一種無標記熒光檢測胰蛋白酶的超分子組裝體及其制備方法與流程

本發明一種無標記熒光檢測胰蛋白酶的超分子組裝體及其制備方法，屬于材料、生物和分析化學交叉學科的技術領域。

背景技術：

胰蛋白酶是蛋白質分解中最重要的消化酶之一，胰蛋白酶原的分泌、活化、抑制以及循環的不平衡會導致急性或慢性的胰腺疾病，嚴重的例如胰腺癌。大約每年有35000例胰腺癌是由于絲氨酸蛋白酶尤其是胰蛋白酶的不平衡引起的。此外胰蛋白酶不僅起消化酶的作用，而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體，起活化作用。

目前發展起來的測定胰蛋白酶的方法主要有紫外分光光度法、比色法、熒光法、免疫法、質譜法(ms)、液相色譜法(hplc)、電泳法等。紫外分光光度法與比色法操作簡單，但靈敏度低，重現性差。免疫法靈敏度高，但由于單克隆抗體的使用使得成本也高，且需要一定的操作技術。質譜儀器昂貴，對樣品的純度要求高，色譜以及電泳法需要比較復雜的操作和較長的檢測時間。

相比這些方法，熒光法操作簡便、靈敏度高、可實現實時監測，具有臨床應用的潛在可能。一般熒光檢測的方法是基于熒光標記的底物，如專利201410429549.2采用了熒光團標記的肽鏈，但這種方法成本較高而且熒光標記可能會對底物的選擇性造成一定的影響。因而有研究者發展了基于非共價作用即超分子組裝的無標記熒光檢測方法，組裝單元主要是應用水溶性熒光共軛聚合物以及新型的聚集誘導發光分子或者熒光量子點，如專利201510719927.5采用了熒光碳點作為探針，但這些熒光探針的合成與分離仍然比較復雜，提高了成本。因而建立制備簡單、成本低的熒光檢測方法具有重要的意義。

我們以前開發了一種無標記的胰蛋白酶檢測方法，如專利201210116073.8所述，采用表面活性劑與帶相反電荷的聚電解質進行組裝，通過酶催化水解作用下的解組裝來實現胰蛋白酶的檢測。該體系是通過熒光減低來實現檢測，相對于熒光升高的方法，熒光降低的干擾因素較多，此外該體系的抗鹽性較差，限制了該體系在生理環境中的應用。因而本發明中采用抗鹽性較好的雙子表面活性劑來構建超分子組裝體，并通過熒光升高的方式來實現檢測。通過檢索，未見雙子表面活性劑用于熒光檢測的專利與報道。

技術實現要素：

本發明一種無標記熒光檢測胰蛋白酶的超分子組裝體及其制備方法的目的是克服現有技術的不足，提供一種制備簡單、成本低且具有良好抗鹽性的無標記熒光檢測胰蛋白酶的超分子組裝體及其制備方法。

本發明一種無標記熒光檢測胰蛋白酶的超分子組裝體，其特征在于該超分子組裝體是由季銨型陽離子雙子表面活性劑與肝素鈉通過靜電作用形成的復合物水溶液，所述的季銨型陽離子雙子表面活性劑化學結構式為：

其中n＝12，14，16。

上述一種無標記熒光檢測胰蛋白酶的超分子組裝體的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

ⅰ季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc的測定；

將季銨型陽離子雙子表面活性劑溶解于濃度為10mm，ph8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，配制濃度范圍為10^-2moll^-1～10^-7moll^-1的梯度溶液；用微量進樣器移取10～50μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到梯度溶液中，使梯度溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以40～100khz敞口超聲波處理10～60分鐘，靜置0.5～12小時后進行熒光發射光譜檢測；以發射峰強度為縱坐標，表面活性劑的對數濃度為橫坐標作圖，得到s形曲線，曲線上第一個轉折點對應濃度即為雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc；

ⅱ肝素鈉濃度的測定：

將肝素鈉溶解于濃度為10mm，ph8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，配制濃度范圍為10～10^-5mgml^-1的梯度溶液；根據步驟i得到的季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc，確定陽離子雙子表面活性劑的濃度為0.3～1.6cmc，按照體積比1:1加入到肝素鈉的梯度溶液中；用微量進樣器移取10～50μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以40～100khz敞口超聲波處理10～60分鐘，靜置0.5～12小時后進行熒光發射光譜檢測；以發射峰強度為縱坐標，肝素鈉的對數濃度為橫坐標作圖，得到s形曲線，曲線上第二個轉折點對應濃度即為形成穩定超分子組裝體的肝素鈉濃度；

