體內交換(Stubenrauchetal.,(2010)DrugMetabDispos.38(1):84-91)。如下顯示的序列的下劃線部分表示可變區的序列。如下顯示的序列的粗體部分表示CDR。SEQIDNO:1(hLK26-IgG1重鏈):EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFWVRQAPGKGLEWVARFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQIDNO:2(hLK26-IgG4p重鏈):EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFSWVRQAPGKGLEWVARFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKSEQIDNO:3(hLK26-κ輕鏈):DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCWYQQKPGKAPKPWIYGTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLPEDIATYYCFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQIDNO:4(26B3(小鼠)IgG1重鏈):GPELVKPGASVKISCKASDYSFTWVMQSHGKSLEWIGRATLTVDKSSSTAHMELRSLASEDSAVYFCARWGQGTTLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSPRPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMNTNGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGKSEQIDNO:5(26B3(小鼠)κ輕鏈):PASLSASVGETVTITCWYQQKQGISPQLLVYGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCFGGGSKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNECSEQIDNO:6(hMov19-IgG1重鏈):QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTWVKQSPGQSLEWIGATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQIDNO:7(hMov19-κ輕鏈):DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCWYHQKPGQQPRLLIYGVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYCFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQIDNO:8(hLK26重鏈可變區)EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFSWVRQAPGKGLEWVARFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARWGQGTPVTVSSSEQIDNO:9(hLK26輕鏈可變區)DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCWYQQKPGKAPKPWIYGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCFGQGTKVEIKSEQIDNO:10(26B3重鏈可變區)GPELVKPGASVKISCKASDYSFTWVMQSHGKSLEWIGRATLTVDKSSSTAHMELRSLASEDSAVYFCARWGQGTTLTVSSSEQIDNO:11(26B3輕鏈可變區)PASLSASVGETVTITCWYQQKQGISPQLLVYGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCFGGGSKLEIKSEQIDNO:12(hMov19重鏈可變區)QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTWVKQSPGQSLEWIGKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRWGQGTTVTVSSSEQIDNO:13(hMov19輕鏈可變區)DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCWYHQKPGQQPRLLIYGVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYCFGGGTKLEIK上述抗-FRA抗體的CDR提供于下表2。表2:抗-FRA抗體的CDR的氨基酸序列重鏈恒定區的氨基酸序列如下提供：SEQIDNO:32(IgG1重鏈恒定區)ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQIDNO:33(IgG4p重鏈恒定區)ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKSEQIDNO:34(κ輕鏈恒定區)RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體為抗體hLK26、hMov19或由任一這些抗體衍生的抗體。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體為抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)。抗體hLK26、hMov19和26B3的輕鏈和重鏈可變序列如上在表1中闡述。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含來自于所述抗體hLK26或hMov19(或自這些抗體的任一者衍生的抗體)的輕鏈和/或重鏈的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含來自于所述抗體hLK26或hMov19(或自這些抗體的任一者衍生的抗體)的輕鏈或重鏈的一個、兩個或三個HVR(或CDR)，諸如如上在表2中闡述的CDR序列。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含來自于所述抗體hLK26或hMov19(或自這些抗體的任一者衍生的抗體)的輕鏈和重鏈的一個、兩個或三個HVR(或CDR)，諸如如上在表2中闡述的CDR序列。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含來自于抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)的輕鏈和/或重鏈的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含來自于抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)輕鏈或重鏈的一個、兩個或三個HVR(或CDR)，諸如如上在表2中闡述的CDR序列。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含來自于抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)的輕鏈和重鏈的一個、兩個或三個HVR(或CDR)，諸如如上在表2中闡述的CDR序列。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含抗體hLK26或hMov19的片段或區。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)的片段或區。在一個實施方案中，所述片段包含抗體hLK26或hMov19的輕鏈可變區。在一個實施方案中，所述片段包含抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)的輕鏈可變區。在另一實施方案中，所述片段包含抗體hLK26或hMov19的重鏈可變區。在另一實施方案中，所述片段包含抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)的重鏈可變區。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含抗體hLK26或hMov19的輕鏈和重鏈可變區。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)的輕鏈和重鏈可變區。在另一實施方案中，所述片段包含來自于抗體hLK26、26B3或hMov19的輕鏈和/或重鏈的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在另一實施方案中，所述片段包含來自于抗體hLK26、26B3或hMov19的輕鏈或重鏈的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在另一實施方案中，所述片段包含來自于抗體hLK26、26B3或hMov19的輕鏈和重鏈的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，衍生自抗體hLK26、26B3或hMov19的一個或多個HVR(或CDR)與hLK26、26B3或hMov19的至少一個、至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個或至少六個HVR(或CDR)是至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:8的一個、兩個或三個HVR(或CDR)；和/或輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:9的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:8的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:9的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:8的一個、兩個或三個HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:9的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含重鏈可變區，其包含選自SEQIDNO:14-16的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區，其包含選自SEQIDNO:17-19的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含選自SEQIDNO:14-16的一個、兩個或三個HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區，其包含選自SEQIDNO:17-19的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:8的三個HVR(或CDR)；和/或輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:9的三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:8的三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:9的三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:8的三個HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:9的三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含重鏈可變區，其包含在SEQIDNO:14中闡述的重鏈可變區(VH)CDR1序列、在SEQIDNO:15中闡述的VHCDR2序列和在SEQIDNO:16中闡述的VHCDR3序列。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區，其包含在SEQIDNO:17中闡述的輕鏈可變區(VL)CDR1序列、在SEQIDNO:18中闡述的VLCDR2序列和在SEQIDNO:19中闡述的VLCDR3序列。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含在SEQIDNO:14中闡述的VHCDR1序列、在SEQIDNO:15中闡述的VHCDR2序列和在SEQIDNO:16中闡述的VHCDR3序列；以及輕鏈可變區，其包含在SEQIDNO:17中闡述的VLCDR1序列、在SEQIDNO:18中闡述的VLCDR2序列和在SEQIDNO:19中闡述的VLCDR3序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:8的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:9的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:8的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；或輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:9的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:8的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:9的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含SEQIDNO:8的氨基酸序列，和/或輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈可變區，其包含SEQIDNO:8的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含SEQIDNO:8的氨基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含與SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈，其包含與SEQIDNO:3的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含與SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；或輕鏈，其包含與SEQIDNO:3的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含與SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈，其包含與SEQIDNO:3的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含SEQIDNO:1或2的氨基酸序列；和/或輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:3的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈，其包含SEQIDNO:1或2的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:3的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含SEQIDNO:1或2的氨基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:3的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體為人源化抗體。