專利名稱：一種快速測定含硒蛋白中硒的方法
技術領域：
本發明涉及一種快速測定含硒蛋白中硒的方法，屬于分析化學領域。
背景技術：
硒是人和動物體必需的微量元素，具有多種生物學功能，如具有抗氧化、抗癌、防衰老、提高人體免疫力、保護心腦血管等作用，它的生物學功能主要是以硒蛋白表現的。已發現的硒蛋白大多數是具有重要作用的酶，又稱之為硒酶。目前已有大量研究表明人體40多種疾病與硒的營養狀況有密切的關系。因此，對硒蛋白的研究已成為近年來的熱點研究課題。硒蛋白的純化過程中硒含量的測定有多種方法，如利用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)，電感耦合等離子體發射光譜(ICP-AES)對純化的蛋白進行硒含量的測定。這些方法雖然方法快速，但儀器設備的費 用昂貴，電感耦合等離子體質譜或發射光譜的儀器費用是原子熒光的3倍以上，載氣的使用費用是原子熒光的50倍以上，這些設備昂貴不利于測試的普及，尋求一種設備簡單，精度較高的方法十分有必要。
發明內容
本發明的目的是提供一種簡便，能精確快速測定含硒蛋白中硒的方法。為達上述目的，本發明借助原子熒光光譜(AFS)對提取蛋白中的硒進行定量分析。本發明的技術方案是一種快速測定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于它由如下步驟組成1.提取蛋白的處理，2.原子熒光光譜法測定硒含量，3.結果計算。下面對上述技術方案進行進一步解釋
I、提取蛋白的處理本發明中所涉及的蛋白為通過不同層析方法獲得的蛋白，因為純化過程中收集的蛋白組分往往較少，有時僅為幾十到幾百微升微升，除了進行硒含量的測定，還需進行進一步的純化或其他生物學功能的測定。而常規的混酸消解往往需要毫升量級體積的樣品，所以純化提取的蛋白不適合用常規的混酸消解后進行測定。將層析純化收集的蛋白取部分樣品加入一定體積的濃鹽酸(l:2(Tl:40，ν/ν)沸水浴中保持O. 5 lh，冷卻后純水定容至5 ml，利用原子熒光進行測定。同時做試樣空白。2、原子熒光光譜法測定硒取硒標準溶液(1000 yg/ml)(國家標準物質中心)逐級稀釋，再配置成I ppb, 2 ppb, 5 ppb,8 ppb, 10 ppb幾個濃度系列。作為標準曲線的繪制。線性關系達到O. 999以上方可進行樣品檢測。測定的儀器參考條件條件為負高壓270 V ；燈電流80 mA ;原子化溫度800 V ;爐高8 mm ;載氣流速400 mL/min ;屏蔽氣流速800mL/min ;測量方式標準曲線法；讀數方式峰面積；延遲時間1 s ;讀數時間7 S。設定好儀器條件，點火預熱10 mirT20 min待儀器穩定后開始測量。先測定標準系列，繪制標準曲線。再進行試樣測量。3. 結果計算分別測定試樣空白和試樣,試樣測定結果按下式計算試樣中硒的
含量X= (C-CO) XV1/V2式中
X—試樣中硒的含量，單位為微克每升(μ g/L)； c一試樣測定的濃度，單位為微克每升(μ g/L)；
CO一試樣空白測定濃度,單位為微克每升(μ g/L)；
Vl一試樣定容體積，單位為毫升(mL)；
V2—試樣取樣體積，單位為毫升(mL)。本發明能提供一種操作簡便，精確度高RSD〈2%，加標回收率為929Γ100%，成本低廉的測定硒的方法。本發明是對提取的蛋白進行簡單的處理，利用原子熒光(AFS)直接測定硒含量，方法簡便，精確度高，成本低廉。
具體實施例方式下面結合實施例進一步說明本發明和效果，但不影響發明的保護范圍。實施例一
