基于il-6的抗原表位及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，具體地說，本發明涉及基于IL-6的抗原表位及其應 用。
【背景技術】
[0002] 類風濕性關節炎煙leumatoidArt虹itis)屬于最常見的自身免疫病之一。該疾 病是一種由于機體的免疫系統對于人體的關節部位的異常的攻擊所造成的關節部位的的 長期的慢性炎癥。治療類風濕性關節炎（RA)的藥物研究已經開展有很多年。W往的策略 是首先服用消炎藥，一旦臨床檢測出有關節損壞的癥狀，便會開始使用控制類風濕藥物。控 制類風濕疾病的藥物一般被分為異源生物體制劑W及生物工程制劑兩類。異源生物體制劑 是一類不能由自然的狀態的機體產生、合成的分子化合物，比如常見的環抱菌素、甲氨噪嶺 (Methotrexate)、氯奎寧等。其中甲氨噪嶺是目前最重要W及有效的控制性抗風濕藥物。通 常氯奎寧被認為是毒性最低的改善類風濕病情的藥物，但是它的藥性有限，對于很多重癥 病人，它無法達到令人滿意的治療效果。
[0003] 大量的研究已經證實，比-6與類風濕性關節炎RA有著密切的關系。相對于正常 人的血清中IL-6的含量而言，RA患者血清中該因子的含量會有顯著升高，且其濃度與C反 應蛋白的水平、晨僵持續的時間及影像學關節破壞的程度呈明顯正相關。在經過有效治療 后，IL-6水平有明顯的降低。RA患者關節液中的IL-6濃度較血清中更高，高濃度的IL-6 可激活破骨細胞，而破骨細胞活性則與關節破壞程度有明顯關聯。
[0004] 目前祀向比-6治療類風濕性關節炎的藥物研發主要集中在單克隆抗體的制備， 通過阻斷比-6與比-6R結合介導的信號通路達到治療疾病的目的。Regeneron公司研發的 IL-6受體特異性人源化單克隆抗體（REGN-88)已進入I期臨床研究；此外，Centor化tho Biotech公司研發的比-6抑制劑（CNT0-136)，UCBSA公司研發的比-6特異性單克隆抗 體（CDP-6038)W及Alder聯合BMS公司研發的比-6特異性人源化單克隆抗體（ALD518) 均已進入II期臨床研究，2010年1月FDA批準人源化抗IL-6R單克隆抗體一巧珠單抗 燈ocilizumab商品名Actemra)被用于中、重度活動性RA的患者的治療。由此我們看到阻 斷IL-6信號通路來治療類風濕關節炎擁有非常廣闊的前景。但是抗體藥物使用周期長、價 格昂貴且易產生免疫耐受，基于IL-6疫苗的主動免疫治療策略正成為RA免疫治療研究的 新熱點。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一種基于IL-6的抗原表位。
[0006] 本發明的另一目的是提供上述基于IL-6的抗原表位的用途。
[0007] 本發明的第一方面，提供了一種抗原表位膚，所述抗原表位膚源自哺乳動物比-6 且包含一個或多個抗原表位，
[0008] 并且所述抗原表位膚氨基酸序列長度為IL-6全長的2-100% (優選地，所述抗原 表位膚氨基酸序列長度為相應的低免疫原性蛋白全長的5-70% ;更優選地，所述抗原表位 膚氨基酸序列長度為相應的低免疫原性蛋白全長的5-50% ;最優選地，所述抗原表位膚氨 基酸序列長度為相應的低免疫原性蛋白全長的5-30 %，如5 %、10 %、15 %、20 %、25 %)，且 所述抗原表位膚的長度為3-300個氨基酸；
[0009] 并且所述抗原表位膚與載體蛋白形成的重組蛋白可誘發同一種類的所述哺乳動 物產生針對IL-6的免疫反應。