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:10的一個、兩個或三個HVR(或CDR)；和/或輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:11的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含:重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:10的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:11的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:10的一個、兩個或三個HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:11的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含重鏈可變區，其包含選自SEQIDNO:20-22的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區，其包含選自SEQIDNO:23-25的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含選自SEQIDNO:20-22的一個、兩個或三個HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區，其包含選自SEQIDNO:23-25的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:10的三個HVR(或CDR)；和/或輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:11的三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:10的三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:11的三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:10的三個HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:11的三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含在SEQIDNO:20中闡述的重鏈可變區(VH)CDR1序列、在SEQIDNO:21中闡述的VHCDR2序列和在SEQIDNO:22中闡述的VHCDR3序列。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區，其包含在SEQIDNO:23中闡述的輕鏈可變區(VL)CDR1序列、在SEQIDNO:24中闡述的VLCDR2序列和在SEQIDNO:25中闡述的VLCDR3序列。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含在SEQIDNO:20中闡述的VHCDR1序列、在SEQIDNO:21中闡述的VHCDR2序列和在SEQIDNO:22中闡述的VHCDR3序列；以及輕鏈可變區，其包含在SEQIDNO:23中闡述的VLCDR1序列、在SEQIDNO:24中闡述的VLCDR2序列和在SEQIDNO:25中闡述的VLCDR3序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:10的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:11的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:10的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；或輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:11的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:10的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:11的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含氨基酸SEQIDNO:10的序列；和/或輕鏈可變區，其包含氨基酸SEQIDNO:11的序列。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈可變區，其包含SEQIDNO:10的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:11的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含SEQIDNO:10的氨基酸序列；或輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:11的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈恒定區，其包含與SEQIDNO:32或33的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈恒定區，其包含與SEQIDNO:34的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:32或33的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；或輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:34的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:32或33的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:34的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈恒定區，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列；和/或輕鏈恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈恒定區，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列；以及輕鏈恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體為嵌合抗體。在一些實施方案中，所述抗體為人源化抗體。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:12的一個、兩個或三個HVR(或CDR)；和/或輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:13的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:12的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:13的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:12的一個、兩個或三個HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:13的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含選自SEQIDNO:26-28的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區，其包含選自SEQIDNO:29-31的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含選自SEQIDNO:26-28的一個、兩個或三個HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區，其包含選自SEQIDNO:29-31的一個、兩個或三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:12的三個HVR(或CDR)；和/或輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:13的三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:12的三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:13的三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:12的三個HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區，其包含來自SEQIDNO:13的三個HVR(或CDR)。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含在SEQIDNO:26中闡述的重鏈可變區(VH)CDR1序列、在SEQIDNO:27中闡述的VHCDR2序列和在SEQIDNO:28中闡述的VHCDR3序列。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區，其包含在SEQIDNO:29中闡述的輕鏈可變區(VL)CDR1序列、在SEQIDNO:30中闡述的VLCDR2序列和在SEQIDNO:31中闡述的VLCDR3序列。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區，其包含在SEQIDNO:26中闡述的VHCDR1序列、在SEQIDNO:27中闡述的VHCDR2序列和在SEQIDNO:28中闡述的VHCDR3序列；以及輕鏈可變區，其包含在SEQIDNO:29中闡述的VLCDR1序列、在SEQIDNO:30中闡述的VLCDR2序列和在SEQIDNO:31中闡述的VLCDR3序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:12的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:13的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:12的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；或輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:13的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:12的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:13的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含SEQIDNO:12的氨基酸序列；和/或輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈可變區，其包含SEQIDNO:12的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含SEQIDNO:12的氨基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈恒定區，其包含與SEQIDNO:32或33的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈恒定區，其包含與SEQIDNO:34的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:32或33的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；或輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:34的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQIDNO:32或33的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含與SEQIDNO:34的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈恒定區，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列；和/或輕鏈恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈恒定區，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列；以及輕鏈恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含與SEQIDNO:6的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈，其包含與SEQIDNO:7的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈，其包含與SEQIDNO:6的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含輕鏈，其包含與SEQIDNO:7的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含與SEQIDNO:6的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈，其包含與SEQIDNO:7的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性室溫氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含SEQIDNO:6的氨基酸序列；和/或輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:7的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈，其包含SEQIDNO:6的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:7的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含SEQIDNO:6的氨基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含SEQIDNO:7的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述抗體為人源化抗體。