一種中藥組合物制劑及制備方法和質量檢測方法

專利名稱：一種中藥組合物制劑及制備方法和質量檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥組合物制劑及質量檢測方法，特別涉及一種理氣活血，通經 散結的中藥組合物制劑及制備方法和質量檢測方法。
背景技術：
前列腺病是男性多發病，具有病種多、發病率高、發病的時間長，且有逐年增多的 趨勢。在少、青、壯、老年隨時都可發病。占泌尿外科發病數的60% 70%，35歲以上的男 性患病率為50%以上，前列腺癌的發病率排在男性腫瘤的第二位.臨床所見和大量統計資 料表明，因從幼到老、誤診與漏診、癥狀輕重不一等因素，約有70%的男性都曾患過前列腺 疾病，只是患者不知罷了。此病逐年增加，嚴重危害了男性身體健康。

發明內容
本發明第一個目的在于提供一種理氣活血，通經散結的中藥組合物；本發明的第 二個目的在于提供該中藥組合物制劑的制備方法。本發明的第三個目的在于提供該中藥組 合物制劑的質量檢測方法。本發明目的是通過如下技術方案實現的本發明一種理氣活血，通經散結的中藥組合物制劑的原料組成為丹參120-168重量份、澤蘭24_72重量份、桃仁24_72重量份、紅花120-144重量 份、赤芍24-72重量份、白芷72-120重量份、陳皮72-120重量份、澤瀉120-168重量份、王不 留行120-168重量份、敗醬216-264重量份、川楝子72-120重量份、小茴香(鹽制)72-120 重量份、黃柏(鹽制)120-168重量份。本發明一種理氣活血，通經散結的中藥組合物制劑的原料組成優選為丹參144重量份、澤蘭48重量份、桃仁48重量份、紅花144重量份、赤芍48重量 份、白芷96重量份、陳皮96重量份、澤瀉144重量份、王不留行144重量份、敗醬240重量 份、川楝子96重量份、小茴香(鹽制)96重量份、黃柏(鹽制)144重量份。上述本發明理氣活血，通經散結的中藥組合物制劑的制備方法為澤瀉、白芷粉碎成細粉；丹參、川楝子用40-80%乙醇回流提取1-3次，每次1-4小 時，合并提取液，濾過，回收乙醇；小茴香、陳皮提取揮發油至盡，蒸餾后的水溶液另器收集； 藥渣與其余赤芍等七味藥加水煎煮1-3次，每次1-5小時，合并煎液，濾過，濾液與上述藥液 合并，濃縮成浸膏，干燥，粉碎成細粉，加入澤瀉、白芷細粉混勻，干燥，加入上述小茴香等揮 發油及常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的劑型，包括但不限于片劑、膠 囊齊IJ、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑 或口服液體制劑。本發明一種理氣活血，通經散結的中藥組合物片劑的制備方法優選為以上十三 味，澤瀉、白芷粉碎成細粉；丹參、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每次2小時，合并提取 液，濾過，回收乙醇；小茴香、陳皮提取揮發油至盡(約4小時)蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與其余赤芍等七味藥加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小時，第二次以6倍量水 煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液與上述藥液合并，濃縮成浸膏，干燥，粉碎成細粉，加入澤 瀉、白芷細粉混勻，制成顆粒，干燥，加入上述小茴香等揮發油，壓制成片，包糖衣，即得。本發明一種理氣活血，通經散結的中藥組合物顆粒劑的制備方法優選為以上 十三味，澤瀉、白芷粉碎成細粉；丹參、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每次2小時，合并 提取液，濾過，回收乙醇；小茴香、陳皮提取揮發油至盡(約4小時)蒸餾后的水溶液另器收 集；藥渣與其余赤芍等七味藥加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小時，第二次以6倍 量水煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液與上述藥液合并，濃縮成浸膏，干燥，粉碎成細粉，加 入澤瀉、白芷細粉混勻，制成顆粒，干燥，加入上述小茴香等揮發油，混勻，即得。
本發明一種理氣活血，通經散結的中藥組合物膠囊劑的制備方法優選為以上 十三味，澤瀉、白芷粉碎成細粉；丹參、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每次2小時，合并 提取液，濾過，回收乙醇；小茴香、陳皮提取揮發油至盡(約4小時)蒸餾后的水溶液另器收 集；藥渣與其余赤芍等七味藥加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小時，第二次以6倍 量水煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液與上述藥液合并，濃縮成浸膏，干燥，粉碎成細粉，加 入澤瀉、白芷細粉混勻，制成顆粒，干燥，加入上述小茴香等揮發油，混勻，裝膠囊，即得。本發明提供一種的理氣活血，通經散結的中藥組合物制劑的質量檢測方法，該方 法包括如下含量測定和/或鑒別中的一種或幾種A、含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 60-80 20-30 比例的 0. 01-0. lmol/1 NaH2PO4 緩沖溶液(H3PO4 調 PH = 2. 5-4. 0)-乙 腈為流動相；檢測波長為260 280nm ；對照品溶液的制備稱定鹽酸小檗堿，加甲醇制 成Iml含5-15 μ g的溶液；供試品溶液的制備稱取該組合物制劑0. l-2g，精密加入甲 醇25-75ml，稱定重量，超聲處理10-40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖 勻，用0. 2-0. 45 μ m微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；測定方法以上溶液，分別吸取對照品 液、供試品液各5 15 μ 1注入液相色譜儀，測定即得；組合物制劑0. 2-lg含鹽酸小檗堿 (C20H17N04 · HCl)不得少于 0. IOmg0B、鑒別取該組合物制劑，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇25_75ml超聲提取 15 45min,濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，2. 5 7. 5g，內徑10-15mm)上，用 20% 60%甲醇25 75ml洗脫，洗脫液蒸干，加水10 25ml溶解，水溶液用水飽和正丁 醇提取1 3次，每次10 25ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗1_3次，每次5 15ml ； 棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品， 加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液；吸取上述對照品2 6 μ 1，供試品6 12 μ 1，分別 點樣于同一硅膠G板上，以10-16 5-9 2的氯仿-甲醇-水混合溶劑的下層溶液為展 開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置于365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在 與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點；C、鑒別取該組合物制劑，粉碎成粉末，稱取粉末5g，加甲醇25_75ml超聲提取 15 45min,濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，2. 5 7. 