專利名稱：環孢素微球制劑治療眼內炎癥的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物新用途，特別涉及一種供玻璃體內注射用的載環孢素的微球給藥方法，以及通過該方法治療眼內炎癥，該方法包括，采用微球混懸劑型在眼球玻璃體內直接注射，使包裹在載體材料中藥物能夠緩慢釋放，對眼內炎癥如葡萄膜炎特別是慢性葡萄膜炎起到良好的治療作用。
背景技術：
本發明涉及一種眼科注射用微球制劑，特別涉及一種可生物降解的高分子材料作為載體材料的長效環孢素眼內釋藥體系。
環孢素A(Cyclosporin A，CsA，也可簡稱環孢素)是第三代免疫抑制劑，其特點是高效，無骨髓毒性，是一種選擇性的免疫抑制劑，在臨床上已廣泛應用于器官移植術后和自身免疫性疾病的免疫抑制治療。在眼科的應用也越來越廣泛，包括全身用藥和局部用藥。Nussenblatt等證實直接向玻璃體腔內注射CsA能阻止實驗性自身免疫性葡萄膜炎，但由于注射后玻璃體腔內CsA的維持時間短，而反復注射可能引起眼內感染、出血等并發癥。此外，全身用藥不僅價格昂貴，而且可能引起腎臟、肝臟毒性損害以及高血壓等并發癥，因此它在眼科的應用受到限制。目前，CsA在眼的局部用藥主要是滴眼劑，由于CsA分子量大且呈疏水性，眼內通透性差，難于在眼內達到治療水平局部用藥的療效。
葡萄膜炎是一種器官特異性的、由T細胞介導的自身免疫性眼科疾病，以侵襲到眼葡萄膜和神經視網膜的炎癥為主要特征，主要表現為復發性炎性或慢性炎性反應，病程長、易慢性化且易復發，其病因復雜，發病機制尚未完全明確，目前尚無理想的預防和治療措施。
發明內容
本發明提供一種供玻璃體內注射的用生物降解微球制成的混懸制劑，本發明意外的發現，本發明的制劑克服了血-眼屏障的限制，可使藥物在玻璃體內保持恒定的水平，能夠在長的時間內獲得穩定的眼內濃度，該制劑對于眼內炎癥如葡萄膜炎具有良好的治療效果，同時該制劑沒有刺激性，安全穩定，沒有引發毒副作用。同眼內植入體相比，它不需要手術放置，減少了手術的麻煩。
本發明提供環孢素在制備一種治療眼內炎癥疾病的藥物中的應用。其中所述眼內炎癥疾病是葡萄膜炎、脈絡膜視網膜炎、交感性眼炎、視網膜血管炎、鳥槍彈樣脈絡膜視網膜病變、急性后極部多發性鱗狀色素上皮病變或增生性玻璃體視網膜病變。本發明的藥物制劑是眼科藥物制劑。特別是含有環孢素的生物降解型微球制劑。所述生物降解型微球制劑由環孢素，可生物降解的高分子材料和/或制備微球制劑適宜的添加劑組成。其中所述高分子材料選自乳酸-羥基乙酸共聚物，聚乳酸或其與其它材料形成的組合物，所述添加劑選自普朗尼克F68、聚維酮PVP，聚乙二醇PEG。其中所述高分子材料乳酸-羥基乙酸是乳酸∶羥基乙酸的重量比為75∶25-25∶75的聚合物高分子材料；所述環孢素和可生物降解的高分子材料之間的重量比為5-50∶100。其中所述生物降解型微球制劑其配方組成如下環孢素 5-50％高分子材料 50-95％添加劑 0.1-20％優選的配方組成如下環孢素 20％
高分子材料 70-77％添加劑 3.0％普朗尼克F68或10％聚乙二醇PEG本發明的制劑，采用的是可生物降解的高分子材料作為載體材料制備長效的環孢素微球釋藥體系，采用眼球玻璃體內直接注射，用于眼內炎癥如葡萄膜炎的治療。
本發明的制劑，利用可生物降解的高分子材料作為載體材料，有效的控制所包載的環孢素藥物釋放速度，達到長效治療眼內炎癥如葡萄膜炎的效果。
本發明的制劑，所述的載環孢素微球采用O/W乳化-溶劑揮發法或乳化-溶劑擴散法制備，是常規的制備方法，具體制備方法參見實施例。
本發明的制劑，由環孢素A，可生物降解的高分子材料和/或一些微球制劑適宜的添加劑組成，所述的可生物降解的高分子材料為乳酸/羥基乙酸共聚物(PLGA)、聚乳酸(PLA)或與其它高分子材料的組合物。優選PLGA，PLGA的分子量范圍10000-100000，優選的為15000。其中乳酸/羥基乙酸比例為75/25--25/75，優選的為75/25。
