一種蒙古芯芭組織培養繁育方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種蒙古芯芭組織培養繁育方法。
【背景技術】
[0002]蒙古芯色Cymbaria mongoIica Maxim，為玄參科芯色屬植物，其蒙藥名為“阿拉坦-阿給”，是蒙醫專用藥芯芭的基源植物之一，多生于海拔620-110米之間的荒漠草原及山地草原上，主要分布于內蒙古、黑龍江、河北等地。全草入藥，具有燥“協日烏素”，清熱，祛風濕、利尿、止血等功效，用于治療風濕關節炎、吐血、衄血、便血、外傷出血、腎炎水腫、黃水瘡等癥。
[0003]目前，市場上的芯芭藥材主要來自野生資源，隨著其藥用價值的提高，市場對藥材的需求量增大，導致芯芭被過渡采挖，野生資源蘊藏量也日趨減少，資源瀕臨枯竭。雖然近年來國內外對蒙藥的關注不斷增加，芯芭也引起了諸多學者的重視，研究報道不斷增加，但主要集中在資源分布、定性鑒別、化學成分及藥理作用研究上。到目前為止，針對芯芭的人工種植、種苗繁育技術的相關研究未見報道。蒙古芯芭一般通過種子進行繁殖，但在初步的種苗繁育工作中發現，蒙古芯芭的種子繁殖存在發芽率低、發芽不整齊、種苗質量不穩定等問題，嚴重制約了蒙古芯芭的規范化種植和生產。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是提供一種蒙古芯芭組織培養繁育方法，能夠有效快速地提高蒙古芯芭種苗的繁殖速度和質量，實現蒙古芯芭優質種苗的工廠化育苗，以滿足生產上的需要。
[0005]本發明通過以下技術方案達到上述目的:一種蒙古芯芭組織培養繁育方法，該方法包括以下步驟:
[0006](I)外植體的選擇與消毒:取蒙古芯芭飽滿果實，剝去果皮后取出種子作為外植體，將外植體依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加入2_3滴吐溫-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體，其中，無菌水為經高溫高壓滅菌的蒸餾水；
[0007](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的無菌外植體接種到MS培養基中，在培養溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養45天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8 ;
[0008](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養75天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加0.5-2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.1-ο.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8。
[0009]本發明的突出優點在于:
[0010](I)采用生物技術對蒙古芯芭進行組織培養快速繁殖，通過蒙古芯芭叢生芽的繁殖，在短時間內可培育出大量適合栽培種植的蒙古芯芭幼苗，保障蒙古芯芭種苗的增殖系數和種苗質量，實現規模化生產，滿足生產上的需要。
[0011](2)采用本發明所述的培養方法得到的蒙古芯芭叢生芽增殖系數達到15-20倍，叢生芽健壯，接種到生根培養基后容易生根。
【具體實施方式】
[0012]下面結合實施例對本發明的技術方案進一步說明。
[0013]實施例1
[0014]本發明所述的蒙古芯芭的組織培養快速繁殖方法的一個實例，包括以下步驟:
[0015](I)外植體的選擇與消毒:取蒙古芯芭飽滿果實，剝去果皮后取出種子作為外植體，將外植體依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體；
[0016](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的無菌外植體接種到MS培養基中，在培養溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養45天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8 ;
[0017](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養75天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA,0.5mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，生長倍率為10.2倍，叢生芽增殖系數為16.2。
[0018]實施例2
[0019]本發明所述的蒙古芯芭的組織培養快速繁殖方法的另一個實例，包括以下步驟:
[0020](I)外植體的選擇與消毒:取蒙古芯芭飽滿果實，剝去果皮后取出種子作為外植體，將外植體依次用2v/v%洗沽精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加入2_3滴吐溫-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體；
[0021](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的無菌外植體接種到MS培養基中，在培養溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養45天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8 ;
[0022](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養75天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA,0.3mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，生長倍率為16.8倍，叢生芽增殖系數為17.3。
[0023]實施例3
[0024]本發明所述的蒙古芯芭的組織培養快速繁殖方法的再一個實例，包括以下步驟:
[0025](I)外植體的選擇與消毒:取蒙古芯芭飽滿果實，剝去果皮后取出種子作為外植體，將外植體依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加入2_3滴吐溫-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體；
[0026](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的無菌外植體接種到MS培養基中，在培養溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養45天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8 ;
[0027](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養75天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA,0.5mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，生長倍率為20.1倍，叢生芽增殖系數為22.9。
[0028]實施例4
[0029]本發明所述的蒙古芯芭的組織培養快速繁殖方法的又一個實例，包括以下步驟:
[0030](I)外植體的選擇與消毒:取蒙古芯芭飽滿果實，剝去果皮后取出種子作為外植體，將外植體依次用2v/v%洗沽精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加入2_3滴吐溫-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體；
[0031](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的無菌外植體接種到MS培養基中，在培養溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養45天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8 ;
[0032](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養75天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA,0.lmg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，生長倍率為18.5倍，叢生芽增殖系數為20.3。
【主權項】
1.一種蒙古芯芭組織培養繁育方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (1)外植體的選擇與消毒:取蒙古芯芭飽滿果實，剝去果皮后取出種子作為外植體，將外植體依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加入2_3滴吐溫-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體； (2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(1)得到的無菌外植體接種到MS培養基中，在培養溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養45天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8 ; (3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養.75天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加0.5-2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、.0.1-ο.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8。
【專利摘要】一種蒙古芯芭組織培養繁育方法，包括如下步驟：(1)取蒙古芯芭種子作為外植體進行消毒；(2)將消毒后的外植體置于MS基本培養基中誘導得到無菌試管苗；(3)將所述無菌試管苗置于MS繁殖培養基中進行試管苗快速繁殖培養獲得叢生芽。采用本發明所述的培養方法得到的蒙古芯芭叢生芽增殖系數達到15-20倍，能夠在短時間內提供成活率高的蒙古芯芭優質種苗，有效解決蒙古芯芭的規模化育苗問題。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105165623
【申請號】
【發明人】韋坤華, 李旻輝, 徐建平, 肖冬, 李林軒, 繆劍華, 李翠, 韋瑩, 王一諾, 張樂, 王曉峰
【申請人】廣西壯族自治區藥用植物園
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年10月12日