ⅲ超分子組裝體溶液的配制：

按照步驟ii中確定的季銨型陽離子雙子表面活性劑與肝素鈉的配比，將兩種溶液按照體積比1:1混合；用微量進樣器移取10～50μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以40～100khz敞口超聲波處理10～60分鐘，靜置0.5～12小時后得到超分子組裝體溶液。

本發明一種無標記熒光檢測胰蛋白酶的超分子組裝體的制備方法，與現有技術相比具有的有益效果：

(1)采用新型的雙子表面活性劑構建組裝體，通過超分子組裝體解組裝與恢復組裝的方式進行檢測，不需要任何有機合成過程，制備簡單、成本低；

(2)雙子表面活性劑具有良好的抗鹽性，賦予超分子組裝體在生理環境中良好的穩定性，擴展了體系在生理環境中的應用。

附圖說明

圖1是超分子組裝體系(乙撐基雙十二烷基二甲基溴化銨+肝素鈉)中加入不同濃度魚精蛋白的熒光發射光譜圖。

圖2是超分子組裝體系(乙撐基雙十二烷基二甲基溴化銨+肝素鈉)中加入魚精蛋白(0.1mgml^-1)，再加入不同濃度胰蛋白酶的熒光發射光譜圖。

具體實施方式

超分子組裝體是由季銨型陽離子雙子表面活性劑與肝素鈉通過靜電作用形成的復合物水溶液。首先測定季銨型陽離子表面活性劑的臨界膠束濃度，在該濃度以下雙子表面活性劑與肝素鈉形成超分子組裝體，疏水染料尼羅紅進入組裝體內腔，熒光發射增強。然后加入與肝素鈉有特異性相互作用的魚精蛋白，魚精蛋白與肝素鈉結合導致組裝體解組裝，熒光發射強度隨魚精蛋白濃度的增加而降低。選擇熒光強度基本穩定的魚精蛋白濃度，加入胰蛋白酶使魚精蛋白水解，組裝體恢復，熒光發射強度隨酶濃度的增大而升高，以此實現酶活性的檢測。下面的實施方式是對本發明的進一步說明，而不是限制本發明的范圍。

實施方式1：

(1)超分子組裝體溶液的制備

ⅰ季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc的測定；

所用季銨型陽離子表面活性劑為乙撐基雙十二烷基二甲基溴化銨，結構式如下式所示：

將乙撐基雙十二烷基二甲基溴化銨溶解于濃度為10mm，ph8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，配制2ml濃度范圍為10^-2～10^-7moll^-1的梯度溶液；用微量進樣器移取10μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到梯度溶液中，使梯度溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以100khz敞口超聲波處理10分鐘，靜置0.5小時后進行熒光發射光譜檢測；以635nm處發射峰強度為縱坐標，表面活性劑的對數濃度為橫坐標作圖，得到s形曲線，曲線上第一個轉折點對應濃度即為雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc。熒光光譜測定得到雙子表面活性劑的臨界膠束濃度為1.75×10^-5moll^-1。

ⅱ肝素鈉濃度的測定：

將肝素鈉溶解于濃度為10mm，ph8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，配制濃度范圍為10～10^-5mgml^-1的梯度溶液；根據步驟i得到的季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc，確定雙子表面活性劑的濃度為1.6cmc(2.8×10^-5moll^-1)，按照體積比1:1加入到肝素鈉的梯度溶液中；用微量進樣器移取10μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以100khz敞口超聲波處理10分鐘，靜置0.5小時后進行熒光發射光譜檢測；以635nm處發射峰強度為縱坐標，肝素鈉的對數濃度為橫坐標作圖，得到s形曲線，曲線上第二個轉折點對應濃度即為形成穩定超分子組裝體的肝素鈉濃度。熒光光譜測定得到肝素鈉濃度為0.05mgml^-1。

ⅲ超分子組裝體溶液的配制：

按照步驟ii中確定的季銨型陽離子雙子表面活性劑與肝素鈉的配比，將兩種溶液按照體積比1:1混合；用微量進樣器移取10μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以100khz敞口超聲波處理10分鐘，靜置0.5小時后得到超分子組裝體溶液。

(2)胰蛋白酶的檢測

i魚精蛋白濃度的確定：

在超分子組裝體溶液中分別加入終濃度為10^-7～1mgml^-1的魚精蛋白的磷酸鹽緩沖溶液(10mm，ph＝8)，在37℃下放置10分鐘后，檢測熒光強度，以635nm處熒光發射峰強度下降的比率對加入魚精蛋白濃度作圖，得到檢測標準曲線。

