專利名稱：一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對映異構體的方法
技術領域：
本發明涉及一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對映異構體的方法，屬于對映體的拆分和檢測技術領域。
背景技術：
建立一種快速且可靠的分離與檢測方法是制備高純度手性物質的前提。目前，常用的手性化合物的分離分析方法有高效液相色譜(或氣相色譜)_手性柱分離法、酶(也包括微生物細胞)拆分法、化學衍生與色譜分離相結合等，但這些方法的成本較高、適用性和效率差、步驟繁瑣，而且不易實現分析手段的自動化。相比之下，高效毛細管電泳具有效率高、 速度快、所需樣品和試劑少、檢測模式多且可以和其他技術聯用、試劑廉價易得、能夠實現自動化的優點，近年來廣泛應用于各種手性藥物及中間體、以及多肽等樣品的分離分析。此夕卜，相比常規的高效液相色譜等分離方法，高效毛細管電泳具有柱效高、有機溶劑用量少、環境污染小、能多次循環使用等特點，與我國當前大力倡導的節能減排和循環經濟的發展方式相符合。⑷-和⑶-3-羥基戊二酸單酯(包括甲酯、乙酯等)是制備阿托伐他汀(Atorvastatin )、瑞舒伐他汀(Rosuvastatin )等他汀類藥物以及減肥健美類藥物左旋肉堿(L-carnitine)的關鍵中間體。目前，無論采用化學合成還是生物合成法，制備得到的都是0 )-和(5)-3-羥基戊二酸單酯的對映體混合產物。而且，研究人員運用了包括高效液相色譜-手性柱等分離手段在內的諸多分離分析方法，均不能對該對映體混合物進行有效分離。因此，迄今為止，無法對0 )-和(5)-3-羥基戊二酸單酯的光學純度進行有效的分析。通過在高效毛細管電泳緩沖液中加入手性選擇劑，構建合適的手性選擇環境，利用其與對映異構體之間的作用差異進行分離。目前，國內外文獻還沒有應用毛細管電泳分離0 )-和C )-3-羥基戊二酸單酯、以及分離檢測其光學純度的相關報道，本發明利用該技術建立了一種分離效果好、靈敏度高、準確性好的分析方法應用于0 )-和C )-3-羥基戊二酸單酯的分離分析。
發明的內容
本發明的目的在于提供了一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對映異構體的方法，通過在高效毛細管電泳緩沖液中加入手性選擇劑，構建合適的手性選擇環境，利用其與對映異構體之間的作用差異進行分離，具有分離效果好、靈敏度高、準確性好等特點。為達到上述目的，本發明的技術方案是
一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對映異構體的方法，包括如下步驟1)用二次重蒸水配置濃度為O. Γ1. O mg/mL的3-羥基戊二酸單酯樣品溶液；2)配制pH為5^7的緩沖溶液，在所述的緩沖溶液中加入濃度為(Γ50 mmol/L的手性選擇劑，超聲脫氣2(T40min，用O. 45 μ m微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續超聲脫氣l(T20min所得溶液為電泳緩沖液；3)使用高效毛細管電泳儀將步驟I)配制的3-羥基戊二酸單酯樣品溶液在毛細管電泳條件下，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使0 )-3-羥基戊二酸單酯和C )-3-羥基戊二酸單酯對映體實現基線分離。所述的3-羥基戊二酸單酯采用3-羥基戊二酸甲酯、3-羥基戊二酸乙酯、3-羥基戊二酸丙酯中的一種。所述的步驟2)中的緩沖溶液為磷酸鹽緩沖液。所述的手性選擇劑采用β -環糊精、羥甲基-β -環糊精、羥乙基-β -環糊精、羥丙基-β -環糊精中的一種。所述的毛細管電泳采用高效毛細管電泳儀，其電泳條件為分離電壓為1(T30 kv,柱溫2(T30°C，檢測波長為190 250 nm，壓力進樣為50 mbaX4S。本發明的有益效果是通過使用本發明提供的一種高效毛細管電泳分離3-羥 基戊二酸單酯對映異構體的方法，通過在高效毛細管電泳緩沖液中加入手性選擇劑，構建合適的手性選擇環境，利用其與對映異構體之間的作用差異進行分離，解決了高效液相色譜-手性柱法等傳統分離方法難以有效分離0 )-和C )-3-羥基戊二酸單酯對映體的難題，從而能夠對0 )-和C )-3-羥基戊二酸單酯的樣品的光學純度進行正確測定。該方法具有分離效果好、靈敏度高、準確性好、無污染、成本低以及易于自動化等優點。
圖I是本發明實施例I中0 )-和(5)-3-羥基戊二酸乙酯樣品的高效毛細管電泳分離具體實施例方式實施例I
