一種從葡萄枝蔓中提取原花青素的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種提取原花青素和分離純化低聚原花青素和高聚原花青素的方法，屬于天然植物活性成分提取領域。更具體地，本發明涉及一種以葡萄藤蔓、葡萄枝條為原料，經過乙醇水溶液提取得到原花青素粗提物的方法，以及對上述原花青素的乙醇水溶液濃縮后、依次采用乙酸乙酯和正丁醇萃取，分離純化后分別得到高純度的低聚原花青素和高聚原花青素的方法。該方法所得到原花青素的粗提物、高純度的低聚原花青素和高聚原花青素能夠根據需要用于食品配料、飲料配料、化妝品、洗護用品、飼料產品中，特別高純度的低聚原花青素因生理活性強、含量高，還能夠用于保健食品和醫藥領域中。
【背景技術】
[0002]原花青素(Proanthocyanidin，簡稱PC)是植物界中廣泛存在的一大類多酸類化合物的總稱。由不同數量的兒茶素、表兒茶素或沒食子酸經C4-C6或C4-C8鍵縮合而成，按照聚合度的不同，一般將二 ~四聚體稱為低聚體，五聚體以上的稱為髙聚體。原花青素是目前國際上公認的清除人體內自由基最有效的天然抗氧化劑，實驗證明，其抗氧化活性和清除自由基能力是VC的20倍、VE的50倍，并且還具有保護心血管、抗氧化、抗突變、抗癌、抗輻射、促進細胞增殖等多種生物學活性，且無毒性，對80多種疾病具有直接或間接的預防和治療作用，在醫藥、保健和化妝品等領域有著廣泛用途。
[0003]目前，原花青素主要是從葡萄籽中提取的。也有少量文獻報道從其他一些植物中提取其中的原花青素。如中國專利CN201510032855公布了一種從葡萄籽中提取原花青素的方法，該方法是將脫脂后的葡萄籽用乙酸乙酯萃取，萃余物經纖維素酶酶解后再次用乙酸乙酯萃取，脫除溶劑后可得到高濃度的低聚原花青素。CN201310618192.8 —種葡萄籽中低聚原花青素的提取及檢測方法，CN201310618174.x 一種廢棄葡萄籽中提取純化原花青素的方法，CN201310297427.8 一種葡萄籽中原花青素的提取方法，CN201310425454.9 一種從葡萄籽中提取原花青素的新方法，CN201410140039.3 一種低聚原花青素的制備方法，CN201410116698.3 一種低聚原花青素的制備方法等專利申請均公布了采用不同的提取和分離技術從葡萄籽中提取原花青素的方法，而中國專利CN201410710766.9公布了一種從葡萄皮中提取原花青素的方法，CN201410387788.6也公布了一種石楠原花青素及其制備方法和應用。上述方法多數是利用葡萄籽提取原花青素的方法，也有從葡萄皮或其他植物中提取原花青素的方法。上述方法各自都具有不同的特點，但所用的葡萄籽均需首先進行脫脂處理。
[0004]葡萄是新疆的特產之一，在新疆種植面積廣泛。由于葡萄是多年生藤本植物，為了便于栽培和管理，提高產量和品質，每年都要對枝蔓進行修剪，因此會產生大量的葡萄枝蔓，這些枝蔓除極少部分留作繁殖苗木外，大部分都被廢棄掉了，這樣既污染了環境又造成了巨大的資源浪費。為了充分利用資源，本發明提供了一種從廢棄的葡萄枝蔓中提取原花青素的方法，因葡萄枝蔓中的脂肪含量較低，該方法克服了用葡萄籽提取原花青素時需要先進行脫脂處理的步驟，可將葡萄枝蔓粉碎后直接進行提取。這不僅可以充分利用資源，也可減少環境處理的成本，變廢為寶，具有提取成本低，獲得原花青素產品的純度高等優點。
【發明內容】
[0005]隨著生活質量的提高以及對健康的追求，原花青素的生理活性已為越來越多的人們所認識，基于原花青素的安全性高，將其應用于各種健康綠色食品生產中，也是目前功能性食品領域的研究的熱點之一。本發明的目的是提供一種利用葡萄種植過程中廢棄的葡萄藤蔓和枝條提取具有功能活性的原花青素產品，該提取原料在新疆葡萄的生長季節中分布廣泛，來源豐富，屬于廢物利用，因此，提取成本低。同時，由于葡萄枝蔓中脂肪、蛋白質含量低，因此提取過程中無需進行脫脂、脫蛋白處理，可明顯減少有機溶劑的使用數量。所得原花青素產品可依據提取和分離工藝的不同獲得不同聚合度和不同含量的產品，所得產品純度高，雜質含量低，天然、無毒、無害。