取層析純化收集的蛋白50 ul,加入Iml濃鹽酸沸水浴保持10 min,冷卻后定容至5 ml利用原子熒光進行測定，同時做試樣空白，加標回收實驗。取硒標準溶液(1000 μ g/ml)(國家標準物質中心)逐級稀釋，再配置成O. I ppb，O. 2 ppb,O. 5 ppb,O. 8 ppb, I. O ppb幾個濃度系列。作為標準曲線的繪制。線性關系達到O. 999以上方可進行樣品檢測。測定的儀器參考條件條件為負聞壓270 V ;燈電流80mA ;原子化溫度800 V ;爐高8 mm ;載氣流速400 mL/min ;屏蔽氣流速800 mL/min ;測量方式標準曲線法；讀數方式峰面積；延遲時間1 s ;讀數時間-J S。設定好儀器條件，點火預熱10 mirT20 min待儀器穩定后開始測量。先測定標準系列，繪制標準曲線，再進行試樣測量。分別測定試樣空白和試樣，試樣測定結果按下式計算試樣中硒的含量
X= (C-CO) XV1/V2
式中X—試樣中硒的含量,單位為微克每升(μ g/L) ;C—試樣測定的濃度，單位為微克每升(μ g/L) ；C0一試樣空白測定濃度,單位為微克每升(μ g/L) ；V1一試樣定容體積，單位為暈升(mL) ；V2一試樣取樣體積，單位為暈升(mL)。測定的結果如下表
權利要求
1.一種快速測定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于包括如下步驟組成 (1)硒蛋白的提取處理將通過層析純化方法獲得的含硒蛋白溶于濃鹽酸中并進行沸水浴，冷卻后純水定容待測，同時做試樣空白； (2)原子熒光光譜法測定硒含量取硒標準溶液(1000u g/ml)(國家標準物質中心)逐級稀釋，再配置成I ppb,2 ppb, 5 ppb,8 ppb, 10 ppb幾個濃度系列；作為標準曲線的繪制；線性關系達到0. 999以上方可進行樣品檢測；測定的儀器參考條件條件為負高壓270 V ；燈電流80 mA ;原子化溫度800 V ;爐高8 mm ;載氣流速400 mL/min ;屏蔽氣流速800mL/min ;測量方式標準曲線法；讀數方式峰面積；延遲時間1 s ;讀數時間7 s ;設定好儀器條件，點火預熱10 mirT20 min待儀器穩定后開始測量；先測定標準系列，繪制標準曲線；再進行試樣測量； (3)結果計算分別測定試樣空白和試樣，試樣測定結果按下式計算試樣中硒的含量X= (C-CO) XV1/V2 式中 X—試樣中硒的含量，單位為微克每升(U g/L)； C一試樣測定的濃度，單位為微克每升(y g/L)； CO一試樣空白測定濃度,單位為微克每升(y g/L)； Vl一試樣定容體積，單位為毫升(mL)； V2—試樣取樣體積，單位為毫升(mL)。
2.根據權利要求I所述的一種快速測定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于所述硒蛋白的提取處理過程中含硒蛋白與濃鹽酸的混合體積比為1:2(T40。
3.根據權利要求I所述的一種快速測定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于所述硒蛋白的提取處理過程中含硒蛋白與濃鹽酸的混合體積比為1:30。
4.根據權利要求I所述的一種快速測定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于所述硒蛋白的提取處理過程中在沸水浴中的時間為0. 5^1小時。
5.根據權利要求I所述的一種快速測定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于所述硒蛋白的提取處理過程中在沸水浴中的時間為45分鐘。
全文摘要
本發明提供了一種快速測定含硒蛋白中硒的方法，它由如下步驟組成1.提取蛋白的處理，2.原子熒光光譜法測定硒含量，3.結果計算。本發明的目的是提供一種簡便，能精確快速測定含硒蛋白中硒的方法。本發明能提供一種操作簡便，精確度高RSD<2%，加標回收率為92%~100%，成本低廉的測定硒的方法。本發明是對提取的蛋白進行簡單的處理，利用原子熒光(AFS)直接測定硒含量，方法簡便，精確度高，成本低廉。
文檔編號G01N1/28GK102809552SQ201210288300
公開日2012年12月5日 申請日期2012年8月15日 優先權日2012年8月15日
發明者朱元元 申請人:蘇州硒谷科技有限公司