專利名稱：一一對照式玻片檢測方法
技術領域：
本發明屬于醫學檢測方法技術領域，具體為一一對照式玻片檢測方法。
背景技術：
在科研或臨床應用上，組織學、細胞學、組織細胞水平、蛋白質水平、RNA水平、DNA水平、免疫組化、各種原位雜交或原位PCR，只要是原位方法的檢測，按質量要求均需要設立陽性對照及空白對照。目前，除少數試劑可于片中尋找自身對照外，通常是一組檢測片只能通過切片方法設立一張陽性對照片作為對照，但是無論是機器操作還是手工操作均不能保證每張玻片的檢測條件一致，如每一步驟的時間、試劑的用量、效價程度或其它人為因素等均存在差異，都會造成部分結果的準確性很難判斷，故其標準化問題日益受到大家的重視。
發明內容
本發明目的在于克服現有技術中存在的上述問題，設計提供一種一一對照式玻片檢測方法的技術方案，能有效提高判斷結果的準確性。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于包括以下步驟1)選擇與檢測對象相應的對照物質，進行細胞提取處理；2)制備細胞對照保存體對照物質進行細胞提取處理后，于保存介質中制成細胞對照保存體，細胞提取物與保存介質的比例為1∶1-5；所述的保存介質為液體石蠟或固體石蠟，也可以是自制的保存液，保存液的制備取0.05-0.1mol/L、PH為7.4的三羥甲基氨基甲烷100ml，加溫到60-70℃，加入優質明膠50-100mg，攪拌溶解后，冷卻至室溫，加入0.1-0.8g牛血清白蛋白，加入NaN3200mg溶解后過濾制成；3)在進行玻片檢測時，將上述細胞對照保存體少許點、涂或融化于相應的每一張玻片上，與檢測對象一起進行檢測、分析或判斷。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于所述的對照物質為培養細胞、液體標本或組織標本。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于培養細胞的細胞提取處理為直接用胰酶將細胞從培養瓶上消化下來。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于液體標本的細胞提取處理為液體標本加入抗凝劑進行直接離心分離、洗滌獲取細胞，所述的洗滌液為0.01mol/L、PH為7.4的磷酸緩沖液或三羥甲基氨基甲烷緩沖液，抗凝劑為肝素或枸櫞酸。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于組織標本的細胞提取處理為組織標本洗去血跡、磨碎，100-400目篩網過濾，進行細胞打孔處理、離心分離、洗滌。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于不新鮮組織標本磨碎后進行及時固定，固定液為10-20％中性福爾馬林或90-95％乙醇或冷丙酮。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于組織標本磨碎后添加紅細胞裂解液處理，紅細胞裂解液的配制稱取3-4g氯化銨、1-2g三羥甲基氨基甲烷，加水溶解并稀釋至500ml，0.22μm濾膜過濾除菌，4-6℃保存。
上述一一對照式玻片檢測方法，操作簡單、方便，將細胞對照保存體少許點、涂或融化于相應的每一張玻片上，與檢測對象一起進行檢測、分析或判斷，保證每張玻片的檢測條件一致，有效提高了檢測結果的準確性，為相關的研究工作提供了必要的數據，更為治療方案的選擇提供了更準確的判斷依據，且還能通過對比觀察檢測出未知物質的性質。
具體實施例方式
一一對照式玻片檢測方法，其特征在于包括以下步驟1)選擇與檢測對象相應的對照物質，進行細胞提取處理，所述的細胞包括動物細胞和微生物，所述的對照物質可為培養細胞、液體標本或組織標本。培養細胞的細胞提取處理為直接用胰酶將細胞從培養瓶上消化下來。液體標本的細胞提取處理為液體標本加入抗凝劑進行直接離心分離、洗滌獲取細胞，所述的洗滌液為0.01mol/L、PH為7.4的磷酸緩沖液或三羥甲基氨基甲烷緩沖液，抗凝劑為肝素或枸櫞酸。組織標本的細胞提取處理為組織標本洗去血跡、磨碎，300目篩網過濾，進行細胞打孔處理、離心分離、洗滌。不新鮮組織標本磨碎后進行及時固定，固定液為15％中性福爾馬林或95％乙醇或冷丙酮。組織標本含紅細胞較多的，磨碎后添加紅細胞裂解液處理，紅細胞裂解液的配制稱取3.735g氯化銨、1.3g三羥甲基氨基甲烷，加水溶解并稀釋至500ml，0.22μm濾膜過濾除菌，4℃保存。