[0006]為了實現上述目的，本發明是采用如下技術方案來予以實現的:
一種從葡萄藤蔓中提取和分離純化原花青素的方法，其特征在于包括以下步驟:
(1)將采集的葡萄枝蔓干燥、粉碎后，再以料液比1:1~1:50的乙醇水溶液在一定的溫度下提取1~3次，每次提取30 min~180 min，合并二次提取液，得到匍萄枝曼中原花青素的乙醇提取液；
(2)將上述步驟(I)中得到的乙醇提取物減壓濃縮至有沉淀析出，濃縮物置于真空干燥箱中35°C)真空干燥，得到原花青素粗提取物；
(3)上述步驟(I)中所得到的乙醇提取液減壓濃縮至提取液總體積的10~40%，以脫去提取液中的乙醇，得到濃縮液；
(4)上述步驟(3)中所得到濃縮液中加入相當于濃縮液總體積0.5-2倍的乙酸乙酯萃取，分離上層乙酸乙酯相，下層水相用乙酸乙酯重復萃取2~4次，分離出乙酸乙酯相，下層水相分離后備用；
(5)合并上述步驟(4)中得到乙酸乙酯相，減壓濃縮回收溶劑乙酸乙酯，濃縮物置于真空干燥箱中35°C)真空干燥，得到低聚原花青素；
(6)上述步驟(4)萃取后的水相中加入1-3倍的正丁醇萃取，分離正丁醇相，水相用正丁醇重復萃取2-4次，分離出水相，合并幾次萃取的正丁醇相，減壓濃縮回收正丁醇，濃縮物置于真空干燥箱中35°C)真空干燥，得到高聚原花青素。
[0007]所述的葡萄枝蔓為葡萄種植期間為保證作物的良好生長而定期修剪后廢棄的葡萄枝蔓，該葡萄枝蔓經自然晾干或低于50°C的溫度下烘干后使用。
[0008]所述的乙醇水溶液的體積濃度為10%~95%，更優選的乙醇水溶液的濃度為50%。
[0009]所述的葡萄枝蔓中原花青素的乙醇水溶液提取的提取溫度為20°C ~ 75°C，更優選的提取溫度為65°C。
[0010]所述的葡萄枝蔓中原花青素的乙醇水溶液提取過程中優選的提取時間為90 min,無需超聲波輔助提取。
[0011]所述的葡萄枝蔓中原花青素的乙醇水溶液提取過程中優選的提取時間為60 min,期間采用超聲波輔助提取10 min。
[0012]所述的葡萄枝蔓中原花青素的乙醇水溶液，經濃縮脫去溶劑后得到的原花青素的粗提物，經測定其中原花青素的質量百分比在10%_35%之間。
[0013]乙酸乙酯萃取分離后得到的低聚原花青素為高純度的產品，經測定其中原花青素的質量百分比在90%~100%之間。
[0014]正丁醇萃取分離后得到的高聚原花青素為高純度的產品，經測定其中原花青素的質量百分比在40%~80%之間。
[0015]根據本技術方案所得到的原花青素的粗提取、低聚原花青素和高聚原花青素的產品，能夠根據需要用于食品、飲料、洗護用品、化妝品和飼料等工業中，同時由于得到的低聚原花青素的藥理活性高，純度高，也能夠將其作為保健品的配料或在醫藥工業中使用。
[0016]本發明所取得的有益效果是:
本發明所選用的提取原料為葡萄種植過程中修剪葡萄枝蔓所產生的廢棄的葡萄枝蔓和藤葉，這些物質通常作為垃圾處理，即浪費資源又增加了環境處理的費用。而原花青素為天然的植物活性成分，具有非常強的抗氧化等保健功效，從這些廢棄的葡萄枝蔓中提取原花青素不僅可以提高資源利用價值，還可以減少污染，提升新疆葡萄種植和加工產業的整體經濟效益。
[0017]本發明所采用的提取和分離純化工藝簡單，原料無需進行脫脂處理，低聚和高聚原花青素的分離容易，獲得的原花青素提取物的提取收率和純度都相對較高，易于實現規模化生產。
[0018]本發明所獲得的原花青素產品的純度能夠根據市場的需求提供工藝過程控制，獲得不同純度和要求的產品，生產過程便以調節控制。
【具體實施方式】
[0019]下面采用具體實施例的方式具體地解釋本發明，但本發明不局限于實施例。
[0020]實施例1
準確稱取10.0000 g過40目篩的馬奶子葡萄枝蔓樣品，加入300 mL50%的乙醇溶液，在65°C水浴中攪拌提取