一種細胞膜蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒的制作方法

本實用新型涉及一種試劑盒，具體涉及一種細胞膜蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒，屬于生物技術領域。

背景技術：

為了節約時間、方便使用，越來越多的實驗步驟與檢測方法被開發為試劑盒，但是傳統的試劑盒為簡單的單層包裝盒，內部空間為封閉的單一結構，所有內容物被疊放于盒內。在使用過程中，技術人員很難準確迅速的獲得所需組分，給實際操作帶來不便，而且在產品運輸過程中，里面各種組分容易出現相互碰撞而造成損壞，對運輸條件要求較高。從培養細胞或組織中抽提細胞膜蛋白和細胞漿蛋白，抽提的膜蛋白不僅包括質膜上的膜蛋白，也包括線粒體膜、內質網膜和高爾基體膜等上的膜蛋白，操作過程復雜，因此，亟需提供一種相關的試劑盒。

技術實現要素：

本實用新型要解決的技術問題是克服現有的細胞膜蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒很難準確迅速的獲得所需組分，給實際操作帶來不便的缺陷，提供一種細胞膜蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒。

為了解決上述技術問題，本實用新型提供了如下的技術方案：

本實用新型提供了一種細胞膜蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒，包括盒體、鉸鏈、盒蓋、固定座、第一孔槽、裝膜蛋白抽提試劑A的試管、標簽、第二孔槽、裝膜蛋白抽提試劑B的試管、說明書安放槽、細胞刮子、移液器和玻璃勻漿器，所述盒蓋通過所述鉸鏈連接所述盒體，所述盒體的底部設有所述固定座，所述固定座的頂部設有所述第一孔槽，所述第一孔槽的內部設置有所述裝膜蛋白抽提試劑A的試管，所述第一孔槽的一側設有所述第二孔槽，所述第二孔槽的內部設有所述裝膜蛋白抽提試劑B的試管，所述第二孔槽的一側設有所述說明書安放槽，所述說明書安放槽的一側放置有所述玻璃勻漿器，所述玻璃勻漿器的邊側設有所述細胞刮子，所述細胞刮子的一側設有所述移液器。

作為本實用新型的一種優選技術方案，所述盒蓋的邊側連接卡扣，所述盒體的側邊設有與所述卡扣相對應的卡槽。

作為本實用新型的一種優選技術方案，所述裝膜蛋白抽提試劑A的試管和所述裝膜蛋白抽提試劑B的試管的頂端均粘貼有對應的所述標簽，所述裝膜蛋白抽提試劑A的試管和所述裝膜蛋白抽提試劑B的試管的殼體上均設有刻度。

本實用新型所達到的有益效果是：該種細胞膜蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒提供了一種比較簡單、方便地從培養細胞或組織中抽提細胞膜蛋白和細胞漿蛋白的方法，抽提的膜蛋白不僅包括質膜上的膜蛋白，也包括線粒體膜、內質網膜和高爾基體膜等上的膜蛋白。通過勻漿適度破碎細胞，經低速離心去除細胞核和少數未破碎的細胞產生的沉淀，隨后取上清高速離心獲得細胞膜沉淀和含有細胞漿蛋白的上清，然后通過優化的膜蛋白抽提試劑從沉淀中抽提獲取膜蛋白。約90分鐘即可完成培養細胞或組織的細胞膜蛋白與細胞漿蛋白的分離和抽提。本試劑盒按照本說明書的操作步驟可以抽提100個細胞或組織樣品。

附圖說明

附圖用來提供對本實用新型的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與本實用新型的實施例一起用于解釋本實用新型，并不構成對本實用新型的限制。在附圖中：

圖1是本實用新型的結構示意圖；

圖中：1、盒體；2、鉸鏈；3、盒蓋；4、固定座；5、第一孔槽；6、裝膜蛋白抽提試劑A的試管；7、標簽；8、第二孔槽；9、裝膜蛋白抽提試劑B的試管；10、說明書安放槽；11、細胞刮子；12、移液器；13、玻璃勻漿器。

