葉網翼藻中分離的降血糖活性肽及其用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及的是生物技術領域，具體涉及從葉網翼藻中分離得到的治療糖尿病 的活性肽。
【背景技術】
[0002] 糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或 其生物作用受損，或兩者兼有引起。糖尿病時長期存在的高血糖，導致各種組織，特別是眼、 腎、心臟、血管、神經的慢性損害、功能障礙。
[0003] 非胰島素依賴性糖尿病（NIDDM或II型糖尿病）是居美國第四位導致死亡的原 因，在全世界有5-7%的人口受它的困擾，并且在西方國家中它的影響日漸嚴重。患糖尿 病時，或者身體不能產生足夠的胰島素，或者產生的胰島素無效，導致血液中葡萄糖水平升 高，這種疾病醫學上稱為高血糖癥。盡管任何年齡的人都有可能患糖尿病，但多數糖尿病患 者的年齡超過45歲。此病似乎有家族性，并且體重超標的個體發病的危險率增加。
[0004] 糖尿病是一種慢性病，無法根治并且伴發其它幾種疾患。它是導致25-74歲年齡 段人失明的主要原因。10%的糖尿病患者并發腎病。糖尿病是導致非創傷性下肢切除最常 見的原因。糖尿病患者腿切除的危險率增加30倍。糖尿病患者并發心臟疾病的危險率增 力口 2-4倍，并且中風的可能性增加5倍。
[0005] 導致糖尿病的原因還不清楚，遺傳因素和環境因素似乎均起作用。有兩種糖尿病： 胰島素依賴性（I型）和非胰島素依賴性（II型）。I型糖尿病是自身免疫疾病，常發生于 兒童和青年。導致I型糖尿病的自身抗原還不知道，患者的存活依賴每日靜脈注射胰島素。
[0006] II型糖尿病是由于機體不能產生足夠量的胰島素或者雖然能產生胰島素但是不 能恰當地使用從而導致的新陳代謝疾病，它被認為是最常見的糖尿病類型。盡管知道缺乏 胰島素的分泌和對胰島素的抗性是導致II型糖尿病的主要原因，但是其中的精確的遺傳 因素目前還不清楚。糖尿病患者通常有下列一種或幾種缺陷。它們是：胰臟產生的胰島 素過少；肝臟分泌的葡萄糖過量；骨骼肌利用葡萄糖功能障礙；葡萄糖轉運蛋白（Glut-1， Glut-2)功能障礙；胰島素受體失敏和多糖代謝分解功能障礙。
[0007] 申請人通過研究發現，葉網翼藻通過小鼠喂食實驗，該藻類具有較好的降低血糖 的效果。為了進一步的研究究竟是什么物質起到降糖的作用，申請人通過提取實驗發現了 一系列的小肽具有較好的降血糖的效果。
【發明內容】
[0008] -方面本發明涉及一類降血糖多肽。其結構具有以下形式： YWYZ-03 :QQQPDGSSEGNHPQCDHM YWYZ-04 ：CSRVQPSGSHCDVMNRPL YWYZ-07 ：PSSMHGRPDCMNSRGSSGPRLD YWYZ-09 :APGMCCCSPVnMNSPTV YWYZ-10 ：QTPADNCCLIGSRVPQTTAA YWYZ-12 :CCDVPSFQGSRVDCMNVGSS YWYZ-13 ：NVPPGSFDCCAMNPPGSVVAR YWYZ-16 ：VGSSILLPHGSSFDVQQTPA YWYZ-20 :CPGSRVARGSPHIPTDCCDV YWYZ-22 JIPVREQPPHHIPASGSRVHIIQ 另一方面，本發明提供一種分離所述多肽的方法，將葉網翼藻先用PBS緩沖液清洗，然 后用10mm〇l/L HC1溶液勻漿在特定的39攝氏度條件下制備成粗制液；（2)將步驟⑴所 得粗制液用7000轉/分鐘離心20分鐘，收集上清液，將上清液用三層紗布過濾，用葡聚糖 G-50(SephadexG-50) (1. 5cmX 90cm)分離，20mmol/L HC1 溶液洗脫，流速 1. 3mL/ 分鐘，收 集洗脫產物，調節溶液至PH6. 0?7. 0,10000轉/分鐘離心15分鐘，上清液冷凍干燥備用； 經十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE)，回收小分子量的條帶，經過驗證，獲 得了 27個小的多肽，經過試驗證實了其中有10個具有較好的生物學活性。
