本發明涉及一種生姜提取物的提取方法，特別涉及一種從生姜中提取分離6-姜酚的方法。
背景技術：
生姜中存在一系列姜酚的同系物，由于結構類似，性質相近，很難用常規方法純化成單體成分，在低壓柱層析柱上分離出的成分，經薄層色譜鑒別為單一斑點，實際上為一族化合物，經高效液相色譜進一步分離得到5個化合物，其中一個主要成分為6-姜酚。6-姜酚中含有8-羥基酮結構，理化性質不穩定，容易受到外界條件的干擾而失去活性。目前，6-姜酚的提取方法多采用化學萃取劑萃取的方法，得到的一般是不純的粗體，也有采用高效液相色譜等方法提取純度高，但是6-姜酚化學性能不穩定，提取過程中損耗較大。專利200410074545.3公開了一種從生姜中提取分離6-姜酚的方法。該方法通過制備姜油樹脂，硅膠色譜柱分離，制備粗姜酚，液相色譜分離，去除溶劑等步驟制備6-姜酚，該方法制備的6-姜酚得率低，產品不容易長期保存。專利200610161540.3公開了一種分離純化6-姜酚的方法，該方法從姜的超臨界流體萃取物中分離純化6-姜酚，包括硅膠柱色譜分離，hplc純化，重結晶的步驟，其優點是制備方法簡單，缺點是得率和純度不高，產品不容易長期保存。專利201210553119.2公開了一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法，包括以下步驟：(1)姜酚的提取濃縮：切片生姜置于小型多功能提取濃縮罐，用質量濃度為80-95％的乙醇按1∶6-15的料液質量體積比在60-80℃下加熱回流提取，提取的時間為每次2-3小時，每批生姜提取2-4次，每次提取的提取液流入所述小型多功能提取濃縮罐中，經統一濃縮得到生姜提取物；(2)姜酚萃取：將所述生姜提取物置于玻璃反應釜中，用乙酸乙酯進行萃取，萃取次數2-4次，合并得到萃取液；該萃取液經旋轉蒸發儀減壓回收得到姜酚粗提物；所述生姜提取物與所述乙酸乙酯的體積比為1∶2-4；(3)硅膠柱層析：將所述姜酚粗提物溶于乙酸乙酯，然后加入所述姜酚粗提物重量2-4倍的硅膠拌樣，溶劑乙酸乙酯揮干后，干法上硅膠柱；用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑等度洗脫，薄層層析tcl檢測，收集含有6-姜酚的洗脫液部分，用旋轉蒸發儀減壓回收所述洗脫液得到6-姜酚粗品；將所述6-姜酚粗品再次上硅膠柱，按照上述方法經洗脫、檢測、收集、回收溶劑，得到較純6-姜酚；(4)制備hplc純化：將所述步驟(3)所得的較純6-姜酚用甲醇-水混合溶劑溶解，以制備hplc純化，以甲醇-水混合溶劑作為流動相等度洗脫，收集最大色譜峰，置旋轉蒸發儀上蒸干至恒重，即得到高純度的6-姜酚。該方法得到的6-姜酚純度很低，只適合于食品和化妝品領域的應用。
技術實現要素：
本發明是為了克服上述現有技術中缺陷，提出一種從生姜中提取分離6-姜酚的方法。
一種從生姜中提取分離6-姜酚的方法，按照如下步驟進行：
(1)將生姜切成碎塊，加1-5倍重量的溶劑，于水浴回流2-4小時，傾出溶劑，再加1-3倍重量的溶劑提取1-5次，合并溶劑提取液，減壓回收溶劑，得到深棕色油狀提取物；
(2)采用200-300目層析硅膠干法裝柱，將上步提取的油狀提取物加溶劑溶解，與硅膠拌均，揮發去溶劑，裝于柱上端，再加硅膠于其上，用石油醚-醋酸乙酯洗脫，洗脫液以薄層色譜鑒別，用6-姜酚標準品對照，將相同部位合并，減壓濃縮回收醋酸乙酯，得淡黃色油狀提取物；