本發明的制劑，其中還可加入一些添加劑，起支撐和穩定作用，所述添加劑選自普朗尼克(Pluronic)F68(用量為1％-10％，優選的為3％)、聚乙二醇(PEG分子量1000-50000，優選的為1000；用量為1％-20％，優選的為10％)。
本發明的制劑，所述的被包封的藥物為環孢素A，藥物與高分子材料載體材料用量比為5-50∶100(重量比)，優選的為20∶100。
其中高分子材料優選的為PLA、PLGA，最優選的為PLGA；其中添加劑優選的為普朗尼克F68、PEG，最優選的為普朗尼克F68本發明的制劑，采用眼球玻璃體內直接注射含藥微球混懸液，其依據的理論是藥物包裹在可生物降解的高分子材料中，利用材料緩慢降解的性能得以緩慢釋放藥物，一次注射給藥后可獲得長效治療效果的目的。
本發明的優點表現在，本發明的制劑，利用可生物降解的高分子材料緩慢降解的性能得以緩慢釋放所載藥物，一次注射給藥后可獲得長效治療效果的目的，進一步提高了藥物的治療指數和病人用藥順應性。
本發明所使用的可生物降解的高分子材料在體內可降解為生物相容的小分子物質，具有低毒的特性。
本發明所使用的玻璃體內注射生物降解微球的優點在于克服了血-眼屏障的限制，可使藥物在玻璃體內保持較為恒定的水平，以較少的藥物取得有效的眼內治療水平，同時避免了毒副作用。同眼內植入體相比，它不需要手術放置，減少了手術中的并發癥。
本發明的制劑生產工藝簡單，質量可控，產品質量穩定，適于大工業生產。
由于眼內炎癥特別是葡萄膜炎目前尚無理想的預防和治療措施，因此本發明提供了一種新的有效的臨床治療方案。圖5、圖6表明，微球眼內給藥后，藥物在很多相關部位的濃度高，持續時間長，有利于這些部位炎癥的治療。
以下通過藥效學試驗數據說明本發明的治療作用。
環孢素A眼用注射微球治療兔眼實驗性葡萄膜炎的藥效學試驗采用PLGA(75/25，分子量15000)作為載體材料和Pluronic F68(3％)作為添加劑，按照例4制備方法進行載環孢素微球的制備，得處方1(不含PluronicF68)和處方2(含Pluronic F68)微球。
參比制劑不含環孢素的空白微球試驗制劑載環孢素的微球試驗動物大白兔(體重2.0-2.5Kg，經檢查確認無眼科疾病，由北京大學醫學部動物實驗中心提供)，采用內毒素誘導葡萄膜炎。
給藥方案取健康無眼疾白色家兔36只，隨機分為4組，對照組(1組)和實驗組(2組)，每組9只18眼，采用兔眼進行玻璃體內注射給藥。兔眼注射不同處方的微球后每日使用0.3％的慶大霉素眼藥水及1％復方托品胺散瞳。分別在第2周、第4周和第6周時，用內毒素誘導葡萄膜炎。
評價方法試驗結果采用房水中蛋白、白細胞計數和組織切片來進行評價。
試驗結果圖7、8、9結果表明，1和2號處方載環孢素微球對內毒素誘導的兔眼實驗性葡萄膜炎模型中的房水白細胞、房水蛋白均有明顯抑制作用，同時對由炎癥引起的視網膜形態改變有明顯的改善作用。
通過另外的實驗，如采用內毒素誘導脈絡膜視網膜炎、交感性眼炎、視網膜血管炎等也取得了類似的治療效果。如動物模型中的房水白細胞、房水蛋白有明顯抑制作用，同時對由炎癥引起的視網膜形態改變有明顯的改善。
使用本發明的制劑，一次注射給藥后可獲得長效治療效果，效果持續時間可以是數天-數十天，因此可根據病情的需要，數天或數十天注射一次，保留藥物濃度在有效濃度，直至炎癥痊愈。
圖1.制備工藝示意2.載環孢素微球掃描電鏡3.載環孢素微球在37℃介質中體外長期釋放情況。
APLGA(MW＝15000，75/25)；MPLGA(MW＝15000，75/25)/PluronicF68(0.5％)；NPLGA(MW＝15000，75/25)/PluronicF68(1％)；OPLGA(MW＝15000，75/25)/PluronicF68(3％)。
