一種厚孢輪枝菌劑及其保護劑和制備方法與流程

本發明涉及一種微生物菌劑，具體涉及一種用于生物防治的厚孢輪枝菌劑及其保護劑和制備方法。

背景技術：

厚孢輪枝菌又名厚垣孢普可尼亞菌(Pochonia chlamydosporia)，該菌屬于半知菌亞門(Deuteromycotina)、絲孢綱(Hyphomycetes)、絲孢目(叢梗孢目)(Moniliales)、絲孢科(叢梗孢科)(Monilaccae)、普可尼亞屬(Pochonia)。

根結線蟲是引起作物根結線蟲病的病原物，其寄主范圍十分廣泛，流行于熱帶和亞熱帶地區，每年都給世界農作物的經濟帶來巨大損失。目前，防治根結線蟲病的方法有多種，其中生物防治的方法對人畜和環境的影響較小，是控制線蟲最安全的方式，目前防治線蟲應用最為廣泛的菌為淡紫擬青霉和厚孢輪枝菌。

關于厚孢輪枝菌，目前研究方向主要是其生防效果、發酵條件優化、與蟲卵的寄生機理研究等。但也有人對其進行了商品化，并取得不錯的效果。汪來發等將淡紫擬青霉固體菌劑與厚孢輪枝菌菌劑混合制成復合菌劑，在室內、小區和大田試驗中都能取得較好的防治效果,兩者互不拮抗，并能促進植物生長。莊占興等利用厚孢輪枝菌防治煙草根結線蟲，在田間試驗中防治效率在70％以上，并能促進作物增產。但是厚孢輪枝菌要進行商品化，還需要提高其有效期，石妍的研究表明，將厚孢輪枝菌孢子粉做成可濕性粉劑在4℃條件下，90天后，有效活菌下降了30％，在常溫條件下保藏則下降了75.38％。厚孢輪枝菌的不易保存給利用其進行生物防控帶來了困難，因此研發一種更為有效的保護劑能使得厚孢輪枝菌的有效期更長就非常有意義了。

技術實現要素：

本發明的目的是克服現有技術的缺點，提供一種能夠有效延長厚孢輪枝菌保存期的保護劑，以及保存期長的厚孢輪枝菌的菌劑及其制備方法。

本發明首先提供一種組合物，含有以下重量份的原料：沸石粉30-50份、腐殖酸15-25份、玉米淀粉25-45份、蔗糖0.2-2份、氯化鈉0.1-1.5份、吐溫80 0.1-1.2份、氯霉素0.01份。

優選地，本發明的組合物含有以下重量份的原料：沸石粉35-45份、腐殖酸18-23份、玉米淀粉30-40份、蔗糖0.5-1.5份、氯化鈉0.4-1.2份、吐溫80 0.4-1份、氯霉素0.01份。

更優選地，本發明的組合物含有以下重量份的原料：沸石粉42份、腐殖酸20份、玉米淀粉36份、蔗糖1.2份、氯化鈉1份、吐溫80 0.5份、氯霉素0.01份。

本發明提供了上述組合物在制備菌劑中的應用。

本發明提供了含有上述組合物的菌劑。

優選地，所述菌劑為厚孢輪枝菌(Pochonia chlamydosporia)菌劑。

所述厚孢輪枝菌(Pochonia chlamydosporia)菌劑是將厚孢輪枝菌與本發明所述的組合物按照質量比2:8混合均勻，調節水分至15％-20％，造粒后干燥至水分8％以下即得。發明人反復研究發現，水分低于15％造粒成粒率不佳，大于20％不容易造粒，因此選擇水分為15％-20％。

優選地，本發明的菌劑為顆粒狀。本發明經過大量研究發現，本發明的菌劑劑型為顆粒型，有利于保質期的延長，其他劑型均不如顆粒型的保質期長。

本發明提供了一種保存期長的厚孢輪枝菌(Pochonia chlamydosporia)菌劑的制備方法，將厚孢輪枝菌(Pochonia chlamydosporia)的菌絲與本發明所述的組合物按照質量比2:8混合均勻，調節水分至15％-20％，造粒后干燥至水分8％以下即得。

其中，厚孢輪枝菌(Pochonia chlamydosporia)的菌絲是厚孢輪枝菌經過液體發酵離心后收集菌絲而得。

厚孢輪枝菌液體發酵培養基為土豆培養基(PS培養基)，培養溫度為25-28℃，轉速為120r/min，通氣量為2.5kg，培養時間為5-7天，離心收集菌絲的機械為碟片式離心機，轉速為6000r/min。將獲得的菌絲與本發明組合物混合，調節水分至15％-20％，雙模快速造粒機造粒，造粒后在30℃條件下干燥，干燥至水分在8％以下即得。

進一步地，本發明提供了上述菌劑在防治作物線蟲病中的應用。

進一步地，本發明提供了上述菌劑在促進作物生長中的應用

本發明有益效果在于：

1、本發明提供的組合物可用于厚孢輪枝菌劑的保護劑，可增強菌劑的穩定性，延長菌劑的有效期，根據企業標準，菌劑含量≥2億cfu/g為合格產品，本產品有效期大于1年。

2、本發明的菌劑制備方法簡單易操作，成本低。

附圖說明

圖1為實施例6的厚孢輪枝菌菌劑含量隨時間的變化。

圖2為實施例7的厚孢輪枝菌菌劑含量隨時間的變化。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。在不背離本發明精神和實質的情況下，對本發明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發明的范圍。