(3)將上步制備的淡黃色油狀提取物溶解于甲醇中，用制備型高效液相色譜儀分離純化6-姜酚；
(4)將制備型高效液相色譜儀純化的6-姜酚油狀物加正已烷回流10-30分鐘，將溶液轉移至錐形瓶中，密閉，放置于15-25℃水箱中過夜，即可析出絮狀結晶，揮去溶劑后，獲得結晶產品。
所述用制備型高效液相色譜儀分離純化6-姜酚的條件：
色譜柱：制備型十八烷基鍵合硅膠柱；
流動相：80％甲醇水溶液；
70％甲醇水溶液；
流速：1.2-2.2ml/min；
檢測：280nm紫外檢測，靈敏度0.5或示差析光檢測；
紙速：20cm/min。
所述石油醚的沸點為60-90℃。
所述石油醚-醋酸乙酯中石油醚與醋酸乙酯的體積比為6∶4。
所述溶劑為醋酸乙酯，丁酸乙酯，乙醇或甲苯。
6-姜酚產品凍存液，由如下重量份數的組分組成：維生素c20-30份，乙醇300-500份，水莎草提取物1-2份。
所述水莎草提取物的提取方法為：將新鮮水莎草莖稈在液氮中凍存，取出研磨為粉末，加3-8倍重量的70％乙醇水溶液溶解，回流提取3次，合并濾液，蒸干制成。
與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：采用本發明的方法制備的6-姜酚產率高，制備的6-姜酚生物活性高，純度高，可直接用于藥品的制備，凍存液可長期保存6-姜酚，生物活性不降低。
附圖說明
圖1是本發明6-姜酚分離提取的工藝圖。
具體實施方式
下面結合附圖，對本發明的具體實施方式進行詳細描述，但應當理解本發明的保護范圍并不受具體實施方式的限制。
實施例1
一種從生姜中提取分離6-姜酚的方法，按照如下步驟進行：
(1)溶劑提取
生姜(zingeberofficinlerosc，產地山東萊蕪，秋季采集)300克，切成碎塊，加2倍量醋酸乙酯，于水浴回流3小時，傾出醋酸乙酯，再加2倍量的醋酸乙酯提取3次，合并醋酸乙酯提取液，減壓回收醋酸乙酯，得到深棕色油狀提取物2克。
(2)低壓硅膠柱層析分離姜酚粗品
采用200-300目層析硅膠干法裝柱，將上步提取的粗提物加5ml醋酸乙酯溶解，與4g硅膠拌均，揮發去醋酸乙酯，裝于柱上端，再加3g純硅膠于其上，用石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(6∶4)洗脫，洗脫液以薄層色譜鑒別，用6-姜酚標準品對照，將相同部位合并，減壓濃縮回收醋酸乙酯，得淡黃色油狀物(約400毫克)，為姜酚粗品。
(3)高效液相色譜純化
將上步制備的姜酚粗品溶解于4毫升甲醇中，用制備型高效液相色譜儀分離純化姜酚。
色譜條件：
色譜柱：制備型十八烷基鍵合硅膠柱；
流動相：80％甲醇水溶液；
70％甲醇水溶液；
流速：1.2-2.2ml/min；
檢測：紫外檢測(280nm)靈敏度0.5或示差析光檢測；
紙速：20cm/min；
采用6-姜酚為標準品標定目標化合物的保留時間，將上步制備的姜酚粗品0.4克溶于4毫克甲醇中，每次進樣15μl，按峰收集樣品，合并后回收溶劑，得到淡黃色油狀物0.2克，此樣品中含有雜質，需要改變流動相進一步純化。
將上步的0.2克樣品溶于2毫升甲醇中，改用70％甲醇水溶液為流動相，流速1.8ml/min，其它條件不變，再進行hplc分離，按峰收集樣品，得到6-姜酚0.12克(淡黃色油狀物)。
(4)重結晶
將hplc純化的6-姜酚油狀物加80毫升正已烷回流20分鐘，將溶液轉移至100毫升錐形瓶中，密閉，放置于20℃水箱中過夜，即可析出絮狀結晶，揮去溶劑后，此結晶在室溫下(19℃)不融化。
