一株降解含酯鍵農藥的銅綠假單胞菌菌株的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及應用環境微生物和農業領域。更具體地，涉及一株降解含醋鍵農藥的 銅綠假單胞菌菌株。
【背景技術】
[0002] 農藥的大量、頻繁使用已給生態環境和人類健康帶來嚴重危害，特別是擬除蟲菊 醋類殺蟲劑和甲氧基丙帰酸醋類殺菌劑的廣泛使用帶來的農藥殘留污染問題不容忽視。該 兩類農藥均是結構上含有醋鍵的農藥，是目前農藥市場上的主要類型。大量研究表明，該兩 類農藥殘留不但對非祀標生物如蜜蜂、魚類和水生無脊椎動物等造成極大的危害，而且對 人類和其他哺乳動物具有慢性毒性，長期接觸或攝入該兩類農藥將導致慢性疾病，甚至有 致癌、致崎、致突變的危險。因此，消除環境中的擬除蟲菊醋類和甲氧基丙帰酸醋類農藥殘 留污染已成為科研工作者亟待解決的具有重大經濟和社會意義的科研命題。
[0003] 近年來，隨著人們生活水平的提高，人們迫切需要無農藥殘留污染的綠色食品和 清潔環境。而在農業生產過程中農藥也不可減少。因此，尋求高效、安全、經濟的農藥殘留 處理新技術，解決病蟲害防治用藥與農藥殘留的矛盾，顯得尤為必要。生物降解是農藥殘留 治理的新領域、新途徑，與傳統的物理化學方法相比具有操作簡便、經濟實用、環境友好等 優點，擁有廣闊的應用前景。國際上已有利用微生物成功治理石油污染的先例。國內的北 京佳農新貿易發展有限公司已成功生產"比亞"降解酶制劑用于治理有機磯類農藥污染。但 是，目前還沒有專口針對含醋鍵農藥的微生物及其生物降解制劑產品。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于針對現有技術的上述不足，提供一株降解含醋鍵農藥的銅綠假 單胞菌菌株。該菌株能有效降解高效氯氯菊醋、高效氯氣氯菊醋、漠氯菊醋、氯氯菊醋、甲氯 菊醋、聯苯菊醋、離菌醋、化哇離菊醋和嚼菌醋等含有醋鍵的農藥，因此，該菌株在水體、± 壤等環境中的農藥殘留去除方面具有非常重要的應用價值。
[0005] 本發明另一目的是提供上述菌株在制備降解含醋鍵農藥的制劑中的應用。
[0006] 本發明另一目的是提供一種降解含醋鍵農藥的制劑。
[0007] 本發明另一目的是提供上述菌株在降解含醋鍵農藥中的應用。
[0008] 本發明上述目的通過W下技術方案實現： 一株降解含醋鍵農藥的銅綠假單胞菌aerwinosa)菌株PA01，所述菌 株于2014年12月5日保藏于中國典型培養物保藏中也（CCTCC)，保藏號是CCTCC NO: M 2014630。所述中國典型培養物保藏中也的地址為湖北省武漢市武漢大學。
[000引 所述銅綠假單胞菌aerwinosa)菌株PA01通過富集培養法對野生 型菌株進行反復篩選復壯而來，使其具有高度耐藥、降解穩定的能力。
[0010] 所述銅綠假單胞菌aerwifliosa)菌株PA01在LB固體平板中生長 較快，菌落形態為黃綠色、中央凸起、邊緣扁平。通過生理生化特性測定，顯示該菌株屬于革 蘭氏陰性桿菌，好氧，氧化酶、明膠液化、硝酸鹽還原反應陽性；剛巧反應陰性。該菌可分解 利用葡萄糖和木糖；不分解利用藏糖和乳糖。
[0011] 本發明通過研究發現，銅綠假單胞菌（Aew/offlmas aerwinosa)菌株PA01能有 效降解高效氯氯菊醋、高效氯氣氯菊醋、漠氯菊醋、氯氯菊醋、甲氯菊醋、聯苯菊醋、離菌醋、 化哇離菌醋和嚼菌醋等含有醋鍵的農藥，因此本發明要求保護菌株PA01在制備降解含醋 鍵農藥的制劑中的應用。
[0012] 一種降解含醋鍵農藥的制劑，含如上所述的銅綠假單胞菌菌株PA01和其他輔劑。
[0013] 所述菌株在降解水體或±壤中含醋鍵農藥的應用。
[0014] 與現有技術相比，本發明具有W下有益效果： 1.本發明提供了一株銅綠假單胞菌aerwinosa)菌株PA01,經試驗證 明，該菌株能在短時間內有效降解高效氯氯菊醋、高效氯氣氯菊醋、漠氯菊醋、氯氯菊醋、甲 氯菊醋、聯苯菊醋、離菌醋、化哇離菌醋和嚼菌醋等含有醋鍵的農藥，降解效率高。
[001引 2.本發明提供的銅綠假單胞菌菌株PA01環境適應性強，使用方便，因此，該菌株 在修復農藥殘留污染的水體、±壤等環境方面具有非常重要的應用價值。
【附圖說明】
[0016] 圖1.菌株PA01降解高效氯氯菊醋產生明顯透明圈。
[0017] 圖2.菌株PA01隨時間降解高效氯氯菊醋（100 y g/mL)的HPLC色譜圖。
[0018] 圖3.菌株PA01降解不同濃度高效氯氯菊醋的比降解速率。
【具體實施方式】
[0019] 下面結合說明書附圖和具體實施例來進一步詳細闡述本發明。W下實施例為本 發明較佳的實施方式，但并不對本發明的保護范圍做任何形式的限定。本發明主要闡述所 述菌株W及基于所述菌株的應用思想，實施方式中簡單參數的替換不能一一在實施例中費 述，但并不因此限制本發明，其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修 飾、替代、組合、簡化，應被視為等效的置換方式，都應包含在本發明范圍內。
