無菌大培養皿并用Parafilm-M膜密封后，于4 °C條件下黑暗保存。
[0032]本實施例的方法能夠使黑木相思幼苗生產不受季節限制，還具有更好的營養供應和抗病能力和方便貯藏和運輸的特點，通過本實施例的方法得到的黑木相思人工種子栽培出的黑木相思幼苗成活率100%，且無表型變異。在步驟(3)的增殖培養基中繼代30代，未發現有變異苗出現，說明可以高繼代培養。
[0033]實施例2
[0034]本實施例的黑木相思人工種子制備方法，包括如下步驟:
[0035](I)外植體處理:將采回的黑木相思枝條剪去葉片，用1%洗衣粉溶液浸泡清洗7分鐘，再用自來水沖洗干凈；在超凈工作臺上用70%的乙醇震蕩漂洗50秒，用無菌水沖洗3次后，用0.08%的升汞溶液消毒10分鐘，用無菌水沖洗7次，吸干水。
[0036](2)誘導培養:截取帶I?2個腋芽莖段接種于誘導培養基上，上述誘導培養基為MS+0.3mg/L 6-BA+0.08mg/L IBA+25g/L蔗糖+瓊脂，進行暗培養8天后轉到光照下培養，每天12小時燈光，光照強度1500?2000Lux，25°C?28°C，培養25?30天誘導產生出不定芽。
[0037](3)增殖培養:將上述誘導培養產生的不定芽轉到增殖培養基上，上述增殖培養基為MS+0.5mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA+25g/L蔗糖+瓊脂，光照下培養，每天12小時燈光，光照強度1500?2000Lux，25°C?28°C，培養25?30天誘導產生出叢生芽；在上述增殖培養條件下，每25?30天繼代培養一次，上述繼代培養使用上述增殖培養基。
[0038](4)人工種子制作:將1/2MS+0.3mg/L IBA+3.0%海藻酸鈉+1.0%殼聚糖溶液注入試管，將上述步驟(3)中增殖得到的叢生芽移進上述試管中的溶液內部，用2.0% CaCl2溶液注入上述試管內壁，凝固5?lOmin，用清水沖洗出上述試管內的固化凝膠即得人工種子。
[0039](5)人工種子貯藏:將上述⑷制作的人工種子盛入無菌大培養皿并用Parafilm-M膜密封后，于4 °C條件下黑暗保存。
[0040]本實施例的方法能夠使黑木相思幼苗生產不受季節限制，還具有更好的營養供應和抗病能力和方便貯藏和運輸的特點，通過本實施例的方法得到的黑木相思人工種子栽培出的黑木相思幼苗成活率99%，且無表型變異。在步驟(3)的增殖培養基中繼代30代，未發現有變異苗出現，說明可以高繼代培養。
[0041]實施例3
[0042]本實施例的黑木相思人工種子制備方法，包括如下步驟:
[0043](I)外植體處理:將采回的黑木相思枝條剪去葉片，用3%洗衣粉溶液浸泡清洗3分鐘，再用自來水沖洗干凈；在超凈工作臺上用75%的乙醇震蕩漂洗10秒，用無菌水沖洗2次后，用0.12%的升汞溶液消毒5分鐘，用無菌水沖洗3次，吸干水。
[0044](2)誘導培養:截取帶I?2個腋芽莖段接種于誘導培養基上，上述誘導培養基為MS+0.7mg/L 6-BA+0.12mg/L IBA+35g/L蔗糖+瓊脂，進行暗培養6天后轉到光照下培養，每天12小時燈光，光照強度1500?2000Lux，25°C?28°C，培養25?30天誘導產生出不定芽。
[0045](3)增殖培養:將上述誘導培養產生的不定芽轉到增殖培養基上，上述增殖培養基為MS+0.7mg/L 6-BA+0.25mg/L NAA+35g/L蔗糖+瓊脂，光照下培養，每天12小時燈光，光照強度1500?2000Lux，25°C?28°C，培養25?30天誘導產生出叢生芽；在上述增殖培養條件下，每25?30天繼代培養一次，上述繼代培養使用上述增殖培養基。
[0046](4)人工種子制作:將1/2MS+0.5mg/L IBA+5.0 %海藻酸鈉+3.0 %殼聚糖溶液注入試管，將上述步驟(3)中增殖得到的叢生芽移進上述試管中的溶液內部，用3.0% CaCl2溶液注入上述試管內壁，凝固5?lOmin，用清水沖洗出上述試管內的固化凝膠即得人工種子。
[0047](5)人工種子貯藏:將上述⑷制作的人工種子盛入無菌大培養皿并用Parafilm-M膜密封后，于4 °C條件下黑暗保存。
[0048]本實施例的方法能夠使黑木相思幼苗生產不受季節限制，還具有更好的營養供應和抗病能力和方便貯藏和運輸的特點，通過本實施例的方法得到的黑木相思人工種子栽培出的黑木相思幼苗成活率98%，且無表型變異。在步驟(3)的增殖培養基中繼代30代，未發現有變異苗出現，說明可以高繼代培養。
[0049]以上內容是結合具體的實施方式對本發明所作的進一步詳細說明，不能認定本發明的具體實施只局限于這些說明。對于本發明所屬技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬于本發明的保護范圍。
【主權項】
