一種煙草中蛋白質氮含量的測定方法

專利名稱：一種煙草中蛋白質氮含量的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種煙草成分的分析測定技術領域，尤其涉及一種煙草中蛋白質氮含量的測定方法。
背景技術：
煙草中的蛋白質對煙草的質量具有較大的影響，一般來講，蛋白質含量的多少與煙草品質的優劣成反比，優質煙的蛋白質含量在10%以下。蛋白質是煙氣中眾多含氮化合物的前體之一，煙草中蛋白質含量的減少有助于減少霍夫曼煙氣分析物中的N雜環化合物 (喹啉，N雜環胺)、芳香胺和HCN，因此較低含量的蛋白質對煙草的品質有著積極的影響；但是蛋白質含量過低，產生的煙氣就會顯得平淡，吃味和香味也會變差，蛋白質的含量直接影響煙草的質量。而且在煙草的處理過程中，蛋白質水平的變化極大如煙草調制可明顯改變其蛋白質的含量和特性，大約有50%的蛋白質在收獲期及調制期被水解或降解，而且在煙草調制過程中蛋白質水解為氨基酸，氨基酸含量與煙氣的香味和豐滿度有明顯的正相關關系；在煙草醇化過程中，煙草中的其他成分會隨著醇化過程而變化，從而也引起煙草中蛋白質含量的變化。因此煙草中蛋白質氮的含量對于其質量有著很大的影響，蛋白質氮含量的測定對于煙草品質的了解，各階段煙草中蛋白質含量的掌握，煙草工業的研究開發以及生產都十分重要。對于氮含量的測定，通常是將含氮化合物消解為硝酸鹽，然后將得到的硝酸鹽定量還原為亞硝酸鹽，利用亞硝酸鹽與磺胺和N-萘基乙二胺鹽酸鹽顯色的性質，采用分光光度法對其進行測定。如鄒琳等利用流動注射分析儀測定了水中的總氮和總磷的含量(鄒琳，周圣東，陳衛.高壓消解\流動注射光度法同時測定水中總氮與總磷.中國給水排水， 2009,25(22) :93 97.)，其過程為在110°C下，將水樣通過堿性過硫酸鉀和硫酸兩次消解，得到的消解產物分別進入流動注射分析儀中的總氮、總磷分析系統，得到水樣中總氮、 總磷的含量。在總氮分析系統中，消解產物通過一個鍍銅的鎘圈后，硝酸根被定量還原為亞硝酸根，在酸性條件下，亞硝酸根與磺胺和N-萘基乙二胺鹽酸鹽在45°C恒溫條件下反應生成紫紅色物質，其最佳吸收波長為^Onm，采用分光光度法對得到的紫紅色物質進行測定， 得到水中的總氮含量。上述高壓消解對無機氮具有較好的消解效果，然而煙草中的含氮成分復雜，這種高壓消解的方法對煙草中的某些含氮化合物如植物堿、氨基酸、水溶性蛋白質等消解不夠完全和徹底，得到的消解效果不均一，帶來較大的誤差；而且煙草中含有還原性成分，如糖類，這些還原性成分會與氧化劑反應，從而影響對含氮組分的消解，嚴重影響其消解效果， 使得對煙草中蛋白質氮含量測定的結果不準確。

發明內容
本發明的目的在于提供一種煙草中蛋白質氮含量的測定方法，本發明提供的方法對煙草中蛋白質氮含量的測定具有較高的準確性。
本發明提供一種煙草中蛋白質氮含量的測定方法，包括以下步驟a)分離煙草中的蛋白質氮，得到含有非蛋白質氮的待測試樣；b)在加熱條件下，向所述待測試樣中加入過硫酸鉀，得到混合溶液；c)將所述混合溶液依次經過紫外催化和高溫加熱，得到消解產物；d)檢測所述消解產物，得到煙草中非蛋白質氮含量；e)根據預定的煙草中總氮含量和所述煙草中非蛋白質氮含量，得到煙草中蛋白質