5g，內徑10-15mm)上，用 20% 60%甲醇25 75ml洗脫，洗脫液蒸干，加水10 25ml溶解，水溶液用水飽和正丁 醇提取1 3次，每次10 25ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗1_3次，每次5 15ml ； 棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液；取芍藥苷對照品，力口乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作為對照品溶液；吸取對照品，供試品各2_10μ 1，分別點樣 于同一硅膠G板上，以35-50 4-6 8-12 0. 2比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸混 合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試 品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點；D、鑒別該組合物制劑粉末0. I-Ig加甲醇2-15ml超聲5 30min，濾過，蒸干，殘渣加甲醇0. 5-5ml溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成Iml含 0. l-5mg的溶液，作為對照品溶液；分別吸取上述兩種溶液各0. 1-2 μ 1，分別點樣于同一硅 膠G板上，以5-8 2-4 1-3 1-4 0. 3-0. 9比例的苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃 氨試液混合溶劑為展開劑，置氨試液飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置于365nm紫外光 燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點。上述質量檢測方法優選包括如下含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八 烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0. 05mol/l NaH2PO4緩沖溶液(H3PO4調PH = 3. 0 士0. 5)-乙腈 (73 27)為流動相；檢測波長為270nm;對照品溶液的制備精密稱定鹽酸小檗堿對照品適 量，加甲醇制成Iml含10μ g的溶液；供試品溶液的制備精密稱取該組合物制劑內容物粉 末0. 5g，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減 失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過，取續濾液，即得；測定方法以上溶液，分別精 密吸取對照品液、供試品液各10 μ 1注入液相色譜儀，測定即得；上述質量控制方法中優選包括如下鑒別法陳皮薄層鑒別取該組合物制劑內容 物，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml超聲提取半小時，濾過，濾液加于中性氧化鋁 柱(100-120目，5g，內徑10-15mm)上，用40%甲醇50ml洗脫，洗脫液蒸干，加水15ml溶解， 水溶液用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2次，每次 IOml ；棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對 照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品；吸取上述對照品4 μ 1，供試品8 μ 1，分別點樣于 同一硅膠G板上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干， 噴以三氯化鋁試液，置于紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應位 置上，顯相同顏色的熒光斑點；赤芍薄層鑒別取該組合物制劑，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml超聲 提取半小時，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內徑10-15mm)上，用40%甲 醇50ml洗脫，洗脫液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml，合 并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2次，每次IOml ；棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲 醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作為 對照品溶液；分別吸取對照品，供試品各5 μ 1，分別點樣于同一硅膠G板上，以氯仿-醋酸 乙酯-甲醇-甲酸(40 5 10 0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸 溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑占.黃柏薄層鑒別該組合物制劑粉末0. 3g加甲醇IOml超聲5min，濾過，蒸干，殘渣 加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成Iml含0. 5mg的溶 液，作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液，各1 μ 1，分別點樣于同一硅膠G板上，以苯-醋酸 乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液(6 3 1.5 1.5 0.5)為展開劑，置氨試液飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置于紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點。本發明組合物具備極佳的理氣活血，通經散結的作用，對治療前列腺增生癥、尿閉 有很好的療效。本發明對中藥組合物制劑中鹽酸小檗堿含量測定和陳皮、芍藥、黃柏的薄層 檢測，經實驗證明本發明含量測定方法檢測專屬性好、穩定性高、重現性好、精密度高，更 加適合工業化的生產，真正確保了臨床用藥的安全、有效、可靠。下面實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發明。本發明所有實驗例所選用的制劑均為根據本發明實施例1制得的本發明片劑，但 是本發明實驗結果并不僅限于該片劑。實驗例1 藥效學實驗本發明組合物對前列腺增生的影響1、實驗材料實驗動物雄性SD大鼠72只，8周齡，體重200 250g。藥品與試劑該組合物制劑；陽性藥保列治；免疫組化試劑bFGF兔多克隆抗體 (克隆系147)、VEGF兔多克隆抗體(克隆系165)；相應二抗及試劑盒。2、實驗方法2. 1造模及給藥方法大鼠馴化喂養1周后，按隨機數字表法隨機分為睪酮組48只，空白組(N) 16只，去 勢組(C)8只。其中，睪酮組大鼠經3%戊巴比妥鈉以lml/kg劑量腹腔注射麻醉后，無菌切 除雙側睪丸，經1周自然恢復后，每日經皮下注射丙酸睪丸酮0. 5mg造模；空白組大鼠麻醉 后，無菌手術切開下腹部，游離睪丸，但不切除睪丸，術后1周自然恢復后，給予皮下注射注 射用水0. Iml而不予注射丙酸睪丸酮；去勢組大鼠切除雙側睪丸，經1周自然恢復后，也給 予皮下注射注射用水0. Iml而不予注射睪酮。10天后，空白組及睪酮組分別隨機取8只大鼠 處死，摘除前列腺，計算前列腺指數，空白組為0. 21 士 0. 03(% )，睪酮組為0. 29 士 0. 03(% ) (P <0.05)，表明造模成功。將睪酮組大鼠隨機分為5組，即該組合物制劑高劑量組(H， 6. 24g/kg)、中劑量組(M，3. 12g/kg)、低劑量組(L，1. 56g/kg)、保列治組(F，1. 67mg/kg)和 模型組(M)。連續給藥30d(中間每周稱重1次以調整給藥量)，末次給藥24h后，稱大鼠體 重后，經股動脈放血處死，摘除前列腺。2. 2檢測指標2. 2. 1前列腺重量、體積及指數的測定用電子天平稱大鼠前列腺重量，并計算前列腺指數(前列腺重量/大鼠體 重X100% )；用水取代法測量前列腺體積，單位ml。2. 2. 2前列腺組織結構的觀察取相同部位前列腺組織，FAA液固定48h，逐級酒精脫水、浸蠟，石蠟包埋，連續切 片5張，切片厚度4 μ m，其中第1張切片作常規HE染色，第2 5張切片作免疫組化染色， 在4X 10鏡下觀察HE染色片前列腺組織結構的變化。2. 2. 3免疫組化染色SP (生物素辣根過氧化酶)法，DAB (3，3_ 二氨基聯苯胺)顯 色，以試劑盒中提供的陽性片為陽性對照，以PBS液(磷酸鹽緩沖液)替代一抗、二抗作陰 性對照。VEGF、bFGF均以血管內皮及間質細胞中出現棕黃色顆粒為其陽性細胞，每張切片中取具有陽性顆粒數目最多的5個間質區視野(400X)，用MIAS 2000型圖形圖像分析系統 定量檢測積分光密度(IOD)來表示其在組織中表達的量的多少。2. 3統計學處理方法各項指標結果均以均數士標準差(X士s)表示，實驗數據用 SPSS10.0軟件進行處理，各組間比較采用單因素方差分析，方差檢驗齊性者用LSD法，方差 不齊者用Games Howell法檢驗。3、結果與分析
