本發明涉及生物制藥領域，具體地說涉及原料藥中間品的制備。
背景技術：
絨促性素是從受精卵著床第1天，即受孕的第8天開始，由胎盤滋養層合體細胞分泌的。受孕后第20天尿中可測得HCG，當妊娠45天時，尿中HCG的濃度升高，60-70天時達到高峰。絨促性素成品呈白色或類白色粉末，易溶于水，不溶于乙醇、乙醚和丙酮等有機溶劑。干品穩定，稀溶液不穩定，過酸、過堿或受熱都易被破壞，但在膠體溶液中能保護其活力不受損失，如在甘油溶液中，100℃能保持1小時。
臨床主要用于男性垂體機能不足所致的性機能過低癥和隱睪癥，用于由黃體功能不全引起的功能性子宮出血病和習慣性流產。與自孕馬血清、絕經期婦女尿中提取的促性激素合用，可誘發排卵，治療不育癥，亦可用于皮膚搔癢癥、神經性皮炎等。
1927年Zondek和Ascbheim首先發現妊娠婦女尿中存在著促性腺激素，1936年Brown和Venning找到在妊娠第60-80天，尿中絨促性素分泌達到最高峰。1928年Zondek和Ascbheim 首先用乙醇沉淀法，從孕婦尿中取得了活性物質，其他研究者則進行應用吸附劑從尿中直接吸附絨促性素的研究，這包括1932年Katzman和Doisy用苯甲酸吸附法，1943年Katzman等人用人造沸石層析吸附法，1954年Loraine和Brown用高嶺土吸附法，1959年難波修一等人用離子交換樹脂吸附法等，用這些方法所取得的絨促性素再用各種純化方法進行純化。
技術實現要素：
本發明提供了一種從粗品中提取絨促性素的方法。
本發明的技術方案是：將絨促性素粗品經高鹽提取液提取、乙醇沉淀、離心、低鹽提取液提取、乙醇沉淀、離心、脫水、干燥得到絨促性素中間品，包括如下步驟：
（1）高鹽提取液提取：絨促性素粗品加入8-12℃高鹽提取液中，高鹽提取液用量為粗品重量的5倍（w/v），在80-120rpm條件下攪拌提取3小時，提取液離心，離心時間30分鐘/車，離心轉速3500rpm，收集離心上清液，離心沉淀物再按粗品重量1：2（w/v）比例加入8-12℃的高鹽提取液溶解，在80-120rpm條件下攪拌提取1小時，提取液離心，離心時間30分鐘/車，離心轉速3500rpm，收集離心上清液，棄去固體分離物。
（2）乙醇沉淀、離心：合并二次離心上清液，邊攪邊加入90%以上乙醇，乙醇溫度不超過-10℃，使乙醇濃度達到79-81%，加完乙醇后繼續攪拌30分鐘，然后停止攪拌，在8~12℃條件下靜置沉淀15~18小時，靜置時間結束后，虹吸上層乙醇，下層沉淀物離心，離心轉速3500rpm，離心時間30分鐘/車，溫度不超過10℃，棄去上層離心母液，收集下層固體即得高鹽提取物。
（3）低鹽提取液提取：將高鹽提取物加入到8-12℃的低鹽提取液中，低鹽提取液用量為高鹽提取物的5倍（w/v），在轉速80-120rpm條件下攪拌提取4小時，提取液離心，離心時間30分鐘/車，離心轉速3500rpm，收集上清液，離心沉淀物再按高鹽提取物重量1：2（w/v）加低鹽提取液，攪拌提取1小時，提取液離心，離心時間30分鐘/車，離心轉速3500rpm，收集上清液，棄去固體分離物。
（4）乙醇沉淀：合并二次離心上清液，邊攪邊加入90%以上乙醇，乙醇溫度不超過-10℃，使乙醇濃度達到79-81%，加完乙醇后繼續攪拌30分鐘，然后停止攪拌，在8~12℃條件下靜置沉淀15~18小時。
（5）離心、脫水、干燥：靜置時間結束后，虹吸上層乙醇，下層沉淀物離心，離心轉速3500rpm，離心時間30分鐘/車，溫度不超過10℃，棄去上層離心母液，收集下層固體物，按離心固體物重量1:5（w/v）比例加入無水乙醇脫水，再按上述步驟離心，收集固體物，在-0.1MPa下真空干燥，干燥20小時以上，溫度低于15℃，干燥后即得絨促性素中間品。
與現有技術相比，本發明的優點和積極效果是：
本發明提供了一種從粗品中提取絨促性素的方法，其基本過程為：控制溫度在8-12℃，先以高濃度的鹽溶液對絨促性素粗品提取，經乙醇沉淀、離心后得到高鹽提取物，再以低濃度的鹽溶液對高鹽提取物提取，經乙醇沉淀、離心、脫水、干燥后得到絨促性素中間品。其特點是：先后用高鹽提取液和低鹽提取液對粗品提取純化，且每種提取液均對粗品進行兩次提取，最大限度保證將活性蛋白從粗品中提取出來，再經乙醇沉淀、離心、脫水、干燥后得到絨促性素中間品。本方法提取的絨促性素中間品產率更高、效價更好，且本方法操作簡單、成本低，便于工業化生產。且以本方法制得的絨促性素中間品可直接用柱層析法進一步分離純化，以此制得的絨促性素精品，其效價在6000IU/mg以上。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明作進一步說明。
