專利名稱：海藻酸復合微生物菌劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及應用于農業生產的海藻酸制劑及其制造方法。
背景技術：
海藻酸是一種海洋藻類中提取的物質，用于農業用生產過程中可有效起到促進作物生長，改善作物品質；同時可達到改良土壤作用。目前國內都是單一利用海藻酸生產農業用葉面肥、有機肥等或將海藻酸加入氮、磷、鉀及一些微量元素制成農業用肥，起到促進作物生長的作用。
發明內容
本發明的主要目的是提供一種海藻酸復合微生物菌劑，其能起到促進作物生長， 改良土壤和修復植物受損細胞，起到防治農作物病害的作用。為了實現上述發明目的，本發明所采用的技術方案是一種海藻酸復合微生物菌劑，由每公斤海藻酸配(0. 3 幻*102單位活菌數的菌體制成；所述的菌體包括熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌，兩種菌體的活菌數比為1 0.5 2。在農作物生產上，許多植物的不良癥狀是因缺素而引起的，海藻酸富含大量氨基酸、細胞分裝素及微量元素，能有效補充植株因缺素而引起的不良癥狀，內含的細胞分裂素等可促進扎根、促進生長、促進開花、促進結果；并且海藻酸也能從一定程度上改良土壤。熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌具有生物抗菌作用，能防治作物病害。并且，復配制劑具有意料不到的技術效果就是能夠修復植物受損細胞。換句話說就是利用本發明的復配制劑，能夠在農作物發生病害后快速地控制作物病害并且修復植物受損細胞，使得農作物遇到病害的情況下也不會減產。海藻酸與兩種菌的復合制劑在農業生產上有著廣泛的用途，對保護環境，減少化學農藥的使用量，促進農業生產可持續發展有著重要的技術價值和社會價值。本發明的另一個目的是提供一種海藻酸復合微生物菌劑的制備方法。技術方案為包括取熒光假單胞菌與枯草芽孢桿菌，菌株在瓊脂培養基平板上培養，再經發酵后分離出菌體，菌體與脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精混合后乳化，凍干磨粉后與海藻酸混合均勻。上述技術方案中的制備方法工藝簡單，都是常規操作工藝，使用的原材料也常見易得，因此制備工藝簡單，成本低廉，所制備的海藻酸復合微生物菌劑穩定性和均勻大大提高，性能優異；也便于運輸和儲存，更適宜產業化推廣。
具體實施例方式一種海藻酸復合微生物菌劑，由每公斤海藻酸配(0.3 幻*102單位活菌數的菌體制成；所述的菌體包括熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌，其中兩種菌的活菌數比為 1 0. 5 2。
最好是每公斤海藻酸配(0. 8 1. 5)*102單位活菌數的菌體，所述的熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數比為1 0. 9 1. 2。進一步的，所述的每公斤海藻酸配1*102單位活菌數的菌體，所述的熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數比為1 1。上述海藻酸復合微生物菌劑的制備方法是將海藻酸與兩種菌體按比例混合即可， 即配即用就能起到很好的作用和效果。更好的是包括取熒光假單胞菌與枯草芽孢桿菌，菌株在瓊脂培養基平板上培養， 再經發酵后分離出菌體，菌體與脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精混合后乳化、凍干磨粉后與海藻酸混合均勻。利用瓊脂培養基平板培養和發酵等工藝處理主要是為了將菌體與海藻酸更好地分散、融合，提高兩者混合后復配物的穩定性和均勻性，便于運輸和儲存，便于在農業生產中推廣和實用。更好的熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌在瓊脂培養基平板上，在室溫下生長，用懸浮培養基收集菌體，再加營養發酵液配置成菌懸液后移入瓊脂平板培養基中，涂抹均勻后，在培養箱中培養；將蛋白營養液裝入搖瓶中，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養；按8 15%的接種量從搖瓶中接種菌體到種子罐，發酵后收集菌體；菌體與分散載體混合乳化，然后凍干、粉碎成粉末，與海藻酸混合均勻。分散載體例如脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精等，主要是起到分散菌體的作用，因其并不是有效成份，所以其量并沒有什么要求，根據經驗和成本控制情況選擇。本發明還摸索發明了一種優選的瓊脂平板培養基配方，具體就是大豆分離蛋白 8. 0g、氯化鈉0. 6g、瓊脂粉1. 5g、脫脂乳粉6. 0g、葡萄糖3. 0g，加入3%的溴甲酚氯乙醇溶液 0. 5ml、PH值7. 5、110°C滅菌30分鐘獲得。實施例一按熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數1 0.5的比例取兩種菌體，菌株在瓊脂培養基平板上，在設定的25°C環境下生長，用懸浮培養基收集菌體，按每個安瓿瓶中加入 0. 