精子選擇方法及載體的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及遺傳技術領域，尤其涉及一種精子類型的選擇方法、基于遺傳性狀的精子選擇方法以及載體。
【背景技術】
[0002]人工輔助生殖技術中，有些性連鎖的遺傳疾病需要進行胚胎性別控制，目前，用于人類生殖輔助的性別控制方法是植入前遺傳選擇，即所謂的第三代試管嬰兒技術。這一方法是在早期胚胎階段從發育中的胚胎中抽取少量遺傳物質，體外擴增后診斷分析標本是否攜帶目標基因，同時可以確認胚胎性別。這一方法是有創方法，操作損傷的結果是有些早期胚胎停止發育，因而導致臨床種植率降低。
[0003]針對性連鎖遺傳的胚胎性別控制，精子類型的選擇是更合理的方法。但目前常用的人類精子類型選擇都是概率選擇，比如上游法、梯度離心法、流式細胞術等等，用于授精的精子標本是包含大量精子的細胞集群，這一細胞集群內X精子和Y精子的比率會有偏移，不是1:1，但肯定有非目標類型的精子摻雜。使用流式細胞術分離人類精子，需加入熒光劑沾染精子，這對胚胎發育的遠期影響難以評估，而且，由于人類X和Y類型精子的形態差異不明顯，流式細胞術對人類精子類型的選擇也不能避免非目標類型的精子摻雜，流式細胞術處理后的人類精子標本中，非目標類型精子數量還是約占比30 %。
【發明內容】
[0004]本發明的實施例提供的精子類型的選擇方法、基于遺傳性狀的精子選擇方法以及載體可以在授精前精確確認特定單個精子的類型，通過單精子卵胞漿內注射操作完成授精，以精子類型來控制胚胎性別或性狀，無需對發育中的胚胎進行遺傳檢查。
[0005]本發明實施例提供了一種精子類型的選擇方法，能夠精確確認特定單個精子的類型，提高精子類型選擇的準確率。該方法包括步驟:
[0006]S1、提供一載體，所述載體表面為超疏水親油表面，所述載體表面上設有--對應的第一親水表面收集區域及第二親水表面收集區域；
[0007]S2、將斷離尾部的精子放置在所述載體的第一親水表面收集區域內，并將所述精子的尾部放置在與所述第一親水表面收集區域對應的第二親水表面收集區域內；
[0008]S3、檢驗所述第二親水表面收集區域內的精子尾部，篩選包目標精子表達特異蛋白的精子尾部；
[0009]S4、根據包含目標精子表達特異蛋白的尾部找出所對應性狀的第一親水表面收集區域內的精子，完成精子類型的選擇。
[0010]在另一個優選實施例中，在所述步驟S2后，還包括步驟:
[0011]S21、將適量的精子玻璃化冷凍保護劑加入到第一親水表面收集區域。
[0012]作為上述方案的改進，所述載體中設有易于分離的線狀連接結構，在所述步驟S2后，還包括步驟:
[0013]S22、通過所述線狀連接結構將所述載體分離成兩部分，使所述第一親水表面收集區域全部位于一部分，而所述第二親水表面收集區域全部位于另一部分；
[0014]S23、將分離后的第一親水表面收集區域投入液氮中，以完成精子冷凍。
[0015]作為上述方案的改進，在所述步驟S4后，還包括步驟:
[0016]S5、解凍所述載體中的第一親水表面收集區域，復蘇冷凍的精子；
[0017]S6、將所選擇的規定性狀的精子進行單精子卵胞漿內注射，完成授精。
[0018]本發明實施例還公開了一種載體，所述載體表面為超疏水親油表面，所述載體表面上設有一一對應的第一親水表面收集區域及第二親水表面收集區域。
[0019]其中，所述載體為透明狀；所述載體為片狀或平面結構。
[0020]作為上述方案的改進，所述載體中設有易于分離的線狀連接結構；通過所述線狀連接結構可將所述載體分離成兩部分，所述第一親水表面收集區域全部位于一部分，而所述第二親水表面收集區域全部位于另一部分。
[0021]本發明實施例還公開了一種基于遺傳性狀的精子選擇方法，能夠實現對精子特定性狀的逆選擇，即選擇不表達這一性狀的精子類型。該方法包括步驟:
[0022]S1、提供一載體，所述載體表面為超疏水親油表面，所述載體表面上設有--對應的第一親水表面收集區域及第二親水表面收集區域；
[0023]S2、根據遺傳性狀與特異蛋白的對應關系，獲得與目標遺傳性狀對應的特異蛋白的精子制動抗體或凝集抗體，其中所述目標遺傳性狀至少為一個；