若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段；若未特別指明，實施例中所用試劑均為市售。

本實施例采用的厚孢輪枝菌購自中國農業微生物菌種保藏管理中心，保藏編號ACCC30604。

實施例1厚孢輪枝菌劑的制備(1)

厚孢輪枝菌液體發酵培養基為土豆培養基(PS培養基)，培養溫度為25-28℃，轉速為120r/min，通氣量為2.5kg,培養時間為7天。用碟片式離心機將發酵液離心處理，轉速為6000r/min。將獲得的菌絲與保護劑混合，其中，沸石粉42kg、腐殖酸20kg、玉米淀粉36kg、蔗糖1.2kg、氯化鈉1kg、吐溫80 0.5kg、氯霉素0.01kg、厚孢輪枝菌菌絲25.18kg。調節水分至20％左右，雙模快速造粒機造粒，造粒后在30℃條件下干燥，干燥至水分在8％以下即得。

實施例2厚孢輪枝菌劑的制備(2)

厚孢輪枝菌制劑液體發酵培養基為土豆培養基(PS培養基)，培養溫度為25-28℃，轉速為120r/min，通氣量為2.5kg,培養時間為5天。用碟片式離心機將發酵液離心處理，轉速為6000r/min。將獲得的菌絲與保護劑混合，其中，沸石粉30kg、腐殖酸15kg、玉米淀粉25kg、蔗糖0.2kg、氯化鈉0.1kg、吐溫80 0.1kg、氯霉素0.01kg、厚孢輪枝菌菌絲17.60kg。調節水分至20％左右，雙模快速造粒機造粒，造粒后在30℃條件下干燥，干燥至水分在8％以下即得。

實施例3厚孢輪枝菌劑的制備(3)

厚孢輪枝菌制劑液體發酵培養基為土豆培養基(PS培養基)，培養溫度為25-28℃，轉速為120r/min，通氣量為2.5kg,培養時間為6天。用碟片式離心機將發酵液離心處理，轉速為6000r/min。將獲得的菌絲與保護劑混合，其中，沸石粉50kg、腐殖酸25kg、玉米淀粉45kg、蔗糖2kg、氯化鈉1.5kg、吐溫80 1.2kg、氯霉素0.01kg、厚孢輪枝菌菌絲31.18kg。調節水分至20％左右，雙模快速造粒機造粒，造粒后在30℃條件下干燥，干燥至水分在8％以下即得。

實施例4厚孢輪枝菌劑的制備(4)

厚孢輪枝菌制劑液體發酵培養基為土豆培養基(PS培養基)，培養溫度為25-28℃，轉速為120r/min，通氣量為2.5kg,培養時間為5天。用碟片式離心機將發酵液離心處理，轉速為6000r/min。將獲得的菌絲與保護劑混合，其中，沸石粉35kg、腐殖酸18kg、玉米淀粉30kg、蔗糖0.5kg、氯化鈉0.4kg、吐溫80 0.4kg、氯霉素0.01kg、厚孢輪枝菌菌絲21.08kg。調節水分至20％左右，雙模快速造粒機造粒，造粒后在30℃條件下干燥，干燥至水分在8％以下即得。

實施例5厚孢輪枝菌劑的制備(5)

厚孢輪枝菌制劑液體發酵培養基為土豆培養基(PS培養基)，培養溫度為25-28℃，轉速為120r/min，通氣量為2.5kg,培養時間為7天。用碟片式離心機將發酵液離心處理，轉速為6000r/min。將獲得的菌絲與保護劑混合，其中，沸石粉45kg、腐殖酸23kg、玉米淀粉40kg、蔗糖1.5kg、氯化鈉1.2kg、吐溫80 1kg、氯霉素0.01kg、厚孢輪枝菌菌絲27.93kg。調節水分至20％左右，雙模快速造粒機造粒，造粒后在30℃條件下干燥，干燥至水分在8％以下即得。

實施例6厚孢輪枝菌劑保存效果試驗

將實施例1制得的厚孢輪枝菌劑分別在室溫和4℃℃條件下保存，每隔15天測定其活菌數，測定方法為血小球計數板計數法。其結果如圖1所示。經過120天的保存后，檢測發現在4℃條件下厚孢輪枝菌活菌數損失11.26％，常溫條件下厚孢輪枝菌活菌數損失31.92％。該效果優于石妍提出的可濕性粉劑的有效期(該文獻名稱為《厚垣孢普可尼亞菌PC152菌株生物學及制劑工藝研究》，可濕性粉劑配方為：潤濕劑吐溫-80 5％、分散劑PEG6000 5％、紫外保護劑0.9％、載體硅藻土45％、以孢子粉補足至100％。4℃貯存90天，損失23.08％，室溫貯存90天，損失75.38％)。

采用本發明實施例2-5制得的菌劑進行上述對比試驗，結果與實施例1結果類似。

實施例7本發明厚孢輪枝菌劑穩定性試驗

將實施例1制得的厚孢輪枝菌劑分別在室溫和4℃條件下保存，每隔15天測定其活菌數，測定方法為血小球計數板計數法。經過375天的保存后仍然還有2.15億cfu/g，根據企業標準(有效活菌數≥2億cfu/g，標準高于國家規定的有效活菌數≥0.5億cfu/g)，本產品有效期可達到1年，結果如圖2所示雖然，上文中已經用一般性說明、具體實施方式及試驗，對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發明要求保護的范圍。

以上的實施例僅僅是對本發明的優選實施方式進行描述，并非對本發明的范圍進行限定，在不脫離本發明設計精神的前提下，本領域普通工程技術人員對本發明的技術方案做出的各種變型和改進，均應落入本發明的權利要求書確定的保護范圍內。