一種高效扁柏雙黃酮的制備方法與流程

本發明涉及一種高效扁柏雙黃酮的制備方法，屬植物成份提取及技術領域。

背景技術：

目前雙黃酮在醫藥化工領域中有著極為廣泛的使用，且需求量巨大，當前提取植物天然雙黃酮的工作中，主要以側柏作為主要的原料，但由于當前的提取工藝限制，在從側柏中提取雙黃酮作業中，主要是以側柏樹葉和枝梢為原料，雖然可以滿足使用需要，但對原料要求較為嚴格，從而導致原料成本相對較高，同時提取作業中，也往往也缺乏有效的提高側柏有效成份提取作業工作效率和純度的方法，因此導致當前所制備的雙黃酮中往往易含有雜質，或直接導致大量的原料浪費，從而進一步影響了雙黃酮提取作業的工作效率、產量和成本，因此針對這一問題，迫切需要開發一種全新的基于側柏的雙黃酮提取方法，以滿足實際工作的需要。

技術實現要素：

本發明目的就在于克服上述不足，提供一種高效扁柏雙黃酮的制備方法。

為實現上述目的，本發明是通過以下技術方案來實現：

一種高效扁柏雙黃酮的制備方法，包括以下步驟：

第一步，制備提取基體，截取生長旺盛且無病蟲害的側柏樹葉及當前生半木質化枝條，然后將截取的植物組織進行-10℃—0℃中風干保存，制備得到提取基體；

第二步，提取基體粉碎，完成第一步后，將獲取的提取基體在1—10分鐘內將溫度下降至-20℃—-10℃并保溫，然后將降溫后的提取基體放置到粉碎機進行粉碎，制備得到80—250目粉末狀提取基體，其中在粉碎過程中，提取基體溫度為-10℃—-5℃，然后將粉碎后粉末狀提取基體自然升溫至-5℃—5℃后保溫備用；

第三步，浸漬，將第二步制備得到的粉末狀提取基體添加到體積為粉末狀提取基體體積5—10倍的石油醚中，然后通過攪拌裝置對混合后的混合物進行單向勻速攪拌均勻，其中攪拌速度為50—300轉/分鐘，攪拌時間為1—3小時，并在攪拌前1—10分鐘內將混合物溫度升高至58℃—90℃，并對混合物進行回流作業，并分別對回流后的固體殘渣和回流后收集的混合溶液進行收集；

第四步，過濾，通過負壓過濾裝置對第三步收集到的固體殘渣和回流后收集的混合溶液分別進行固液分離過濾，然后將分離后的混合溶液進行收集并以20℃—30℃溫度進行恒溫保存，將固體殘渣返回到第三步繼續進行浸漬處理，且固體殘渣反復進行3—5次浸漬處理，然后分別將各次浸漬后得到的過濾液混合后行獨立存放，對經過過濾的固體殘渣進行0℃—5℃低溫存放，并作為后續作業原料；

第五步，萃取，將第四步制備的固體殘渣添加到微波萃取裝置中，然后向固體殘渣中添加總量為固體殘渣總量4—10倍的去離子水并攪拌均勻，然后后通過微波萃取裝置對混合物進行萃取作業，萃取作業時的萃取功率為300—600w，萃取時間為5—15分鐘，在完成萃取后，對混合物進行固液分離，然后對萃取液進行20℃—30℃溫度恒溫保存，對分離后的固體殘渣連續進行2—5次萃取作業后，將每次萃取作業后的萃取液進行混合，將最后一次萃取后的固體殘渣作為廢料無害化處理；

第六步，濃縮，將第五步得到的萃取液通過真空減壓濃縮設備進行濃縮，并得到濃度為0.1—0.5g/ml的濃縮液，其中真空減壓濃縮設備的濃縮壓力為-0.08mpa—-0.1mpa，濃縮溫度為30℃—60℃，并將濃縮液通過大孔樹脂進行吸附，并在大孔樹脂吸附完成后，用10℃—30℃去離子水進行清洗除雜；

第七步，洗脫，由60％—80％乙醇首先對第六步制備的濃縮液進行洗脫作業，且60％—80％乙醇量為第六步濃縮液量的3—5倍，然后對洗脫作業后的乙醇洗脫液進行濃縮，然后將乙醇洗脫液加到聚酰胺層析柱上，以比例為3：1的二氯甲烷—甲醇混合溶劑對乙醇洗脫液進行二次洗脫，然后再由聚酰胺膜對二次洗脫后的二次洗脫液進行收集，并對聚酰胺膜上rf＝4—4.5的二次洗脫液進行流份并回收二次洗脫液，然后對回收后的二次洗脫液中添加丙酮并混合均勻后，對二次洗脫液進行洗滌干燥，即可獲得成品。