氮含量。優選的，所述紫外催化為在非硫酸酸性環境中進行紫外催化。優選的，所述紫外催化的溫度為90°C 110°C。優選的，所述高溫加熱的溫度為95°C 150°C。優選的，所述高溫加熱為加壓高溫加熱。優選的，所述加壓高溫加熱的壓力為5Psi 8Psi。優選的，所述步驟b)中的加熱溫度為90°C 110°C。優選的，所述步驟a)具體為向煙草中加入蛋白質變性試劑，加熱得到的混合物，分離后得到含有非蛋白質氮的待測試樣。優選的，所述蛋白質變性試劑為有機酸。優選的，所述步驟b)前還包括向所述待測試樣中加入過氧化氫，氧化所述待測試樣中的還原性組分；和/或向所述待測試樣中加入活性炭，除去所述待測試樣中的無機色素；和/或向所述待測試樣中加入乙二胺四乙酸二鈉，除去所述待測試樣中的金屬離子。本發明提供一種煙草氮中蛋白質的測定方法，包括以下步驟分離煙草中的蛋白質氮，得到含有非蛋白質氮的待測試樣；在加熱條件下，向所述待測試樣中加入過硫酸鉀， 得到混合溶液；將所述混合溶液依次經過紫外催化和高溫加熱，得到消解產物；檢測所述消解產物，得到煙草中非蛋白質氮含量；根據預定的煙草樣品中總氮含量和所述煙草中非蛋白質氮含量，得到煙草中蛋白質氮含量。在本發明中，過硫酸鉀在加熱條件下釋放出活性氧原子
，得到的活性氧原子
首先對煙草樣品進行消解，然后在紫外催化條件下，部分出活性氧原子
在紫外催化的條件下與水反應生成自由基，該自由基使煙草中的含氮化合物得到消解；接著，在高溫條件，活性氧原子
對煙草中的含氮化合物進行進一步消解，最終使各類含氮組分被充分消解。本發明提供的方法在對煙草中的含氮化合物消解的同時也消解了其中的還原性成分，使其失去了還原作用，消除了對含氮組分消解的干擾，提高了消解結果的均一性，提高了對煙草中蛋白質氮含量檢測的準確度。另外，本發明提供的測定方法具有良好的穩定性和重復性。實驗結果表明，本發明提供的方法對煙草中蛋白質氮測定得到的數據變異系數較小，準確度較高。另外，本發明提供的方法采用連續消解的方式，消解條件溫和，操作簡單、 省時，步驟簡便；本發明提供的方法批量處理樣品能力較強，處理周期較短，大大提高了檢測效率。


圖1為本發明實施例1得到的紫外光譜圖；圖2為本發明實施例1得到的非線性二級標準曲線；圖3為本發明實施例1得到的線性標準曲線。
具體實施例方式本發明提供了一種煙草中蛋白質氮含量測定方法，包括以下步驟a)分離煙草中的蛋白質氮，得到含有非蛋白質氮的待測試樣；b)在加熱條件下，向所述待測試樣中加入過硫酸鉀，得到混合溶液；c)將所述混合溶液依次經過紫外催化和高溫加熱，得到消解產物；d)檢測所述消解產物，得到煙草中非蛋白質氮含量；e)根據預定的煙草中總氮含量和所述煙草中非蛋白質氮含量，得到煙草中蛋白質
氮含量。為了便于對煙草中蛋白質氮含量的測定，本發明優選對煙草進行前處理，具體包括以下步驟將煙草烘干、粉碎，得到煙草粉末。所述烘干溫度優選為25°C 40°C，更優選為 38°C，最優選為30°C 35°C，所述煙草粉末的粒度優選為60目 120目，更優選為
65目 110目，最優選為80目 100目。得到煙草粉末后，測量所述煙草粉末的干重。所述煙草粉末的干重優選按照以下方法獲得測定所述煙草粉末中的水分含量，用稱量得到的煙草粉末的質量扣除所述煙草粉末中的水分含量，得到所述煙草粉末的干重。本發明優選采用烘箱法測定所述煙草粉末中的水分含量，對所述烘箱法沒有特殊限制。煙草粉末的質量根據測定結果的精確度而定，本發明中，測定結果的準確度優選為0. OOOlg 0. Olg，更優選為0. OOlg 0. Olgo得到煙草粉末的干重后，本發明分離所述煙草粉末中的蛋白質氮，得到含有非蛋白質氮的待測試樣。