在一些實施方案中，包括于或用于本申請所述的靶向部分(或抗體靶向部分)中的抗-FRA抗體特異性地結合至由癌細胞(例如FRA陽性卵巢癌細胞、肺癌細胞、子宮癌細胞、睪丸絨毛膜癌細胞、室管膜瘤細胞、間皮瘤細胞、乳腺癌細胞、結腸癌細胞或腎細胞癌細胞)表達的FRA(諸如人FRA)。如本申請所使用，關于序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”及“同源性”指若需要在對齊序列及引進間隙后與特定序列中的氨基酸殘基相同的候選序列中的氨基酸殘基的百分比以實現最大百分比序列同一性，而不考慮任何保守取代作為序列同一性的部分。可按本領域內的各種方式實現意欲用于確定百分比氨基酸序列同一性的對齊，例如使用諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGNTM(DNASTAR)軟件那樣的公用計算機軟件。本領域技術人員可確定用于測量對齊的適宜參數，包括在所比較的序列的全長上實現最大對齊所需的任何算法。在一些實施方案中，本申請所描述的CDR為KabatCDR、ChothiaCDR或接觸CDR。在一些實施方案中，CDR為KabatCDR。在一些實施方案中，CDR為ChothiaCDR。在其它實施方案中，CDR為KabatCDR與ChothiaCDR的組合(也稱為“組合CDR”或“延伸CDR”)。換言之，對于含有超過一個CDR的任何給定實施方案，CDR可為Kabat、Chothia和/或組合中的任一個。該領域中已知確定CDR的方法。抗體的可變區指單獨或組合的抗體輕鏈的可變區或抗體重鏈的可變區。大體而言，可變區調節抗原結合及定義對于其特定抗原的特定抗體的特異性。可變區可具有相對無變化的延伸，稱為框架區(FR)(例如15-30個氨基酸之FR)，所述框架區通過稱為“高變區”(“HVR”)的極端變化性的較短區分開(例如HVR每個為9-12個氨基酸長)。在一些實施方案中，天然重鏈及輕鏈的可變域每個包含四個FR，主要采用β片狀構型，由三個高變區連接，形成連接β片狀結構的環及在一些情況中形成β片狀結構的一部分。每個鏈上的高變區可通過FR緊密固持于一起及與其它鏈上的高變區一起貢獻于抗體的抗原結合位點的形成(請參見Kabat等人,SequencesofProteinsofofImmunologicalInterest,第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))。恒定域不可直接涉及結合抗體至抗原，但是可展示各種效應功能，諸如抗體在抗體依賴性細胞毒性(ADCC)中的參與。抗體的恒定區指單獨或組合的抗體輕鏈的恒定區或抗體重鏈的恒定區。抗體的恒定區大體上提供結構穩定性及其它生物功能，諸如抗體鏈關聯、分泌、經胎盤移動及補充結合，但是不涉及結合至抗原。恒定區的基因中的氨基酸序列及對應的外顯子序列將取決于其所衍生來自的物種；然而，在物種內部針對特定恒定區將相對限制氨基酸序列中導致異型的變異。每個鏈的可變區通過連接多肽序列接合至恒定區。通過輕鏈基因中的“J”序列及重鏈基因中的“D”序列及“J”序列的組合編碼連接序列。當本申請所使用時的術語“高變區”(“HVR”)指導致抗原結合的抗體的氨基酸殘基。高變區大體上包含來自“互補決定區”或“CDR”的氨基酸殘基(例如VL中圍繞殘基24-34(L1)、50-56(L2)及89-97(L3)周圍及VH中圍繞31-35B(H1)、50-65(H2)及95-102(H3)周圍(在一個實施方案中，H1圍繞31-35周圍)；Kabat等人,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))和/或來自“高變環”的那些殘基(例如VL中的殘基26-32(L1)、50-52(L2)及91-96(L3)及VH中的26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)；Chothia及LeskJ.Mol.Biol.196:901-917(1987))。存在多種方式用于確定CDR，例如基于交叉物種序列變化性的途徑(即Kabat等人,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,(第5版,1991,NationalInstitutesofHealth,BethesdaMD))；及基于抗原-抗體復合物的結晶研究的途徑(Al-lazikani等人(1997)J.Mol.Biol.273:927-948))。作為Kabat互補決定區(CDR)的HVR基于序列變化性且最常使用(前述Kabat等人)。Chothia反而指結構環的位置(Chothia及LeskJ.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbMHVR表示KabatCDR與Chothia結構環之間的折中且由OxfordMolecular的AbM抗體建模軟件使用。“接觸”HVR基于可得復晶體結構的分析。如本申請所使用，CDR可為由上述措施中的任一個或上述措施中的任兩者或三者的組合定義的CDR。CDR可為KabatCDR、ChothiaCDR或接觸CDR。下文注釋來自這些HVR中的各者的殘基。HVR可包含如下“延伸HVR”：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)及89-97或89-96(L3)及VH中的26-35(H1)、50-65或49-65(優選實施方案)(H2)及93-102、94-102或95-102(H3)。根據前述Kabat等人針對這些延伸HVR定義中的各者編號可變域殘基。在一些實施方案中，抗體為用半胱氨酸工程化的抗體，該抗體在重鏈或輕鏈(例如重鏈和/或輕鏈恒定區，和/或重鏈和/或輕鏈可變區)中包含游離半胱氨酸氨基酸。抗體中游離半胱氨酸氨基酸的工程化可提供反應性親電子官能團，該官能團可進一步在特異性位點處賦能諸如抗體-藥物綴合物(ADC)化合物那樣的的抗體綴合物化合物與藥物分子(即位點特異性綴合)。用半胱氨酸工程化的抗體及產生用半胱氨酸工程化的抗體的手段的實例參見Junutula,JR等人,(2008)Nat.Biotech.26(8):925-932；Lyons,A等人,(1990)Prot.Engineering3(8):703-708；及Stimmel,JB等人,(2000)J.Biol.Chem.275(39):30445-30450。在一些實施方案中，對抗體進行工程化以用一或多個半胱氨酸殘基代替重鏈(例如在恒定區中)或輕鏈(例如在恒定區中)上的氨基酸殘基(例如天然存在的氨基酸)，前提條件是半胱氨酸殘基的反應性硫醇基團對抗體折疊或組裝幾乎沒有影響且不明顯改變抗原結合。在一些實施方案中，針對新引進的工程化的半胱氨酸硫醇基團的反應性評估半胱氨酸殘基。硫醇反應性值為0至1.0范圍內的相對數值項且可針對任何用半胱氨酸工程化的抗體測量該值。在一些實施方案中，本發明的用半胱氨酸工程化的抗體的硫醇反應性值為約0.6至1.0、0.7至1.0或0.8至1.0中的任一個。WO2006/034488、WO2010/141902、WO2013/093809、WO2008/038024、WO2008/070593、WO2009/092011、WO2011/005481及WO2011/156328提供針對位點特異性綴合的用半胱氨酸工程化的抗體。可通過誘變處理母抗體的核酸序列制備用半胱氨酸工程化的抗體，誘變處理包括：由半胱氨酸替代一或多個氨基酸殘基以編碼用半胱氨酸工程化的抗體；表達用半胱氨酸工程化的抗體；及分離用半胱氨酸工程化的抗體。在一些實施方案中，用半胱氨酸工程化的抗體為抗體片段；例如，Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或單鏈(ScFv)抗體。在一些實施方案中，對抗體進行工程化以包括重鏈中的氨基酸殘基T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442以及輕鏈中的氨基酸殘基L201、V205和T206(EU編號)的一或多個半胱氨酸代替。在本發明的一些實施方案中，本申請所述的抗體(例如抗體hLK26、hMov19，或自抗體26B3衍生的抗體諸如人源化或嵌合抗體)或自任一這些抗體衍生的抗體進行工程化以包含一或多個游離半胱氨酸殘基。所述工程化的半胱氨酸殘基也稱為“添加的半胱氨酸殘基”。在一些實施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgG重鏈的以下位置中的任一或多處的一或多個氨基酸殘基：40、43、84、88、103、112、113、114、115、131、132、133、134、135、136、137、138、139、161、168、172、234、235、237、239、246、249、265、267、269、270、276、278、282、283、284、287、289、292、293、297、298、299、300、302、303、312、314、315、318、320、324、326、327、330、332、333、334、335、336、337、339、345、347、354、355、356、358、359、360、361、362、370、373、376、378、380、382、383、384、386、388、398、390、392、393、400、401、404、411、413、414、416、418、419、421、422、428、431、432、437、438、439、440、442、443及444；根據Kabat等人(1991,NIHPublication91-3242,NationalTechnicalInformationService,Springfield,VA,以下稱為“Kabat”)的EU索引編號。在一些實施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgG重鏈的以下位置中的任何組合處的一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個或更多個氨基酸殘基：40、43、84、88、103、112、113、114、115、131、132、133、134、135、136、137、138、139、161、168、172、234、235、237、239、246、249、265、267、269、270、276、278、282、283、284、287、289、292、293、297、298、299、300、302、303、312、314、315、318、320、324、326、327、330、332、333、334、335、336、337、339、345、347、354、355、356、358、359、360、361、362、370、373、376、378、380、382、383、384、386、388、398、390、392、393、400、401、404、411、413、414、416、418、419、421、422、428、431、432、437、438、439、440、442、443及444；根據Kabat的EU索引編號。在一些實施方案中，在IgG重鏈(例如人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4或人IgG4p)的任意一個或多個以下位置的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代：T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442；所述編號是根據Kabat的EU索引。氨基酸的突變位置(EU編號)和側翼序列列于下表3。表3:氨基酸的突變位置(EU編號)和側翼序列在一些實施方案中，本申請所述的抗-FRA抗體包含重鏈恒定區，其包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列。在一些實施方案中，本申請所述的抗-FRA抗體包含輕鏈恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實施方案中，本申請所述的抗-FRA抗體包含：重鏈恒定區，其包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列；以及輕鏈恒定區，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在可針對位點特異性綴合進行工程化為半胱氨酸的IgG重鏈上的額外位置包括(EU編號)118-215、234-239、246、248、249、254、265、267、269、270、273、276、278、279、282、283、284、286、287、289、292、293、294、297、298、299、300、302、303、312、314、315、318、320、324、326、327、330、332-337、339、341-447(在US2012/0148580A1；WO2013/093809A1；US2009/0258420A1；US7521541B2；US7855275B2；US2011/0137017A1；US2012/0213705A1；US2011/0033378A1；US8455622B2中描述)。在可針對位點特異性綴合進行工程化為半胱氨酸的IgG輕鏈上的額外位置包括(EU編號)108-211(在WO2013/093809A1；US2009/0258420A1；US7855275B2；US8455622B2中描述)。在一些實施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgGλ輕鏈的以下位置中的任一或多處的一或多個氨基酸殘基：7、15、20、22、25、43、110、111、125、144、149、155、158、161、168、185、188、189、191、197、205、206、207、208和210，根據Kabat的EU索引編號。在一些實施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgGλ輕鏈的以下位置中的任何組合處的一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個或更多個氨基酸殘基：7、15、20、22、25、43、110、111、125、144、149、155、158、161、168、185、188、189、191、197、205、206、207、208和210，根據Kabat的EU索引編號。在一些實施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgGκ輕鏈的以下位置中的任一或多個處的一或多個氨基酸殘基：7、15、20、22、25、43、110、111、144、168、183和210，根據Kabat的編號。