一種新型牙髓干細胞培養基的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種新型牙髓干細胞培養基，每1L牙髓干細胞培養基中由以下成分組成：100?150ml的胎牛血清、10?15ml的青鏈霉素雙抗、1?5ng TGF?β、1?5mM L?谷氨酰胺、1640培養基余量；制備方法：取總量1/3的1640培養基，加入TGF?β、L?谷氨酰胺、青鏈霉素雙抗，攪拌溶解，補加余下1640培養基定容至1L，攪拌均勻；配制的溶液用0.22um濾膜過濾，無菌條件下加入胎牛血清，即得；本發明的培養基中，基礎培養基為1640，其含有乳牙牙髓基質細胞向成牙本質細胞方向分化所需要的無機成分；培養基中含有胎牛血清，提供細胞生長所需營養物質并可以促進細胞貼壁生長；谷氨酰胺和TGF?β可以增強細胞的增殖；青鏈霉素雙抗起到抗菌作用。
【專利說明】
一種新型牙髓干細胞培養基
技術領域
[0001 ]本發明涉及干細胞培養領域，尤其涉及新型牙髓干細胞培養基。
【背景技術】
[0002]干細胞是一類具有自我復制能力的多潛能細胞，是原始且未特化的細胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能。干細胞存在所有多細胞組織里，能經由有絲分裂與分化來分裂成多種的特化細胞，而且可以利用自我更新來提供更多干細胞。干細胞的來源有很多，包括骨髓、臍帶、臍帶血、牙齒與脂肪。
[0003]2000年首次發現了牙髓干細胞，Gronthos等發現在離體的乳牙和智齒中都存在牙髓干細胞。這是一類具有高增殖能力、高度自我更新能力、多項分化能力的細胞。已有研究利用該細胞成功地構建牙髓、牙本質以及牙齒組織。牙髓干細胞與其他組織來源的干細胞在生物學特性上有很多相似之處。而乳牙的獲取則容易無痛，且每個人一生中首先長出來的是20顆乳牙，乳牙在半歲左右即開始萌出，約2歲半出齊，6-12歲之間乳牙陸續脫落，因此從乳牙牙髓獲取間充質干細胞將越來越普遍。
[0004]2003年，Miura等從脫落乳牙的牙髓中分離出具有高度增殖能力和多向分化能力的干細胞-SHED。由于其具有良好的間充質干細胞的生物學特性，組織來源易得且無創傷，被認為是干細胞組織工程技術中進行組織再生修復比較理想的種子細胞。
[0005]現代研究發現乳牙間充質干細胞在治療骨和牙組織再生修復、神經系統疾病及肌肉萎縮、免疫系統疾病、皮膚外傷、肝臟疾病等方面有廣闊的應用前景。因此，開發簡單、快速、安全獲得大量乳牙間充質干細胞方法成為當務之急，在干細胞的培養中，培養基的選擇是基礎的研究，合適的培養基選擇是做干細胞培養成功的保證。
【發明內容】
[0006]本發明的目的是提供一種新型牙髓干細胞培養基。
[0007]本發明的目的是通過以下技術方案來實現的:一種新型牙髓干細胞培養基，每IL牙髓干細胞培養基中由以下成分組成:
胎牛血清100-150ml
青鏈霉素雙抗 10_15ml TGF-βl-5ng
L-谷氨酰胺l_5mM
1640培養基余量。
[0008]在上述方案基礎上優選的，每IL牙髓干細胞培養基中由以下成分組成:
胎牛血清120ml
青鏈霉素雙抗12ml
TGF-β3ng
L-谷氨酰胺3mM 1640培養基余量。
[0009]—種制備牙髓干細胞培養基的方法，包括以下步驟:
步驟一，取總量I/3的1640培養基，加入TGFH-谷氨酰胺、青鏈霉素雙抗，攪拌溶解，補加余下1640培養基定容至1L，攪拌均勻；
步驟二，將步驟一配制的溶液用0.22um濾膜過濾，無菌條件下加入胎牛血清，即得；用
0.22um濾膜過濾，可以達到很好的除菌目的。
[0010]本發明的有益效果:本發明中的培養基，基礎培養基為1640，其含有乳牙牙髓基質細胞向成牙本質細胞方向分化所需要的無機成分;培養基中含有胎牛血清，提供細胞生長所需營養物質并可以促進細胞貼壁生長;谷氨酰胺和TGF-β可以增強細胞的增殖;青鏈霉素雙抗起到抗菌作用。
【具體實施方式】
[0011 ]以下結合具體實施例對本發明作進一步說明:
實施例1
制備IL新型牙髓干細胞培養基:
取胎牛血清10ml、青鏈霉素雙抗1ml、TGFKsigma) 5叫、1^-谷氨酰胺(8丨811^)511^[、1640培養基IL;
取0.3L的1640培養基，加入TGF-?Κ sigma)、M L-谷氨酰胺(sigma)、青鏈霉素雙抗(sigma)，攪拌溶解，補加1640培養基至IL定容，攪拌均勾，用0.22um濾膜過濾除菌，無菌條件下加入胎牛血清(gibco)，將制得的溶液無菌分裝至已滅菌的收集瓶內保存。
[0012]實施例2
制備IL新型牙髓干細胞培養基:
取胎牛血清120ml、青鏈霉素雙抗12ml、TGFKsigma) 3叫、1^-谷氨酰胺(8丨811^)311^[、1640培養基IL;
取0.3L的1640培養基，加入TGF-?Κ sigma)、M L-谷氨酰胺(sigma)、青鏈霉素雙抗(sigma)，攪拌溶解，補加1640培養基至IL定容，攪拌均勾，用0.22um濾膜過濾除菌，無菌條件下加入胎牛血清(gibco)，將制得的溶液無菌分裝至已滅菌的收集瓶內保存。
[0013]實施例3
制備IL新型牙髓干細胞培養基:
取胎牛血清150ml、青鏈霉素雙抗15ml、TGFKsigma) Ing、L-谷氨酰胺(sigma)ImM、1640培養基IL;
取0.3L的1640培養基，加入TGF-?Κ sigma)、M L-谷氨酰胺(sigma)、青鏈霉素雙抗(sigma)，攪拌溶解，補加1640培養基至IL定容，攪拌均勾，用0.22um濾膜過濾除菌，無菌條件下加入胎牛血清(gibco)，將制得的溶液無菌分裝至已滅菌的收集瓶內保存。
【主權項】
1.一種新型牙髓干細胞培養基，其特征在于，每IL牙髓干細胞培養基中由以下成分組成: 胎牛血清100-150ml 青鏈霉素雙抗 10_15ml TGF-βl-5ng L-谷氨酰胺l_5mM 1640培養基余量。2.根據權利要求1所述的新型牙髓干細胞培養基，其特征在于，每IL牙髓干細胞培養基中由以下成分組成: 胎牛血清120ml 青鏈霉素雙抗12ml TGF-β3ng L-谷氨酰胺3mM 1640培養基余量。3.—種制備牙髓干細胞培養基的方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一，取總量I/3的1640培養基，加入TGF-13、L-谷氨酰胺、青鏈霉素雙抗，攪拌溶解，補加余下1640培養基定容至1L，攪拌均勻； 步驟二，將步驟一配制的溶液用0.22um濾膜過濾，無菌條件下加入胎牛血清，即得。
【文檔編號】C12N5/074GK106011053SQ201610475763
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月27日
【發明人】晁若瑜, 王麗麗
【申請人】安徽新生命干細胞科技有限公司