采用本實施例的方法得率為75％，6-姜酚純度為99.6％。
為確證其化學結構，對該化合物進行了fab-ms，ei-ms，1hnmr，13cnmr，ir和uv分析，證明該化合物為6-姜酚。以前文獻報導的6-姜酚可能由于當時的分離技術所限，含有少量同系物雜質，因而熔點下降，在5℃以上為油狀物。
6-姜酚，白色結晶(正已烷)，mp.28-30℃，元素分析：c69.19％(理論值：69.29％)，h9.05％(理論值：8.9％)。fab-ms譜證明該化合物的分子量為294.3，分子式為c17h26o4
結構解析：從fab-ms和ei-msm/z(％)顯示分子離子峰為294，符合6-姜酚的分子式c17h26o4。ir(kbr)cm-1：3443.5(bs)、2929.5、2858.5、1704.3、1603.9、1515.8、1462.5、1370.5、1271.0、1240、1208.1、1152.3、1123.9、1034.3、924.0、853.2、814.8、727.2，提示分子中存在羥基、次甲基、甲基、酮基、苯環、甲氧基等；1hnmr中δ：6.82、6.68、6.65為苯環上1’、5’、6’位的三個h，4.02碳鏈上5位羥基碳的h，3.87為苯環上3’位上甲氧基的三個h，2.83為碳鏈上2位碳的二個h，2.73為碳鏈上1位碳的二個h，2.49(2h)，1.47(2h)，1.28(6h)為碳鏈上6、7、8位碳的h，0.88為碳鏈上10位碳的三個h；13cnmr(400mhz，cdcl3)δ：211.5為3位碳；120.7、114.4、146.4、144.0、132.6、111.0苯環的六個碳；55.9為甲氧基上碳；14.0為10位上的甲基碳；22.6、25.1、29.3、31.7、67.7、49.3、45.4、36.4為碳鏈1至9位的碳。從hmbc(600mhz，cdcl3)顯示，季碳δc132.6(c-1’)與δh2.73(2h，dd，h-1)、δh2.83(2h，dd，h-2)、δh6.68(1h，d，h-2’)、δh6.82(1h，d，h-5’)有相關關系；季碳δc144.0(c-4’)與δh6.68(1h，d，h-2’)、δh6.82(1h，d，h-5’)、δh6.65(1h，dd，h-6’)有相關關系；季碳δc146.4(c-3’)與δh6.68(1h，d，h-2’)、δh6.82(1h，d，h-5’)、δh3.87(3h，dd，h-11)有相關關系，證明甲氧基是連在3’位置的碳上，羥基連在4’位置的碳上。
hmbc相關譜如下所示：
從hmbc相關譜中可以看出，c1`(132.6)、c2`(111.0)、c6`(120.7)與c1-h、c2`-h相關，c1`-h、c2`-h都與羰基碳(211.5)，c2`(45.4)與c4`-h(2.57，2.49)、c4`(49.3)與c2`-h(2.79)都有相關，羰基碳(211.5)與c4`-h(2.57，2.49)、和c5`-h(4.02))都有相關，c4`(49.3)與c5`-h(4.02)c6`-h(1.47)都有相關，c5`(67.7)與c4`-h(2.57，2.49)和c6`-h(1.47)都有相關，從而說明1-6位碳的連接順序，說明醇羥基連于5位碳上。
通過以上ir、ei-ms、1hnmr、13cnmr和hmbc譜的分析，確定了苯環、碳鏈和碳鏈上羰基和羥基以及苯環上甲氧基、酚羥基的位置，從而證明我們得到的化合物為6-姜酚。其結構如下所示：