1.一種黑木相思人工種子制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟: (1)外植體處理:將采回的黑木相思枝條剪去葉片，用1-3%洗衣粉溶液浸泡清洗3-7分鐘，再用自來水沖洗干凈；在超凈工作臺上用70-75%的乙醇震蕩漂洗10-50秒，用無菌水沖洗1-3次后，用0.08-0.12%的升萊溶液消毒5-10分鐘，用無菌水沖洗3-7次，吸干水； (2)誘導培養:截取帶I?2個腋芽莖段接種于誘導培養基上，所述誘導培養基為MS+0.3-0.7mg/L 6-BA+0.08-0.12mg/L IBA+25_35g/L 蔗糖 + 瓊脂，進行暗培養 6-8 天后轉到光照下培養，每天12小時燈光，光照強度1500?2000Lux，25°C?28°C，培養25?30天誘導產生出不定芽； (3)增殖培養:將所述誘導培養產生的不定芽轉到增殖培養基上，所述增殖培養基為MS+0.5-0.7mg/L 6-BA+0.15-0.25mg/L NAA+25_35g/L 蔗糖 + 瓊脂，光照下培養，每天 12 小時燈光，光照強度1500?2000Lux，25°C?28°C，培養25?30天誘導產生出叢生芽；任選地，在所述增殖培養條件下，每25?30天繼代培養一次，所述繼代培養使用所述增殖培養基; (4)人工種子制作:將1/2MS+0.3-0.5mg/L IBA+3.0 ?5.0 % 海藻酸鈉 +1.0 ?3.0%殼聚糖溶液注入試管，將所述步驟(3)中增殖得到的叢生芽移進所述試管中的溶液內部，用2.0?3.0% CaCl2S液注入所述試管內壁，凝固5?lOmin，用清水沖洗出所述試管內的固化凝膠即得人工種子； (5)人工種子貯藏:將所述(4)制作的人工種子盛入無菌大培養皿并用Parafilm-M膜密封后，于4°C條件下黑暗保存。2.根據權利要求1所述的黑木相思人工種子制備方法，其特征在于，所述步驟(I)的外植體處理具體為:將采回的黑木相思枝條剪去葉片，用2%洗衣粉溶液浸泡清洗5分鐘，再用自來水沖洗干凈；在超凈工作臺上用75%的乙醇震蕩漂洗30秒，用無菌水沖洗I次后，用0.1 %的升汞溶液消毒7分鐘，用無菌水沖洗5次，吸干水。3.根據權利要求1所述的黑木相思人工種子制備方法，其特征在于，所述步驟⑵的誘導培養具體為:截取帶1-2個腋芽莖段接種于誘導培養基上，所述誘導培養基為MS+0.5mg/L 6-BA+0.lmg/L IBA+30g/L蔗糖+瓊脂，進行暗培養7天后轉到光照下培養，每天12小時燈光，光照強度1500?2000Lux，25°C?28°C，培養25?30天誘導產生出不定芽。4.根據權利要求1所述的黑木相思人工種子制備方法，其特征在于，所述步驟(3)的增殖培養具體為:將所述誘導培養產生的不定芽轉到增殖培養基上，所述增殖培養基為MS+0.6mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+瓊脂，光照下培養，每天12小時燈光，光照強度1500?2000Lux，25°C?28°C，培養25?30天誘導產生出叢生芽；任選地，在所述增殖培養條件下，每25?30天繼代培養一次，所述繼代培養使用所述增殖培養基。5.根據權利要求1所述的黑木相思人工種子制備方法，其特征在于，所述步驟(4)的人工種子制作具體為:將1/2MS+0.4mg/L IBA+4.0%海藻酸鈉+2.0 %殼聚糖溶液注入試管，將所述步驟(3)中增殖得到的叢生芽移進所述試管中的溶液內部，用2.5% CaCl2S液注入所述試管內壁，凝固5?lOmin，用清水沖洗出所述試管內的固化凝膠即得人工種子。6.根據權利要求1所述的黑木相思人工種子制備方法，其特征在于，所述步驟⑶中進行30代所述繼代培養。
【專利摘要】本發明公開了一種黑木相思人工種子制備方法，包括外植體處理、誘導培養、增殖培養、人工種子制作和人工種子貯藏的步驟，其中誘導培養使用的誘導培養基為MS+0.3-0.7mg/L？6-BA+0.08-0.12mg/L？IBA+25-35g/L蔗糖+瓊脂，增殖培養使用的增殖培養基為MS+0.5-0.7mg/L？6-BA+0.15-0.25mg/L？NAA+25-35g/L蔗糖+瓊脂，最終制作的人工種子盛入無菌大培養皿并密封后，于4℃條件下黑暗保存。本發明的方法不受季節限制，具有更好的營養供應和抗病能力，并且方便貯藏和運輸，人工種子栽培出的幼苗成活率近100％，且無表型變異。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105165606
【申請號】
【發明人】王立, 黃宏健, 譚沛濤, 胡楊
【申請人】江門市新會區林業科學研究所
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年8月4日