[0010] 優選地，所述抗原表位膚氨基酸序列長度為3-57。更優選地，所述抗原表位膚氨基 酸序列長度為 5-17。如 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17個氨基酸。
[0011] 在另一優選例中，所述抗原表位膚包括人IL-6全長序列、鼠IL-6全長序列或其同 源序列。
[0012] 在另一優選例中，所述人IL-6全長序列如SEQIDNO. : 1所示。
[0013] 在另一優選例中，所述鼠IL-6全長序列如SEQIDNO. :2所示。
[0014] 在另一優選例中，所述抗原表位膚選自下組：
[001引 （l)SEQIDNO. :1、2或8所示的氨基酸序列；
[0016] (2)將（1)中所示氨基酸序列經過一個或多個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而 形成的，且與載體蛋白融合后具有誘發免疫反應功能的衍生的多膚。
[0017] 在另一優選例中，所述抗原表位膚的氨基酸序列為AE邸GCFQSGFN。
[0018] 在另一優選例中，所述載體蛋白具有至少一個T細胞表位，并且在所述載體蛋白 的至少一個分子表面氨基酸殘基區通過拼接、替換、和/或插入而引入所述的抗原表位膚。
[0019] 在另一優選例中，所述載體蛋白與所述抗原膚段不是來自同一個蛋白，并且所述 載體蛋白可W增強所述表位膚的免疫原性。
[0020] 在另一優選例中，所述載體蛋白包括白喉毒素DT、白喉毒素的跨膜結構域DTT、霍 亂毒素B亞單位（CTB)、沙口氏菌鞭毛蛋白（Flic)、百日咳毒素（PT訝、破傷風毒素、或上述 蛋白的免疫原性片段（如破傷風毒素的C片段）、輪狀病毒VP7、利什曼原蟲的熱休克蛋白、 空腸彎曲菌鞭毛蛋白、沙眼衣原體主要外膜蛋白、血藍蛋白化巧holeLimpet化mo巧anin, KLH)、牛血清白蛋白度ovineSe;rumA化umin，BSA)，雞卵白蛋白（Ova化umin，OVA)，纖維蛋 白原。
[0021] 在另一優選例中，所述"分子表面氨基酸殘基區"包括loop區、beta-tum區、N末 端或C末端。
[0022] 本發明的第二方面，提供了一種融合蛋白，所述融合蛋白是如本發明第一方面所 述的抗原表位膚與載體蛋白融合所形成的。
[0023] 在另一優選例中，所述載體蛋白具有至少一個T細胞表位，并且在所述載體蛋白 的至少一個分子表面氨基酸殘基區通過拼接、替換、和/或插入而引入所述的抗原表位膚。
[0024] 在另一優選例中，所述載體蛋白與所述抗原膚段不是來自同一個蛋白，并且所述 載體蛋白可W增強所述表位膚的免疫原性。
[0025] 在另一優選例中，所述載體蛋白包括白喉毒素DT、白喉毒素的跨膜結構域DTT、霍 亂毒素B亞單位（CTB)、沙口氏菌鞭毛蛋白（Flic)、百日咳毒素（PT訝、破傷風毒素、或上述 蛋白的免疫原性片段（如破傷風毒素的C片段）、輪狀病毒VP7、利什曼原蟲的熱休克蛋白、 空腸彎曲菌鞭毛蛋白、沙眼衣原體主要外膜蛋白、血藍蛋白化巧holeLimpet化mo巧anin. KLH)、牛血清白蛋白度ovineSe;rumA化umin，BSA)，雞卵白蛋白（Ova化umin，OVA)，纖維蛋 白原。
[0026] 在另一優選例中，所述"分子表面氨基酸殘基區"包括loop區、beta-tum區、N末 端或C末端。
[0027] 在另一優選例中，所述的載體蛋白為白喉毒素的跨膜結構域DTT。