3. 1對前列腺重量、體積及指數的影響各組大鼠體重無顯著性差異(P > 0. 05)，組間具有可比性。模型組大鼠前列腺重 量、體積、前列腺指數明顯高于空白組(P < 0.01)，去勢組大鼠前列腺重量、體積、前列腺指 數明顯低于模型組及空白組(P <0.01)。該組合物制劑各劑量組及保列治組與模型組比 較，前列腺重量、前列腺體積、前列腺指數均明顯降低(P < 0.01)。結果表明模型組前列 腺體積、重量顯著增大，造模成功。該組合物制劑可明顯縮小BPH大鼠前列腺體積，見表1。3. 2對大鼠前列腺組織結構的影響HE染色片在4X 10倍光學顯微鏡下觀察表明空白組腺體排列清楚，腺體間可見 明顯的間質，腺腔無擴張，腺上皮單層柱狀，可見少許基底細胞及明顯基底膜。模型組腺體 排列密集，腺腔變大，部分腺體擴張，腔內分泌物增多，上皮細胞呈單層柱狀，腺上皮變厚， 部分區域呈假復層，部分腺體呈乳頭狀突向腔內，可見較多基底細胞，間質小血管擴張充 血；間質平滑肌增多。去勢組可見腺腔直徑及腺上皮厚度均較模型組及空白組明顯減小，小 血管未見擴張，間質組織疏松。該組合物制劑各劑量組及保列治組以上各種改變均有不同 程度的改善。由表2可見，模型組平均腺體周長、平均腺體面積均較空白組明顯增大(P <0.01)，相同面積內腺體數目較空白組明顯減少(P <0.01)。去勢組大鼠腺體平均周長、 腺體平均面積均較空白組及模型組明顯降低(P < 0.01)，相同面積內腺體數目較空白組及 模型組明顯增加(P <0.01)。該組合物制劑各劑量及保列治組與模型組比較，腺體平均面 積、平均周長降低，相同面積內腺體總數目增加(P < 0.01)。結果表明模型組腺體增生， 該組合物制劑可降低BPH大鼠前列腺腺體增生。3. 3對大鼠前列腺組織bFGF、VEGF的表達bFGF、VEGF在前列腺血管內皮細胞、間質細胞及腺上皮細胞中都有表達。空白組大 鼠前列腺組織陽性著色分布較均勻，染色較淡；在模型組大鼠前列腺組織中染色普遍較深， 尤其在微血管成簇聚集部位的血管內皮細胞及血管周圍間質細胞中強表達；在該組合物制 劑劑量組及保列治組陽性著色主要位于間質細胞中，染色較淺，明顯低于模型組。各組前列 腺組織中bFGF、VEGF蛋白表達情況見表3。由表3可見，模型組bFGF、VEGF陽性顆粒積分光密度均顯著高于空白組(P <0.01)；去勢組上述兩項指標均顯著低于模型組(P <0.01)，與空白組無顯著差異；該組 合物制劑各劑量bFGF表達顯著低于模型組(P < 0. 01)，高劑量組前列腺組織中VEGF表達 明顯低于模型組(P<0. 05)。表1各組前列腺重量、體積、指數比較(X土s) 注與空白組相比，ΔΡ<0.05，ΔΔΡ< 0.01 ；與模型組比較，*Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01。表2各組間腺體數目、平均周長、平均面積比較(X土s) 注與空白組相比，ΔΡ < 005,ΔΔΡ < 001 ；與模型組相比，*Ρ < 005，**Ρ < 001，表3各組間前列腺組織VEGF、bFGF陽性顆粒積分光密度比較(X土S) 結果表明，該組合物制劑可縮小前列腺體積，降低前列腺重量及指數。鏡下觀察及形態計量學研究顯示睪酮皮下注射所致的大鼠前列腺增生，腺體及間質組織均出現增生 而以腺體增生為主；該組合物制劑可縮小腺體面積、腺體周長及腺上皮面積。實驗例2 鹽酸小檗堿含量測定方法實驗本發明組合物由黃柏(鹽制)、赤芍、陳皮、白芷、丹參、澤蘭、紅花、川楝子、小茴香 (鹽制 )等13味中藥組成。鹽酸小檗堿為黃柏的主要有效成份。鹽酸小檗堿(C2tlH17NO4 ·Ηα) 是黃柏化學成分中一種重要的生物堿類化合物，《中國藥典》2005年版I部以鹽酸小檗堿作 為黃柏的高效液相色譜含量測定的對照品。測定本發明組合物中鹽酸小檗堿的含量有助于 控制本中成藥制劑的質量，確保臨床用藥的安全、有效。1、測定方法的選擇根據文獻報道，黃柏的含量測定方法有薄層色譜_紫外分光光度法，薄層色譜掃 描法，高效液相色譜法等。本實驗采用高效液相色譜法測定鹽酸小檗堿含量，分析速度快， 靈敏度高，專屬性強，應用范圍廣，重現性與準確性均優于薄層色譜-紫外分光光度法、薄 層色譜掃描法。2、檢測波長的選擇通過鹽酸小檗堿、本發明組合物片劑、黃柏藥材、缺黃柏陰性對照溶液的全波長掃 描光譜比較可以看出鹽酸小檗堿在270nm處有紫外最大吸收，且在270m下鹽酸小檗堿峰 形對稱，黃柏陰性對照溶液無干擾。故選擇該波長為檢測波長。3、流動相的優選本發明曾以乙腈-水(50 50)、乙腈-0. 磷酸溶液(50 50)、0. 05mol/l NaH2PO4 緩沖溶液(H3PO4 調 PH = 3. 0士0. 5)-乙腈(55 45)、0. 05mol/l NaH2PO4 緩沖溶液(H3PO4 調 PH = 3. 0士0. 5)-乙腈(73 27)、0. 05mol/l NaH2PO4 緩沖溶液(H3PO4 調 PH = 3. 0士0. 5)-乙腈(85 15)等系統 作為流動相作了系列比較。結果表明，采用0.05mol/l NaH2PO4緩沖溶液(H3PO4調PH = 3.0士0.5)-乙腈(73 27)作為流動相，在該色譜條件下，鹽酸小檗堿峰形及分離度最好， 鹽酸小檗堿峰與之相鄰峰的分離度不低于2.0。鹽酸小檗堿的保留時間適中，鹽酸小檗堿與 供試溶液中其它組分達到基線分離，陰性對照液溶液圖譜在鹽酸小檗堿峰位置無吸收峰， 陰性對照無干擾。4、色譜柱考察為了保證色譜條件的廣泛適用性，考察不同品牌色譜柱對鹽酸小檗堿的分離， 試驗結果表明Diamonsil C18 (5 μ m，250mmX4. 6mm)、Agilent ZORBAX Extend-C18(5 μ m, 250mmX4. 6mm) ,Agilent ZORBAX Eclipse XDB (5 μ m，250mmX 4. 6mm)均對鹽酸小檗堿有良 好的分離。5、本發明組合物片中鹽酸小檗堿提取條件的考察為了確保測定結果真實、準確，本發明通過一系列考察，確保制備供試品溶液時將 本發明組合物片中的鹽酸小檗堿提取完全。選擇正交試驗設計優選影響制劑中成分提取率的3個因素進行考察，分別為提 取溶劑、提取溶劑量、超聲提取時間，每個因素設置3個水平。試驗設計如下 按正交表L9 (34)安排實驗。實驗方法如下 各組樣品用微孔濾膜(0.45μπι)濾過后，進液相分析，記錄峰面積(對于提取溶 劑量為25ml組，吸取5 μ 1樣品進樣；50ml組，吸取10 μ 1樣品進樣；IOOml組，吸取20 μ 1 樣品進樣)，通過統計分析，以峰面積與取樣量比值大為優，確定最終供試品制備方法如下 精密稱本發明組合物去糖衣粉末0. 5g，精密加入甲醇50ml，稱定重量超聲處理30分鐘，放 冷再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。綜上試驗最后確定本發明組合物片劑中鹽酸小檗堿含量測定的色譜條件及對照 品和供試品制備方法為色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.05mol/l NaH2PO4緩沖溶液(H3PO4調PH = 3. 0 士 0. 5)-乙腈(73 27)為流動相；檢測波長為270nm。對照品溶液的制備精密稱定鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成Iml含10 μ g的 溶液。供試品溶液的制備精密稱取該組合物制劑去糖衣粉末0.5g，精密加入甲醇 50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔 濾膜(0. 45 μ m)濾過，取續濾液，即得。測定方法以上溶液，分別精密吸取對照品液、供試品 液各10 μ 1注入液相色譜儀，測定，即得。實驗例3 鹽酸小檗堿含量測定方法驗證實驗