本發明可以采用向煙草粉末中加入蛋白質變性試劑，加熱得到的混合物，或紫外烘烤所述煙草粉末的方法，固化其中的蛋白質，分離固化后的蛋白質，得到含有非蛋白質氮的待測試樣；本發明優選向煙草粉末中加入蛋白質變性試劑，加熱得到的混合物，分離固化后的蛋白質，得到含有非蛋白質氮的待測試樣。所述蛋白質變性試劑優選為有機酸， 更優選為醋酸水溶液；所述醋酸水溶液的體積分數優選為0. 5%，更優選為0. 3% 4%，最優選為0.5% 3% ；所述蛋白質變性試劑的體積與煙草粉末的質量比優選為 25mL (0. 1 3) g，更優選為25mL (0. 3 1) g ；優選將得到的混合物加熱至沸騰；所述加熱時間優選為5分鐘 50分鐘，更優選為8分鐘 40分鐘，最優選為20分鐘 30分鐘。停止加熱后，優選將得到的溶液趁熱過濾，用所述蛋白質變性試劑優選淋洗1 次 10次，更優選為2次 8次，最優選為3 5次，合并每次得到的濾液，冷卻后定容，得到含有非蛋白質氮的待測試樣。為了減小煙草中還原性組分對其中非蛋白質氮含量測定的干擾，本發明在對所述待測試樣進行消解前優選氧化所述待測試樣中的還原性組分。本發明中所述煙草中主要的
5還原物質為糖類化合物，優選當所述待測樣品中總糖含量> 15%時，更優選> 20%時，優選向所述待測樣品中加入過氧化氫，氧化所述待測試樣中的還原性組分。所述過氧化氫與待測樣品中的還原性組分進行氧化還原反應，使其失去還原作用，所述過氧化氫的質量濃度優選為3% 50%，更優選為10% 30%，本發明對所述氧化還原反應中原料的配比，反應條件等沒有特殊限制，為本領域技術人員熟知的還原性物質與過氧化氫之間的氧化還原反應。為了減小雜質對測定的干擾，本發明在對所述待測試樣進行消解前優選除去所述待測試樣中的雜質，得到含有非蛋白質氮的待測試樣。如所述待測樣品中含有無機色素時， 可以采用以下方法處理優選向所述濾液中加入活性炭，過濾得到的混合溶液，除去其中的無機色素；所述待測樣品含有金屬離子時，可以采用以下方法處理優選向所述濾液中加入乙二胺四乙酸二鈉溶液，過濾得到的混合溶液，除去其中的金屬離子，所述乙二胺四乙酸二鈉溶液的濃度優選為0. lg/L 5g/L，更優選為0. 2g/L 3g/L，最優選為0. 8g/L 2g/ L ；所述待測樣品含有無機色素和金屬離子時，可以先用上述方法除去無機色素再除去金屬離子，也可以先用上述方法除去金屬離子再除去無機色素。得到含有非蛋白質氮的待測試樣后，本發明在加熱條件下，向所述待測試樣中加入過硫酸鉀，得到混合溶液。所述過硫酸鉀在加熱條件下釋放出活性氧原子
，得到的活性氧原子
會對待測試樣進行消解，得到消解產物。所述過硫酸鉀與所述煙草粉末干重的質量比優選為1 (1 20)，更優選為1 0 15)，最優選為1 (3 10);優選向所述待測試樣中加入過硫酸鉀溶液，所述過硫酸鉀溶液的摩爾濃度優選為0. lmol/L lmol/ L，更優選為0. 15mol/L 0. 8mol/L，最優選為0. 25mol/L 0. 5mol/L ；所述加熱溫度優選為90°C 110°C，更優選為95°C 105°C。得到混合溶液后，本發明將所述混合溶液依次進行紫外催化和高溫加熱，得到消解產物。首先將所述混合溶液進行紫外催化，得到紫外催化的消解產物。在紫外催化過程中，上述得到的部分活性氧原子