[0028] 在另一優選例中，所述白喉毒素的跨膜結構域DTT的loop區包括；DTT的第 305-310位氨基酸殘基（1F0L.pdb)。
[0029] 在另一優選例中，所述將權利要求1所示抗原表位替換白喉毒素跨膜結構域DTT 的第305-310位氨基酸殘基（lH)L.p化）形成所述融合蛋白。
[0030] 在另一優選例中，所述的載體蛋白為霍亂毒素B亞單位。
[0031] 在另一優選例中，所述霍亂毒素B亞單位的loop區包括：霍亂毒素B亞單位（CTB) 的 31-LAGKRE-36 位氨基酸殘基（3CHB.pdb)。
[0032] 在另一優選例中，所述抗原表位膚連接于所述載體蛋白的C末端和/或N末端形 成所述融合蛋白。
[0033] 在另一優選例中，所述抗原表位和所述載體蛋白之間具有連接膚。優選地，所述連 接膚長度為3-30個氨基酸。更優選地，所述連接膚長度為4-20個氨基酸。最優選地，所述 連接膚長度為7-17個氨基酸。
[0034] 在另一優選例中，所述抗原表位和所述載體蛋白之間不具有連接膚。
[0035] 在另一優選例中，所述融合蛋白選自：
[0036] (a)沈QIDNO. : 29、31、33、35所示氨基酸序列的多膚；
[0037] 化）將（a)中多膚經過一個或多個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且具 有誘發針對IL-6的免疫反應功能的由（a)衍生的多膚。
[0038] 本發明的第H方面，提供了一種多核巧酸，所述的多核巧酸編碼本發明第一方面 所述的抗原表位膚或本發明第二方面所述的融合蛋白。
[0039] 本發明的第四方面，提供了一種表達載體，所述表達載體含有本發明第H方面所 述的多核巧酸。
[0040] 本發明的第五方面，提供了一種宿主細胞，所述的宿主細胞含有本發明第四方面 所述的表達載體，或者在基因組中整合有本發明第H方面所述的多核巧酸。
[0041] 在另一優選例中，所述的宿主細胞包括原核細胞和真核細胞。
[004引在另一優選例中，所述的宿主細胞包括大腸桿菌、酵母、C冊細胞、DC細胞等。
[0043] 本發明的第六方面，提供了一種藥物組合物，所述的組合物含有本發明第一方面 所述的抗原表位膚、本發明第二方面所述的所述的融合蛋白、本發明第H方面所述的多核 巧酸、本發明第四方面所述的表達載體或者本發明第五方面所述的宿主細胞，W及藥學上 可接受的載體和/或輔料。
[0044] 在另一優選例中，所述的組合物為疫苗。
[0045] 本發明的第走方面，提供了一種疫苗組合物，所述的組合物含有本發明第一方面 所述的所述的抗原表位膚、本發明第二方面所述的所述的融合蛋白、本發明第H方面所述 的多核巧酸、本發明第四方面所述的表達載體或者本發明第五方面所述的宿主細胞，W及 免疫學上可接受的載體和/或輔料。
[0046] 在另一優選例中，所述的疫苗組合物還含有佐劑。
[0047] 在另一優選例中，所述的佐劑包括氧化鉛、皂巧、quilA、胞壁醜二膚、礦物油或 植物油、基于囊泡的佐劑、非離子嵌段共聚物或DEAE葡聚糖、細胞因子（包括IL-1、IL-2、 IFN-r、GM-CSF、比-6、比-12 和CpG)。
[0048] 本發明的第八方面，提供了本發明第一方面所述的抗原表位膚、本發明第二方面 所述的所述的融合蛋白、本發明第H方面所述的多核巧酸、本發明第四方面所述的表達載 體或者本發明第五方面所述的宿主細胞的用途，
[0049] (a)用于制備針對所述抗原表位的抗體；和/或化）用于制備治療與所述抗原表 位相關的疾病的藥物。
[0050] 在另一優選例中，所述的疾