5ml菌液，用酒精燈燒灼口塞棉花塞，真空干燥，火灼封口，在_50°C冰箱中保存。每安瓿瓶打開后，加入0. 2ml營養發酵液配置菌懸液，再移入瓊脂平板培養基中， 用無菌三角刮棒涂抹均勻，在培養箱中培養。稱取20g豆粕粉，加水200ml裝入500ml搖瓶中，使之徹底溶解，PH值自然，110°C 滅菌30分鐘，冷卻至30°C，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養。按照8%接種量，從搖瓶接種到20L種子罐，保持25°C生產溫度，培養使之發酵48 小時。發酵后用壓力壓送發酵液從發酵罐轉到轉筒式離心機收集菌體。利用脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精與菌體混合后乳化。乳化后放入凍干機，在-40°C下速凍，后干燥。干燥后取出，置于粉碎機打成粉末。利用系列稀釋法涂布平板，計算活菌數。按每公斤海藻酸配0. 3*102活菌數菌粉混合均勻制得品。
保存六個月后活菌數、菌體分布均勻性無變化。實施例二按熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數1 0.9的比例取兩種菌體，菌株在瓊脂培養基平板上，在設定的32°C環境下生長，用懸浮培養基收集菌體，按每0. 5ml加入 0. 25ml營養發酵液配置菌懸液，再移入瓊脂平板培養基中，涂抹均勻后，在培養箱中培養。稱取20g豆粕粉，加水300ml裝入500ml搖瓶中，使之徹底溶解，PH值自然，110°C 滅菌25分鐘，冷卻至室溫，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養。按照10%接種量，從搖瓶接種到20L種子罐，保持30°C生產溫度，培養使之發酵48 小時。發酵后用離心過濾收集菌體。利用脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精與菌體混合后乳化，凍干、粉碎成粉末，計算活菌數后，按每公斤海藻酸配0. 8*102活菌數菌粉混合均勻得的成品。保存六個月后活菌數、菌體分布均勻程度無變化。實施例三按熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數1 1的比例取兩種菌體，菌株在瓊脂培養基平板上，在設定的30°C環境下生長，用懸浮培養基收集菌體，按每0. 5ml加入0. 3ml 營養發酵液配置菌懸液，再移入瓊脂平板培養基中，涂抹均勻后，在培養箱中培養。稱取20g豆粕粉，加水150ml裝入500ml搖瓶中，使之徹底溶解，PH值自然，105°C 滅菌30分鐘，冷卻至32°C，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養。按照10%接種量，從搖瓶接種到20L種子罐，保持生產溫度，培養使之發酵45 小時。發酵后用離心收集菌體。利用脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精與菌體混合后乳化，凍干、粉碎成粉末，計算活菌數后，按每公斤海藻酸配1*102活菌數菌粉混合均勻得的成品。保存六個月后活菌數、菌體分布均勻程度無變化。實施例四按熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數1 1.2的比例取兩種菌體，菌株在瓊脂培養基平板上，在設定的30°C環境下生長，用懸浮培養基收集菌體，按每0. 5ml加入 0. 25ml營養發酵液配置菌懸液，再移入瓊脂平板培養基中，涂抹均勻后，在培養箱中培養。稱取20g豆粕粉，加水300ml裝入500ml搖瓶中，使之徹底溶解，PH值自然，110°C 滅菌25分鐘，冷卻至室溫，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養。按照12%接種量，從搖瓶接種到20L種子罐，保持30°C生產溫度，培養使之發酵48 小時。發酵后用離心過濾收集菌體。利用脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精與菌體混合后乳化，凍干、粉碎成粉末，計算活菌數后，按每公斤海藻酸配1. 5*102活菌數菌粉混合均勻得的成品。保存六個月后活菌數、菌體分布均勻程度無變化。實施例五按熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數1 2的比例取兩種菌體，菌株在瓊脂培養基平板上，在設定的環境下生長，用懸浮培養基收集菌體，按每0. 5ml加入0. 35ml 營養發酵液配置菌懸液，再移入瓊脂平板培養基中，涂抹均勻后，在培養箱中培養。稱取20g豆粕粉，加水250ml裝入500ml搖瓶中，使之徹底溶解，PH值自然，115°C 滅菌20分鐘，冷卻至室溫，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養。按照15%接種量，從搖瓶接種到20L種子罐，保持生產溫度，培養使之發酵50 小時。發酵后用離心過濾收集菌體。