[0009] 另一方面，本發明提供一種藥物組合物，所述的組合物含有如上所述的體多肽。
[0010] 如上所述的藥物組合物，其還含有還包含一種或多種藥學上可接受的載體；優 選地，所述藥學上可接受的載體選自：水溶性填充劑、pH調節劑、穩定劑、注射用水和滲透 壓調節劑； 更優選地，所述水溶性填充劑選自以下的一種或幾種：甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨 醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖和半乳糖； 更優選地，所述pH調節劑為生理可接受的酸、堿和/或鹽，優選選自以下的一種或幾 種： 非揮發性酸如枸櫞酸、磷酸、乳酸、酒石酸或鹽酸，堿如氫氧化鉀、氫氧化鈉或氫氧化鉀 或氫氧化銨，鹽如碳酸鈉或碳酸鉀或碳酸銨鹽，碳酸氫鈉或碳酸氫鉀或碳酸氫銨鹽； 更優選地，所述穩定劑為選自以下的一種或幾種：EDTA-2Na、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸 鈉、亞硫酸鈉、磷酸氫二鉀、碳酸氫鈉、碳酸鈉、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇 4000、十二烷基硫酸鈉或三羥甲基氨基甲烷等，進一步優選自：焦亞硫酸鈉、磷酸氫二鉀、 精氨酸、聚乙二醇6000、三羥甲基氨基甲烷中的一種或幾種； 更優選地，所述滲透壓調節劑選自氯化鈉和/或氯化鉀。
[0011] 本發明再一方面還提供上述多肽在制備治療糖尿病的藥物中的應用。
[0012] 并且，所述藥物組合物優選為注射劑，更優選地為凍干粉針或溶液注射劑。
[0013] 本發明的又一方面還提供一種藥物組合物，包含上述所述的突變體多肽。
[0014] 優選地，還包含可接受的輔料成分。
[0015] 發明的優點在于： .提供了一種多肽能夠提高降糖活性，同時具有較好的穩定性。
【具體實施方式】
[0016] 實施例1多肽的分離 將葉網翼藻先用PBS緩沖液清洗，然后用10mm〇l/L HC1溶液勻漿在特定的39攝氏度條 件下制備成粗制液；（2)將步驟（1)所得粗制液用7000轉/分鐘離心20分鐘，收集上清液， 將上清液用三層紗布過濾，用葡聚糖G_50(Sephadex G-50) (1.5cmX90cm)分離，20mmol/L HC1溶液洗脫，流速1. 3mL/分鐘，收集洗脫產物，調節溶液至pH6. 0?7. 0,10000轉/分鐘離 心15分鐘，上清液冷凍干燥備用；經十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE)， 回收小分子量的條帶，經過驗證，獲得了 27個小的多肽，經過試驗證實了其中有10個具有 較好的生物學活性。
[0017] 實施例2多肽對正常小鼠血糖的影響 小鼠隨機分為12組，每組10只.禁食過夜后，正常對照組皮下注射蒸餾水0. 2 mL，其余11組小鼠分別皮下注射樣品多肽各0. 2mL，最后1組口腔灌胃樣品1 0. 2 mL. 2 h后尾部取血，測rfn糖侑.結里嘰衷
【主權項】
1. 一種降血糖多肽，其特征在于：來源于葉網翼藻。
2. 如權利要求1所述的降血糖多肽，其特征在于：其序列如SEQ ID NO :1-10任一項所 /Jn 〇
3. 權利要求1-2任一項所述的多肽在制備用于降低血糖的藥物組合物中的用途。
4. 按照權利要求3的用途，其中所述的藥物針對的病癥為糖尿病。
【專利摘要】本發明提供了葉網翼藻的多肽,它的制備方法及在治療高血糖癥中的使用方法。所述多肽有降血糖作用,口服給藥后也有這種活性。同時提供的還有利用這些活性藥物治療高血糖疾病的方法,尤其是糖尿病,其中優選口服給予這些活性藥物。
【IPC分類】A61K38-16, A61P3-10, C07K7-08, A61K38-10, C07K14-405
【公開號】CN104592368
【申請號】CN201510069168
【發明人】馬淑娟
【申請人】馬淑娟
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2015年2月10日