熒光強度下降的比率為(i0-i)/i0×100％，i0代表只加緩沖溶液的空白對照635nm處熒光發射峰強度，i代表加入不同濃度魚精蛋白后635nm處熒光發射峰強度。熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與魚精蛋白濃度有很好的線性關系，魚精蛋白濃度達到0.1mgml^-1熒光強度基本不再下降。

ⅱ胰蛋白酶的檢測：

在超分子組裝體溶液中加入0.1mgml^-1的魚精蛋白，然后分別加入終濃度為0.01～100μgml^-1的胰蛋白酶的磷酸鹽緩沖溶液(10mm，ph＝8)，在37℃下放置30分鐘后，檢測熒光強度，以635nm處熒光發射峰強度升高的比率對加入胰蛋白酶濃度作圖，得到檢測標準曲線。

熒光強度升高的比率為(i-i0)/i0×100％，i0代表只加緩沖溶液的空白對照635nm處熒光發射峰強度，i代表加入不同濃度胰蛋白酶后635nm處熒光發射峰強度。熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度升高比率與胰蛋白酶濃度有很好的線性關系，超分子組裝體在緩沖溶液中可以檢測胰蛋白酶。

ⅲ抗鹽性實驗：

在超分子組裝體溶液中加入0.1mgml^-1的魚精蛋白，分別加入終濃度為0～500mmoll^-1的氯化鈉溶液，檢測熒光強度。最后分別加入終濃度為100μgml^-1的胰蛋白酶溶液，在37℃下放置30分鐘后，檢測熒光強度。

熒光光譜檢測結果表明：在不同鹽濃度下，熒光強度都有很好的恢復，超分子組裝體系具有良好的抗鹽性。

實施方式2

(1)超分子組裝體溶液的制備

ⅰ季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc的測定；

所用季銨型陽離子表面活性劑為乙撐基雙十四烷基二甲基溴化銨，結構式如下式所示：

將乙撐基雙十四烷基二甲基溴化銨溶解于濃度為10mm，ph8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，配制2ml濃度范圍為10^-2～10^-7moll^-1的梯度溶液；用微量進樣器移取30μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到梯度溶液中，使梯度溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以70khz敞口超聲波處理30分鐘，靜置2小時后進行熒光發射光譜檢測；以635nm處發射峰強度為縱坐標，表面活性劑的對數濃度為橫坐標作圖，得到s形曲線，曲線上第一個轉折點對應濃度即為雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc。熒光光譜測定得到雙子表面活性劑的臨界膠束濃度為9.2×10^-6moll^-1。

ⅱ肝素鈉濃度的測定：

將肝素鈉溶解于濃度為10mm，ph8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，配制濃度范圍為10～10^-5mgml^-1的梯度溶液；根據步驟i得到的季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc，確定雙子表面活性劑的濃度為cmc(9.2×10^-6moll^-1)，按照體積比1:1加入到肝素鈉的梯度溶液中；用微量進樣器移取30μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以70khz敞口超聲波處理30分鐘，靜置2小時后進行熒光發射光譜檢測；以635nm處發射峰強度為縱坐標，肝素鈉的對數濃度為橫坐標作圖，得到s形曲線，曲線上第二個轉折點對應濃度即為形成穩定超分子組裝體的肝素鈉濃度。熒光光譜測定得到肝素鈉濃度為0.03mgml^-1。

ⅲ超分子組裝體溶液的配制：

按照步驟ii中確定的季銨型陽離子雙子表面活性劑與肝素鈉的配比，將兩種溶液按照體積比1:1混合；用微量進樣器移取30μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以70khz敞口超聲波處理30分鐘，靜置2小時后得到超分子組裝體溶液。

(2)胰蛋白酶的檢測

i魚精蛋白濃度的確定：同實施方式1。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與魚精蛋白濃度有很好的線性關系，魚精蛋白濃度達到0.05mgml^-1熒光強度基本不再下降。

ⅱ胰蛋白酶的檢測：除了在超分子組裝體溶液中加入0.05mgml^-1的魚精蛋白，其余同實施方式1。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與胰蛋白酶濃度有很好的線性關系，超分子組裝體在緩沖溶液中可以檢測胰蛋白酶。

