肝素鈉純化方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及肝素鈉的生產方法，具體涉及一種親和層析純化肝素鈉的方法。
【背景技術】
[0002]粗品肝素中含有其它黏多糖，也含有一些殘余的蛋白質和核酸類物質，從而使粗品肝素的效價過低。目前，在肝素提取純化方面，主要采用有機溶劑(如乙醇、丙酮等)分步沉淀法、氧化純化法、酶解輔助純化法、離子交換法、親和層析法等。這些方法各有特點，但也都有些不足之處，有的表現為產品在線時間長，有的表現為分離不完全，特別是粗品肝素中的硫酸皮膚素、硫酸軟骨素等有關物質去除效果很難達到藥典要求。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在于:提供一種肝素鈉純化方法，以共價結合的瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III為層析介質，運用親和層析的原理純化肝素鈉粗品，去除硫酸皮膚素及硫酸軟骨素，得到效價大于180UUSp/mg的高純肝素鈉，其中硫酸皮膚素及硫酸軟骨素等相關物質含量遠小于藥典規定的含量要求。
[0004]本發明的技術解決方案是:以共價結合的瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III為層析介質，用平衡液溶解粗品肝素，緩慢通過親和層析介質，循環吸附3次；吸附完成后，用2-3個柱體積的洗滌液洗滌；再用2個柱體積的洗脫液將肝素洗下；最后加入提取液乙醇，攪拌，沉淀，脫水，過濾，烘干，得效價大于180Uusp/mg的高純肝素鈉。
[0005]其中，平衡液中含0.15MNaCl、20mM Tris-HCl, pH7.5。
[0006]其中，洗滌液中含1.2-1.5MNaCl、20mM Tris-HCl, ρΗ7.5。
[0007]其中，洗脫液中含2MNaCl、20mM Tris-HCl，ρΗ7.5。
[0008]其中，提取液乙醇的質量濃度是94%，其體積是洗脫液體積的1.0-1.5倍，沉淀8-10小時。
[0009]本發明的優點在于:1、粗品肝素經一步純化就將硫酸皮膚素及硫酸軟骨素等相關物質的含量降低到藥典的要求，極大地提高了生產效率；2、瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III層析介質經再生后，可重復使用。
【具體實施方式】
[0010]下面結合具體實施例進一步說明本發明的技術解決方案，這些實施例不能理解為是對技術方案的限制。
[0011]實施例1:取粗品肝素鈉(來源于豬)2克，用10ml (0.15MNaCl,20mM Tris-HCl,pH7.5)平衡液溶解,緩慢通過瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III親和層析介質(2ml/min),循環吸附3次；吸附完成后，用2-3個柱體積的洗滌液(1.2MNaCl,20mM Tris-HCl,pH7.5)洗滌；再用2個柱體積的洗脫液(2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5)將肝素洗下；最后按洗脫液的體積加入洗脫液體積1.5倍的質量濃度94%的乙醇，攪拌，沉淀10小時，脫水，過濾，烘干，得效價大于180UUSp/mg的高純肝素鈉。硫酸皮膚素及硫酸軟骨素等相關物質的液相色譜峰面積僅為對照品的1/5，符合藥典要求。
[0012]實施例2:取粗品肝素鈉(來源于豬)1.8克，用100ml(0.15MNaCl,20mM Tris-HCl,pH7.5)平衡液溶解,緩慢通過瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III親和層析介質(2ml/min),循環吸附3次；吸附完成后，用2-3個柱體積的洗滌液(1.35MNaCl,20mM Tris-HCl, ρΗ7.5)洗滌；再用2個柱體積的洗脫液(2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5)將肝素洗下；最后按洗脫液的體積加入洗脫液體積1.25倍的質量濃度94%的乙醇，攪拌，沉淀9小時，脫水，過濾，烘干，得效價大于185Uusp/mg的高純肝素鈉。硫酸皮膚素及硫酸軟骨素等相關物質的液相色譜峰面積僅為對照品的1/6，符合藥典要求。
[0013]實施例3:取粗品肝素鈉(來源于牛)1.5克，用100ml(0.15MNaCl,20mM Tris-HCl,pH7.5)平衡液溶解,緩慢通過瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III親和層析介質(2ml/min),循環吸附3次；吸附完成后，用2-3個柱體積的洗滌液(1.5MNaCl,20mM Tris-HCl,pH7.5)洗滌；再用2個柱體積的洗脫液(2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5)將肝素洗下；最后按洗脫液的體積加入洗脫液體積1.0倍的質量濃度94%的乙醇，攪拌，沉淀8小時，脫水，過濾，烘干，得效價大于190UuSp/mg的高純肝素鈉。液相色譜圖中未見硫酸皮膚素及硫酸軟骨素等相關物質的峰，符合藥典要求。
【主權項】
1.肝素鈉純化方法，其特征是:以共價結合的瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III為層析介質，用平衡液溶解粗品肝素，緩慢通過親和層析介質，循環吸附3次；吸附完成后，用2-3個柱體積的洗滌液洗滌；再用2個柱體積的洗脫液將肝素洗下；最后加入提取液乙醇，攪拌，沉淀，脫水，過濾，烘干，得效價大于180Uusp/mg的高純肝素鈉。
2.根據權利要求1所述的肝素鈉純化方法，其特征是:所述平衡液中含0.15MNaCl、20mM Tris-HCl, ρΗ7.5。
3.根據權利要求1所述的肝素鈉純化方法，其特征是:所述洗滌液中含1.2-1.5MNaCl、20mM Tris-HCl, ρΗ7.5。
4.根據權利要求1所述的肝素鈉純化方法，其特征是:所述洗脫液中含2MNaCl、20mMTris-HCl，ρΗ7.5。
5.根據權利要求1所述的肝素鈉純化方法，其特征是:所述提取液乙醇的質量濃度是94%，其體積是洗脫液體積的1.0-1.5倍，沉淀8-10小時。
【專利摘要】本發明公開了一種肝素鈉純化方法，以共價結合的瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III為層析介質，用平衡液溶解粗品肝素，緩慢通過親和層析介質，循環吸附3次；吸附完成后，用2-3個柱體積的洗滌液洗滌；再用2個柱體積的洗脫液將肝素洗下；最后加入提取液乙醇，攪拌，沉淀，脫水，過濾，烘干，得效價大于180Uusp/mg的高純肝素鈉。本發明的粗品肝素經一步純化就將硫酸皮膚素及硫酸軟骨素等相關物質的含量降低到藥典的要求，極大地提高了生產效率，而且瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III層析介質經再生后，可重復使用。
【IPC分類】C08B37-10
【公開號】CN104672349
【申請號】CN201510096620
【發明人】李亞仲
【申請人】淮安麥德森制藥有限公司
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2015年3月5日