圖4.載環孢素微球(處方O)在37℃條件釋放介質中不同時間段的掃描電鏡圖。abefore test×400；b2weeks×1500；c2months×1500圖5.玻璃體內注射載3H-CsA微球后眼球后節段組織中放射強度的變化情況圖6.玻璃體內注射載3H-CsA微球后眼球前節段組織中放射強度的變化情況圖7.房水中白細胞計數測定結果圖8.房水中蛋白含量的變化情況圖9.視網膜組織切片圖(a葡萄膜炎模型，b處方1用藥后，c處方2用藥后)具體實施方式
以下通過實施例，進一步說明本發明，但不作為對本發明的限制。
實施例1室溫條件下，在具塞試管中加入環孢素A與PLGA(75/25，MW＝15000)共溶于二氯甲烷中，充分溶解后，將有機相迅速傾倒入以一定速度攪拌的水相中，并持續以此速度攪拌6min(800rpm)。然后將此體系分散到含有PVA(聚乙烯醇，濃度0.1％)的200ml水溶液中，在室溫磁力攪拌下，揮發5h，除去二氯甲烷，使微球固化。以4000rpm速度，15℃，離心15min。收集上清液，得微球混懸液。將所得到的微球冷凍干燥保存。臨床用時用注謝用水、注射用生理鹽水或注射用葡萄糖溶液配成微球混懸劑，進行眼球玻璃體內注射。
實施例2載環孢素A微球的制備方法室溫條件下，在具塞試管中加入環孢素A與PLGA(75/25，MW＝15000)(藥物與載體材料用量比10％，W/W)共溶于二氯甲烷中，充分溶解后，將有機相迅速傾倒入以一定速度攪拌的水相中，并持續以此速度攪拌6min(攪拌速度800rpm)。然后將此體系分散到含有PVA(聚乙烯醇，濃度5％)的200ml水溶液中，在室溫磁力攪拌下，揮發除去二氯甲烷，使微球固化。以4000rpm速度，15℃，離心15min。收集上清液，得微球混懸液。將所得到的微球冷凍干燥保存。
所制得載環孢素微球粒徑分布范圍在10-70μm，掃描電子顯微鏡觀察微球粒子表明光滑圓整，藥物包封率均在90％以上。
實施例3、載環孢素A微球的制備方法室溫條件下，在具塞試管中加入環孢素A與PLGA(75/25，MW＝15000)(藥物與載體材料用量比20％，W/W)及普朗尼克F68(0.5％)共溶于二氯甲烷中，充分溶解后，將有機相迅速傾倒入以一定速度攪拌的水相中，并持續以此速度攪拌6min(攪拌速度1000rpm)。然后將此體系分散到含有PVA(聚乙烯醇，濃度0.5％)的200ml水溶液中，在室溫磁力攪拌下，揮發除去二氯甲烷，使微球固化。以4000rpm速度，15℃，離心15min。收集上清液，得微球混懸液。將所得到的微球冷凍干燥保存。
所制得載環孢素微球粒徑分布范圍在10-70μm，掃描電子顯微鏡觀察微球粒子表明光滑圓整，藥物包封率均在90％以上。
實施例4、載環孢素A微球的制備方法室溫條件下，在具塞試管中加入環孢素A與PLGA(75/25，MW＝15000)(藥物與載體材料用量比20％，W/W)及普朗尼克F68(3％)共溶于二氯甲烷中，充分溶解后，將有機相迅速傾倒入以一定速度攪拌的水相中，并持續以此速度攪拌6min(攪拌速度800rpm)。然后將此體系分散到含有PVA(聚乙烯醇，濃度0.5％)的200ml水溶液中，在室溫磁力攪拌下，揮發除去二氯甲烷，使微球固化。以4000rpm速度，15℃，離心15min。收集上清液，得微球混懸液。將所得到的微球冷凍干燥保存。
所制得載環孢素微球粒徑分布范圍在10-70μm，掃描電子顯微鏡觀察微球粒子表明光滑圓整，藥物包封率均在90％以上。
實施例5載環孢素A微球的制備方法室溫條件下，在具塞試管中加入環孢素A與聚乳酸(PLA)(藥物與載體材料用量比20％，W/W)共溶于二氯甲烷中，充分溶解后，將有機相迅速傾倒入以一定速度攪拌的水相中，并持續以此速度攪拌6min(攪拌速度1000rpm)。然后將此體系分散到含有PVA(聚乙烯醇，濃度0.5％)的200ml水溶液中，在室溫磁力攪拌下，揮發除去二氯甲烷，使微球固化。以4000rpm速度，15℃，離心15min。收集上清液，得微球混懸液。將所得到的微球冷凍干燥保存。