在紫外催化的條件下與水反應，優選在紫外燈照射條件下，生成自由基，所述自由基可對待測試樣中的各類有機氮等還原性組分進行消解，得到紫外催化的消解產物。所述紫外催化優選在非硫酸酸性環境中進行紫外催化，更優選為在鹽酸酸性環境中進行紫外催化；所述紫外催化的溫度優選為90°C 110°C，更優選為 95°C 105 "C。得到紫外催化的消解產物后，本發明將所述紫外催化的消解產物繼續進行高溫加熱，得到所述待測試樣的消解產物。在高溫加熱過程中，上述得到的活性氧原子
在高溫條件下對所述紫外催化消解產物進行進一步消解，得到所述待測樣品的消解產物。所述高溫加熱的溫度優選為95°C 150°C，更優選為100°C 140°C，最優選為110°C 130°C ；所述高溫加熱優選為加壓高溫加熱，所述加壓高溫加熱的壓力優選為5Psi 8Psi，更優選為 5. 5Psi 7. 5Psi。得到所述待測試樣的消解產物后，檢測所述消解產物，本發明優選采用紫外分光光度法檢測所述消解產物，得到所述消解產物的紫外光譜數據。首先將得到的消解產物還原，得到亞硝酸鹽，然后將所述亞硝酸鹽優選與磺胺和Ν-α-萘基)乙二胺二鹽酸鹽反應， 得到紫紅色產物，采用紫外分光光度法測定得到的紫紅色產物，得到所述消解產物的紫外光譜數據。優選用鎘將得到的消解產物還原，得到亞硝酸鹽；所述磺胺的濃度優選為Ig/ L 50g/L，更優選為10g/L 40g/L，最優選為20g/L 30g/L ；所述N-萘基乙二胺鹽酸鹽的濃度優選為0. lg/L 10g/L,更優選為0. 5g/L 8g/L，最優選為lg/L 5g/L ；所述測定波長優選為520nm 560nm，更優選為530nm 550nm，最優選為5;35nm M5nm。根據上述技術方案得到的紫外光譜數據和預定的標準曲線，即可得到煙草中的非蛋白質氮含量。在本發明中，所述標準曲線優選按照以下方法獲得配制系列濃度的標準溶液；在加熱條件下，向所述標準溶液中加入過硫酸鉀，得到混合溶液；將所述混合溶液依次經過紫外催化和高溫加熱，得到消解產物；檢測所述消解產物，得到系列濃度標準溶液的紫外光譜數據；根據所述紫外光譜數據繪制標準曲線。本發明中所述標準溶液優選為硝酸鈉水溶液，采用國家標準物質研究中心的硝酸鹽氮標準，配制系列濃度的標準溶液。首先，配制標準物質的儲備液，將得到的儲備液稀釋至標準溶液的濃度。所述標準溶液的質量濃度優選為0. 001% 10%，更優選為0. 01% 5%，最優選為0. ；優選用醋酸溶液將標準物質儲備液稀釋到標準溶液的濃度，所述醋酸溶液的體積分數優選為0. 1 % 10 %，更優選為0. 25 % 8 %，最優選為0. 5 % 5%。得到系列濃度的標準溶液后，本發明在加熱條件下，向所述標準溶液中加入過硫酸鉀消解，得到混合溶液。所述過硫酸鉀在加熱條件下釋放出活性氧原子
，得到的活性氧原子
會對所述標準溶液進行消解，得到消解產物。所述過硫酸鉀與所述標準溶液中標準物質的質量比優選為1 (1 20)，更優選為1 O 15)，最優選為1 (3 10); 優選向所述標準溶液中加入過硫酸鉀溶液，所述過硫酸鉀溶液的摩爾濃度優選為0. Imol/ L lmol/L，更優選為0. 15mol/L 0. 8mol/L,最優選為0. 25mol/L 0. 5mol/L ；所述加熱溫度優選為90°C 110°C，更優選為95°C 105°C。得到混合溶液后，將所述混合溶液依次經過紫外催化和高溫加熱，得到消解產物。 