[0024]S3、獲得包含所述抗體的活性基材；
[0025]S4、將包含所述抗體的活性基材置于載體的第一親水表面收集區域；
[0026]S5、往所述第一親水表面收集區域加入精子液滴，使所述精子液滴與活性基材充分接觸，從而得到不包含所述目標遺傳性狀的精子；
[0027]S6、將不包含所述目標遺傳性狀的精子轉移到與所述第一親水表面收集區域對應的第二親水表面收集區域。
[0028]作為上述方案的改進，在所述步驟S5后，還包括步驟:
[0029]S51、將不包含所述目標遺傳性狀的精子加入放置另一個目標遺傳性狀的抗體活性基材的第一親水表面收集區域中，從而獲得不包含兩個目標遺傳性狀的精子；
[0030]S52、依次操作，從而獲得不包含N個目標遺傳性狀的精子，2。
[0031]與現有技術相比，本發明公開的精子類型選擇方法通過采用單精子顯微載體，由于單精子顯載體表面為超疏水親油表面，所述載體表面上設有--對應的第一親水表面收集區域及第二親水表面收集區域。這樣，就可以將斷離尾部的精子的頭頸部放置在所述載體的第一親水表面收集區域內，并將所述精子的尾部放置在與所述第一親水表面收集區域對應的第二親水表面收集區域內，并檢驗所述第二親水表面收集區域內的精子尾部，篩選包含目標精子表達特異蛋白的尾部，根據包含目標精子表達特異蛋白的鞭毛找出所對應性狀的單精子存儲條內的精子，從而完成精子類型的選擇。另外，在每一所述第一親水表面收集區域設有第一標記，在每一所述第二親水表面收集區域設有第二標記，所述第二標記與所述第一標記一一對應時，還能實現一個載體對多個目標精子的類型選擇。因此，使用本發明實施例的精子選擇方法可以在授精前精確確認特定單個精子的類型，通過單精子卵胞楽內注射操作完成授精，以精子類型來控制胚胎性別或性狀，無需對發育中的胚胎進行遺傳檢查，還能夠實現對精子特定性狀的逆選擇，即選擇不表達這一(或若干)性狀的精子類型。方法簡單，易操作，成本低，減輕病人經濟負擔、心理負擔，降低難免流產妊娠率，可以節約大量社會資源，提高出生人口素質。
【附圖說明】
[0032]圖1是本發明實施例1的一種精子類型的選擇方法的流程示意圖。
[0033]圖2是本發明實施例2的一種精子類型的選擇方法的流程示意圖。
[0034]圖3是本發明實施例3的一種基于遺傳性狀的精子選擇方法。
[0035]圖4是發明實施例4的一種載體的結構示意圖。
【具體實施方式】
[0036]下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
[0037]在介紹本發明具體實施例前，首先，說明一下本發明所利用的理論基礎。精子發生的生理過程包含顯著的形變，單倍體次級精母細胞顯著形變為頭、頸、尾形態的精子，這一生理進程中，精母細胞染色體能自表達特異蛋白，具備授精能力的精子，尾部包含精子染色體自表達的特異蛋白成分，而精子尾部并不參與合子精原核的發育，授精時可以去除尾部，用于檢查特定精子的類型。確認精子類型，只需要確認特定精子的尾部是否包含精子染色體表達的特異蛋白成分，檢查過的精子仍然具有完全的授精能力，對胚胎和個體的全部發育過程無影響。本發明涉及的一種精子類型的選擇方法、基于遺傳性狀的精子選擇方法以及載體均是利用了這一理論基礎而實現。
[0038]實施例1
[0039]參考圖1，本發明實施例提供了一種精子類型的選擇方法，如圖1所示，該方法包括:
[0040]步驟SlOl、提供一載體，所述載體表面為超疏水親油表面，所述載體表面上設有一一對應的第一親水表面收集區域及第二親水表面收集區域；
[0041]其中，所述載體為顯微單精子載體，載體結構參考圖4，所述載體的載體表面111為超疏水、親油表面。所述載體表面111上設有第一親水表面收集區域113及相對應的第二親水表面收集區域115。即每一個親水表面收集區域113和第二親水表面收集區域115一一對應。具體的，每一所述第一親水表面收集區域113設有第一標記112，每一所述第二親水表面收集區域115設有第二標記116，所述第二標記116與所述第一標記112 —一對應。例如，第一親水表面收集區域113的第一標記為001時，與其對應的第二親水表面收集區域115的第二標記也為001。