ⅲ抗鹽性實驗：在超分子組裝體溶液中加入0.05mgml^-1的魚精蛋白，其余同實施方式1。

熒光光譜檢測結果表明：在不同鹽濃度下，熒光強度都有很好的恢復，超分子組裝體系具有良好的抗鹽性。

實施方式3

(1)超分子組裝體溶液的制備

ⅰ季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc的測定；

所用季銨型陽離子表面活性劑為乙撐基雙十六烷基二甲基溴化銨，結構式如下式所示：

將乙撐基雙十六烷基二甲基溴化銨溶解于濃度為10mm，ph8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，配制2ml濃度范圍為10^-2～10^-7moll^-1的梯度溶液；用微量進樣器移取50μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到梯度溶液中，使梯度溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以40khz敞口超聲波處理60分鐘，靜置12小時后進行熒光發射光譜檢測；以635nm處發射峰強度為縱坐標，表面活性劑的對數濃度為橫坐標作圖，得到s形曲線，曲線上第一個轉折點對應濃度即為雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc。熒光光譜測定得到雙子表面活性劑的臨界膠束濃度為1.05×10^-6moll^-1。

ⅱ肝素鈉濃度的測定：

將肝素鈉溶解于濃度為10mm，ph8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，配制濃度范圍為10～10^-5mgml^-1的梯度溶液；根據步驟i得到的季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc，確定雙子表面活性劑的濃度為0.3cmc(3.15×10^-7moll^-1)，按照體積比1:1加入到肝素鈉的梯度溶液中；用微量進樣器移取50μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以40khz敞口超聲波處理60分鐘，靜置12小時后進行熒光發射光譜檢測；以635nm處發射峰強度為縱坐標，肝素鈉的對數濃度為橫坐標作圖，得到s形曲線，曲線上第二個轉折點對應濃度即為形成穩定超分子組裝體的肝素鈉濃度。熒光光譜測定得到肝素鈉濃度為0.01mgml^-1。

ⅲ超分子組裝體溶液的配制：

按照步驟ii中確定的季銨型陽離子雙子表面活性劑與肝素鈉的配比，將兩種溶液按照體積比1:1混合；用微量進樣器移取50μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以40khz敞口超聲波處理60分鐘，靜置12小時后得到超分子組裝體溶液。

(2)胰蛋白酶的檢測：

i魚精蛋白濃度的確定：同實施方式1。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與魚精蛋白濃度有很好的線性關系，魚精蛋白濃度達到0.01mgml^-1熒光強度基本不再下降。

ⅱ胰蛋白酶的檢測：在超分子組裝體溶液中加入0.01mgml^-1的魚精蛋白，其余同實施方式1。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與胰蛋白酶濃度有很好的線性關系，超分子組裝體在緩沖溶液中可以檢測胰蛋白酶。

ⅲ抗鹽性實驗：在超分子組裝體溶液中加入0.01mgml^-1的魚精蛋白，其余同實施方式1。

熒光光譜檢測結果表明：在不同鹽濃度下，熒光強度都有很好的恢復，超分子組裝體系具有良好的抗鹽性。

實施方式4

(1)超分子組裝體溶液的制備

ⅰ季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc的測定：

同實施方式1。

熒光光譜測定得到陽離子雙子表面活性劑的cmc。

ⅱ肝素鈉濃度的測定：

將肝素鈉溶解于濃度為10mm，ph8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，配制濃度范圍為10～10^-5mgml^-1的梯度溶液；根據步驟i得到的季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc，確定雙子表面活性劑的濃度為0.8cmc，按照體積比1:1加入到肝素鈉的梯度溶液中；用微量進樣器移取20μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以80khz敞口超聲波處理20分鐘，靜置1小時后進行熒光發射光譜檢測，以635nm處發射峰強度為縱坐標，表面活性劑的對數濃度為橫坐標作圖，得到s形曲線，曲線上第二個轉折點對應濃度即為形成穩定超分子組裝體的肝素鈉濃度。

ⅲ超分子組裝體溶液的配制：

按照步驟ii中確定的季銨型陽離子雙子表面活性劑與肝素鈉的配比，將兩種溶液按照體積比1:1混合；用微量進樣器移取20μl尼羅紅的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6moll^-1，以80khz敞口超聲波處理20分鐘，靜置1小時后得到超分子組裝體溶液。

(2)胰蛋白酶的檢測

i魚精蛋白濃度的確定：同實施方式1。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與魚精蛋白濃度有很好的線性關系。

ⅱ胰蛋白酶的檢測：同實施方式1。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與胰蛋白酶濃度有很好的線性關系，超分子組裝體在緩沖溶液中可以檢測胰蛋白酶。