所述紫外催化和高溫加熱過程與上述技術方案中的紫外催化和高溫加熱過程相同。按照上述技術方案中的紫外催化和高溫加熱過程，得到消解產物后，檢測所述消解產物，得到系列濃度標準溶液的紫外光譜數據。所述檢測過程與上述技術方案中的檢測過程相同。根據上述技術方案中的檢測過程，得到系列濃度標準溶液的紫外光譜數據后，根據所述紫外光譜數據及其對應的濃度繪制得到標準曲線。所述標準曲線優選為非線性二級標準曲線或線性標準曲線。根據上述技術方案得到的煙草消解產物的紫外光譜圖和標準曲線，經過計算得到煙草中非蛋白質氮的質量，再將所述非蛋白質氮的質量除以上述煙草樣品的干重，得到煙草中非蛋白質氮含量。得到煙草中非蛋白質氮含量后，根據預定的煙草中總氮含量和所述煙草中非蛋白質氮含量，得到煙草中蛋白質氮含量。本發明可以按照行業標準YC/T161-2002測定所述煙草中總氮含量，也可以按照上述煙草中非蛋白質氮含量的測定方法測定煙草中總氮含量。采用上述煙草中非蛋白質氮含量的測定方法測定煙草中的總氮含量時，所述煙草中總氮含量測定的技術方案與上述非蛋白質氮含量的技術方案的不同之處在于，煙草中總氮含量的測定不包括步a)分離煙草中的蛋白質氮，得到含有非蛋白質氮的待測試樣。根據上述技術方案得到的煙草中總氮含量和非蛋白質氮含量，經過計算得到煙草中蛋白質氮含量。得到煙草中蛋白質氮含量后，還可以用所述煙草中蛋白質氮含量乘以蛋白質系數，即可得到煙草中蛋白質含量。在本發明提供的煙草中蛋白質氮含量的測定方法中，過硫酸鉀釋放的活性氧原子
首先對煙草樣品進行初步消解，然后依次在紫外催化和高溫加熱的條件下部分活性氧原子
對煙草進行進一步地消解，其中的含氮化合物得到相對完全和徹底地消解，而且消除了其中還原性組分對消解產物的影響，具有良好的消解效果，提高了消解產物的均一性，提高了對煙草中蛋白質氮含量測定的準確性。另外，本發明提供的方法具有良好的穩定性和重復性。為了進一步說明本發明，以下結合實施例對本發明提供的煙草中蛋白質氮含量的測定方法進行詳細描述，但不能將它們理解為對本發明保護范圍的限定。實施例1將Ilg硝酸鈉溶解于IOOmL蒸餾水中，得到質量濃度為10. 0 %的硝酸鈉儲備液。 準確移取1. OmL,2. OmL,4. OmL,6. OmL,8. OmLUO. OmL所述標準儲備液，用體積分數為0. 5% 的醋酸溶液分別將其定容到lOOmL，得到系列濃度的硝酸鈉標準待測溶液。分別取所述標準待測溶液2mL，傾入連續流動分析儀樣品管中分別平行測定三次，取其平均值。在連續流動分析儀中，樣品進樣量為0. lmL/min，進樣時間為100s，沖洗時間為120s。首先在90°C下， 向所述標準待測溶液中加入2mL摩爾濃度為0. 3mol/L的過硫酸鉀溶液，過硫酸鉀溶液的進樣量為0. SmL/min，然后得到的混合溶液在90°C，鹽酸提供的酸性條件下進行紫外燈照射 3min，接著在6Psi壓力下高溫加熱得到的紫外催化的消解產物2. 5min，加熱溫度為110°C， 得到樣品的消解產物。得到的消解產物經過鎘柱時被還原為亞硝酸鹽，進入檢測器進行紫外分光光度法測定，檢測波長為MOnm，得到標準物質的紫外光譜圖。標準物質的紫外光譜圖如圖1所示，圖1為本發明實施例1得到的紫外光譜圖，圖中曲線上的信號叉從第五個開始緊接著的6個信號叉依次為系列濃度的標準溶液的電信號強度。