進一步的，所述的第三步浸漬中，另通過超聲波震蕩裝置對混合物進行超聲波震蕩作業，且超聲波震蕩頻率為18—30khz。

進一步的，所述的超聲波設備的聲波傳播方向與混合物攪拌方向相反，并與混合液攪拌方向間呈30°—70°夾角，且超聲波設備至少兩個，并環繞混合液攪拌軸線均布。

進一步的，所述的第四步中，對經過過濾的固體殘渣存放時間不得超過24小時。

本發明工藝簡單，操作簡便且操作效率高，一方面可有效的提高側柏有效利用率，提高原料獲取途徑，從而達到降低原料成本和拓寬原料來源的目的，另一方面可有效的提高對側柏有效成份提取作業的精度和效率，從而達到雙黃酮提取作業的工作效率和純度的目的。

附圖說明

圖1為本發明的結構示意圖。

具體實施方式

實施例1

如圖1所示，一種高效扁柏雙黃酮的制備方法，包括以下步驟：

第一步，制備提取基體，截取生長旺盛且無病蟲害的側柏樹葉及當前生半木質化枝條，然后將截取的植物組織進行-10℃風干保存，制備得到提取基體；

第二步，提取基體粉碎，完成第一步后，將獲取的提取基體在10分鐘內將溫度下降至-10℃并保溫，然后將降溫后的提取基體放置到粉碎機進行粉碎，制備得到150目粉末狀提取基體，其中在粉碎過程中，提取基體溫度為-10℃，然后將粉碎后粉末狀提取基體自然升溫至-5℃后保溫備用；

第三步，浸漬，將第二步制備得到的粉末狀提取基體添加到體積為粉末狀提取基體體積5倍的石油醚中，然后通過攪拌裝置對混合后的混合物進行單向勻速攪拌均勻，其中攪拌速度為50轉/分鐘，攪拌時間為2小時，并在攪拌前8分鐘內將混合物溫度升高至60℃，并對混合物進行回流作業，并分別對回流后的固體殘渣和回流后收集的混合溶液進行收集；

第四步，過濾，通過負壓過濾裝置對第三步收集到的固體殘渣和回流后收集的混合溶液分別進行固液分離過濾，然后將分離后的混合溶液進行收集并以30℃溫度進行恒溫保存，將固體殘渣返回到第三步繼續進行浸漬處理，且固體殘渣反復進行3次浸漬處理，然后分別將各次浸漬后得到的過濾液混合后行獨立存放，對經過過濾的固體殘渣進行1℃低溫存放，并作為后續作業原料；

第五步，萃取，將第四步制備的固體殘渣添加到微波萃取裝置中，然后向固體殘渣中添加總量為固體殘渣總量5倍的去離子水并攪拌均勻，然后通過微波萃取裝置對混合物進行萃取作業，萃取作業時的萃取功率為600w，萃取時間為10分鐘，在完成萃取后，對混合物進行固液分離，然后對萃取液進行30℃溫度恒溫保存，對分離后的固體殘渣連續進行4次萃取作業后，將每次萃取作業后的萃取液進行混合，將最后一次萃取后的固體殘渣作為廢料無害化處理；

第六步，濃縮，將第五步得到的萃取液通過真空減壓濃縮設備進行濃縮，并得到濃度為0.1g/ml的濃縮液，其中真空減壓濃縮設備的濃縮壓力為-0.08mpa，濃縮溫度為50℃，并將濃縮液通過大孔樹脂進行吸附，并在大孔樹脂吸附完成后，用20℃去離子水進行清洗除雜；

第七步，洗脫，由75％乙醇首先對第六步制備的濃縮液進行洗脫作業，且75％乙醇量為第六步濃縮液量的4倍，然后對洗脫作業后的乙醇洗脫液進行濃縮，然后將乙醇洗脫液加到聚酰胺層析柱上，以比例為3：1的二氯甲烷—甲醇混合溶劑對乙醇洗脫液進行二次洗脫，然后再由聚酰胺膜對二次洗脫后的二次洗脫液進行收集，并對聚酰胺膜上rf＝4.5的二次洗脫液進行流份并回收二次洗脫液，然后對回收后的二次洗脫液中添加丙酮并混合均勻后，對二次洗脫液進行洗滌干燥，即可獲得成品。