在一些實施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgGκ輕鏈的以下位置中的任何組合處的一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個或更多個氨基酸殘基：7、15、20、22、25、43、110、111、144、168、183和210，根據Kabat的編號。在一些實施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgGκ輕鏈的以下位置中的任一或多處的一或多個氨基酸殘基：L201、V205和T206，根據Kabat的EU索引編號。氨基酸的突變位置(EU編號)和側翼序列列于下表4。表4:氨基酸的突變位置(EU編號)和側翼序列EU編號側翼序列SEQIDNO:L201C(CL)EVTHQGCSSPVTKSFNRGEC51T206C(CL)EVTHQGLSSPVCKSFNRGEC52V205C(CL)EVTHQGLSSPCTKSFNRGEC53在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區和輕鏈恒定區，其中在所述重鏈恒定區的選自T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442的一個或多個氨基酸或在所述輕鏈恒定區的選自L201和T206的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代，且其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在一些實施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區和輕鏈恒定區，其中在所述重鏈恒定區的選自T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442的一個或多個氨基酸以及在所述輕鏈恒定區的選自L201和T206的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代，且其中所述編號是根據Kabat的EU索引。在一些實施方案中，抗體為分離的。分離的抗體指已自天然環境的組分識別及分離和/或回收的抗體。在一些實施方案中，抗體為大體純的。術語“大體純的”可指材料至少50％純的(即無污染物)，更優選地至少90％純的，更優選地至少95％純的，更優選地至少98％純的，更優選地至少99％純的。在一些實施方案中，抗體為單克隆抗體。在一些實施方案中，抗體為人源化抗體。在一些實施方案中，抗體為嵌合抗體。在一些實施方案中，抗體為人類抗體。在一些實施方案中，抗體為IgG(諸如IgG1、IgG2或IgG4)。在一些實施方案中，抗體為人類IgG，諸如人類IgG1。在某些實施方案中，所述抗體為人IgG，其包含IgG4p恒定域。本申請所描述的抗體可進一步包括經修飾即通過任何類型分子的共價接附的類似物及衍生物，只要此共價接附容許抗體保持其抗原結合免疫特異性。例如，抗體的衍生物及類似物包括已進一步經修飾例如糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通過已知保護基/阻斷基進行衍生化、蛋白質裂解、連接至細胞配體或其它蛋白質等的那些衍生物及類似物。可通過已知技術進行化學修飾，這些技術包括但不限于特異性化學裂解、乙酰化、調配等。另外，類似物或衍生物可含有一或多個非天然氨基酸。在一些實施方案中，式(I)-(V)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體中的抗體靶向部分T為與藥物部分部分綴合的抗體，以使得其可進一步連接至額外藥物部分。因此，在一些實施方案中，式(I)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體意欲涵蓋式(Ia)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體。同樣，式(II)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體意欲涵蓋式(IIa)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體；式(III)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體意欲涵蓋式(IIIa)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體；式(IV)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體意欲涵蓋式(IVa)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體；及式(V)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體意欲涵蓋式(Va)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體。本領域中已知制備靶向部分(例如抗體、多肽、肽或非肽基部分)的方法，諸如美國專利第7,674,605號、美國專利第7,982,017號、PCT/US2007/013587(專利公開第WO2007/146172號)或PCT/US2008/087515(專利公開第WO2009/079649號)中所描述的方法。代表性連接子在某些實例中，式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的化合物中的“-A-L4-L3-L2-”或“-A-L4-L3-”部分為：在某些實例中，式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的化合物中的“-A-L4-L3-L2-”或“-A-L4-L3-”部分為：在某些實例中，式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的化合物中的“-A-L4-L3-L2-”或“-A-L4-L3-”部分為：在某些實例中，式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的化合物中的“-A-L4-L3-L2-X-L1-D”部分為：在所述實例中，本公開提供式(III)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中T為靶向部分。在某些實例中，在式(III)中，T為抗體。在一些實施方案中，T為抗-FRA抗體。在一些實施方案中，T為抗體hLK26或hMOV19。在一些實施方案中，T為抗體26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)。在一些實施方案中，本申請提供了式(IIIa)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中T為靶向部分且p為1至20。在一些實施方案中，p為1至8。在一些實施方案中，p為1至6。在一些實施方案中，p為1至4。在一些實施方案中，p為2至4。在一些實施方案中，p為1、2、3或4。在一些實施方案中，p為2。在一些實施方案中，p為3。在一些實施方案中，p為4。在某些實例中，在式(IIIa)中，T為抗體，任選地其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，所述抗體為抗-FRA抗體。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體為hLK26或hMOV19或其衍生物或hLK26，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代；或hMOV19，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在一些實施方案中，所述抗-FRA抗體為26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)或26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，式(I)或(Ia)化合物諸如式(III)或(IIIa)化合物可使用合成中間體諸如式(VI)化合物或其鹽或溶劑化物和/或式(IX)化合物或其鹽或溶劑化物來制備。在某些實例中，式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)化合物的“-A-L4-L3-L2-X-L1-D”部分為：在所述實例中，本公開提供式(IV)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中T為靶向部分。在某些實例中，在式(IV)中，T為抗體。在一些實施方案中，T為抗-FRA抗體。在一些實施方案中，所述抗體為抗體hLK26或hMOV19。在一些實施方案中，所述抗體為抗體26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)。在一些實施方案中，本申請提供了式(IVa)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中T為靶向部分且p為1至20。在一些實施方案中，p為1至8。在一些實施方案中，p為1至6。在一些實施方案中，p為1至4。在一些實施方案中，p為2至4。在一些實施方案中，p為1、2、3或4。在一些實施方案中，p為2。在一些實施方案中，p為3。在一些實施方案中，p為4。在某些實例中，在式(IVa)中，T為抗體，任選地其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在一些實施方案中，所述抗體為抗-FRA抗體。在一些實施方案中，所述抗體為hLK26或hMOV19或其衍生物或hLK26，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代；或MOV19，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在一些實施方案中，所述抗體為26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)或26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，式(I)或(Ia)化合物諸如式(IV)或(IVa)化合物可使用合成中間體諸如式(VII)化合物或其鹽或溶劑化物和/或式(X)化合物或其鹽或溶劑化物來制備。在某些實例中，式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)化合物的“-A-L4-L3-L2-X-L1-D”部分為：在所述實例中，本公開提供式(V)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中T為靶向部分。在某些實例中，在式(V)中，T為抗體。在一些實施方案中，所述抗體為抗-FRA抗體。在一些實施方案中，所述抗體為抗體hLK26或hMOV19。在一些實施方案中，所述抗體為抗體26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)。在一些實施方案中，本申請提供了式(Va)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中T為靶向部分且p為1至20。在一些實施方案中，p為1至8。在一些實施方案中，p為1至6。在一些實施方案中，p為1至4。在一些實施方案中，p為2至4。在一些實施方案中，p為1、2、3或4。在一些實施方案中，p為2。在一些實施方案中，p為3。在一些實施方案中，p為4。在某些實例中，在式(Va)中，T為抗體，任選地其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在一些實施方案中，所述抗體為抗-FRA抗體。在一些實施方案中，所述抗體為hLK26或hMOV19或其衍生物，或hLK26，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代，或MOV19，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在一些實施方案中，所述抗體為26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)或26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在某些實施方案中，式(I)或(Ia)化合物諸如式(V)或(Va)化合物可使用合成中間體諸如式(VIII)化合物或其鹽或溶劑化物和/或式(XI)化合物或其鹽或溶劑化物來制備。在某些實施方案中，本申請所述的式(I)或(Ia)化合物或其任何變體或其鹽或溶劑化物或立體異構體可使用式(XII)化合物制備：其中R為NO2或NH2。可制備和/或調配式(I)-(V)或(Ia)-(Va)的化合物作為藥用鹽。藥用鹽為化合物的游離堿形式的無毒鹽，所述鹽具有游離堿的期望藥理學活性。這些鹽可衍生自無機酸或有機酸。藥用鹽的非限制性實例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、一氫磷酸鹽、二氫磷酸鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、甲基磺酸鹽、丙基磺酸鹽、苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、羥乙酸鹽、酒石酸鹽及扁桃酸鹽。其它適宜的藥用鹽的列表參見Remington’sPharmaceuticalSciences,第17版,MackPublishingCompany,Easton,Pa.,1985。對于含有堿性氮的式(I)-(V)或(Ia)-(Va)中的任一個的化合物，可通過本領域中可得的任何適宜方法制備藥用鹽，例如使用無機酸處理游離堿，所述無機酸諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、硼酸、磷酸等，或使用有機酸處理游離堿，所述有機酸諸如乙酸、苯基乙酸、丙酸、硬脂酸、乳酸、抗壞血酸、馬來酸、羥基馬來酸、羥基乙磺酸、丁二酸、戊酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、油酸、棕櫚酸、月桂酸、吡喃糖苷酸(諸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羥基酸(諸如扁桃酸、檸檬酸或酒石酸)、氨基酸(諸如天冬氨酸或谷氨酸)、芳族酸(諸如苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、萘甲酸或肉桂酸)、磺酸(諸如月桂磺酸、對甲苯磺酸、甲磺酸或乙磺酸)或酸的任何可兼容混合物(諸如本申請實施例所提供的那些酸)及根據本領域技術人員的常規水平被視為等效或可接受的代替的任何其它酸及其混合物。也提供包含式(I)-(V)或(Ia)-(Va)的一或多種化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體的組合物。在式(I)-(V)或(Ia)-(Va)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體中，靶向部分可具有一或多個接附的位點用于連接至藥物部分。