檢測儀器(室溫檢測)=AgilentllOO型高效液相色譜儀色譜柱Agilent Zorbax C184. 6 X 150mm, 5 μ m流動相:0.05mol/l NaH2PO4 緩沖溶液(H3PO4 調 PH = 3. 0 士0. 5)-乙腈(73 27)檢測波長270nm流速L0ml/min柱溫室溫對照品來源鹽酸小檗堿(購于中國藥品生物制品檢定所)供試品批號02120401、02120502、02120603供試品制備精密稱取該組合物制劑粉末0. 5g，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超 聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾 過，取續濾液，即得。陰性對照樣品溶液的制備按本發明組合物制備工藝制備缺黃柏的空白樣品，并 按供試品溶液的制備方法制備成陰性樣品液。分別精密吸取陰性對照液，對照品液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測
定，即得。1.含量測定方法考察1. 1線性關系考察取對照品溶液(10μ g/ml)搖勻，分別精密吸取2、4、6、8、10、12μ 1注入高效液相 色譜儀，測定峰面積，結果見下表，表明鹽酸小檗堿在20ng-120ng間呈線性關系，其回歸方 程為Area = 1. 21960305 X Amt-O. 9018775 (r = 0. 9999) 1.2穩定性試驗對照品溶液，分別于配制后0、2、4、6、12、24小時，依法測定，結果表明，其在24小
時內基本穩定，結果見下表 1.3精密度試驗精密吸取供試品溶液，(批號02120603) 10μ 1，重復進樣5次，求得相對標準偏差
< 2%，結果見下表

1.4重現性試驗按正文方法，取同一批號(批號02120603)樣品五份，對每份進行測定，求得相對 標準偏差<2%，結果見下表 1.5回收率試驗精密稱取已知含量的同一批號(批號02120603)的樣品0. 25g再分別精密稱取 鹽酸小檗堿對照品0. 25mg，按正文供試品溶液的制備方法操作，測定其含量，并計算其回收 率，測定結果見下表 2.該組合物制劑測定結果見下表 根據以上數據，將含量限度定為本品中每素片含黃柏以鹽酸小檗堿計 (C20H17NO4 · HCl)，不得少于 0. 10mg。實驗例4 陳皮薄層鑒別試驗陳皮中主要含有橙皮苷等黃酮苷類化合物，這類成分為極性偏大，能溶于極性溶 齊U，如甲醇等。本處方藥味較多，成分復雜，本發明中利用薄層色譜檢測陳皮中的黃酮類成 分，以此鑒定制劑中含有陳皮藥材。
1、薄層色譜方法的選擇常見的薄層色譜有硅膠薄層層析、紙層析等。硅膠薄層適用于低極性及中等極性成分，適用范圍較廣；紙層析適用于大極性成分如多糖類成分。陳皮中成分多為黃酮苷類成 分，中等極性，所以選擇硅膠層析進行試驗。2、供試品的制備2. 1陳皮有效成分的富集、純化2. 2. 1陳皮有效成分的富集、純化方法考察本處方中藥味較多，成份復雜，需要對制劑中的陳皮成分進行富集、純化。富集、純 化中藥成分常使用吸附法、萃取法及吸附_萃取結合法等。方法1:吸附法取該組合物制劑內容物，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml超聲提取半小 時，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內徑10-15mm)上，用40 %甲醇50ml洗 脫，洗脫液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液1。方法2:萃取法取該組合物制劑內容物，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml超聲提取半小 時，濾過，蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml，合并正丁醇 液，用正丁醇飽和水洗2次，每次10ml。棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶 解，作為供試品溶液2。方法3:吸附-萃取法取本品適量，去糖衣，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml超聲提取半小時， 濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內徑10-15mm)上，用40%甲醇50ml洗脫，洗 脫液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml，合并正丁醇液，用 正丁醇飽和水洗兩次，每次IOml。棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為 供試品溶液3。取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。分別吸取上述對照品溶液4 μ 1，供試品溶液1、2、3各8 μ 1，點樣于同一硅膠G板 上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁 試液，置于紫外光燈(365nm)下檢視。實驗結果如下供試品溶液1非常粘稠、混濁，點樣困難，色譜中未在橙皮苷相對應的位置上顯相 同顏色的熒光斑點；供試品溶液2色譜中所含成分較多，雖在橙皮苷對照品色譜相對應的位置上顯相 同顏色的熒光斑點，但有雜質干擾；供試品溶液3色譜中在橙皮苷對照品色譜相對應的位置上顯相同顏色的熒光斑 點，斑點位置確定，顯色清晰。因此使用吸附法_萃取法進行富集、純化方法。2. 2. 2吸附純化部分的考察吸附法中吸附劑的種類、吸附劑用量、洗脫劑的種類、洗脫劑的用量之間存在著相 互影響的交互作用。因此，采用L93(4)正交實驗設計，對吸附法進行考察。
通過上述實驗方案制備了 9份供試品溶液。取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。分別吸取上述對照品溶液4 μ 1，供試品溶液1-9各8 μ 1，點樣于同一硅膠G板上， 以氯仿-甲醇-水(13 7 2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試 液，置于紫外光燈(365nm)下檢視。實驗結果如下采用硅膠做吸附劑時，由于洗脫溶劑中含有大量的水，使硅膠失活，吸附作用降 低，除雜的作用最弱。在供試品色譜中與對照品色譜相應位置上，有雜質干擾。采用聚酰胺做吸附劑時，用20% 60%甲醇25ml 75ml洗脫，在供試品色譜中， 很難在與對照品色譜相應位置上找到顯相同顏色的熒光斑點。采用中性氧化鋁做吸附劑時，用20% 60%甲醇洗脫，用量在25ml 75ml時，供 試品色譜中在與對照品色譜相應位置上，有顯相同顏色的熒光斑點，且當用40%甲醇洗脫， 用量在50ml時，條件最優，陰性無干擾。2. 2. 3萃取法的考察采用萃取法的目標是富集供試品中的鑒別成分，正丁醇適宜萃取苷類化合物，除 去糖類、蛋白等大極性雜質干擾。為保證充分萃取，對萃取方法進行考察。取該組合物制劑內容物，按2. 2. 2方法制備后過中性氧化鋁柱洗脫液兩份，分別 蒸干，加水15ml溶解。水溶液1用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml，合并正丁醇液，棄去水層，正丁醇 提取液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液1。水溶液2用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗 2次，每次10ml，棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液2。取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。分別吸取上述對照品溶液4 μ 1，供試品溶液1、2各8 μ 1，點樣于同一硅膠G板上， 以氯仿-甲醇-水(13 7 2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試 液，置于紫外光燈(365nm)下檢視。實驗結果如下供試品色譜中1，在與對照品色譜相應位置上，相同顏色的熒光斑點模糊、不清晰， 且有雜質點干擾。供試品色譜中2，在與對照品色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，且斑點清 晰，無雜質干擾。2. 3供試品溶液及對照藥材溶液點樣量的考察