根據得到的系列濃度的標準物質的紫外光譜圖及其對應的濃度繪制得到標準曲線，如圖2和圖3所示，圖2為本發明實施例1得到的非線性二級標準曲線，圖3為本發明實施例1得到的線性標準曲線，圖3所示的線性標準曲線的硝酸根濃度線性范圍為0. 1%，線性方程為:A(吸光度)=-1076. 98+47750. 43C(% )，相關系數r為0.9981。由圖中可以看出，本發明提供的方法對氮含量的測定得到的電信號強度明顯提高，而且電信號強度與其濃度之間存在良好的線性關系，本發明提供的方法具有良好的效果。比較例1將Ilg硝酸鈉溶解于IOOmL蒸餾水中，得到質量濃度為10. O %的硝酸鈉儲備液。 準確移取1. OmL,2. OmL,4. OmL,6. OmL,8. OmLUO. OmL所述標準儲備液，用體積分數為0. 5% 的醋酸溶液分別將其定容到lOOmL，得到系列濃度的硝酸鈉標準溶液。分別取得到的標準溶液2mL，傾入連續流動分析儀樣品管中分別平行測定三次，取其平均值。在連續流動分析儀中，樣品進樣量為0. lmL/min，進樣時間為100s，沖洗時間為120s。首先在90°C下，向所述標準溶液中加入2mL摩爾濃度為0. 3mol/L的過硫酸鉀溶液，過硫酸鉀溶液的進樣量為0. SmL/ min，然后在6Psi壓力下高溫加熱得到的混合溶液2. 5min，加熱溫度為110°C，得到樣品的消解產物。得到的消解產物經過鎘柱時被還原為亞硝酸鹽，進入檢測器進行紫外分光光度法檢測，檢測波長為MOnm，得到標準物質的紫外光譜圖。根據得到的系列濃度的標準物質的紫外光譜圖繪制得到標準曲線。實施例2 17根據中華人民共和國標準GB/T19616-2004選擇16種煙草樣品，煙草樣品為本公司技術中心原料檢驗室煙葉組提供的2006年、2007年和2008年國內外生產的烤煙煙葉樣品，按照中華人民共和國煙草行業標準YC/T31-1996制備煙末試樣，測定煙末中水分含量。 將2g煙末試樣溶解于IOOmL體積分數為0. 5%的乙酸溶液中，加熱沸騰15分鐘，迅速用無氮定性濾紙過濾，用體積分數為0. 5%的乙酸溶液沖洗沉淀物，合并得到的濾液，冷卻后定容到200mL，準確移取2mL濾液傾入連續流動分析儀樣品管中分別平行測定三次，取其平均值。在連續流動分析儀中，樣品進樣量為0. lmL/min，進樣時間為100s，沖洗時間為120s。 首先在90°C下，向所述濾液中加入2mL摩爾濃度為0. 3mol/L的過硫酸鉀溶液，過硫酸鉀溶液的進樣量為0. SmL/min，然后得到的混合溶液在90°C，鹽酸提供的酸性條件下進行紫外燈照射3min，接著在6Psi壓力下高溫加熱得到的紫外催化的消解產物2. 5min,加熱溫度為 110°C，得到煙堿樣品的消解產物。得到的消解產物經過鎘柱時被還原為亞硝酸鹽，進入檢測器進行紫外分光光度法檢測，檢測波長為MOnm，得到煙草樣品的紫外光譜圖。根據得到的煙草樣品的紫外光譜圖和實施例1得到的標準曲線，得到煙草中非蛋白質氮含量。將2g煙末試樣溶解于IOOmL水中，過濾除去其中的不溶性雜質，將得到的濾液合并后定容到200mL，準確移取2mL濾液傾入連續流動分析儀樣品管中分別平行測定三次，測定過程同本實施例中上述測定煙草中非蛋白質氮的過程相同，得到煙草樣品中總氮的紫外光譜圖。根據得到的煙草樣品中總氮的紫外光譜圖和實施例1得到的標準曲線，得到煙草中總氮含量。根據得到的煙草中總氮含量和所述煙草中非蛋白質氮含量，得到煙草中蛋白質氮含量，再用所述煙草中蛋白質氮含量乘以蛋白質系數，得到煙草中蛋白質含量，結果如表1 所示，表1為本發明實施例2 17得到的測定結果。表1本發明實施例2 17得到的測定結果