具體實施方式

以下結合附圖對本實用新型的優選實施例進行說明，應當理解，此處所描述的優選實施例僅用于說明和解釋本實用新型，并不用于限定本實用新型。

實施例1

如圖1所示，本實用新型提供一種細胞膜蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒，包括盒體1、鉸鏈2、盒蓋3、固定座4、第一孔槽5、裝膜蛋白抽提試劑A的試管6、標簽7、第二孔槽8、裝膜蛋白抽提試劑B的試管9、說明書安放槽10、細胞刮子11、移液器12和玻璃勻漿器13，盒蓋3通過鉸鏈2連接盒體1，盒體1的底部設有固定座4，固定座4的頂部設有第一孔槽5，第一孔槽5的內部設置有裝膜蛋白抽提試劑A的試管6，第一孔槽5的一側設有第二孔槽8，第二孔槽8的內部設有裝膜蛋白抽提試劑B的試管9，第二孔槽8的一側設有說明書安放槽10，說明書安放槽10的一側放置玻璃勻漿器13，玻璃勻漿器13的邊側設有細胞刮子11，細胞刮子11的一側設有所述移液器12。

盒蓋3的邊側連接卡扣，盒體1的側邊設有與卡扣相對應的卡槽，使該試劑盒密封。

裝膜蛋白抽提試劑A的試管6和裝膜蛋白抽提試劑B的試管9的頂端均粘貼有對應的標簽7，裝膜蛋白抽提試劑A的試管6和裝膜蛋白抽提試劑B的試管9的殼體上均設有刻度，便于操作人員準確提取。

具體原理：該種細胞膜蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒，進行細胞膜蛋白與細胞漿蛋白抽提操作時，首先需準備試劑，室溫融解并混勻膜蛋白抽提試劑A和B，融解后立即置于冰浴上。取適量的膜蛋白抽提試劑A和B備用，在使用前數分鐘內加入PMSF。再準備細胞或組織樣品，對于貼壁細胞，培養約2000-5000萬細胞，用PBS洗一遍，用細胞刮子11刮下細胞或用含有EDTA但不含胰酶的細胞消化液處理細胞使細胞不再貼壁很緊，并用移液器12吹打下細胞。離心收集細胞，吸除上清，留下細胞沉淀備用。對于懸浮細胞，培養約2000-5000萬細胞，直接離心收集細胞，吸除上清，留下細胞沉淀備用。然后用適量冰浴預冷的PBS輕輕重懸細胞沉淀，取少量細胞用于計數，剩余細胞4℃，600g離心5分鐘沉淀細胞。棄上清，隨后4℃，600g離心1分鐘，以沉淀離心管管壁上的殘留液體并進一步沉淀細胞，盡最大努力吸盡殘留液體。接著對細胞預處理，把1毫升臨用前添加了PMSF的膜蛋白抽提試劑A加入至2000-5000萬細胞中，輕輕并充分懸浮細胞，冰浴放置10-15分鐘。對于組織，取約100毫克組織，用剪刀盡量小心剪切成細小的組織碎片。加入1毫升臨用前添加了PMSF的膜蛋白抽提試劑A，輕輕懸浮組織碎片，冰浴放置10-15分鐘。把細胞懸液或組織樣品轉移到冰浴預冷玻璃勻漿器13中，勻漿約30-50下，直到細胞破碎的程度大于70％。然后去除細胞核和未破碎的細胞，4℃，700g離心10分鐘，小心收集上清液至一新的離心管中。沉淀細胞膜碎片，4℃，14000g離心30分鐘，以沉淀細胞膜碎片。最后吸取上清即為細胞漿蛋白，可-70℃保存備用。抽提膜蛋白，4℃，14000g離心10秒，盡最大努力吸盡上清。加入膜蛋白抽提試劑B200微升最高速劇烈Vortex 5秒重懸沉淀，冰浴5-10分鐘。重復前述步驟的vortex和冰浴孵育1-2次，以充分抽提膜蛋白。隨后，4℃，14000g離心5分鐘，收集上清即為細胞膜蛋白溶液。可-70℃保存備用。

最后應說明的是：以上所述僅為本實用新型的優選實施例而已，并不用于限制本實用新型，盡管參照前述實施例對本實用新型進行了詳細的說明，對于本領域的技術人員來說，其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換。凡在本實用新型的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本實用新型的保護范圍之內。