按2. 2項下方法制備供試品溶液。取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。分別吸取上述對照品溶液2、4、6μ 1，供試品溶液6、8、12μ 1，點樣于同一硅膠G板 上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁 試液，置于紫外光燈(365nm)下檢視。實驗結果如下橙皮苷對照品溶液點樣量為2μ 1時，熒光斑點強度較低，不宜觀察；點樣量為 4μ1時，橙皮苷對照品溶液薄層上熒光斑點清晰，大小適中；點樣量為6μ 1時，斑點太大， 拖尾。因此，確定橙皮苷對照品溶液的最佳點樣量為4μ 1。供試品溶液點樣量為6μ 1時，在橙皮苷對照品相對應的位置上熒光斑點強度較 低，不宜觀察；點樣量為8μ 1時，在橙皮苷對照品相對應的位置上熒光斑點明顯，斑點大小 適中，前后無干擾；點樣量為12μ 1時，在橙皮苷對照品相對應的位置上熒光斑點較大，明 顯拖尾，與前后熒光斑點相連。因次確定供試品的最佳點樣量為8 μ 1。2. 4展開劑的選擇按上述方法制備供試品溶液和對照藥材溶液。吸取上述對照品溶液4μ 1，供試品 溶液8μ 1，分別用以下展開劑展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置于紫外光燈(365nm) 下檢視。試驗結果如下方法1:展開劑為氯仿-甲醇-水(6 9 2)(下層)，展開劑極性較大，供試品、 橙皮苷斑點Rf值接近0. 85，供試品色譜中橙皮苷斑點與前后斑點未分開；方法2:展開劑為氯仿-甲醇-水(13 7 2)(下層)，極性適宜，橙皮苷斑點Rf 值接近0. 45，供試品色譜中橙皮苷斑點分離良好，前后無干擾；方法3:展開劑為氯仿-甲醇-水(26 5 2)(下層)，極性偏低，供試品色譜中 橙皮苷斑點與前后斑點未分開。因此，確定分離中藥組合物制劑中陳皮成分的最優薄層展開劑為氯仿_甲醇-水 (13 7 2)(下層)。綜上試驗最后確定中藥組合物制劑中陳皮的薄層色譜鑒別條件為取該組合物制劑內容物，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml超聲提取半小 時，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內徑10-15mm)上，用40 %甲醇50ml洗 脫，洗脫液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml，合并正丁醇 液，用正丁醇飽和水洗2次，每次10ml。棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶 解，作為供試品溶液。另取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品。吸取上述對照 品4μ1，供試品8μ1，分別點樣于同一硅膠G板上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2)的下 層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置于紫外光燈(365nm)下檢視。供 試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點。實驗例5 赤芍薄層鑒別試驗赤芍中主要含有單萜類化合物如芍藥苷等，為赤芍的有效成分。本處方藥味較多， 成分復雜，薄層鑒別方法比較獨特。
1、供試品制備方法的選擇本發明中利用赤芍中的芍藥苷與陳皮中的橙皮苷極性相似，在陳皮薄層鑒別供試品中也含有赤芍成分，以下對此進行驗證取該組合物制劑內容物，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml超聲提取半小 時，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內徑10-15mm)上，用40 %甲醇50ml洗 脫，洗脫液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml，合并正丁醇 液，用正丁醇飽和水洗2次，每次10ml。棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶 解，作為供試品溶液。取芍藥苷對照品，加乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作為對照品溶液吸取對照品溶液、供試品溶液各5 μ 1，分別點樣于同一硅膠G板上，以氯仿_醋酸 乙酯-甲醇-甲酸(40 5 10 0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸 溶液，加熱至斑點顯色清晰。結果表明供試品色譜中，在與芍藥苷對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑 點。陳皮薄層鑒別供試品溶液制備方法同樣適用于制備赤芍的薄層鑒別供試品。2、供試品溶液點樣量的考察本發明，對供試品溶液點樣量進行考察。分別吸取供試品溶液2、5、8μ 1點于同一硅膠G板上，展開、檢識。試驗結果如下供試品溶液點樣量為2μ 1時，斑點強度較低，不宜觀察；供試品溶液點樣量為5μ 1時，薄層上熒光斑點清晰，大小適中，無拖尾，前后無干 擾；供試品溶液點樣量為8μ 1時，供試品溶液薄層上熒光斑點較大，與前后熒光斑點 相連。因此，確定供試品溶液的最佳點樣量為5μ 1。綜上試驗最后確定中藥組合物制劑中赤芍的薄層色譜鑒別條件為取芍藥苷對照品，加乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取芍藥苷 對照品溶液，陳皮薄層鑒別供試品溶液各5 μ 1，分別點樣于同一硅膠G板上，以氯仿-醋酸 乙酯-甲醇-甲酸(40 5 10 0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸 溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑 點ο實驗例6 黃柏薄層鑒別試驗1、供試品制備方法的考察本發明通過一系列考察，對黃柏薄層鑒別供試品提取方法進行優選。選擇正交試驗設計優選影響制劑中成分提取率的3個因素進行考察，分別為提 取溶劑、提取溶劑量、提取時間，每個因素設置3個水平。試驗設計如下 按正交表L9(34)安排實驗。實驗方法如下 通過以上試驗共制備9份供試品溶液。取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成Iml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取對照品溶液及9份供試品溶液，各1 μ 1，分別點樣于同一硅膠G板上，以 苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液(6 3 1.5 1.5 0.5)為展開劑，置氨試 液飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置于紫外光燈(365nm)下檢視。試驗結果表明，最優供試品制備方法為該組合物制劑末0.3g加甲醇IOml超聲 5min，濾過，蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液。