下面結合具體詳細實例對本發明所采用的分離方法及其帶來的技術效果作進一步的說明，但本發明的保護范圍并不僅限于此。I)用二次重蒸水配置濃度為O. 5 mg/mL的3_羥基戊二酸乙酯樣品溶液；2)配制pH為5. O的磷酸鹽緩沖溶液，在所述的磷酸鹽緩沖溶液中加入濃度為30 mmol/L的β -環糊精作為手性選擇劑，超聲脫氣30min，用O. 45 μ m微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續超聲脫氣IOmin所得溶液為電泳緩沖液；3)將步驟I)配制的3-羥基戊二酸乙酯樣品溶液在毛細管電泳條件下，(所用儀器為G1600AX型高效毛細管電泳儀(美國Agilent公司))，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使(K)- 3-羥基戊二酸乙酯和C )-3-羥基戊二酸乙酯對映體實現基線分離，所述的毛細管電泳條件為分離電壓為20 kV，柱溫25°C，檢測波長為214nm，壓力進樣為50 mbaX4S。實驗結果如圖I所示，⑵-和⑶_3_羥基戊二酸乙酯的保留時間分別為16. 20和16. 80min，完全達到了基線分離。通過使用本實施例的一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸乙酯對映異構體的方法，在高效毛細管電泳緩沖液中加入手性選擇劑，構建合適的手性選擇環境，利用其與對映異構體之間的作用差異進行分離，解決了高效液相色譜-手性柱法等傳統分離方法難以有效分離0 )-和C )-3-羥基戊二酸乙酯對映體的難題，從而能夠對0 )-和C )-3-羥基戊二酸乙酯的樣品的光學純度進行正確測定。該方法具有分離效果好、靈敏度高、準確性好、無污染、成本低以及易于自動化等優點。
實施例2
I)用二次重蒸水配置濃度為I. Omg/mL的3-羥基戊二酸乙酯樣品溶液；2)配制pH為6. O的磷酸鹽緩沖溶液，在所述的緩沖溶液中加入濃度為20 mmol/L的β -環糊精作為手性選擇劑，超聲脫氣40min，用O. 45 μ m微孔濾膜 過濾，過濾完畢繼續超聲脫氣20min所得溶液為電泳緩沖液；3)將步驟I)配制的3-羥基戊二酸乙酯樣品溶液在步驟3)所述的毛細管電泳條件下，(所用儀器為G1600AX型高效毛細管電泳儀(美國Agilent公司)，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使0 )- 3-羥基戊二酸乙酯和C )-3-羥基戊二酸乙酯對映體實現基線分離，分離度1 > 1.5以上。所述的毛細管電泳條件為分離電壓為25 kV，柱溫30°C，檢測波長為214nm，壓力進樣為50 mbaX4S。通過使用本實施例的一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸乙酯對映異構體的方法，在高效毛細管電泳緩沖液中加入手性選擇劑，構建合適的手性選擇環境，利用其與對映異構體之間的作用差異進行分離，解決了高效液相色譜-手性柱法等傳統分離方法難以有效分離(/ )_和C )-3-羥基戊二酸乙酯對映體的難題，從而能夠對0 )-和C )-3-羥基戊二酸乙酯的樣品的光學純度進行正確測定。該方法具有分離效果好、靈敏度高、準確性好、無污染、成本低以及易于自動化等優點。實施例3
I)用二次重蒸水配置濃度為O. 2mg/mL的3-羥基戊二酸甲酯樣品溶液；2)配制pH為
6.O的磷酸鹽緩沖溶液，在所述的緩沖溶液中加入濃度為30mmol/L的羥乙基-β -環糊精作為手性選擇劑，超聲脫氣20min，用O. 45 μ m微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續超聲脫氣15min所得溶液為電泳緩沖液；3)將步驟I)配制的3-羥基戊二酸甲酯樣品溶液在步驟3)所述的毛細管電泳條件下，(所用儀器為G1600AX型高效毛細管電泳儀(美國Agilent公司))，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使0 )- 3-羥基戊二酸甲酯和C )-3-羥基戊二酸甲酯對映體實現基線分離，分離度R > 1.5以上。所述的毛細管電泳條件為分離電壓為30 kV，柱溫30°C，檢測波長為220nm，壓力進樣為50 mbaX4S。通過使用本實施例的一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸甲酯對映異構體的方法，在高效毛細管電泳緩沖液中加入手性選擇齊U，構建合適的手性選擇環境，利用其與對映異構體之間的作用差異進行分離，解決了高效液相色譜-手性柱法等傳統分離方法難以有效分離0 )-和C )-3-羥基戊二酸甲酯對映體的難題，從而能夠對0 )-和C )-3-羥基戊二酸甲酯的樣品的光學純度進行正確測定。該方法具有分離效果好、靈敏度高、準確性好、無污染、成本低以及易于自動化等優點。
實施例4
I)用二次重蒸水配置濃度為O. lmg/mL的3-羥基戊二酸丙酯樣品溶液；2)配制pH為