[0020] 除非特別說明，本發明采用的試劑、方法和設備為本技術領域常規試劑、方法和設 備。除非特別說明，本發明所用試劑和材料均為市購。
[002。 實施例1菌株PA01的富集培養 本發明人通過富集培養法對野生型菌株PA01進行反復篩選復壯，使具有高度耐藥、降 解穩定的能力。用來富集培養的培養基為基礎培養基(配方為；(NH4)2S04，2 g; M拆04，0.2 g; CaCl], 0.01 g; FeS〇4, 0.005 g; MnCl；^, 0.002 g; K2HPO4, 10. 5 g;皿2口〇4, 4.5 g, 蒸觸水1000 mL，pH 7. 5)。同時加入高效氯氯菊醋原藥母液值MSO為溶劑），使高效氯氯菊 醋初始質量濃度為50 113/111以于30 ° C、150 r/min搖床下進行富集培養。培養7 d后， 按10%的接種量轉接到第二批含100 yg/mL高效氯氯菊醋的基礎培養基中。相同條件培 養7 d后，再按10%的接種量轉接到含高效氯氯菊醋為200 y g/mL的基礎培養基中，繼續 培養7 d。W此類推，不斷增加農藥的選擇壓力，反復篩選。最后取0.2 mL基礎培養基發酵 液均勻涂抹到含高效氯氯菊醋的固體平板中反復進行劃線分離，直至得到單菌落，并使用 高效液相色譜法（WLC )驗證其降解效果。
[0022] 將所述菌株保藏于中國典型培養物保藏中也（CCTCC)，保藏日期是2014年12月5 日，保藏號是CCTCC M 2014630,所述菌株命名為銅綠假單胞菌（Aew/offlmas aerwinosa) 菌株PAOl。
[0023] 所述中國典型培養物保藏中也的地址為湖北省武漢市武漢大學。
[0024] 實施例2菌株PA01的生理生化特性 所述銅綠假單胞菌aerwinosa)菌株PA01在LB固體平板中生長較快， 菌落形態為黃綠色、中央凸起、邊緣扁平。通過生理生化特性測定，顯示該菌株屬于革蘭氏 陰性桿菌，好氧，氧化酶、明膠液化、硝酸鹽還原反應陽性；剛巧反應陰性。該菌可分解利用 葡萄糖和木糖；不分解利用藏糖和乳糖。
[002引實施例3菌株PA01降解農藥試驗 在基礎培養基（同實施例1)中分別加入高效氯氯菊醋、高效氯氣氯菊醋、漠氯菊醋、氯 氯菊醋、甲氯菊醋、聯苯菊醋、離菌醋、化哇離菌醋和嚼菌醋，使其終濃度為100 y g/mL ;接 種量為0.2 g/L，并設不接菌的培養基為對照，30 ° C培養0~5 d，定期取樣，應用HPLC檢 測農藥的殘留量并計算降解率，結果見表1所示。結果表明，菌株PA01在短時間內可有效降 解高效氯氯菊醋、高效氯氣氯菊醋、漠氯菊醋、氯氯菊醋、甲氯菊醋、聯苯菊醋、離菌醋、化哇 離菌醋和嚼菌醋，5 d內對上述農藥的降解率分別達到91. 4%、86. 1%、84. 5%、82. 8%、70. 2%、 52. 2%、87. 7%、86. 3%和68. 0%，具有較好的生物降解效果。
【主權項】
1. 一株降解含酯鍵農藥的銅綠假單胞菌aerygifliosa)菌株PA01，其特 征在于，所述菌株于2014年12月5日保藏于中國典型培養物保藏中心（CCTCC)，保藏號是 CCTCC M 2014630。
2. 根據權利要求1所述菌株，其特征在于，所述菌株的菌落形態為黃綠色、中央凸起、 邊緣扁平。
3. 根據權利要求1所述菌株，其特征在于，所述含酯鍵農藥為高效氯氰菊酯、高效氯氟 氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、甲氰菊酯、聯苯菊酯、醚菌酯、吡唑醚菌酯或嘧菌酯中的一種 或多種。
4. 權利要求1或2所述菌株在制備降解含酯鍵農藥的制劑中的應用。
5. -種降解含酯鍵農藥的制劑，其特征在于，含有權利要求1所述的銅綠假單胞菌菌 株PA01和其他輔劑。
6. 權利要求1或2所述菌株在降解含酯鍵農藥中的應用。
7. 根據權利要求6所述的應用，其特征在于，權利要求1或2所述菌株在降解水體或土 壤中含酯鍵農藥的應用。
【專利摘要】本發明屬于應用環境微生物和農業領域，具體公開了一株降解含酯鍵農藥的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)菌株PAO1，菌種保藏號為CCTCC M 2014630。所述菌株降解譜廣，可降解高效氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、甲氰菊酯、聯苯菊酯、醚菌酯、吡唑醚菌酯和嘧菌酯等含有酯鍵的農藥。該菌株環境適應性強，降解效果好，使用方便，可用于降解含有酯鍵的農藥，在水體、土壤等環境中的農藥殘留去除方面具有非常重要的應用價值。CCTCC NO: M 201463020141205
【IPC分類】B09C1-10, C12R1-385, C02F3-34, C12N1-20
【公開號】CN104673704
【申請號】CN201410774238
【發明人】張煉輝, 陳少華, 常長青, 鄧音樂, 劉詩胤
【申請人】華南農業大學
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2014年12月16日