具體實施例方式實施例1丹參144g 澤蘭48g 桃仁48g 紅花144g 赤芍48g白芷96g 陳皮96g 澤瀉144g王不留行144g敗醬240g川楝子96g小茴香(鹽制)96g黃柏(鹽制)144g以上十三味，澤瀉、白芷粉碎成細粉；丹參、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每 次2小時，合并提取液，濾過，回收乙醇；小茴香、陳皮提取揮發油至盡(約4小時)蒸餾后 的水溶液另器收集；藥渣與其余赤芍等七味藥加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小時，第二次以6倍量水煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液與上述藥液合并，濃縮成浸膏，干 燥，粉碎成細粉，加入澤瀉、白芷細粉混勻，制成顆粒，干燥，加入上述小茴香等揮發油，壓制 成1000片，包糖衣，即得。功能主治理氣活血，通經散結。用于前列腺增生癥，尿閉等。用法用量口服，一次4 6片，一日3次。每片重0. 35g。含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 0. 05mol/lNaH2P04緩沖溶液(H3PO4調PH = 3. 0 士0. 5)-乙腈(73 27)為流動相；檢測波長 為270nm ；對照品溶液的制備精密稱定鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成Iml含10 μ g 的溶液；供試品溶液的制備精密稱取該組合物制劑內容物粉末0. 5g，精密加入甲醇50ml， 稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜 (0. 45 μ m)濾過，取續濾液，即得；測定方法以上溶液，分別精密吸取對照品液、供試品液各 10μ 1注入液相色譜儀，測定即得；本品中每片含黃柏以鹽酸小檗堿計(C20H17N04 · HCl)， 不得少于0. IOmg0陳皮薄層鑒別取該組合物制劑內容物，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml 超聲提取半小時，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內徑10-15mm)上，用40% 甲醇50ml洗脫，洗脫液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml， 合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2次，每次IOml ；棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲 醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品；吸取 上述對照品4μ1，供試品8μ1，分別點樣于同一硅膠G板上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2) 的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置于紫外光燈(365nm)下檢 視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點；赤芍薄層鑒別取該組合物制劑，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml超聲 提取半小時，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內徑10-15mm)上，用40%甲 醇50ml洗脫，洗脫液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml，合 并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2次，每次IOml ；棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲 醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作為 對照品溶液；分別吸取對照品，供試品各5 μ 1，分別點樣于同一硅膠G板上，以氯仿-醋酸 乙酯-甲醇-甲酸(40 5 10 0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸 溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑占.黃柏薄層鑒別該組合物制劑粉末0. 3g加甲醇IOml超聲5min，濾過，蒸干，殘渣 加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成Iml含0. 5mg的溶 液，作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液，各1 μ 1，分別點樣于同一硅膠G板上，以苯-醋酸 乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液(6 3 1.5 1.5 0.5)為展開劑，置氨試液飽和的 展開缸內，展開，取出，晾干，置于紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色 譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點。實施例2丹參144g 澤蘭48g 桃仁48g 紅花144g 赤芍48g
白芷96g 陳皮96g 澤瀉144g王不留行144g敗醬240g川楝子96g小茴香(鹽制)96g黃柏(鹽制)144g以上十三味，澤瀉、白芷粉碎成細粉；丹參、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每次2小時，合并提取液，濾過，回收乙醇；小茴香、陳皮提取揮發油至盡(約4小時)蒸餾后 的水溶液另器收集；藥渣與其余赤芍等七味藥加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小 時，第二次以6倍量水煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液與上述藥液合并，濃縮成浸膏，干 燥，粉碎成細粉，加入澤瀉、白芷細粉混勻，制成顆粒，干燥，加入上述小茴香等揮發油，壓制 成1000片，包糖衣，即得。含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 0. 05mol/lNaH2P04緩沖溶液(H3PO4調PH = 3. 0 士0. 5)-乙腈(73 27)為流動相；檢測波長 為270nm ；對照品溶液的制備精密稱定鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成Iml含10 μ g 的溶液；供試品溶液的制備精密稱取該組合物制劑內容物粉末0. 5g，精密加入甲醇50ml， 稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜 (0. 45 μ m)濾過，取續濾液，即得；測定方法以上溶液，分別精密吸取對照品液、供試品液各 10 μ 1注入液相色譜儀，測定即得；本品中每片含黃柏以鹽酸小檗堿計(C20H17N04 · HCl)， 不得少于0. 15mg。實施例3丹參144g 澤蘭48g桃仁48g紅花144g 赤芍48g白芷96g 陳皮96g澤瀉144g王不留行144g敗醬240g川楝子96g小茴香(鹽制)96g黃柏(鹽制)144g以上十三味，澤瀉、白芷粉碎成細粉；丹參、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每 次2小時，合并提取液，濾過，回收乙醇；小茴香、陳皮提取揮發油至盡(約4小時)蒸餾后的 水溶液另器收集；藥渣與其余赤芍等七味藥加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小時， 第二次以6倍量水煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液與上述藥液合并，濃縮成浸膏，干燥，粉 碎成細粉，加入澤瀉、白芷細粉混勻，制成顆粒，干燥，加入上述小茴香等揮發油，混勻，裝膠 囊，即得。含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 0. 05mol/lNaH2P04緩沖溶液(H3PO4調PH = 3. 0 士0. 5)-乙腈(73 27)為流動相；檢測波長 為270nm ；對照品溶液的制備精密稱定鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成Iml含10 μ g 的溶液；供試品溶液的制備精密稱取該組合物制劑內容物粉末0. 