取決于在形成綴合物中靶向部分中的接附位點的可接近性及藥物部分的相對濃度，接附位點的一部分不可在所形成的綴合物中鍵合至藥物部分。可形成在每個靶向部分處具有各種數目的藥物部分的化合物的混合物。因此，也提供組合物，該組合物包含式(Ia)-(Va)的一或多種化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體。例如，對于具有4個接附的位點的靶向分子，組合物可包含選自以下化合物中的一或多種化合物：式(Ia)的化合物，其中p為1；式(Ia)的化合物，其中p為2；式(Ia)的化合物，其中p為3；及式(Ia)的化合物，其中p為4。可調節組合物中的化合物的相對量以實現藥物部分與靶向部分之間的理想比例。在一些實施方案中，組合物主要包含化合物中的一種或兩種。本發明的化合物或組合物中的“藥物-抗體比例”(DAR)定義為化合物或組合物中的藥物部分與化合物或組合物中的抗體之間的摩爾比例。在抗體具有超過一個接附的位點的情況下，可將超過一個藥物部分連接至每個抗體。在一些實例中，獲得包含超過一種抗體-藥物綴合物(ADC)分子的混合物。可通過本領域中已知的分析方法例如Jeffrey等人,Bioconjug.Chem.24(7):1256-1263(2013)及Sun等人,Bioconjug.Chem.16(5):1282-1290(2005)中所描述的方法測量抗體-藥物綴合物的藥物-抗體比例。在一些實施方案中，包含本申請所詳細描述的一或多種ADC的組合物所具有的平均DAR為約0.5至約6、約1至約5、約1至約4、約1.5至約3.5或約2至約4。在一些實施方案中，所述組合物所具有的平均DAR為約1.5至約3.5、或約2至約3.5、或約2.7至約3.5、或約2至約3、或約3至約3.3、或約2、或約3。在一些其它優選的實施方案中，所述組合物所具有的平均DAR為約2.5±10％(例如，約2.25至約2.75)。在一些實施方案中，靶向抗體含有用半胱氨酸工程化的接附位點及組合物所具有的平均DAR為約1.6至約2.1或約2.0。藥物組合物和治療方法出于治療的目的，實施方案的藥物組合物包含至少一種式(I)-(V)或(Ia)-(Va)的化合物或其藥用鹽。藥物組合物可進一步包含一或多種藥用賦形劑或藥用載體。藥用賦形劑為一種無毒及以其它方式在生物學上適合于給藥于受試者的物質。此類賦形劑促進本申請所描述的化合物的給藥及可與活性成份相容。藥用賦形劑的實例包括穩定劑、潤滑劑、表面活性劑、稀釋劑、抗氧化劑、粘合劑、著色劑、填充劑、乳化劑或味覺改良劑。在優選實施方案中，根據實施方案的藥物組合物為無菌組合物。可使用已知混合技術或對本領域技術人員變得可用的技術制備藥物組合物。也通過實施方案涵蓋無菌組合物，包括符合管理此類組合物的國家及當地法律的組合物。本申請所描述的藥物組合物及化合物可調配為適宜藥學溶劑或載體中的溶液、乳液、混懸液、分散液或包合復合物(諸如環糊精)或調配為與固體載體一起的丸劑、片劑、口含劑、栓劑、藥囊、糖衣片劑、顆粒、粉末、復溶用粉末或膠囊，根據本領域中已知的常規方法用于制備各種劑型。可通過遞送的適宜途徑(諸如口服、胃腸外、直腸、鼻道、局部或眼睛途徑)或通過吸入給藥實施方案的藥物組合物。優選地，針對靜脈或口服給藥調配組合物。對于口服給藥，可按諸如片劑或膠囊的固體形式或作為溶液、乳液或混懸液提供實施方案的化合物。為制備口服組合物，可調配實施方案的化合物以得到劑量，例如每日約0.01至約50mg/kg或每日約0.05至約20mg/kg或每日約0.1至約10mg/kg。口服片劑可包括與可兼容藥用賦形劑混合的活性成份，這些賦形劑諸如稀釋劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、著色劑及防腐劑。適宜惰性填充劑包括碳酸鈉及碳酸鈣、磷酸鈉及磷酸鈣、乳糖、淀粉、糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、甘露糖醇、山梨糖醇等。示例性液體口服賦形劑包括乙醇、甘油、水等。示例性崩解劑為淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羥基乙酸淀粉鈉、微晶纖維素及海藻酸。粘合劑可包括淀粉及明膠。若存在，則潤滑劑可為硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。若需要，則片劑可包衣有諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯那樣的材料以延遲胃腸道內的吸收或可包衣有腸溶衣。對于口服給藥的膠囊包括硬明膠膠囊及軟明膠膠囊。為制備硬明膠膠囊，可將活性成份與固體、半固體或液體稀釋劑混合。可通過將活性成份與水、油(諸如花生油或橄欖油)、液體石蠟、短鏈脂肪酸的單甘油酯及二甘油酯的混合物、聚乙二醇400或丙二醇混合制備軟明膠膠囊。對于口服給藥的液體可呈混懸液、溶液、乳液或糖漿形式或可經凍干或呈現為干燥產物以在使用前用水或其它適宜媒介物復溶。此類液體組合物可任選含有：藥用賦形劑，諸如助懸劑(例如山梨糖醇、甲基纖維素、海藻酸鈉、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠等)；無水媒介物，例如油(例如杏仁油或分級椰子油)、丙二醇、乙醇或水；防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)；潤濕劑，諸如卵磷脂；及若需要，調味劑或著色劑。針對直腸給藥可將實施方案的組合物調配為栓劑。對于包括靜脈內、肌內、腹膜內、鼻內或皮下途徑的胃腸外使用，可按無菌水溶液或混懸液提供實施方案的藥物(將這些液體緩沖至適宜pH及等滲性)或在藥用油中提供。適宜水溶液媒介物包括林格溶液及等滲氯化鈉。可將此類形式呈現為單位劑量形式(諸如安瓿或一次性注射裝置)、多劑量形式(諸如可撤回適宜劑量的小瓶)或固體形式或可用于制備注射劑的預濃縮物。在自數分鐘至數日范圍內的一段時間中將自約1μg/kg/分鐘至1000μg/kg/分鐘的說明性輸注劑量范圍的藥物與藥物載體混合。對于鼻道、吸入或口服給藥，可使用例如也含有適宜載體的噴霧劑給藥實施方案的藥物組合物。對于局部應用，將實施方案的化合物優選地調配為乳膏或軟膏或適合于局部給藥的類似媒介物。對于局部給藥，可按藥物與媒介物比例為約0.1％至約10％的濃度將本發明化合物與藥物載體混合。給藥實施方案的藥物的另一模式可使用貼片劑以產生經皮遞送的效果。本公開提供殺死表達葉酸受體α(FRA)的細胞的方法，包括向所述細胞給予有效量的式(I)-(V)或(Ia)-(Va)化合物或其鹽、溶劑化物或立體異構體。在一些實施方案中，本申請提供了殺死表達人葉酸受體α(FRA)的細胞的方法，包括向所述細胞給予足以殺死所述細胞的量的式(I)-(V)或(Ia)-(Va)化合物或其鹽、溶劑化物或立體異構體。在某些實施方案中，所述細胞為癌細胞。在某些實施方案中，所述癌細胞為卵巢癌細胞、肺癌細胞、子宮癌細胞、睪丸絨毛膜癌細胞、室管膜瘤細胞、間皮瘤細胞、乳腺癌細胞、結腸癌細胞或腎細胞癌瘤細胞。在某些實施方案中，所述癌細胞為FRA-陽性卵巢癌細胞、FRA-陽性肺癌細胞、FRA-陽性子宮癌細胞、FRA-陽性睪丸絨毛膜癌細胞、FRA-陽性室管膜瘤細胞、FRA-陽性間皮瘤細胞、FRA-陽性乳腺癌細胞、FRA-陽性結腸癌細胞或FRA-陽性腎細胞癌瘤細胞。在另一方面，本公開提供在個體中治療癌癥的方法，包括向所述個體給予有效量的式(I)-(V)或(Ia)-(Va)化合物或其鹽、溶劑化物或立體異構體。可用本申請所述的方法治療的癌癥的實例包括但不限于癌瘤，包括腺癌、淋巴瘤、胚細胞瘤、黑素瘤及肉瘤。此類癌癥的更具體實例包括鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、胃腸癌、霍奇金淋巴瘤及非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、成膠質細胞瘤、宮頸癌、神經膠質瘤、卵巢癌、諸如肝癌瘤及肝細胞瘤那樣的肝癌、膀胱癌、乳腺癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌瘤、唾液腺癌瘤、諸如腎細胞癌及韋爾姆斯腫瘤那樣的腎癌、基底細胞癌、黑素瘤、間皮瘤、前列腺癌、甲狀腺癌、睪丸癌、食道癌、膽囊癌以及各種類型的頭頸癌。在治療癌癥的方法的某些實施方案中，所述癌癥選自卵巢癌、肺癌、子宮癌、睪丸絨毛膜癌、室管膜瘤、間皮瘤、乳腺癌、結腸癌或腎細胞癌瘤。在一些實施方案中，所述癌癥為FRA-陽性癌癥。在某些實施方案中，所述癌癥為FRA-陽性卵巢癌、FRA-陽性肺癌、FRA-陽性子宮癌、FRA-陽性睪丸絨毛膜癌、FRA-陽性室管膜瘤、FRA-陽性間皮瘤、FRA-陽性乳腺癌、FRA-陽性結腸癌或FRA-陽性腎細胞癌瘤。在某些實施方案中，所述個體具有癌癥或已經診斷有癌癥。在某些實施方案中，所述個體具有FRA-陽性惡性病或已經診斷有FRA-陽性惡性病(諸如卵巢癌、肺癌、子宮癌、睪丸絨毛膜癌、室管膜瘤、間皮瘤、乳腺癌、結腸癌或腎細胞癌)。在某些實施方案中，所述個體為人。在一些實施方案中，所述方法還包括以下步驟：在給予化合物之前，檢測癌細胞上的FRA的表達水平。在某些實施方案中，將化合物腹膜內、靜脈內、肌內、皮下、鞘內、心室內、口服、經腸、腸胃外、鼻內、經皮、舌下或通過吸入來給藥。試劑盒本公開提供一種藥學包裝或試劑盒，該藥學包裝或試劑盒包含一或多個容器，這些容器包含對治療或預防癌癥有用的式(I)-(V)或(Ia)-(Va)的化合物或其鹽、溶劑化物或立體異構體。所述試劑盒可進一步包含在癌癥的治療中的使用說明。本公開也提供一種藥學包裝或試劑盒，該藥學包裝或試劑盒包含一或多個容器，這些容器包含本發明實施方案的藥物組合物的成份中的一或多種。與此類容器任選關聯的可為由規范藥品或生物學產品的制造、使用或銷售的政府機構所規定形式的通知，該通知反映了政府機構批準針對人類給藥的制造、使用或銷售。藥物綴合物的合成實施方案也涉及對制備主題化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體有用的方法及中間體。可取得眾多一般參考，這些參考提供對合成本申請化合物有用的通常已知的化學合成方案及條件(請參見例如SmithandMarch,March’sAdvancedOrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure,第5版,Wiley-Interscience,2001)。可通過本領域中已知的任何手段純化本申請所描述的化合物，這些手段包括色譜手段諸如高效液相色譜法(HPLC)、制備性薄層色譜法、快速柱色譜法及離子交換色譜法。可使用任何適宜固定相，包括正相和反相以及離子樹脂。最典型的是，經由硅膠和/或氧化鋁色譜法純化本申請化合物。請參見例如IntroductiontoModernLiquidChromatography,第2版，L.R.Snyder及J.J.Kirkland編者,JohnWileyandSons,1979；及ThinLayerChromatography,E.Stahl(編者),Springer-Verlag,NewYork,1969。在制備主題化合物的任何方法期間，保護所參與的任何分子上的敏感基團或反應基團可為必需和/或理想的。可經由權威著作中所描述的常規保護基實現此舉，這些著作諸如T.W.Greene及P.G.M.Wuts,“ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis”,第4版,Wiley,NewYork2006。可使用本領域中已知的方法在方便的后續階段中除去保護基。現將參考本申請大體制備的說明性合成方案及隨后的特定實施例描述對實施方案的方法有用的示例性化學實體。本領域技術人員將認識到的是，為獲得本申請的各種化合物，可適當選擇起始物質以使得將在具有或不具有保護的情況下酌情經由反應方案實施最終期望取代基以得到期望產物。可選擇地，不使用最終期望取代基，而是使用可經由反應方案實施及酌情使用期望取代基替代的適宜基團可為必需或理想的。此外，本領域技術人員將認識到的是，可按與特定側基的官能性兼容的任何次序執行下文方案中所示的轉化。優選地在自約0℃至所使用的有機溶劑的回流溫度的溫度執行大體方案中所描述的反應中的各者。除另有規定外，變量如上文關于式(I)所定義。可通過將藥物部分經由包含親水性自消耗間隔基的連接子接附至抗體上構造本發明實施方案的綴合物。在下文方案及隨后的特定實施例中描述針對式(I)的化合物的連接子部分的代表性合成。方案2在方案2中展示自4-硝基苯甲醛的化合物C的合成。使用諸如SOCl2、PCl3或PCl5那樣的氯化試劑將4-硝基苯基乙醇酸轉化成對應的酰氯。隨后酰氯與1-甲基哌嗪反應以提供酮酰胺中間體。可選擇地，可使用諸如EDCI那樣的偶聯劑將4-硝基苯基乙醇酸偶聯至1-甲基哌嗪。酮酰胺中間體含有酮基，隨后使用諸如DIBAL-H、BH3、LiAlH4-AlCl3、LiAlH4-BF3-Et2O或氫硼化鈉那樣的還原劑還原該酮基以產生化合物C。方案3參見方案3，通過使用諸如鈀、鎳或鉑那樣的催化劑的催化氫化還原化合物C的硝基以在化合物I中得到苯胺基團。適宜氫化催化劑的實例包括Pd/C及蘭尼鎳(Raneynickel)。方案4參見方案4，化合物I提供本發明實施方案的化合物中的親水性自消耗連接子部分。化合物I的氨基可經由標準肽偶聯條件與化合物W反應以得到化合物X。可在諸如DIEA那樣的堿或為本領域技術人員所熟知的其它堿參與的情況下及在適宜溶劑中使用諸如EDCI/HOBt、HOBt、PyBOP、HATU或BEM那樣的試劑(Carpino,L.A.J.Am.Chem.Soc.1993,115,4397.Carpino,L.A.；El-Faham,A.J.Am.Chem.Soc.1995,117,5401.Li,P.；Xu,J.C.J.Pept.Res.2001,58,129.)。繼續參見方案4，使用氯甲酸4-硝基苯基酯將化合物X的羥基轉化成活化碳酸酯。有了化合物Y，與具有氨基的藥物反應可得到化合物Z。若藥物不含有氨基，則如上文所論述的那樣，第二中間體自消耗間隔基或環化自消除連接子可位于藥物部分與氨基芐基氧基羰基之間。在某些實施方案中，參見下文方案5，連接子的-L3-L2-部分接附于化合物I。隨后接附-A-L4-部分。方案5用于制備本申請實施方案的化合物的方法包括制備抗體在緩沖液中的溶液及用諸如TCEP那樣的還原劑的溶液處理。確定游離巰基的量。當游離巰基的量達到預定量時，使用連接子-藥物部分對部分還原的抗體進行烷基化。在一些實施方案中，提供用于制備式(I)或(Ia)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體的方法：其中D、T、X、L1、L2、L3、L4、A及p在適當情況下如就式(I)或(Ia)所定義，所述方法包括將包含靶向部分T的化合物與式：A-L4-L3-L2-X-L1-D的化合物反應。在一些實施方案中，T為特異性結合葉酸受體α(例如人FRA)的抗體。在一些實施方案中提供由所述方法產生的化合物。進一步提供包含由所述方法產生的一或多種化合物的組合物。在一些實施方案中，提供用于制備式(II)或(IIa)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體的方法：其中D、T、L1、L2、L3、L4、A及p在適當情況下如就式(II)或(IIa)所定義，所述方法包括將含有一或多個游離巰基(或巰基)的抗體與化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構體反應：在一些實施方案中，帶有一個或多個游離巰基(或巰基)的抗體為抗-FRA抗體。在一些實施方案中，帶有一個或多個游離巰基(或巰基)的抗體為抗體hLK26或hMOV19。在一些實施方案中，帶有一個或多個游離巰基(或巰基)的抗體為抗體26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)。