用于鑒別寧夏水稻品種的引物組合物及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及鑒別水稻品種技術領域，特別涉及用于鑒別寧夏水稻品種的引物組合 物及其應用。
【背景技術】
[0002] 傳統的品種鑒定是根據種子、幼苗及植株的形態特征和農藝性狀進行鑒定的，主 要測試品種的特異性、一致性和穩定性。這些鑒定方法存在時間長、費用大、占用土地等應 用局限性問題，同時這種方法也只適用于品種間差異明顯的樣品的鑒定。利用分子技術進 行品種鑒定具有不受環境影響、快速高效、可用標記多等優點。基于PCR技術的SSR標記具 有多態豐富、共顯性、穩定、技術簡單易行、成本低等特性，目前是構建指紋圖譜有效鑒別品 種真實性的理想標記。
[0003] 參照NY/T 1433-2014《水稻品種鑒定技術規程SSR標記法》提供的48對引物，對 寧夏47份水稻品種（系）進行分析，結果表明，48對引物中21對引物沒有多態性；利用其 余27對引物對參試材料比較分析，只有34份品種能夠被區分（品種間有2對或2對引物 以上差異），占參試材料的72. 3% ;而表型相似的品種如寧粳41和富源4號，寧粳28、寧粳 23、寧粳35,寧香稻2號、寧香稻3號等均不能區分。由此可見，由于寧夏水稻遺傳基礎狹 窄，品種間遺傳差異性較小，NY/T 1433-2014《水稻品種鑒定技術規程SSR標記法》不能對 寧夏水稻品種進行完全有效的鑒定。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一種用于鑒別寧夏水稻品種的引物組合物及其應用。
[0005] 本發明提供的用于鑒別寧夏水稻品種的引物組合物，主要由RM1195、RM3482、 RM208、RM8208、RM5473、RM430、RM1370、RM336、RM6670、RM223、RM219、RM333、RM536 和 RM1337引物對組成；
[0006] 所述RM1195引物對由序列1和序列2所示DNA組成的引物對；
[0007] 所述RM3482引物對由序列3和序列4所示DNA組成的引物對；
[0008] 所述RM208引物對由序列5和序列6所示DNA組成的引物對；
[0009] 所述RM8208引物對由序列7和序列8所示DNA組成的引物對；
[0010] 所述RM5473引物對由序列9和序列10所示DNA組成的引物對；
[0011] 所述RM430引物對由序列11和序列12所示DNA組成的引物對；
[0012] 所述RM1370引物對由序列13和序列14所示DNA組成的引物對；
[0013] 所述RM336引物對由序列15和序列16所示DNA組成的引物對；
[0014] 所述RM6670引物對由序列17和序列18所示DNA組成的引物對；
[0015] 所述RM223引物對由序列19和序列20所示DNA組成的引物對；
[0016] 所述RM219引物對由序列21和序列22所示DNA組成的引物對；
[0017] 所述RM333引物對由序列23和序列24所示DNA組成的引物對；
[0018] 所述RM536引物對由序列25和序列26所示DNA組成的引物對；
[0019] 所述RM1337引物對由序列27和序列28所示DNA組成的引物對。
[0020] 本發明所述的用于鑒別寧夏水稻品種的引物組合物，還包括RM297、RM525、RM251、 RM8277、RM5414、RM249、RM253、RM528、RM481、RM72、RM160、RM7217、RM224、RM247 引物對；
[0021] 所述RM297引物對由序列29和序列30所示DNA組成的引物對；
[0022] 所述RM525引物對由序列31和序列32所示DNA組成的引物對；
[0023] 所述RM251引物對由序列33和序列34所示DNA組成的引物對；
[0024] 所述RM8277引物對由序列35和序列36所示DNA組成的引物對；
[0025] 所述RM5414引物對由序列37和序列38所示DNA組成的引物對；
[0026] 所述RM249引物對由序列39和序列40所示DNA組成的引物對；