13cnmr，1hnmrdataof6-gingerol(400mhz，cdcl3)
其熔點為28～30℃，經高壓液相色譜歸一化法分析，其在一年內沒有變化。因此可作為對照品應用。
實施例2
一種從生姜中提取分離6-姜酚的方法，按照如下步驟進行：
(1)溶劑提取
生姜(zingeberofficinlerosc，產地山東萊蕪，秋季采集)300克，切成碎塊，加2倍量丁酸乙酯，于水浴回流3小時，傾出丁酸乙酯，再加2倍量的丁酸乙酯提取3次，合并丁酸乙酯提取液，減壓回收丁酸乙酯，得到深棕色油狀提取物2克。
(2)低壓硅膠柱層析分離姜酚粗品
采用200-300目層析硅膠干法裝柱，將上步提取的粗提物加5ml醋酸乙酯溶解，與4g硅膠拌均，揮發去醋酸乙酯，裝于柱上端，再加3g純硅膠于其上，用石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(6∶4)洗脫，洗脫液以薄層色譜鑒別，用6-姜酚標準品對照，將相同部位合并，減壓濃縮回收醋酸乙酯，得淡黃色油狀物(約400毫克)，為姜酚粗品。
(3)高效液相色譜純化
將上步制備的姜酚粗品溶解于4毫升甲醇中，用制備型高效液相色譜儀分離純化姜酚。
色譜條件：
色譜柱：制備型十八烷基鍵合硅膠柱；
流動相：80％甲醇水溶液；
70％甲醇水溶液；
流速：1.2-2.2ml/min；
檢測：紫外檢測(280nm)靈敏度0.5或示差析光檢測；
紙速：20cm/min；
采用6-姜酚為標準品標定目標化合物的保留時間，將上步制備的姜酚粗品0.4克溶于4毫克甲醇中，每次進樣15μl，按峰收集樣品，合并后回收溶劑，得到淡黃色油狀物0.2克，此樣品中含有雜質，需要改變流動相進一步純化。
將上步的0.2克樣品溶于2毫升甲醇中，改用70％甲醇水溶液為流動相，流速1.8ml/min，其它條件不變，再進行hplc分離，按峰收集樣品，得到6-姜酚0.12克(淡黃色油狀物)。
(4)重結晶
將hplc純化的6-姜酚油狀物加80毫升正已烷回流20分鐘，將溶液轉移至100毫升錐形瓶中，密閉，放置于20℃水箱中過夜，即可析出絮狀結晶，揮去溶劑后，此結晶在室溫下(19℃)不融化。
采用本實施例的方法得率為73％，6-姜酚純度為99.5％。
實施例3
6-姜酚產品凍存液，由如下重量份數的組分組成：維生素c25份，乙醇400份，水莎草提取物2份。
所述水莎草提取物的提取方法為：將新鮮水莎草莖稈在液氮中凍存，取出研磨為粉末，加3-8倍重量的70％乙醇水溶液溶解，回流提取3次，合并濾液，蒸干制成。
將實施例1制備的6-姜酚產品與凍存液按照1∶10的比例混合，儲存于-4℃冰箱中，1年內生物活性不降低。
實施例4
6-姜酚產品凍存液，由如下重量份數的組分組成：維生素c25份，乙醇400份，喜鹽草提取物2份。
所述喜鹽草提取物的提取方法為：將新鮮喜鹽草莖稈在液氮中凍存，取出研磨為粉末，加3-8倍重量的70％乙醇水溶液溶解，回流提取3次，合并濾液，蒸干制成。
將實施例1制備的6-姜酚產品與凍存液按照1∶10的比例混合，儲存于-4℃冰箱中，1年內生物活性不降低。
實施例5
6-姜酚產品凍存液，由如下重量份數的組分組成：維生素c25份，乙醇400份。
將實施例1制備的6-姜酚產品與凍存液按照1∶10的比例混合，儲存于-4℃冰箱中，半年內生物活性降低50％。
以上公開的僅為本發明的具體實施例，但是，本發明并非局限于此，任何本領域的技術人員能思之的變化都應落入本發明的保護范圍。