1.一種固定化透明質酸酶的方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)向酶活為10000~15000U/mL的透明質酸酶的酶液中,添加β-環糊精,β-環糊精的添加量為透明質酸酶的酶液的質量的0.5%,攪拌均勻后,在室溫下靜置0.5~1h;
(2)向步驟(1)所得溶液中添加殼聚糖溶液,攪拌均勻后,在室溫下靜置1~2h;殼聚糖溶液與透明質酸酶的酶液的質量比例為(3~4):1,所述殼聚糖溶液是將粘度700cps、脫乙酰度95%以上的殼聚糖用體積濃度為0.05%的乙酸水溶液溶解,配成質量濃度為3~4%殼聚糖溶液;
(3)將TPP水溶液在400r/min的攪拌速度下,以1mL/min的滴加速度加入到步驟(2)所得溶液中,形成固定化酶的分散體系;在4℃條件下靜置1h;所述TPP的用量為殼聚糖質量的8~10%;所述TPP水溶液為質量濃度為5mg/mL的TPP水溶液;
(4)離心收集固定化酶的顆粒,經真空低溫干燥即可獲得固定化透明質酸酶。
2.根據權利要求1所述的一種固定化透明質酸酶的方法,其特征在于,步驟(1)采用酶活為15000U/mL的透明質酸酶的酶液,β-環糊精的添加量為透明質酸酶的酶液的質量的0.5%,攪拌均勻后,在室溫下靜置0.5h。
3.根據權利要求1或2所述的一種固定化透明質酸酶的方法,其特征在于,步驟(2)向步驟(1)所得溶液中添加殼聚糖溶液,攪拌均勻后,在室溫下靜置1h;殼聚糖溶液與透明質酸酶的酶液的質量比例為4:1,所述殼聚糖溶液是將粘度700cps、脫乙酰度95%以上的殼聚糖用體積濃度為0.05%的乙酸水溶液溶解,配成質量濃度為4%殼聚糖溶液。
4.根據權利要求1或2或3所述的一種固定化透明質酸酶的方法,其特征在于,步驟(3)將TPP水溶液在400r/min的攪拌速度下,以1mL/min的滴加速度加入到步驟(2)所得溶液中,形成固定化酶的分散體系;在4℃條件下靜置1h;所述TPP的用量為殼聚糖質量的8%;所述TPP水溶液為質量濃度為5mg/mL的TPP水溶液。
5.根據權利要求1~4任一所述方法制備得到固定化透明質酸酶。
6.權利要求5所述固定化透明質酸酶在生產透明質酸中的應用。