[0027] 所述RM253引物對由序列41和序列42所示DNA組成的引物對；
[0028] 所述RM528引物對由序列43和序列44所示DNA組成的引物對；
[0029] 所述RM481引物對由序列45和序列46所示DNA組成的引物對；
[0030] 所述RM72引物對由序列47和序列48所示DNA組成的引物對；
[0031] 所述RM160引物對由序列49和序列50所示DNA組成的引物對；
[0032] 所述RM7217引物對由序列51和序列52所示DNA組成的引物對；
[0033] 所述RM224引物對由序列53和序列54所示DNA組成的引物對；
[0034] 所述RM247引物對由序列55和序列56所示DNA組成的引物對。
[0035] 所述的引物組合物可用于鑒別寧夏水稻品種。本發明以寧夏審定且確認的44份 品種和3份已完成生產試驗待審定的品系為材料，通過篩選的28對核心引物鑒定判別，能 夠較好的將各品種區分開來。尤其是能夠區分表型性狀不易判別的品種，如寧粳41和富源 4號，寧粳35號和寧粳28號，寧粳36號和寧粳47號等。
[0036] 本發明還保護一種用于鑒別寧夏水稻品種的試劑盒。所述試劑盒中，還可包括用 于提取基因組DNA的試劑和/或用于PCR擴增的試劑。所述試劑盒中的各個組分可為液體， 也可為凍干粉。
[0037] 本發明還保護一種應用所述引物組合物鑒別寧夏水稻品種的方法，包括如下步 驟：以待測水稻的DNA基因組為模板，分別用所述RM1195、所述RM3482、所述RM208、所述 冊8208、所述冊5473、所述冊430、所述冊1370、所述冊336、所述冊6670、所述冊223、所述 RM219、所述RM333、所述RM536和所述RM1337引物對進行PCR擴增，獲得PCR擴增產物；將 所述PCR擴增產物進行電泳、染色及鑒定。
[0038] 當樣品間檢測出的差異位點數小于2時，以待測水稻品種DNA基因組為模板，分別 用所述RM297、所述RM525、所述RM251、所述RM8277、所述RM5414、所述RM249、所述RM253、 所述RM528、所述RM481、所述RM72、所述RM160、所述RM7217、所述RM224、所述RM247引物 對進行PCR擴增，獲得PCR擴增產物；將所述PCR擴增產物進行電泳、染色及鑒定。
[0039] 利用本發明中的28對核心引物，參試的47份品種（系）中，除寧粳23號和寧粳 28號、寧粳23號和寧粳35號各有1對引物差異，判別為相似品種外，其余品種間均有2對 或2對以上引物差異，品種間能夠被區分。本發明確定的前14對引物可以區分參試47份 材料中的42份，占89. 4%。具有靈敏度高、分辨力好、結果準確可靠等優點。
[0040] 本發明技術方案的制定，使寧夏水稻品種鑒定在分子水平上有標準可循，與表型 鑒定相結合，在品種審定方面，有利于仿冒雷同品種的檢出；可以對待審定品種和審定品種 進行有效的判別，填補了利用分子標記技術判別寧夏水稻品種的空白。在品種保護、市場監 管、生產利用等方面，有利于防止套牌、假種子等的危害，保護育種家及農戶的合法權益。因 此，本發明的實施具有良好的社會效益。
【具體實施方式】
[0041] 下面將結合本發明中的實施例，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地 描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發 明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施 例，都屬于本發明保護的范圍。
[0042] 本發明參試的47份品種（系）是通過2年表型鑒定試驗仔細甄別，確保了品種的 真實性。
[0043] 實施例1 :
[0044] (一）、田間鑒定
[0045] 1、將構建指紋圖譜的材料（來源于寧夏目前審定的水稻品種及優異品系60份） 育秧后單本插值。田間管理同大田生產。逐株編號掛牌，調查各農藝性狀，并參考楊占烈等 田間鑒定方法鑒定并記載雜株類型。
[0046] 2、成熟時去除邊