實施例1
本實施例為從粗品中提取絨促性素的方法，其具體操作為：
（1）高鹽提取液配制：配制含乙酸鈉0.1mol/L、氯化鈣0.015mol/L、氯化鈉0.5mol/L的純化水溶液，方法為：分別稱取乙酸鈉13.6g、氯化鈣1.66g、氯化鈉29.2g，加入純化水溶解并稀釋至1L，然后向該溶液中滴加冰乙酸，調節pH值至5.0-5.2。根據絨促性素粗品的重量，配制所需量的高鹽提取液，在8-12℃條件下保存。
（2）高鹽提取液提取：將絨促性素粗品加入到大罐中，按粗品重量1：5（w/v）比例加入8~12℃的高鹽提取液，打開攪拌槳，在80-120rpm轉速下攪拌3小時，之后，提取液用低速大容量冷凍離心機離心，使固液分離；設定離心時間30分鐘/車，離心轉速3500rpm，離心溫度不高于10℃；離心結束后，收集上清液，于8-12℃環境下暫存；下層離心沉淀物收集后，再次提取，按粗品重量1：2（w/v）比例加入8-12℃的高鹽提取液，在80-120rpm轉速下攪拌提取1小時，提取液用低速大容量冷凍離心機離心；設定離心時間30分鐘/車，離心轉速3500rpm，離心溫度不高于10℃；離心結束后，收集上清液，下層固體分離物棄去。
（3）乙醇沉淀、離心：合并二次離心上清液，加入到大罐中，邊攪拌邊加入90%以上乙醇（乙醇溫度不超過-10℃），同時用密度計測量乙醇濃度，乙醇濃度達到79-81%停止加入，繼續攪拌30分鐘，然后停止攪拌，在8~12℃條件下靜置沉淀15~18小時，直至罐內乙醇清澈沉淀物全部沉入罐底部；之后，用軟管自然虹吸上層乙醇，下層沉淀物用低速大容量冷凍離心機離心；設定離心轉速3500rpm，離心時間30分鐘/車，溫度不超過10℃；離心結束后，棄去上層母液，收集下層固體，即得高鹽提取物。
（4）低鹽提取液配制：配制0.1mol/L乙酸鈉溶液，方法為取13.6g乙酸鈉，加純化水溶解并稀釋至1L。向上述溶液中滴加冰乙酸，調節pH至4.8-5.0；根據高鹽提取物的重量，配制所需量的低鹽提取液，在8-12℃條件下保存。
（5）低鹽提取液抽提：將高鹽提取物加入到大罐中，按高鹽提取物重量1：5（w/v）比例加入8-12℃低鹽提取液，打開攪拌槳，在80-120rpm轉速下攪拌提取4小時，之后用低速大容量冷凍離心機對提取液離心；設定離心時間30分鐘/車，離心轉速3500rpm，離心溫度不高于10℃；離心結束后，收集上清液，在8-12℃條件下暫存；下層離心沉淀物收集后再次提取，按高鹽提取物重量1：2（w/v）比例加低鹽提取液，攪拌提取1小時，提取液用低速大容量冷凍離心機離心；設定離心時間30分鐘/車，離心轉速3500rpm，離心溫度不高于10℃；離心結束后，收集上清液，棄去下層固體分離物。
（6）乙醇沉淀：合并二次離心上清液，加入到大罐中，邊攪拌邊加入90%以上乙醇（乙醇溫度不超過-10℃），同時用密度計測量乙醇濃度，直至乙醇濃度達到79-81%停止加入，繼續攪拌30分鐘，然后停止攪拌，在8~12℃條件下靜置沉淀15~18小時，直至罐內乙醇清澈沉淀物全部沉入罐底部。
（7）離心、脫水、真空干燥：靜置時間結束后，用軟管自然虹吸上層乙醇，下層沉淀物用低速大容量冷凍離心機離心；設定離心轉速3500rpm，離心時間30分鐘/車，溫度不超過10℃；離心結束后棄去上層離心母液，收集下層固體物，稱量其重量，按固體物重量1:5（w/v）比例加入無水乙醇脫水，再按上述步驟離心，棄去上層液體，收集下層離心固體，放入真空干燥箱真空干燥；真空度為-0.1MPa，環境溫度應低于15℃，干燥時間20小時以上；干燥后的即得絨促性素中間品。
本方法得到的中間品為淡黃色粉末，經檢驗，其效價為684 IU/mg。以本方法制得的絨促性素中間品可直接用柱層析法進一步分離純化，制得絨促性素精品，精品效價在6000IU/mg以上。
以上所述，僅是本發明的較佳實施例而已，并非是對本發明作其它形式的限制，任何熟悉本專業的技術人員可能利用上述揭示的技術內容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發明技術方案內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發明技術方案的保護范圍。