2)制備細胞對照保存體對照物質進行細胞提取處理后，于保存介質中制成細胞對照保存體，所述的細胞對照保存體為懸液，也可以是固體，所述的保存介質為醫用的液體石蠟或固體石蠟，也可以是自制的保存液。保存液的制備取0.06mol/L、PH為7.4的三羥甲基氨基甲烷100ml，加溫到65℃，加入優質明膠90mg，攪拌溶解后，冷卻至室溫，加入0.7g牛血清白蛋白，加入NaN3200mg溶解后過濾制成。細胞提取物與保存液按1∶3的配比，制成細胞懸液；細胞提取物進行脫水、透明處理后與液體石蠟、固體石蠟按配比進行浸蠟處理，其比例分別為1∶3，1∶1，分別制成細胞懸液、細胞對照保存固體。
3)在進行玻片檢測時，將上述細胞對照保存體少許點、涂于相應的每一張玻片上，與檢測對象一起進行檢測、分析或判斷。
本申請中所涉及的離心分離、洗滌處理，脫水、透明、浸蠟處理，及細胞懸液、細胞對照保存固體的配制均為一般公知技術，在此不再贅述。
根據該檢測方法，可開發出針對不同檢測目的、不同檢測對象的對照物質，生產出可長時間保存的細胞對照保存體。在進行玻片檢測時，將細胞對照保存體少許點、涂或融化于相應的每一張玻片上，與檢測對象一起進行檢測、分析或判斷，保證每張玻片的檢測條件一致，有效提高了檢測結果的準確性，為相關的研究工作提供了必要的數據，更為治療方案的選擇提供了更準確的判斷依據，且還能通過對比觀察檢測出未知物質的性質。
權利要求
1.一一對照式玻片檢測方法，其特征在于包括以下步驟1)選擇與檢測對象相應的對照物質，進行細胞提取處理；2)制備細胞對照保存體對照物質進行細胞提取處理后，于保存介質中制成細胞對照保存體，細胞提取物與保存介質的比例為1∶1-5；所述的保存介質為液體石蠟或固體石蠟，也可以是自制的保存液，保存液的制備取0.05-0.1mol/L、PH為7.4的三羥甲基氨基甲烷100ml，加溫到60-70℃，加入優質明膠50-100mg，攪拌溶解后，冷卻至室溫，加入0.1-0.8g牛血清白蛋白，加入NaN3200mg溶解后過濾制成；3)在進行玻片檢測時，將上述細胞對照保存體少許點、涂或融化于相應的每一張玻片上，與檢測對象一起進行檢測、分析或判斷。
2.如權利要求1所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于所述的對照物質為培養細胞、液體標本或組織標本。
3.如權利要求2所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于培養細胞的細胞提取處理為直接用胰酶將細胞從培養瓶上消化下來。
4.如權利要求2所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于液體標本的細胞提取處理為液體標本加入抗凝劑進行直接離心分離、洗滌獲取細胞，所述的洗滌液為0.01mol/L、PH為7.4的磷酸緩沖液或三羥甲基氨基甲烷緩沖液，抗凝劑為肝素或枸櫞酸。
5.如權利要求2所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于組織標本的細胞提取處理為組織標本洗去血跡、磨碎，100-400目篩網過濾，進行細胞打孔處理、離心分離、洗滌。
6.如權利要求5所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于不新鮮組織標本磨碎后進行及時固定，固定液為10-20％中性福爾馬林或90-95％乙醇或冷丙酮。
7.如權利要求5所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于組織標本磨碎后添加紅細胞裂解液處理，紅細胞裂解液的配制稱取3-4g氯化銨、1-2g三羥甲基氨基甲烷，加水溶解并稀釋至500ml，0.22μm濾膜過濾除菌，4-6℃保存。
全文摘要
一一對照式玻片檢測方法，屬于醫學檢測方法技術領域。其特征在于包括以下步驟選擇與檢測對象相應的對照物質，進行細胞提取處理；制備細胞對照保存體對照物質進行細胞提取處理后，于保存介質中制成細胞對照保存體，細胞提取物與保存介質的比例為1∶1－5；在進行玻片檢測時，將上述細胞對照保存體少許點、涂或融化于相應的每一張玻片上，與檢測對象一起進行檢測、分析或判斷。上述一一對照式玻片檢測方法，操作簡單、方便，能保證每張玻片的檢測條件一致，有效提高了檢測結果的準確性，為相關的研究工作提供了必要的數據，更為治療方案的選擇提供了更準確的判斷依據，且還能通過對比觀察檢測出未知物質的性質。
文檔編號G01N1/28GK1699953SQ20051005030
公開日2005年11月23日 申請日期2005年5月12日 優先權日2005年5月12日
發明者任興昌 申請人:杭州市中醫院