一種可提高銀耳多糖升白作用的腸溶微粒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及銀耳多糖腸溶微粒的制備方法，特別涉及通過制備銀耳多糖腸溶微粒 提高銀耳多糖口服時對環磷酰胺和放射損傷所致白細胞減少的保護作用，屬于中藥技術領 域。 技術背景
[0002] 多糖是生物體內除蛋白質和核酸以外的又一類重要的生物大分子，具有多種多樣 的生物學功能，它幾乎沒有小分子化合物具有的異化生物代謝毒性，使用比較安全，和其他 藥物的相互作用比較少。由于其上述特點和對許多目前缺少治療藥物的疾病具有良好的前 景，已成為生命科學研究和新藥開發中極受重視的一類化合物。但是，由于其結構十分復 雜，分離純化困難，易在胃中被酸分解和在腸道缺少吸收機制，嚴重制約了其研究和開發。
[0003] 銀耳（TremellafuciformBerk)是真菌類植物，其主要化學成分為多糖類化合 物，具有提高機體免疫力等作用。但是該多糖口服不被吸收，基本無活性；靜脈給藥雖具有 良好的作用，但其結構十分復雜，純化困難，難以進行靜脈給藥的新藥研發。因此，如何提高 其口服時的生物利用度，是該類藥物研發面臨的瓶頸問題。提高糖類藥物的生物利用度，首 先要克服胃酸對其水解所造成的破壞。對藥物以腸溶材料保護是常用的方法。但是該方法 制備的制劑因粒徑大（> 40目），難以對小動物口服給藥，造成實驗難以進行.也有文獻證 明，糖復合物如果制成納米微粒，可以明顯提高其口服時的生物利用度。因此，研究制備粒 徑小的腸溶微粒，為藥效學、藥代動力學研究提供可行的樣品，是提高糖類藥物生物利用度 研究面臨的首要問題。我們以銀耳多糖為樣品，采用擠出滾圓制粒機和流化床包衣機，最終 制備了粒徑小、分布均勻、包衣效果好、載藥量較高的腸溶微粒，該微粒可明顯提高銀耳多 糖口服時的升白作用。
[0004] 本發明完成前未發現有關銀耳多糖腸溶微粒用于提高銀耳多糖升白活性的報道， 本發明具有廣泛的應用前景。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的之一是將銀耳多糖本身具有的特性和微粒本身具有的優勢結合在 一起，通過微粒的特點將該多糖制備成易于在腸道吸收的微粒，并通過腸溶包衣材料包衣 使其免于胃酸和蛋白酶的破壞。本發明中的腸溶微粒平均粒徑為175ym，在人工胃液和人 工腸液中的溶解性能實驗也表明此腸溶微粒在人工腸液中釋放，而在人工胃液中不溶，達 到了預想的粒徑要求和包衣效果，可滿足小動物藥理實驗的要求。
[0006] 本發明的目的之二是銀耳多糖腸溶微粒在環磷酰胺和放射損傷所致白細胞減少 的保護作用方面的用途。雖然銀耳多糖也具有該用途，其只有通過靜脈給藥才能具有顯著 藥效學作用，口服時基本無作用。但本發明得到的銀耳多糖腸溶微粒藥效學實驗的結果表 明其活性明顯優于銀耳多糖，因此，本發明的銀耳多糖腸溶微粒與銀耳多糖相比，可明顯提 高其升白作用，具有實質的突出特點和顯著的技術進步。
[0007] 本發明的內容是能過以下技術方案來實施的：
[0008] -、銀耳多糖腸溶微粒的制備方法，共包括以下步驟：
[0009] (1)取銀耳孢糖5kg，加6倍量水，提取2次，每次1小時，濾過，合并濾液，濃縮，濃 縮液加乙醇至乙醇含量為80%，回收乙醇，沉淀真空干燥，得銀耳多糖；
[0010] (2)分別將銀耳多糖粉末和微晶纖維素過150目藥篩，加入潤濕劑并充分混合攪 拌，制成軟材，經內徑為〇. 2_的篩板擠出機篩板擠成均勻的藥條，立即分次置于擠出滾圓 機內，調節滾圓時間和滾圓轉速，將制得的微粒過80目-120目的藥篩，于50°C干燥5h后， 將微粒進行流化床包衣，得銀耳多糖腸溶微粒。