ⅲ抗鹽性實驗：同實施方式1。

熒光光譜檢測結果表明：在不同鹽濃度下，熒光強度都有很好的恢復，超分子組裝體系具有良好的抗鹽性。

實施方式5

(1)超分子組裝體溶液的制備

ⅰ季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc的測定：

除所用季銨型陽離子雙子表面活性劑結構式如下式所示，其余同實施方式1。

熒光光譜測定得到陽離子雙子表面活性劑的cmc。

ⅱ肝素鈉濃度的測定：

除所用季銨型陽離子雙子表面活性劑結構式如上式所示，陽離子雙子表面活性劑濃度為1.2cmc以外，其他同實施方式1。

熒光光譜測定得到形成穩定超分子組裝體的肝素鈉濃度。

ⅲ超分子組裝體溶液的配制：同實施方式1。

(2)胰蛋白酶的檢測

i魚精蛋白濃度的確定：同實施方式1。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與魚精蛋白濃度有很好的線性關系。

ⅱ胰蛋白酶的檢測：同實施方式1。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與胰蛋白酶濃度有很好的線性關系，超分子組裝體在緩沖溶液中可以檢測胰蛋白酶。

ⅲ抗鹽性實驗：同實施方式1。

熒光光譜檢測結果表明：在不同鹽濃度下，熒光強度都有很好的恢復，超分子組裝體系具有良好的抗鹽性。

實施方式6

(1)超分子組裝體溶液的制備

ⅰ季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc的測定：

除所用季銨型陽離子雙子表面活性劑結構式如下式所示，其余同實施方式2。

熒光光譜測定得到陽離子雙子表面活性劑的cmc。

ⅱ肝素鈉濃度的測定：

除所用季銨型陽離子雙子表面活性劑結構式如上式所示，陽離子雙子表面活性劑濃度為0.8cmc以外，其他同實施方式2。

熒光光譜測定得到形成穩定超分子組裝體的肝素鈉濃度。

ⅲ超分子組裝體溶液的配制：同實施方式2。

(2)胰蛋白酶的檢測

i魚精蛋白濃度的確定：同實施方式2。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與魚精蛋白濃度有很好的線性關系。

ⅱ胰蛋白酶的檢測：同實施方式2。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與胰蛋白酶濃度有很好的線性關系，超分子組裝體在緩沖溶液中可以檢測胰蛋白酶。

ⅲ抗鹽性實驗：同實施方式2。

熒光光譜檢測結果表明：在不同鹽濃度下，熒光強度都有很好的恢復，超分子組裝體系具有良好的抗鹽性。

實施方式7

(1)超分子組裝體溶液的制備

ⅰ季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc的測定：

除所用季銨型陽離子雙子表面活性劑結構式如下式所示，其余同實施方式3。

熒光光譜測定得到陽離子雙子表面活性劑的cmc。

ⅱ肝素鈉濃度的測定：

除所用季銨型陽離子雙子表面活性劑結構式如上式所示，陽離子雙子表面活性劑濃度為0.4cmc以外，其他同實施方式3。

熒光光譜測定得到形成穩定超分子組裝體的肝素鈉濃度。

ⅲ超分子組裝體溶液的配制：同實施方式3。

(2)胰蛋白酶的檢測

i魚精蛋白濃度的確定：同實施方式3。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與魚精蛋白濃度有很好的線性關系。

ⅱ胰蛋白酶的檢測：同實施方式3。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與胰蛋白酶濃度有很好的線性關系，超分子組裝體在緩沖溶液中可以檢測胰蛋白酶。

ⅲ抗鹽性實驗：同實施方式3。

熒光光譜檢測結果表明：在不同鹽濃度下，熒光強度都有很好的恢復，超分子組裝體系具有良好的抗鹽性。

實施方式8

(1)超分子組裝體溶液的制備

ⅰ季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度cmc的測定：

同實施方式5。

熒光光譜測定得到陽離子雙子表面活性劑的cmc。

ⅱ肝素鈉濃度的測定：

除所用季銨型陽離子雙子表面活性劑結構式同實施方式5,陽離子雙子表面活性劑濃度為0.6cmc以外，其余同實施方式4。

熒光光譜測定得到形成穩定超分子組裝體的肝素鈉濃度。

ⅲ超分子組裝體溶液的配制：同實施方式4。

(2)胰蛋白酶的檢測

i魚精蛋白濃度的確定：同實施方式4。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與魚精蛋白濃度有很好的線性關系。

ⅱ胰蛋白酶的檢測：同實施方式4。

熒光光譜檢測結果表明：熒光發射峰強度下降比率與胰蛋白酶濃度有很好的線性關系，超分子組裝體在緩沖溶液中可以檢測胰蛋白酶。

ⅲ抗鹽性實驗：同實施方式4。

熒光光譜檢測結果表明：在不同鹽濃度下，熒光強度都有很好的恢復，超分子組裝體系具有良好的抗鹽性。