7.O的磷酸鹽緩沖溶液，在所述的緩沖溶液中加入濃度為20mmol/L的羥丙基-β -環糊精作為手性選擇劑，超聲脫氣20min，用O. 45 μ m微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續超聲脫氣IOmin所得溶液為電泳緩沖液；3)將步驟I)配制的3-羥基戊二酸丙酯樣品溶液在步驟3)所述的毛細管電泳條件下，(所用儀器為G1600AX型高效毛細管電泳儀(美國Agilent公司))，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使0 )- 3-羥基戊二酸丙酯和C )- 3-羥基戊二酸丙酯對映體實現基線分離，分離度R > 1.5以上。所述的毛細管電泳條件為分離電壓為30 kV，柱溫25°C，檢測波長為220nm，壓力進樣為50 mbaX4S。通過使用本實施例的一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸丙酯對映異構體的方法，在高效毛細管電泳緩沖液中加入手性選擇齊U，構建合適的手性選擇環境，利用其與對映異構體之間的作用差異進行分離，解決了高效液相色譜-手性柱法等傳統分離方法難以有效分離O )-和C )-3-羥基戊二酸丙酯對映體 的難題，從而能夠對0 )-和C )-3-羥基戊二酸丙酯的樣品的光學純度進行正確測定。該方法具有分離效果好、靈敏度高、準確性好、無污染、成本低以及易于自動化等優點。
權利要求
1.一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對映異構體的方法，其特征在于包括如下步驟I)用二次重蒸水配置濃度為0. ri. 0 mg/mL的3-羥基戊二酸單酯樣品溶液；2)配制pH為5 7的緩沖溶液，在所述的緩沖溶液中加入濃度為(T50 mmol/L的手性選擇劑，超聲脫氣2(T40min，用0. 45 y m微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續超聲脫氣l(T20min，所得溶液為電泳緩沖液；3)將步驟I)配制的3-羥基戊二酸單酯樣品溶液在毛細管電泳條件下，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使0 )-3-羥基戊二酸單酯和C )-3-羥基戊二酸單酯對映體實現基線分離。
2.根據權利要求I所述的一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對映異構體的方法，其特征在于所述的3-羥基戊二酸單酯采用3-羥基戊二酸甲酯、3-羥基戊二酸乙酯、3-羥基戊二酸丙酯中的一種。
3.根據權利要求I所述的一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對映異構體的方法，其特征在于所述的步驟2)中的緩沖溶液為磷酸鹽緩沖液。
4.根據權利要求I所述的一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對映異構體的方法，其特征在于所述的手性選擇劑采用P -環糊精、羥甲基-P -環糊精、羥乙基-P -環糊精、羥丙基-￠-環糊精中的一種。
5.根據權利要求I所述的一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對映異構體的方法，其特征在于所述的毛細管電泳采用高效毛細管電泳儀，其電泳條件為分離電壓為10 30 kV，柱溫2(T30°C，檢測波長為190 250 nm，壓力進樣為50 mbaX4S。
全文摘要
本發明公開了一種高效毛細管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對映異構體的方法，包括如下步驟1)配置3-羥基戊二酸單酯樣品溶液；2)配制pH為5~7的緩沖溶液，在所述的緩沖溶液中加入手性選擇劑，超聲脫氣，用微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續超聲脫氣，所得溶液為電泳緩沖液；3)將步驟1)配制的3-羥基戊二酸單酯樣品溶液在毛細管電泳條件下，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使(R)-3-羥基戊二酸單酯和(S)-3-羥基戊二酸單酯對映體實現基線分離。本發明通過在高效毛細管電泳緩沖液中加入手性選擇劑，構建合適的手性選擇環境，利用其與對映異構體之間的作用差異進行分離，具有分離效果好、靈敏度高、準確性好等特點。
文檔編號G01N27/447GK102798656SQ20121028700
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月14日 優先權日2012年8月14日
發明者董華平, 徐新, 胡六江, 占林軍 申請人:紹興文理學院