[0011] 二、銀耳多糖腸溶微粒理化性質分析
[0012] 1、微粒直徑分布范圍
[0013] 取制得的腸溶微粒適量，加入0.01M的鹽酸溶液，震搖，充分混勻。以LS-13320MW 激光粒度分析儀（Beckman-Coulter)測定，得粒徑分布范圍。平均粒徑和跨距分別為： 175ym和 6. 6ym。
[0014] 2.在人工胃液和人工腸液中的溶解性能
[0015] 取腸溶微粒20mg，置100ml量瓶中，加人工腸液至刻度，搖勻，即得樣品人工腸液 溶液（每一毫升中含腸溶微粒200ug)。觀察微粒溶解情況和立刻離心后測定上清溶液在 276nm處的吸收度（以人工腸液為空白），并每隔30分鐘測定一次。另取腸溶微粒20mg， 置100ml量瓶中，加人工胃液至刻度，搖勻，即得樣品溶液（每一毫升中含腸溶微粒200ug)。 觀察微粒溶解情況和離心后立刻測定上清溶液在276nm處的吸收度（以人工胃液為空白）， 并每隔30分鐘測定一次。
[0016] 結果如表1
[0017] 表1腸溶微粒在不同溶液中的溶解時間
[0018]
[0019] 表1的結果表明，腸溶微粒在人工腸液中釋放度良好；腸溶微粒在人工胃液中未 見溶解，直至過夜，溶液仍為混懸液。吸收度測定結果表明，腸溶微粒在人工腸液中基本全 部釋放，表明該微粒在腸道中釋放良好；在人工胃液中除極少量未包裹完全的腸溶銀耳多 糖迅速釋放外，絕大部分被包裹，在胃中釋放緩慢。
[0020] 三、銀耳多糖腸溶微粒升白作用實驗
[0021 ] 本發明的銀耳多糖腸溶微粒進行了對環磷酰胺所致小鼠白細胞減少的對抗作用 和對放射損傷所致小鼠白細胞減少的保護作用。
[0022] 1.腸溶銀耳多糖微粒的對環磷酰胺所致小鼠白細胞減少的對抗作用
[0023] 取50只昆明種小鼠6~8周齡，體重18~22g，雌雄各半，進行環磷酰胺所致小鼠 白細胞減少的對抗作用實驗。以苦參素注射液（尾靜脈注射）為陽性藥，銀耳多糖和腸溶 銀耳多糖微粒為按所述方法自制。用注射用環磷酰胺造成白細胞減少模型，結果見表2。
[0024] 表2銀耳多糖對CTX所致外周血白細胞減少的保護作用
[0025]
[0026] 注：與模型對照組比較#P〈0. 05, ##P〈0. 01
[0027] 銀耳多糖腸溶微粒樣品于藥后3、6、9、12天對CTX所致外周血白細胞減少均有明 顯對抗作用，其作用明顯高于銀耳多糖，與模型對照組比較差異顯著（P〈〇. 01);銀耳多糖 樣品對CTX所致外周血白細胞減少無明顯對抗作用（p>0. 05)。
[0028] 2、銀耳多糖腸溶微粒樣品口服給藥對放射損傷所致白細胞減少的保護作用
[0029] 取體重18~22g昆明種小白鼠50只，分空白對照組、陽性藥組（苦參素注射液）、 銀耳多糖組、腸溶微粒組四組，雌雄各半。樣品同環磷酰胺所致小鼠白細胞減少的對抗作用 試驗。給藥組分為口服銀耳多糖、和腸溶微粒。以X-射線照射（照射量為l.OGy，時間為 210秒），造成白細胞減少模型。陽性藥物組為尾靜脈注射苦參素注射液，各組小鼠分別于 第1次給予X-射線照射（即給藥）后3、6、9、12天尾部采血，按常規方法計數外周血白細 胞數。結果見表3。
[0030] 表3銀耳多糖對放射損傷所致外周血白細胞減少的保護作用
[0031]
[0032] 注：與模型對照組比較#P〈0. 05, ##P〈0. 01