5g，精密加入甲醇50ml， 稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜 (0. 45 μ m)濾過，取續濾液，即得；測定方法以上溶液，分別精密吸取對照品液、供試品液各 10μ 1注入液相色譜儀，測定即得；本品中每片含黃柏以鹽酸小檗堿計(C20H17N04 · HCl)， 不得少于0. IOmg0陳皮薄層鑒別取該組合物制劑內容物，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml 超聲提取半小時，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內徑10-15mm)上，用40% 甲醇50ml洗脫，洗脫液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml， 合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2次，每次IOml ；棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲 醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品；吸取上述對照品4μ1，供試品8μ1，分別點樣于同一硅膠G板上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2) 的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置于紫外光燈(365nm)下檢 視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點；赤芍薄層鑒別取該組合物制劑，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml超聲 提取半小時，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內徑10-15mm)上，用40%甲 醇50ml洗脫，洗脫液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml，合 并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2次，每次IOml ；棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲 醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作為 對照品溶液；分別吸取對照品，供試品各5 μ 1，分別點樣于同一硅膠G板上，以氯仿-醋酸 乙酯-甲醇-甲酸(40 5 10 0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸 溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑占.黃柏薄層鑒別該組合物制劑粉末0. 3g加甲醇IOml超聲5min，濾過，蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成Iml含0. 5mg的溶 液，作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液，各1 μ 1，分別點樣于同一硅膠G板上，以苯-醋酸 乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液(6 3 1.5 1.5 0.5)為展開劑，置氨試液飽和的 展開缸內，展開，取出，晾干，置于紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色 譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
權利要求
一種理氣活血，通經散結的中藥組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為丹參120-168重量份、澤蘭24-72重量份、桃仁24-72重量份、紅花120-144重量份、赤芍24-72重量份、白芷72-120重量份、陳皮72-120重量份、澤瀉120-168重量份、王不留行120-168重量份、敗醬216-264重量份、川楝子72-120重量份、小茴香(鹽制)72-120重量份、黃柏(鹽制)120-168重量份。
2.如權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為丹參144重量份、澤蘭48重量份、桃仁48重量份、紅花144重量份、赤芍48重量份、白芷96重量份、陳皮96重量份、澤瀉144重量份、王不留行144重量份、敗醬240重量份、川 楝子96重量份、小茴香(鹽制)96重量份、黃柏(鹽制)144重量份。
3.如權利要求1或2所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為澤瀉、白芷粉碎成細粉；丹參、川楝子用40-80%乙醇回流提取1-3次，每次1-4小時， 合并提取液，濾過，回收乙醇；小茴香、陳皮提取揮發油至盡，蒸餾后的水溶液另器收集；藥 渣與其余赤芍等七味藥加水煎煮1-3次，每次1-5小時，合并煎液，濾過，濾液與上述藥液合 并，濃縮成浸膏，干燥，粉碎成細粉，加入澤瀉、白芷細粉混勻，干燥，加入上述小茴香等揮發 油及常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的劑型，包括但不限于片劑、膠囊 齊U、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑或 口服液體制劑。
4.如權利要求3所述的藥物組合物片劑的制備方法，其特征在于該方法為澤瀉、白芷粉碎成細粉；丹參、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每次2小時，合并提取 液，濾過，回收乙醇；小茴香、陳皮蒸餾提取揮發油4小時后的水溶液另器收集；藥渣與其余 赤芍等七味藥加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小時，第二次以6倍量水煎煮2小時， 合并煎液，濾過，濾液與上述藥液合并，濃縮成浸膏，干燥，粉碎成細粉，加入澤瀉、白芷細粉 混勻，制成顆粒，干燥，加入上述小茴香等揮發油，壓制成片，包糖衣，即得。
5、如權利要求1 或2所述的藥物組合物制劑的質量檢測方法，該方法包括如下含量測定或鑒別中的一種或 幾種A、含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 60-80 20-30 比例的 0. 01-0. lmol/1 NaH2PO4 緩沖溶液(H3PO4 調 PH = 2. 5-4. 0)-乙 腈為流動相；檢測波長為260 280nm ；對照品溶液的制備稱定鹽酸小檗堿，加甲醇制 成Iml含5-15 μ g的溶液；供試品溶液的制備稱取該組合物制劑0. l_2g，精密加入甲醇 25-75ml，稱定重量，超聲處理10-40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻， 用0. 2-0. 45 μ m微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；測定方法以上溶液，分別吸取對照品液、供 試品液各5 15 μ 1注入液相色譜儀，測定即得；組合物制劑0. 2-lg含鹽酸小檗堿不得少 于 0. IOmg0B、鑒別取該組合物制劑，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇25-75ml超聲提取15 45min，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，2. 5 7. 