本實施例中，所述的第三步浸漬中，另通過超聲波震蕩裝置對混合物進行超聲波震蕩作業，且超聲波震蕩頻率為18khz。

本實施例中，所述的超聲波設備的聲波傳播方向與混合物攪拌方向相反，并與混合液攪拌方向間呈30°夾角，且超聲波設備至少兩個，并環繞混合液攪拌軸線均布。

本實施例中，所述的第四步中，對經過過濾的固體殘渣存放時間不得超過24小時。

實施例2

如圖1所示，一種高效扁柏雙黃酮的制備方法，包括以下步驟：

第一步，制備提取基體，截取生長旺盛且無病蟲害的側柏樹葉及當前生半木質化枝條，然后將截取的植物組織進行0℃中風干保存，制備得到提取基體；

第二步，提取基體粉碎，完成第一步后，將獲取的提取基體在5分鐘內將溫度下降至10℃并保溫，然后將降溫后的提取基體放置到粉碎機進行粉碎，制備得到100目粉末狀提取基體，其中在粉碎過程中，提取基體溫度為-5℃，然后將粉碎后粉末狀提取基體自然升溫至0℃后保溫備用；

第三步，浸漬，將第二步制備得到的粉末狀提取基體添加到體積為粉末狀提取基體體積7倍的石油醚中，然后通過攪拌裝置對混合后的混合物進行單向勻速攪拌均勻，其中攪拌速度為300轉/分鐘，攪拌時間為2小時，并在攪拌前3分鐘內將混合物溫度升高至58℃，并對混合物進行回流作業，并分別對回流后的固體殘渣和回流后收集的混合溶液進行收集；

第四步，過濾，通過負壓過濾裝置對第三步收集到的固體殘渣和回流后收集的混合溶液分別進行固液分離過濾，然后將分離后的混合溶液進行收集并以30℃溫度進行恒溫保存，將固體殘渣返回到第三步繼續進行浸漬處理，且固體殘渣反復進行5次浸漬處理，然后分別將各次浸漬后得到的過濾液混合后行獨立存放，對經過過濾的固體殘渣進行0℃—5℃低溫存放，并作為后續作業原料；

第五步，萃取，將第四步制備的固體殘渣添加到微波萃取裝置中，然后向固體殘渣中添加總量為固體殘渣總量10倍的去離子水并攪拌均勻，然后通過微波萃取裝置對混合物進行萃取作業，萃取作業時的萃取功率為600w，萃取時間為5分鐘，在完成萃取后，對混合物進行固液分離，然后對萃取液進行30℃溫度恒溫保存，對分離后的固體殘渣連續進行4次萃取作業后，將每次萃取作業后的萃取液進行混合，將最后一次萃取后的固體殘渣作為廢料無害化處理；

第六步，濃縮，將第五步得到的萃取液通過真空減壓濃縮設備進行濃縮，并得到濃度為0.5g/ml的濃縮液，其中真空減壓濃縮設備的濃縮壓力為-0.1mpa，濃縮溫度為60℃，并將濃縮液通過大孔樹脂進行吸附，并在大孔樹脂吸附完成后，用30℃去離子水進行清洗除雜；

第七步，洗脫，由70％乙醇首先對第六步制備的濃縮液進行洗脫作業，且70％乙醇量為第六步濃縮液量的5倍，然后對洗脫作業后的乙醇洗脫液進行濃縮，然后將乙醇洗脫液加到聚酰胺層析柱上，以比例為3：1的二氯甲烷—甲醇混合溶劑對乙醇洗脫液進行二次洗脫，然后再由聚酰胺膜對二次洗脫后的二次洗脫液進行收集，并對聚酰胺膜上rf＝4的二次洗脫液進行流份并回收二次洗脫液，然后對回收后的二次洗脫液中添加丙酮并混合均勻后，對二次洗脫液進行洗滌干燥，即可獲得成品。

本實施例中，所述的第三步浸漬中，另通過超聲波震蕩裝置對混合物進行超聲波震蕩作業，且超聲波震蕩頻率為30khz。

本實施例中，所述的超聲波設備的聲波傳播方向與混合物攪拌方向相反，并與混合液攪拌方向間呈30°夾角，且超聲波設備至少兩個，并環繞混合液攪拌軸線均布。

本實施例中，所述的第四步中，對經過過濾的固體殘渣存放時間不得超過24小時。

本發明工藝簡單，操作簡便且操作效率高，一方面可有效的提高側柏有效利用率，提高原料獲取途徑，從而達到降低原料成本和拓寬原料來源的目的，另一方面可有效的提高對側柏有效成份提取作業的精度和效率，從而達到雙黃酮提取作業的工作效率和純度的目的。

以上顯示和描述了本發明的基本原理和主要特征和本發明的優點。本行業的技術人員應該了解，本發明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發明的原理，在不脫離本發明精神和范圍的前提下，本發明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發明范圍內。本發明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。