[0033] 模型對照組于給予X-射線照射3、6、9、12、15天均可見外周血白細胞數明顯減少， 與正常對照組比較差異顯著。腸溶銀耳多糖顆粒組于藥后3、6、9、12天對放射所致外周血 白細胞減少均有明顯對抗作用，與模型對照組比較差異顯著（P〈〇. 05);銀耳多糖樣品組對 放射所致外周血白細胞減少均無明顯對抗作用（P>〇. 05)。
[0034] 上述藥效學結果表明銀耳多糖腸溶微粒具有對環磷酰胺和放射損傷所致白細胞 減少的保護作用的活性，其升白活性與銀耳多糖相比，均具有顯著性差異。
[0035] 本發明是通過如下的實施例得以實現的，但本發明不受實施例的任何限制。
[0036] 實施例1 (膠囊劑）
[0037] (1)取銀耳孢糖5kg，加水6倍量，加熱至沸騰，保持沸騰1小時，停止加熱，待降至 室溫時，濾出提取液；殘渣加入6倍量水加熱至沸騰，保持沸騰1小時，停止加熱，待降至室 溫時，濾過，合并提取液，濃縮至相對密度為1. 06 (60°C)，濃縮液加乙醇，至乙醇含量80%， 回收乙醇，沉淀真空干燥，得銀耳多糖；
[0038] (2)分別將銀耳多糖粉末和微晶纖維素過150目藥篩，加入90 %乙醇作為潤濕 劑并充分混合攪拌，制成軟材，經擠出機篩板（篩板內徑〇.2_)擠成均勻的藥條，立即分 次置于擠出滾圓機內，根據軟硬度及濕粘性調節滾圓時間和滾圓轉速，將制得的微粒過80 目-120目的藥篩，于50°C干燥5h后，然后將微粒進行流化床包衣，以丙烯酸樹脂水分散體 為腸溶包衣材料，包衣制備腸溶微粒。
[0039] (3)取銀耳多糖腸溶腸溶微粒100g，藥用淀粉適量，混合均勻，裝入1號膠囊，制成 1000粒，即得。每次3粒、每日2次。
[0040] 實施例2 (片劑）
[0041] 根據實施例1，取銀耳多糖腸溶腸溶微粒l〇〇g，藥用淀粉適量，糊精適量，混合均 勻，制粒，干燥，整粒，干燥，加入潤滑劑適量，壓片，制成1000片，即得。每次3片、每日2次。
[0042] 實施例3 (散劑）
[0043] 根據實施例1，取銀耳多糖腸溶腸溶微粒300g，蔗糖適量，混合均勻，包裝，制成 1000袋，每次1袋，一日2次。
【主權項】
1. 一種可提高銀耳多糖升白作用的腸溶微粒，所述的腸溶微粒的制備方法為： (1) 取銀耳孢糖5kg，加6倍量水，提取2次，每次1小時，濾過，合并濾液，濃縮，濃縮液 加乙醇至乙醇含量為80%，回收乙醇，沉淀真空干燥，得銀耳多糖； (2) 分別將銀耳多糖粉末和微晶纖維素過150目藥篩，加入潤濕劑并充分混合攪拌，制 成軟材，經內徑為0.2mm的篩板擠出機篩板擠成均勻的藥條，立即分次置于擠出滾圓機內， 調節滾圓時間和滾圓轉速，將制得的微粒過80目-120目的藥篩，于50°C干燥5h后，將微粒 進行流化床包衣，得銀耳多糖腸溶微粒。2. 根據權利要求1所述的腸溶微粒，其特征在于含有有效治療劑量的銀耳多糖腸溶微 粒以及一種或多種藥學上可接受的藥用賦形劑。
【專利摘要】本發明是關于銀耳多糖腸溶微粒制備方法以及該微粒可提高銀耳多糖的升白作用。該腸溶微粒可保護銀耳多糖在胃中不被溶解，而且可在腸道環境下迅速釋放，可以解決銀耳多糖口服吸收困難的問題,提高口服時銀耳多糖對環磷酰胺和放射損傷所致白細胞減少的保護作用，屬于中藥技術領域。
【IPC分類】A61K31/715, A61P7/00, A61K9/14, A61K47/38
【公開號】CN105168138
【申請號】
【發明人】高陽, 徐多多, 王明星, 高其品
【申請人】高其品
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年8月10日