5g，內徑10_15mm)上，用20% 60%甲醇25 75ml洗脫，洗脫液蒸干，加水10 25ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取 1 3次，每次10 25ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗1_3次，每次5 15ml ；棄去 水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液；吸取上述對照品2 6μ 1，供試品6 12 μ 1，分別點樣于同一硅膠G板上，以10-16 5-9 2的氯仿-甲醇-水混合溶劑的下層溶液為展開 齊U，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置于365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與 對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點；C、鑒別取該組合物制劑，粉碎成粉末，稱取粉末5g，加甲醇25-75ml超聲提取15 45min，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，2. 5 7. 5g，內徑10_15mm)上，用20% 60%甲醇25 75ml洗脫，洗脫液蒸干，加水10 25ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取 1 3次，每次10 25ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗1_3次，每次5 15ml ；棄去 水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液；取芍藥苷對照品，加乙醇 制成每Iml含2mg的溶液，作為對照品溶液；吸取對照品，供試品各2_10 μ 1，分別點樣于同 一硅膠G板上，以35-50 4-6 8-12 0. 2比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸混合溶 劑為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色 譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點；D、鑒別該組合物制劑粉末0.I-Ig加甲醇2-15ml超聲5 30min，濾過，蒸干，殘渣加 甲醇0. 5-5ml溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成Iml含0. l_5mg 的溶液，作為對照品溶液；分別吸取上述兩種溶液各0. 1-2 μ 1，分別點樣于同一硅膠G板 上，以5-8 2-4 1-3 1-4 0. 3-0. 9比例的苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試 液混合溶劑為展開劑，置氨試液飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置于365nm紫外光燈下 檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
6.如權利要求5所述的藥物組合物制劑的質量檢測方法，該方法包括如下含量測定和 /或鑒別中的一種或幾種含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 0. 05mol/l NaH2PO4緩沖溶液(H3PO4調PH= 3. 0士0. 5)-乙腈(73 27)為流動相；檢測波長 為270nm ；對照品溶液的制備精密稱定鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成Iml含10 μ g的 溶液；供試品溶液的制備精密稱取該組合物制劑內容物粉末0. 5g，精密加入甲醇50ml，稱 定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0. 45 μ m微孔 濾膜濾過，取續濾液，即得；測定方法以上溶液，分別精密吸取對照品液、供試品液各10 μ 1 注入液相色譜儀，測定即得； 鑒別陳皮薄層鑒別取該組合物制劑內容物，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml超 聲提取半小時，濾過，濾液加于100-120目，5g，內徑10-15mm中性氧化鋁柱上，用40%甲醇 50ml洗脫，洗脫液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml，合并 正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2次，每次IOml ；棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇 2ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品；吸取上 述對照品4 μ 1，供試品8 μ 1，分別點樣于同一硅膠G板上，以13 7 2氯仿-甲醇-水 的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置于365nm紫外光燈下檢視； 供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點；赤芍薄層鑒別取該組合物制劑，粉碎成粉末，稱取本粉末5g，加甲醇50ml超聲提取半 小時，濾過，濾液加于100-120目，5g，內徑10-15mm中性氧化鋁柱上，用40 %甲醇50ml洗脫，洗脫液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取兩次，每次15ml，合并正丁醇 液，用正丁醇飽和水洗2次，每次IOml ；棄去水層，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇2ml溶 解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作為對照品溶 液；分別吸取對照品，供試品各5μ1，分別點樣于同一硅膠G板上，以40 5 10 0.2的 氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至 斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點；黃柏薄層鑒別該組合物制劑粉末0. 3g加甲醇IOml超聲5min，濾過，蒸干，殘渣加 甲醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成Iml含0. 5mg的 溶液，作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液，各 μ ，分別點樣于同一硅膠G板上，以 6 3 1.5 1.5 0.5的苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液為展開劑，置氨試液 飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置于365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照 品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
7.如權利要求1或2所述的中藥組合物在制備治療前列腺增生癥、尿閉藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種理氣活血，通經散結的中藥組合物制劑，該組合物由丹參120-168重量份、澤蘭24-72重量份、桃仁24-72重量份、紅花120-144重量份、赤芍24-72重量份、白芷72-120重量份、陳皮72-120重量份、澤瀉120-168重量份、王不留行120-168重量份、敗醬216-264重量份、川楝子72-120重量份、小茴香(鹽制)72-120重量份、黃柏(鹽制)120-168重量份制成，該組合物制劑對前列腺增生癥、尿閉具有顯著療效。
文檔編號G01N30/90GK101837076SQ20091008029
公開日2010年9月22日 申請日期2009年3月17日 優先權日2009年3月17日
發明者付建家, 付立家 申請人:北京亞東生物制藥有限公司