所制得載環孢素微球粒徑分布范圍在10-70μm，掃描電子顯微鏡觀察微球粒子表明光滑圓整，藥物包封率均在90％以上。
實施例61、載環孢素微球的體外釋放情況采用PLGA(75/25，分子量15000)作為載體材料和不同濃度的Pluronic F68作為添加劑，按照例1制備方法進行載環孢素微球的制備。所制得的微球體外釋放情況和微球粒子表面變化情況進行了考察。
體外釋放結果表明，處方O在60天考察期間累積釋放25.08％，累積釋放量為280.32±32.96μg，平均每天釋放量為4.67μg。電鏡照片顯示，處方O微球粒子表面在2周內基本保持不變，2周后，表面逐漸粗糙不光滑，提示微球表面溶蝕或微球內部存在大量細密空洞。
2、3H-CsA微球玻璃體注射后兔眼組織分布和藥動學研究。
采用PLGA(75/25，分子量15000)作為載體材料和Pluronic F68(3％)作為添加劑，按照例4制備方法進行載3H-CsA微球的制備。
參比制劑環孢素溶液(3H-CsA)試驗制劑載環孢素的微球(3H-CsA)
試驗動物大白兔(體重2.0-2.5Kg，經檢查確認無眼科疾病，由北京大學醫學部動物實驗中心提供)。
給藥方案取健康無眼疾白色家兔24只，隨機分為6組，環孢素溶液組(3組)和載環孢素的微球(3組)，每組4只8眼，按照“兔眼玻璃體注射的限組織分布和藥動學研究”中動物實驗的方法，對兔眼進行玻璃體內注射。
試驗結果試驗結果采用玻璃體內注射后1、3、7、17、25、35、50和65天時眼組織中放射線強度測定方法來評價CsA體內動力學。
結果表明，3H-CsA微球玻璃體內注射后，玻璃體內的藥物濃度在65天的試驗期間，藥物釋放維持相對恒定的水平均保持在87.20～259.80ng/ml之間(玻璃體內有效治療葡萄膜炎濃度約為100ng/ml。
權利要求
1.環孢素在制備一種治療眼內炎癥疾病的藥物中的應用。
2.根據權利要求1的應用，其特征在于，其中所述眼內炎癥疾病是葡萄膜炎、脈絡膜視網膜炎、交感性眼炎、視網膜血管炎、鳥槍彈樣脈絡膜視網膜病變、急性后極部多發性鱗狀色素上皮病變或增生性玻璃體視網膜病變。
3.根據權利要求1的應用，其特征在于，是葡萄膜炎。
4.根據權利要求1-3任一權利要求的應用，其特征在于，其中所述藥物是眼科藥物制劑。
5.根據權利要求4的應用，其特征在于，其中眼科藥物制劑是環孢素的生物降解型微球制劑。
6.根據權利要求5的應用，其特征在于，其中所述生物降解型微球制劑由環孢素，可生物降解的高分子材料和/或制備微球制劑適宜的添加劑組成。
7.根據權利要求6的應用，其特征在于，其中所述高分子材料選自乳酸-羥基乙酸共聚物，聚乳酸或其與其它材料形成的組合物，所述添加劑選自普朗尼克F68、聚維酮，聚乙二醇。
8.根據權利要求7的應用，其特征在于，所述高分子材料乳酸-羥基乙酸是乳酸羥基乙酸的重量比為75∶25-25∶75的聚合物高分子材料；所述環孢素和可生物降解的高分子材料之間的重量比為5-50∶100。。
9.根據權利要求6的應用，其特征在于，所述生物降解型微球制劑其配方組成如下環孢素5-50％高分子材料50-95％添加劑0.1-20％。
10.根據權利要求6的應用，其特征在于，所述生物降解型微球制劑其配方組成如下環孢素20％高分子材料70-77％添加劑為 3.0％的普朗尼克F68或10％的聚乙二醇。
全文摘要
本發明提供一種供注射用載環孢素的微球混懸制劑，使包裹在載體材料中藥物能夠緩慢釋放，采用該制劑在眼球玻璃體內直接注射，對眼內炎癥如葡萄膜炎治療起到有效和長效作用。
文檔編號A61P27/02GK1853717SQ20051006641
公開日2006年11月1日 申請日期2005年4月25日 優先權日2005年4月25日
發明者張強, 劉瑜玲, 王堅成, 何淵, 張華 申請人:北京大學