在一些實施方案中，帶有一個或多個游離巰基(或巰基)的抗體為hLK26，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代，或hMOV19，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在一些實施方案中，帶有一個或多個游離巰基(或巰基)的抗體為抗體26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)或26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個或多個氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。。在一些實施方案中，所述方法進一步包括用于制備如本申請所詳細描述的化合物Z的方法。在一些實施方案中，所述方法進一步包括用于制備產生如本申請所詳細描述的化合物Z的合成中間體(例如化合物Y及化合物X)中的一或多個的方法。在一些實施方案中提供由本申請所詳細描述的方法中的任一個產生的化合物。進一步提供包含由本申請所詳細描述的方法中的任一個產生的一或多種化合物的組合物。在一些實施方案中，提供用于制備式(II)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體的方法：其中：D為藥物部分；T為抗體；R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元；所述方法包括使抗體與化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構體反應：在一些實施方案中，T為特異性結合葉酸受體α(例如人FRA)的抗體。在一些實施方案中，提供用于制備式(IIa)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體的方法：其中：p為1至20；D為藥物部分；T為抗體；R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元；所述方法包括使抗體與化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構體反應：在一些實施方案中，T為特異性結合葉酸受體α(例如人FRA)的抗體。本公開進一步提供通過本申請詳細描述的任何制備化合物的方法和/或制備化合物的方法所產生的化合物。本公開也提供包含通過本申請詳細描述的任何制備化合物的方法和/或制備化合物的方法所產生的化合物中的一或多個的組合物(例如藥物組合物)。本公開提供用于制備方案4及方案5中的化合物及中間體的方法。方案4及方案5中所表示的化合物意指具有完整化合價或適宜時用任選保護基或離去基適當封端。例如，如方案“化合物TAP-18H的合成”中所示那樣，L3-L2可為：本公開提供用于制備化合物X或其鹽或溶劑化物或立體異構體的方法：其中：R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L2為鍵或第二自消耗連接子；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元；所述方法包括使化合物W：A-L4-L3-L2和化合物I：反應。本公開提供用于制備化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構體的方法：其中：D為藥物部分；R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元；所述方法包括：使化合物X:和氯甲酸對硝基苯酯反應以形成化合物Y：且使化合物Y與包含L1-D的化合物反應。本公開提供用于制備化合物X1或其鹽或溶劑化物或立體異構體的方法：其中：R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L2為鍵或第二自消耗連接子；且L3為肽連接子；所述方法包括：使化合物W1：L3-L2和化合物I：反應。本公開提供用于制備化合物Y1或其鹽或溶劑化物或立體異構體的方法：其中：R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；D為藥物部分；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；且L3為肽連接子；所述方法包括：使化合物X1：和包含L1-D的化合物反應。本公開提供用于制備化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構體的方法：其中：D為藥物部分；R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元；所述方法包括：使化合物Y1：和包含A-L4的化合物反應。本公開提供下式的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中：R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L2為鍵或第二自消耗連接子；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元。本公開提供下式的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中：R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；D為藥物部分；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元。本公開提供下式的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中：R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；L2為鍵或第二自消耗連接子；且L3為肽連接子。本公開提供下式的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構體：其中：R1為氫、未取代或經取代的C1-3烷基或未取代或經取代的雜環基；D為藥物部分；L1為鍵、第二自消耗連接子或環化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；且L3為肽連接子。認為本說明書足以使得本領域技術人員能夠實踐本發明。除本申請所示及所述的那些之外，本發明的各種修改將根據前述描述而對本領域技術人員變得明顯，且落入隨附權利要求的范疇內。本申請引用的所有出版物、專利及專利申請均以全文通過引用的方式并入本申請以用于所有目的。實施例本發明可進一步通過參考以下實施例來進一步理解，所述實施例通過示例說明方式提供且不意在限制。實施例1:實施例2-6的材料及方法連接子-藥物的合成下文方案中展示化合物Tap-18H的合成。下文方案中也展示中間體化合物M及O的合成。化合物M的合成化合物O的合成化合物TAP-18H的合成參見化合物Tap-18H的合成的方案，使用PCl5或在DMF中的EDCI及NiPr2Et或在CH2Cl2中的2-氯基-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪及N-甲基嗎啉作為偶聯劑將市購的4-硝基苯基乙醛酸(glyoxylicacid)與N-甲基哌嗪縮合以產生期望酮酰胺。在典型過程中，在0-5℃連續攪拌下將N-甲基嗎啉(15mmol)添加至CH2Cl2(20ml)中的2-氯基-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(5mmol)的溶液中。30-40分鐘后形成白色混懸液并將CH2Cl2(10ml)中的4-硝基苯基乙醛酸添加至此混合物中，引起透明溶液的形成。在攪拌混合物1小時后，在室溫添加N-甲基哌嗪(5mmol)。在反應完成(TLC,10分鐘)后，使用10％NaHCO3水溶液(2×10ml)繼之以H2O(3×10ml)洗滌混合物。用無水硫酸鈉干燥有機層及在減壓下除去溶劑，得到粗產物，通過重結晶或柱色譜法(石油醚:乙酸乙酯＝8:2)進一步純化該粗產物。在THF或DIBAL-H或硼氫化鈉存在的情況下通過0.5當量的LiAlH4進一步還原酮酰胺化合物以產生硝基化合物C。[B.P.BandgarandS.S.Pandit,TetrahedronLetters44(2003)3855-3858]通過使用SnCl2處理或在室溫在甲醇中使用Pd/C(10％w/w)作為催化劑催化氫化約6-11小時將硝基化合物C還原至苯胺化合物I，產率為65-81％。其可使用MultiMaxIR系統與RB04-50反應器B經由以下過程獲得。最初使用35ml甲醇、0.03mg10％Pd/C及0.0252mol硝基化合物C填充反應器并將氫氣添加至反應器中高達6.3巴壓力(H2,恒定)。參見化合物M的合成的方案，經Boc保護的L-纈氨酸用在DCM中的N-羥基琥珀酰亞胺及EDAC-HCl或在DCM中的N-羥基琥珀酰亞胺及EDC處理以提供琥珀酰亞胺酯。此活化酯與L-瓜氨酸及CH3CN、H2O、NaHCO3反應以提供經Boc保護的化合物M。參見化合物Tap-18H的合成的方案，經由在室溫在DMF中的DCC/HOBt反應32小時提供化合物N(產率78-82％)或使用PS-碳二亞胺將苯胺化合物I與經Boc保護的化合物M偶聯，在所述反應中在兩當量PS-碳二亞胺及在DCM中的1.7當量HOBt存在下從100mg化合物M與1.5當量苯胺化合物I開始歷時24小時實施化合物N的合成反應。通過LC/MS的分析展示具有期望質量的峰及大約50-60％的轉化。隨后偶聯產物化合物N在DCM中的2,6-二甲基吡啶參與的情況下在RT與氯甲酸4-硝基苯基酯反應8小時，得到碳酸酯化合物P，LC/MS展示具有期望質量的峰。在DMF中的HOAt及Et3N存在的情況下，使用單甲基多拉司他汀10處理碳酸酯化合物P，引起化合物Q的形成。參見化合物O的合成的方案，用DMF中的馬來酸酐處理β-丙氨酸且由此獲得的酸在DCC偶聯下與N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)反應，得到NHS酯。通過使用TFA處理除去市購t-boc-N-酰氨基-dPEG4-酸中的BOC保護基，得到胺的TFA鹽，該TFA鹽與先前合成的NHS酯反應。分離由此獲得的羧酸及使用EDCI將羧酸與N-羥基琥珀酰亞胺偶聯，得到NHS酯化合物O。參見化合物Tap-18H的合成的方案，使用TFA除去化合物Q中的Boc基及在室溫在無水乙腈及NaHCO3中將游離胺與NHS酯化合物O偶聯12-36小時，得到最終產物Tap-18H，產率為35-45％。圖1顯示Tap-18H的NMR譜化合物TAP-18Hr1的合成合成具有下文所示的式的Tap-18Hr1。圖2顯示Tap-18Hr1的NMR光譜。化合物TAP-18Hr2的合成合成具有下文所示的式的Tap-18Hr2。圖3顯示Tap-18Hr2的NMR光譜。細胞系將卵巢癌細胞SK-OV-3(目錄號HTB-77TM)在補充有10％FBS(目錄號SH30071.03)及100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素(目錄號15140)的McCoy5A培養基(目錄號16600)中培養。將卵巢癌細胞OVCAR-3(BioresourceCollectionandResearch目錄號60551)在補充有20％FBS、1mM丙酮酸鈉(目錄號11360)、0.01mg/mL牛胰島素(目錄號I6634)及100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素的RPMI培養基1640(目錄號22400)中培養。卵巢癌細胞OVCAR-3B由OVCAR-3適應，且在補充有10％FBS、1mM丙酮酸鈉(目錄號11360)及100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素的RPMI培養基1640(目錄號22400)中培養。胰腺癌細胞Panc02.03B由Panc02.03(目錄號CRL-2553TM)適應，且在補充有15％FBS、1mM丙酮酸鈉及100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素的RPMI培養基1640中不利用胰島素培養。將肺癌細胞NCI-H2110(目錄號CRL-5924TM)在補充有10％FBS、1mM丙酮酸鈉、2.5g/升D-葡萄糖(目錄號G8270)及100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素的RPMI培養基1640中培養。將肺癌細胞NCI-H292(BIORESOURCECOLLECTIONANDRESEARCH目錄號60372)在補充有10％FBS、1mM丙酮酸鈉及100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素的RPMI培養基1640中培養。試劑DTT及DTPA由(St.Louis,MO)獲得。TCEP由Acros(MorrisPlains,NJ)獲得。DTNB由ThermoScientific(Rockford,IL)獲得。磷酸鈉、硼酸鈉及氯化鈉由J.T.BAKERTM(CenterValley,PA)獲得。半胱氨酸由(WardHill,MA)獲得。表5:抗-FRA抗體hLK26的氨基酸序列SEQIDNO:1(hLK26-IgG1重鏈)EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFSWVRQAPGKGLEWVARFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQIDNO:2(hLK26-IgG4p重鏈)EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFSWVRQAPGKGLEWVARFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKSEQIDNO:3(hLK26-κ輕鏈)DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCWYQQKPGKAPKPWIYGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEChLK26-半胱氨酸變體的產生利用定位突變(site-directedmutagenesis)方法將半胱氨酸殘基引入hLK26的重鏈(CH)或κ輕鏈(CL)的恒定區中。簡言之，通過重疊PCR進行突變。可通過并入核苷酸改變的引物引入期望堿基中的特異性變更(alternation)。隨著將引物延長，在所得擴增子中產生突變。氨基酸的突變位置(EU編號)及側翼序列在以下表6中列出。表6:氨基酸的突變位置(EU編號)和側翼序列表達hLK26-Cys變體的穩定細胞系的產生hLK26-半胱氨酸(hLK26-Cys)變體于Flp-InCHO細胞(InvitrogenTM，目錄號：R758-07)中穩定地表達并產生。將半胱氨酸取代的抗體變體的DNA序列插入pcDNA5/FRT載體(InvitrogenTM，目錄號：V6010-20)中，且按照由供應商提供的標準操作與pOG44(InvitrogenTM，目錄號V6005-20)共同轉染。收集所建立的細胞系的培養物上清液，且利用蛋白質A瓊脂糖珠粒(GEHealthcareTM，目錄號：17-5280-04)純化。利用SDS-PAGE及尺寸排阻色譜分析純化蛋白質，以確保抗體的品質。