利用脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精與菌體混合后乳化，凍干、粉碎成粉末，計算活菌數后，按每公斤海藻酸配5*102活菌數菌粉混合均勻得的成品。保存六個月后活菌數、菌體分布均勻程度無變化。產品的大田試驗效果2008年江蘇興化河道內一裝載重金屬油的船發生事故，致使河道污染，當地農民誤將河道中的水打入水稻地澆灌，致使大面積水稻發黃、中毒，分別使用本發明的實施例一到五所述的制劑后使中毒發黃的水稻恢復生長，后期又二次使用該制劑噴施，效果明顯；最終該地受害水稻測產，產量分別下降lg^us^d^j^ue^，對照地、也就是未采取措施處理的地塊減產30%，單純使用海藻酸的減產27%，單純使用熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌復配劑的減產30%，該地新聞及農技推廣部門都做了大量報道。這就充分證明了本發明的制劑對作物受損細胞的修復能力。以下三組實驗則是僅采用實施例三的制劑的情況。2008年，江蘇省淮陰市，由于連續載作甜椒，各種土傳病害引起的根腐病及莖基腐病發病嚴重，一般田塊為20-30%，嚴重田塊達到40%以上，2008年的秋季，對蘇椒5號的根腐病及莖基腐病進行了大棚試驗，對照地發病達70%以上，單純使用海藻酸的發病率為 67%，單純使用熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌復配劑的發病率68%，而用本發明制劑處理的2500株甜椒的發病率僅為10%左右，防治效果極為明顯。2008年廣西著名的芋頭之鄉荔浦，幾戶農民在芋頭種植過程中發生芋頭根莖腐爛，且地上部分葉片發黃萎蔫，極有可能造成減產甚至絕收，用該制劑溶于水后澆灌根部， 一周后再澆灌一次，癥狀得到控制并沒有蔓延情況發生，芋頭沒有造成減產，而最初沒有發病的田塊用了本制劑澆灌后產量增加10% -15%左右，增產效果明顯。發病田塊單純使用海藻酸的減產13%，單純使用熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌復配劑的減產12%。2009年江蘇阜寧水稻大面積發生“黑條矮縮病”用本品進行對照試驗，噴施本品田塊該病發病率僅為5%左右，對照田塊和單純使用海藻酸、單純使用熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌復配劑的發病率都在20%以上。
權利要求
1.一種海藻酸復合微生物菌劑，由每公斤海藻酸配(0. 3 幻*102單位活菌數的菌體制成；所述的菌體包括熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌，兩種菌的活菌數比為1 0.5 2。
2.根據權利要求1所述的一種海藻酸復合微生物菌劑，其特征在于所述的每公斤海藻酸配(0. 8 1. 5)*102單位活菌數的菌體，所述的熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數比為1 0. 9 1. 2。
3.根據權利要求1或2所述的一種海藻酸復合微生物菌劑，其特征在于所述的每公斤海藻酸配1*102單位活菌數的菌體，所述的熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數比為1 Io
4.一種根據權利要求1或2或3所述的海藻酸復合微生物菌劑的制備方法，包括取熒光假單胞菌與枯草芽孢桿菌，菌株在瓊脂培養基平板上培養，再經發酵后分離出菌體，菌體與分散載體混合后乳化、凍干磨粉后與海藻酸混合均勻。
5.根據權利要求4所述的海藻酸復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌在瓊脂培養基平板上，在室溫下生長，用懸浮培養基收集菌體，再加營養發酵液配置成菌懸液后移入瓊脂平板培養基中，涂抹均勻后，在培養箱中培養；將蛋白營養液裝入搖瓶中，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養； 按8 15%的接種量從搖瓶中接種菌體到種子罐，發酵后收集菌體； 菌體與分散載體混合乳化，然后凍干、粉碎成粉末，與海藻酸混合均勻。
全文摘要
本發明涉及用于農業生產的海藻酸制劑及其制造方法；本發明的海藻酸復合微生物菌劑，能起到促進作物生長，改良土壤和修復植物受損細胞，起到防治農作物病害的作用；由每公斤海藻酸配(0.3～5)*102單位活菌數的菌體制成；所述的菌體包括熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌，兩種菌體的活菌數比為1∶0.5～2；這樣海藻酸與兩種菌體的復合制劑在農業生產上有著廣泛的用途，對保護環境，減少化學農藥的使用量，促進農業生產可持續發展有著重要的技術價值和社會價值；尤其是其意料不到的技術效果就是能夠修復植物受損細胞，也就是能夠在農作物發生病害后快速地控制作物病害并且修復植物受損細胞，使得農作物遇到病害的情況下也不會減產。
文檔編號C05F11/08GK102225877SQ20111008563
公開日2011年10月26日 申請日期2011年4月6日 優先權日2011年4月6日
發明者宋珂 申請人:上海農安生物科技發展有限公司