權利要求
1.一種煙草中蛋白質氮含量的測定方法，包括以下步驟a)分離煙草中的蛋白質氮，得到含有非蛋白質氮的待測試樣；b)在加熱條件下，向所述待測試樣中加入過硫酸鉀，得到混合溶液；c)將所述混合溶液依次經過紫外催化和高溫加熱，得到消解產物；d)檢測所述消解產物，得到煙草中非蛋白質氮含量；e)根據預定的煙草中總氮含量和所述煙草中非蛋白質氮含量，得到煙草中蛋白質氮含量。
2.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述紫外催化為在非硫酸酸性環境中進行紫外催化。
3.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述紫外催化的溫度為90°C 110°C。
4.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述高溫加熱的溫度為95°C 150°C。
5.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述高溫加熱為加壓高溫加熱。
6.根據權利要求5所述的測定方法，其特征在于，所述加壓高溫加熱的壓力為5Psi SI3Si。
7.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述步驟b)中的加熱溫度為90°C 110°C。
8.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述步驟a)具體為向煙草中加入蛋白質變性試劑，加熱得到的混合物，分離后得到含有非蛋白質氮的待測試樣。
9.根據權利要求8所述的測定方法，其特征在于，所述蛋白質變性試劑為有機酸。
10.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述步驟b)前還包括 向所述待測試樣中加入過氧化氫，氧化所述待測試樣中的還原性組分；和/或向所述待測試樣中加入活性炭，除去所述待測試樣中的無機色素； 和/或向所述待測試樣中加入乙二胺四乙酸二鈉，除去所述待測試樣中的金屬離子。
全文摘要
本發明提供一種煙草中蛋白質氮含量的測定方法，包括以下步驟分離煙草中的蛋白質氮，得到含有非蛋白質氮的待測試樣；在加熱條件下，向所述待測試樣中加入過硫酸鉀，得到混合溶液；將所述混合溶液依次經過紫外催化和高溫加熱，得到消解產物；檢測所述消解產物，得到煙草中非蛋白質氮含量；根據預定的煙草中總氮含量和所述煙草中非蛋白質氮含量，得到煙草中蛋白質氮含量；本發明提供的方法能夠更加完全和徹底地消解煙草中的含氮物質，具有良好的消解效果，在消解煙草中含氮組分的同時也消解了其中的還原性組分，使其失去還原作用，減少對含氮組分消解的干擾，提高了消解結果的均一性，提高了對煙草中蛋白質含量測定的準確性。
文檔編號G01N33/68GK102565425SQ20111046014
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月30日 優先權日2011年12月30日
發明者孔浩輝, 張心穎, 程志穎, 馬青 申請人:廣東中煙工業有限責任公司