hLK26-IgG1抗體的常規綴合常規藥物綴合物通過經由四鏈間二硫鍵的還原使連接子有效負載與抗體綴合而實現，且綴合因此限于游離半胱氨酸的八個暴露的巰基。每個抗體的連接子-藥物可在0-8個范圍變化。hLK26-IgG1抗體部分地由0.025M硼酸鈉pH8、0.025MNaCl、1mMDTPA中的1.85當量的TCEP在37℃還原2小時。使用針對1.0mg/mL溶液在280nm為1.616的吸光度值定量蛋白質濃度，且使用145,055g/mol的分子量確定摩爾濃度。通過以DTNB滴定來確定所產生的mAb-半胱氨酸巰基的濃度。典型地獲得3.22個巰基/mAb。部分還原的抗體由1.2摩爾的馬來酰亞胺己酰基-藥物(Tap18Hr1、Tap-18Hr1)/mAb-半胱氨酸巰基或馬來酰亞胺基-藥物/mAb-半胱氨酸巰基烷基化。在4℃進行烷基化反應12～16小時。半胱氨酸(最終1mM)用于淬滅任何未反應的過量馬來酰亞胺己酰基-藥物或馬來酰亞胺基-藥物。首先用綴合緩沖液、10mM磷酸鈉、10mMNaCl、5％DMSO(pH7.0)將綴合混合物稀釋5倍，且針對hLK26-IgG1-Tap18Hr1純化，以每20mg綴合抗體1mL羥磷灰石的負荷容量施用于羥磷灰石柱(MacroprepceramicI型40μm,Hercules,CA)。柱先前用5倍柱體積的結合緩沖液平衡。在樣本施用的后，用3倍柱體積的結合緩沖液洗滌柱，且用5倍柱體積的10mM磷酸鈉、10mMNaCl(pH7.0)使其平衡。結合ADC隨后用200mM磷酸鈉、10mMNaCl(pH7.0)洗脫。洗脫后，將緩沖液改變成Dulbecco磷酸鹽緩沖鹽水，使用HIPREPTM26/10脫鹽柱(任選)。hLK26-Cys變體的位點特異性綴合位點特異性藥物綴合物通過將連接子有效負載(即，包含連接至藥物部分的連接子的分子)與抗體的恒定域(CH或CL)經由兩個工程化半胱氨酸殘基的還原來綴合而實現，且綴合因此限于游離半胱氨酸的兩個暴露的巰基。為特異地綴合引入半胱氨酸上的連接子有效負載，使用還原/氧化操作。為移除所引入半胱氨酸位點上可在培養條件期間出現的半胱氨酸或谷胱甘肽，首先用10～15倍摩爾過量的TCEP(ACROS目錄號：363830100)在37℃、于含有1mMDTPA(目錄號：D6518)的PBS(目錄號：21600-069)中處理hLK26-Cys變體-Tap18Hr1及hLK26-T155C和hLK26-S442C的重鏈突變體2～5小時。在移除過量TCEP之后，隨后用去氫抗壞血酸(dehydroascorbicacid；DHA)(目錄號：261556)以超過蛋白質的20～30倍摩爾過量在室溫將抗體再氧化3～5小時，以確保鏈間二硫鍵的重新形成。將樣本緩沖液更換成PBS。隨后添加馬來酰亞胺連接的藥物有效負載Tap18Hr1，以與所處理抗體上的游離巰基反應。過量有效負載以N-乙酰基-L-半胱氨酸(目錄號：A7250)淬滅，且CHT陶瓷羥磷灰石珠粒(目錄號：157-0040)用于純化位點特異性綴合hLK26-Cys變體-Tap18Hr1、hLK26-T155C-Tap18Hr1及hLK26-S442C-Tap18Hr1。還原/氧化操作也與一些修飾一起使用，以特異地綴合重鏈的T199處及在κ輕鏈的L201及T206處的所引入半胱氨酸上的連接子有效負載。首先用15～50倍摩爾過量的TCEP(ACROS目錄號：363830100)在37℃、于含有1～50mMDTPA(目錄號：D6518或E5134)的PBS(目錄號：21600-069)中處理T199C的hLK26重鏈突變體及L201C和T206C的輕鏈突變體2～5小時。在移除過量TCEP之后，隨后用去氫抗壞血酸(DHA)(目錄號：261556)以超過蛋白質的50～70倍摩爾過量在室溫將抗體在4℃再氧化2～5小時，以確保鏈間二硫鍵的重新形成。將樣本緩沖液更換成PBS。隨后添加馬來酰亞胺連接的藥物有效負載Tap18Hr1，以與所處理抗體上的游離巰基反應。過量有效負載以N-乙酰基-L-半胱氨酸(目錄號：A7250)淬滅，且CHT陶瓷羥磷灰石珠粒(目錄號：157-0040)用于純化這些位點特異性ADC。通過反相HPLC分析確定藥物抗體比(DAR)開發由還原及變性反相HPLC(RP-HPLC)組成的方法來分離并定量各種輕鏈物及重鏈物，以確定綴合ADC的DAR。在HPLC分析之前，綴合物樣品用6M胍鹽酸鹽及20mMDTT于50℃加熱下處理15min。將100μg的所處理綴合物樣品施用于PLRP-S柱(2.1x150mm,8μm,Aligent)。流速設定在0.8mL/min，且柱溫設定在80℃，恒定地貫穿該分析。溶劑A為MilliQ水中的0.05％三氟乙酸，且溶劑B為乙腈中的0.04％三氟乙酸。該梯度程序由以下組成：3ml的等度25％B、25ml線性梯度至50％B、2ml線性梯度至95％B、1ml線性梯度至25％B以及2ml的等度25％B。在此方法中，用過量DTT預處理ADC使鏈間及鏈內二硫化物斷裂，且允許具有0或1個藥物的輕鏈(L0及L1)與具有0、1、2或3個藥物的重鏈(H0、H1、H2及H3)分離。通過每一分離物的洗脫時間及UV光譜(A248/280比隨藥物負荷增加)歸屬所述物的峰。基于所測試ADC的RP-HPLC分布中的個別峰的面積計算的DAR在表7A及7B中列出。表7:藥物抗體比(A)測量1(B)測量2hLK26-Cys-變體和Tap18Hr1綴合物與癌細胞的結合在V形底96孔板中，以每孔接種1x105個細胞，且用50μl的未綴合Ab或ADC以所滴定濃度，或用同種型對照抗體人類IgG以10μg/mL溫育。在4℃溫育60分鐘之后，將細胞用200μlFACS緩沖液(含有1％FBS的1xPBS)洗滌一次，用FACS緩沖液中的50μl的1μg/mL山羊F(ab’)2-抗-人類IgG(H+L)-RPE或山羊抗-人類IgG-RPE(SOUTHERN目錄號2043-09或2040-09)染色，且隨后在4℃溫育30min。將細胞用FACS緩沖液洗滌一次，且通過流式細胞儀(BDLSR,BDLifeSciences)分析。體外WST-8細胞毒性測定在96孔微量滴定板上，分別以每孔1x103～1x104個細胞接種SK-OV-3、OVCAR-3、OVCAR-3B及Panc02.03B細胞。以在以下于最終體積200μl/孔中的最終指示濃度范圍，一式三份或一式五份添加Tap18Hr綴合的ADC或未綴合的抗體：針對SK-OV-3及Panc02.03B利用2.5倍或3倍連續稀釋以達600nM至0.03nM(90μg/mL至0.005μg/mL)，以及針對OVCAR-3及OVCAR-3B利用3倍連續稀釋以達200nM至0.01nM(30μg/ml至0.005μg/ml)。隨后將細胞在37℃及5％CO2溫育。在針對OVCAR-3為3天且針對SK-OV-3、Panc02.03B及OVCAR-3B為3-6天的溫育之后，通過細胞計數試劑盒-8(CellCountingKit-8)(Dojindo，目錄號CK04)按照制造商的說明書測量細胞存活力。簡言之，在溫育結束時，移除100μL/孔的培養基且將10μL/孔的試劑染料(WST-8)添加至每一孔中。在最佳色彩顯影(當未處理對照的OD450≧1時)之后，通過分光光度計(MOLECULARVERSAMAXTM微板閱讀器)測量450nm的吸光度(OD450值)。獲得平行測試(replicates)的平均值，且減去背景(培養基對照)。所得OD450值隨后用于根據下式計算生長抑制％：[未處理OD450-樣本OD450]/[未處理OD450]*100。在癌癥異種移植物模型中的ADC處理用hLK26-IgG1-Tap18Hr1處理的卵巢腫瘤SK-OV-3為建立皮下異種移植物模型，將于含有25％BDMATRIGELTM基底膜基質高濃度(BDBiosciences，目錄號354248)的120μLPBS中的1x107個SK-OV-3細胞植入6周齡雌性C.B-17SCID小鼠(Lasco,Taipei,Taiwan)的右側腹中。在腫瘤細胞接種之后約1小時，以于100μL中的3mg/kg靜脈內注射hLK26-IgG1-Tap18Hr1(標記為第1天)。用卡尺在兩個垂直尺寸上每周測量腫瘤體積一次，且根據式(0.52*長度*寬度*寬度)來計算腫瘤體積。為確定所處理小鼠中的潛在藥物毒性，每周記錄體重。用與Tap18Hr1綴合的hLK26-Cys變體處理的卵巢腫瘤SK-OV-3為建立皮下異種移植物模型，將于含有50％BDMATRIGELTM基底膜基質(BDBiosciences，目錄號354234)的100μLPBS中的1x107個SK-OV-3細胞植入6周齡雌性C.B-17SCID小鼠(Lasco,Taipei,Taiwan)的右側腹中。在腫瘤細胞接種之后約2小時，以于150μL中的5mg/kg靜脈內注射位點特異性ADChLK26-Cys變體-Tap18Hr1(標記為第1天)。用卡尺在兩個垂直尺寸上每周測量腫瘤體積一次，且根據式(0.52*長度*寬度*寬度)來計算腫瘤體積。為確定所處理小鼠中的潛在藥物毒性，每周記錄體重。用常規hLK26-IgG1-Tap18Hr1以及位點特異性綴合的hLK26-Cys變體-Tap18Hr1處理的肺腫瘤NCI-H2110為建立皮下異種移植物肺腫瘤模型，將于100μLPBS中的5x106個NCI-H2110細胞植入6周齡雌性C.B-17SCID小鼠(Lasco,Taipei,Taiwan)的右側腹中。在腫瘤細胞接種之后約6小時，各以于150μL中的5mg/kg靜脈內注射常規的綴合hLK26-IgG1-Tap18Hr1及位點特異性hLK26-Cys變體-Tap18Hr1(標記為第1天)。用卡尺在兩個垂直尺寸上每周測量腫瘤體積一次，且根據式(0.52*長度*寬度*寬度)來計算腫瘤體積。為確定所處理小鼠中的潛在藥物毒性，每周記錄體重。實施例2:基于hLK26的抗體藥物綴合物(ADC)在卵巢和肺癌細胞中的結合活性hLK26-IgG1-Tap18Hr1結合活性在表達FRA的SK-OV-3、OVCAR-3、NCI-h2110及NCI-h292細胞中通過流式細胞分析評估hLK26-IgG1裸Ab及hLK26-IgG1-Tap18Hr1的結合活性。結果(表8)顯示為利用一系列Ab/ADC濃度實現最佳結合所處的平均螢光強度(MFI)。hLK26-IgG1-Tap18Hr1正性地結合至所有所測試的FRA表達細胞系，且展現與裸AbhLK26-IgG1等效的結合能力。這些數據證明：常規的ADChLK26-IgG1-Tap18Hr1保持hLK26-IgG1的抗原反應性，且有效地結合至表達FRA的癌細胞。表8:hLK26-IgG1-Tap18Hr1和未綴合的hLK26-IgG1與癌細胞的結合在卵巢癌SK-OV-3及OVCAR-3B(表9-10)及肺癌NCI-H2110及NCI-H292(表11-12)細胞中通過流式細胞分析評估hLK26-Cys變體-Tap18Hr1的位點特異性綴合物的結合活性。表中的平均螢光強度(MFI)值表示ADC于測試濃度的結合活性。在IgG1變體中，hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr1及hLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr1與野生型、裸hLK26-IgG1相當地結合，但hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1顯示結合反應性的稍微降低。IgG4p變體-Tap18Hr1綴合物也結合至在此測試的所有FRA陽性癌細胞，但螢光強度通常低于利用IgG1變體所觀察到的那些螢光強度。結合活性的該降低可能歸因于IgG4同種型而非半胱氨酸突變。總之，位點特異性綴合hLK26-Cys變體保持對所測試卵巢及肺癌細胞的抗原反應性。表9:未綴合的hLK26-IgG1和hLK26-Cys變體-Tap18Hr1與SK-OV-3細胞的結合(1)T155C和S442C突變體的位點特異性ADC抗體(1.1μg/mL)MFIhLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr11888hLK26-S442C-IgG4p-Tap18Hr11885hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr12474hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr12077hLK26-IgG12446僅2ndAb6(2)T199C、L201C和T206C突變體的位點特異性ADC抗體(1.1μg/mL)MFIhLK26-T199C-IgG4p-Tap18Hr1966hLK26-L201C-IgG4p-Tap18Hr11004hLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr11274hLK26-IgG11403僅2ndAb5表10:未綴合的hLK26-IgG1和hLK26-Cys變體-Tap18Hr1與OVCAR-3B細胞的結合抗體(1.1μg/mL)MFIhLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr1806hLK26-S442C-IgG4p-Tap18Hr1769hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr11062hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1967hLK26-IgG11154僅2ndAb5表11:未綴合的hLK26-IgG1和hLK26-Cys變體-Tap18Hr1與NCI-H2110細胞的結合(1)T155C和S442C突變體的位點特異性ADC抗體(3.3μg/mL)MFIhLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr1494hLK26-S442C-IgG4p-Tap18Hr1479hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr1649hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1605hLK26-IgG1679僅2ndAb5(2)T199C、L201C和T206C突變體的位點特異性ADC抗體(3.3μg/mL)MFIhLK26-T199C-IgG4p-Tap18Hr1898hLK26-L201C-IgG4p-Tap18Hr1890hLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr11180hLK26-IgG11186僅2ndAb5表12:未綴合的hLK26-IgG1和hLK26-Cys變體-Tap18Hr1與NCI-H292細胞的結合實施例3:hLK26-IgG1-Tap18Hr1ADC和hLK26-IgG1在表達FRA的細胞系中的體外細胞毒性在FRA陽性癌細胞系(SK-OV-3及OVCAR-3)及FRA陰性細胞系(Panc02.03B)評估hLK26-IgG1-Tap18Hr1的體外細胞毒性活性。也平行測試通過裸hLK26-IgG1抗體引起的細胞毒性。ADChLK26-IgG1-Tap18Hr1誘導針對FRA陽性癌細胞(SK-OV-3及OVCAR-3)的特異性及劑量依賴性生長抑制，而其對FRA-陰性細胞Panc02.03B具有更加小的生長抑制效應，從而證明此細胞毒性的抗原特異性(表13)。相較于ADC，裸AbhLK26-IgG1對所處理細胞的存活力具有可忽略影響。表13:hLK26-IgG1-Tap18Hr1和hLK26-IgG1的體外細胞毒性活性也在SK-OV-3及OVCAR-3B細胞中評估位點特異性綴合的hLK26Cys變體-Tap18Hr1的體外細胞毒性活性。表14顯示IgG1變體的結果，且表15顯示IgG4p變體。如常規綴合的ADC一樣(表13)，hLK26Cys變體-Tap18Hr1針對FRA陽性癌細胞(SK-OV-3及OVCAR-3)誘導特異性及劑量依賴性生長抑制。它們對FRA-陰性細胞Panc02.03B的存活力具有更加小的影響，從而證明此細胞毒性的抗原特異性(表14及15)。這些數據證明：常規和位點特異性綴合的hLK26-Tap18Hr1ADC均可以抗原特異性將細胞毒性藥物遞送至靶標癌細胞。表14:綴合的hLK26IgG1Cys變體的體外細胞毒性活性表15:綴合的hLK26IgG4pCys變體的體外細胞毒性活性實施例4:常規ADChLK26-IgG1-Tap18Hr1在卵巢癌中的體內效果在來源于卵巢癌細胞SK-OV-3的異種移植物模型中體內評估hLK26-IgG1-Tap18Hr1的效力。在腫瘤細胞植入之后約一小時，用媒介物(PBS)或單一劑量的ADC以3mg/kg靜脈內處理小鼠(標記為第1天，參見圖4中的箭頭)。歸因于細胞-Matrigel混合物的接種體積，第1天的腫瘤大小因此記錄為120mm3。所注射的Matrigel在第15天呈現吸收，在此期間產生腫瘤且如媒介物對照組中所觀察穩定地生長。在第57天，媒介物對照的平均腫瘤大小已超過500mm3(圖4)，而在研究結束時，用hLK26-IgG1-Tap18Hr1處理的小鼠的組中(6只中的6只)未檢測到腫瘤生長。未觀察到毒性，因為兩個組的體重改變保持無差異(數據未顯示)。因此，研究證明：單獨的hLK26-IgG1-Tap18Hr1ADC為對卵巢癌有效的抗腫瘤劑。實施例5:位點特異性ADChLK26Cys變體-Tap18Hr1在卵巢癌中的體內效果SCID小鼠中的SK-OV-3異種移植物模型也用于評估位點特異性綴合的hLK26Cys變體-Tap18Hr1的體內抗腫瘤效應。將癌細胞皮下移植于SCID小鼠中，且在腫瘤細胞植入之后約兩小時給予5mg/kgADC或媒介物對照的單一劑量(標記為第1天)。比較四個處理組：hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1、hLK26-T155C-IgG4P-Tap18Hr1、hLK26-S442C-IgG4P-Tap18Hr1及媒介物對照，其中每一處理組6只小鼠。每周測量腫瘤大小一次。結果示于圖5中。歸因于所接種細胞-Matrigel混合物的體積，第1天的腫瘤大小記錄為100mm3。相較于媒介物對照，5mg/kghLK26Cys變體-Tap18Hr1的單一劑量在所有ADC處理組中延遲腫瘤生長(p值<0.005，自處理之后第16天起)。圖5中的箭頭指示給予處理的時間。在用ADC處理的小鼠組中未觀察到明顯毒性，因為所有組的體重改變保持無差異(數據未顯示)。研究證明：位點特異性綴合的hLK26Cys變體-Tap18Hr1為用于卵巢癌的有效抗腫瘤劑，即使利用一些變體觀察到細胞結合活性的一些降低亦如此。實施例6:基于抗-FRA的Tap18Hr1綴合物針對肺癌的體內抗腫瘤活性在來源于肺癌細胞NCI-H2110的異種移植物模型中體內評估常規和位點特異性抗-FRA-Tap18Hr1綴合物的效果。將癌細胞皮下移植于SCID小鼠中，且在腫瘤細胞植入之后約6小時，給予5mg/kgADC或媒介物對照的單一劑量(標記為第1天，參見圖6中的箭頭)，所述ADC包括：hLK26-IgG1-Tap18Hr1、hLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr1、LK26-T155C-IgG4p-Tap18hr1、hLK26-T199C-IgG4p-Tap18Hr1及hLK26-L201C-IgG4p-Tap18Hr1。歸因于所接種細胞混合物的體積，第1天的腫瘤大小記錄為100mm3。每周測量一次具有5只動物的每一處理組的腫瘤大小。5mg/kg常規的hLK26-IgG1-Tap18Hr1或位點特異性hlk26Cys變體-Tap18Hr1綴合物的單一劑量完全地抑制所處理小鼠中的腫瘤生長。在所有ADC處理組中，至多第29天均未檢測到腫瘤生長。對比而言，媒介物組的腫瘤快速地生長且在第29天超過1000mm3(p值<0.05，自處理之后第7天起)。在用ADC處理的小鼠組中未觀察到明顯毒性，因為所有組的體重增加保持無差異(數據未顯示)。研究證明：無論常規的還是位點特異性基于抗FRA的Tap18Hr1綴合物，它們單獨對肺癌而言均為有效抗腫瘤劑。參考文獻1.Carter,PJandSenter,PD.Antibody-drugconjugatesforcancertherapy.CancerJ.2008；14:154-169)2.Teicher,BA.Antibody-drugconjugatetargets.CurrentcancerDrugTargets2009,9:982-1004.3.Ducry,LandStump,B.Antibody-drugconjugates:linkingcytotoxicpayloadstomonoclonalantibodies.Bioconjugatechem.,2010,21:5-13.4.Koblinski,JE.,Ahram,MandSloane,BF.Unravelingtheroleofproteasesincancer.Clin.Chem.Acta2000；291:113-135.本申請引用的所有專利、專利申請、文件及論文均以全文通過引用方式并入本申請中。序列表<110>荷商臺醫(有限合伙)公司臺醫國際股份有限公司林榮華林士瑤謝昱祁黃久珍李叔樺蔡育英蔣鳳琳胡立安<120>抗葉酸鹽受體α(FRA)抗體-藥物綴合物及其使用方法<130>606592001040<140>未指定<141>ConcurrentlyHerewith<150>US62/015,321<151>2014-06-20<160>53<170>針對Windows版本4.0的FastSEQ<210>1<211>449<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>1GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyValValGlnProGlyArg151015SerLeuArgLeuSerCysSerAlaSerGlyPheThrPheSerGlyTyr202530GlyLeuSerTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045AlaMetIleSerSerGlyGlySerTyrThrTyrTyrAlaAspSerVal505560LysGlyArgPheAlaIleSerArgAspAsnAlaLysAsnThrLeuPhe65707580LeuGlnMetAspSerLeuArgProGluAspThrGlyValTyrPheCys859095AlaArgHisGlyAspAspProAlaTrpPheAlaTyrTrpGlyGlnGly100105110ThrProValThrValSerSerAlaSerThrLysGlyProSerValPhe115120125ProLeuAlaProSerSerLysSerThrSerGlyGlyThrAlaAlaLeu130135140GlyCysLeuValLysAspTyrPheProGluProValThrValSerTrp145150155160AsnSerGlyAlaLeuThrSerGlyValHisThrPheProAlaValLeu165170175GlnSerSerGlyLeuTyrSerLeuSerSerValValThrValProSer180185190SerSerLeuGlyThrGlnThrTyrIleCysAsnValAsnHisLysPro195200205SerAsnThrLysValAspLysLysValGluProLysSerCysAspLys210215220ThrHisThrCysProProCysProAlaProGluLeuLeuGlyGlyPro225230235240SerValPheLeuPheProProLysProLysAspThrLeuMetIleSer245250255ArgThrProGluValThrCysValValValAspValSerHisGluAsp260265270ProGluValLysPheAsnTrpTyrValAspGlyValGluValHisAsn275280285AlaLysThrLysProArgGluGluGlnTyrAsnSerThrTyrArgVal290295300ValSerValLeuThrValLeuHisGlnAspTrpLeuAsnGlyLysGlu305310315320TyrLysCysLysValSerAsnLysAlaLeuProAlaProIleGluLys325330335ThrIleSerLysAlaLysGlyGlnProArgGluProGlnValTyrThr340345350LeuProProSerArgAspGluLeuThrLysAsnGlnValSerLeuThr355360365CysLeuValLysGlyPheTyrProSerAspIleAlaValGluTrpGlu370375380SerAsnGlyGlnProGluAsnAsnTyrLysThrThrProProValLeu385390395400AspSerAspGlySerPhePheLeuTyrSerLysLeuThrValAspLys405410415SerArgTrpGlnGlnGlyAsnValPheSerCysSerValMetHisGlu420425430AlaLeuHisAsnHisTyrThrGlnLysSerLeuSerLeuSerProGly435440445Lys<210>2<211>446<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>2GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyValValGlnProGlyArg151015SerLeuArgLeuSerCysSerAlaSerGlyPheThrPheSerGlyTyr202530GlyLeuSerTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045AlaMetIleSerSerGlyGlySerTyrThrTyrTyrAlaAspSerVal505560LysGlyArgPheAlaIleSerArgAspAsnAlaLysAsnThrLeuPhe65707580LeuGlnMetAspSerLeuArgProGluAspThrGlyValTyrPheCys859095AlaArgHisGlyAspAspProAlaTrpPheAlaTyrTrpGlyGlnGly100105110ThrProValThrValSerSerAlaSerThrLysGlyProSerValPhe115120125ProLeuAlaProCysSerArgSerThrSerGluSerThrAlaAlaLeu130135140GlyCysLeuValLysAspTyrPheProGluProValThrValSerTrp145150155160AsnSerGlyAlaLeuThrSerGlyValHisThrPheProAlaValLeu165170175GlnSerSerGlyLeuTyrSerLeuSerSerValValThrValProSer180185190SerSerLeuGlyThrLysThrTyrThrCysAsnValAspHisLysPro195200205SerAsnThrLysValAspLysArgValGluSerLysTyrGlyProPro210215220CysProProCysProAlaProGluPheLeuGlyGlyProSerValPhe225230235240LeuPheProProLysProLysAspThrLeuMetIleSerArgThrPro245250255GluValThrCysValValValAspValSerGl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1>25<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>43ValValThrValProSerSerSerLeuGlyThrLysCysTyrThrCys151015AsnValAspHisLysProSerAsnThr2025<210>44<211>25<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>44ValValThrValProSerSerSerLeuGlyThrGlnThrTyrCysCys151015AsnValAsnHisLysProSerAsnThr2025<210>45<211>25<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>45ValValThrValProSerSerAsnPheGlyThrGlnThrTyrCysCys151015AsnValAspHisLysProSerAsnThr2025<210>46<211>25<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>46ValValThrValProSerSerSerLeuGlyThrGlnThrTyrCysCys151015AsnValAsnHisLysProSerAsnThr2025<210>47<211>25<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>47ValValThrValProSerSerSerLeuGlyThrLysThrTyrCysCys151015AsnValAspHisLysProSerAsnThr2025<210>48<211>18<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>48GluAlaLeuHisAsnHisTyrThrGlnLysSerLeuCysLeuSerPro151015GlyLys<210>49<211>18<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>49GluAlaLeuHisAsnArgPheThrGlnLysSerLeuCysLeuSerPro151015GlyLys<210>50<211>18<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>50GluAlaLeuHisAsnHisTyrThrGlnLysSerLeuCysLeuSerLeu151015GlyLys<210>51<211>20<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>51GluValThrHisGlnGlyCysSerSerProValThrLysSerPheAsn151015ArgGlyGluCys20<210>52<211>20<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>52GluValThrHisGlnGlyLeuSerSerProValCysLysSerPheAsn151015ArgGlyGluCys20<210>53<211>20<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構建物<400>53GluValThrHisGlnGlyLeuSerSerProCysThrLysSerPheAsn151015ArgGlyGluCys20當前第1頁1 2 3