銀包鈀納米制劑在制備抗隱球菌感染藥物中的應用

銀包鈀納米制劑在制備抗隱球菌感染藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及銀包鈀納米制劑在制備抗隱球菌感染藥物中 的應用。
【背景技術】
[0002] 隱球菌（Cryptococcosus)是遍布自然界的一種重要酵母菌，隱球菌屬包括70余 種，其中臨床致病感染以新生隱球菌和格特隱球菌最為常見。隱球菌主要經宿主呼吸道吸 入侵犯肺部，臨床多表現為無癥狀性肺炎，常為宿主正常免疫功能所清除或轉化為潛伏感 染狀態；當機體免疫功能嚴重抑制或削弱時，潛伏在肺部的隱球菌活化入血循環、播散引發 系統性感染，尤嗜感染中樞神經系統。隱球菌感染的臨床結局主要取決于其毒性因子表達 與宿主免疫應答能力之間的相互作用，當機體免疫力下降時，病原菌可直接侵入并引起血 行傳播，故長期使用免疫抑制劑或糖皮質激素的患者、艾滋病、白血病等患者易患本病。隱 球菌感染依照臨床表現可分為肺隱球菌病、中樞神經系統隱球菌病、皮膚黏膜隱球菌病、骨 隱球菌病及內臟隱球菌病五型。
[0003] 隱球菌病的臨床治療主要依賴于抗真菌藥物，通常可選用的藥物主要包括兩性霉 素B及其脂質體、氟康唑、氟胞嘧啶等。然而，這些抗真菌藥物具有顯著的毒副作用和日趨 上升的耐藥性，是當前困擾侵襲性真菌病臨床治療的重要挑戰。兩性霉素B療效確切，但劑 量相關的藥物毒副作用（如肝腎毒性、溶血性貧血等）對基礎情況不佳的患者考驗重大，令 很多臨床醫師望而生畏；氟康唑可以透過血腦屏障進入中樞神經系統，是臨床為數不多可 用于隱球菌感染治療的可選藥物，然而其臨床耐藥株已然出現，且單獨用藥時療效不佳；氟 胞嘧啶單藥治療可迅速誘導臨床耐藥。因此，盡快研發出新型安全高效的抗真菌藥物或聯 合用藥方案已然迫在眉睫。
[0004] 近十年來，納米科技在全球范圍內掀起了一場新的工業革命，推動了生物、醫藥、 信息、化工、國防等領域科技的巨大發展。納米銀材料，具有穩定的物理化學性能（表面等 離子體共振效應SPR)，可有效殺滅多數細菌、真菌以及腫瘤細胞，已廣泛應用于醫療衛生、 醫療器械、紡織、涂料、日用品、生態環境等領域。然而，納米銀材料的光熱穩定性較差，經 強光照射后物理生物特性可發生改變，在此基礎上新合成的銀包鈀納米材料（PdOAg)顯著 克服了該缺點。銀包鈀納米材料以理化特性良好的鈀納米制劑為"種子"，加入不同比例 的還原態銀離子后形成不同直徑的Pd-Ag核心-外殼雙金屬納米材料，其大小形狀均勻， 光熱轉化效率高，光熱穩定性和生物兼容性極佳，目前已成功應用于抗惡性腫瘤及抗細菌 感染治療石開究（HuangX,TangS,LiuB,RenB,ZhengN.Enhancingthephotothermal stabilityofplasmonicmetalnanoplatesbyacore-shellarchitecture.Adv Mater. 2011. 23(30) :3420-5.；MoS,ChenX,ChenM,HeC,LuY?ZhengN.Two-dimensional AntibaterialPd@AgNanosheetswithaSynergeticEffectofPlasmonicHeatingand Ag+Release.JMaterChemB.2015(Accepted).)〇
[0005] 但目前尚未見有關銀包鈀納米制劑用于抗隱球菌治療的相關報道，也未見有關銀 包鈀納米制劑和其他抗隱球菌藥物聯用的相關報道。

【發明內容】

[0006] 本發明的目的在于提供銀包鈀納米制劑的新用途，具體是銀包鈀納米制劑在制備 抗隱球菌感染藥物中的應用。
[0007] 本發明的第一方面，提供了銀包鈀納米制劑在制備抗隱球菌感染藥物中的應用。
[0008] 所述的銀包鈀PdOAg納米制劑，粒徑為l-120nm。
[0009] 所述的銀包鈀PdOAg納米制劑，粒徑為5-120nm具有較佳的抗隱球菌效應；最佳 的，粒徑為80nm。
[0010] 本發明經細胞實驗表明，在多種常見的侵襲性真菌病原體之中，不同直徑銀包鈀 納米制劑僅對隱球菌具有良好的抑制活性，其抗真菌活性略次于兩性霉素B(AmB)，但顯著 高于氟康唑（FCZ)。
[0011] 而且，低濃度（彡5yg/ml)不同直徑的PdOAg納米制劑對HeLa細胞的毒副作用 較小。
[0012] 在本發明的一個優選實施例中，Pd@Ag納米制劑（80nm)對不同基因型新生/格特 隱球菌的臨床株或分離株均有良好的抑菌效應。
[0013] 本發明所述的抗隱球菌感染藥物，是以PdOAg納米制劑作為唯一活性成份，或者 包含Pd@Ag納米制劑的藥物組合物。
[0014] 所述的抗隱球菌感染藥物中Pd@Ag納米制劑的含量為0.l-99wt%。
[0015] 較佳地，所述的抗隱球菌感染藥物中Pd@Ag納米制劑的含量為0. 5-51wt%。
[0016] 所述的抗隱球菌感染藥物，為Pd@Ag納米制劑和常用的藥學輔料制備得到的藥物 制劑。
[0017] 本發明的Pd@Ag納米制劑可以按常規藥劑學制備成藥物制劑，如口服制劑、注射 制劑、輸液制劑或透皮吸收的藥物制劑等。
[0018] 本發明的第二方面，提供了銀包鈀納米制劑與兩性霉素B聯合在制備抗隱球菌感 染藥物中的應用。
[0019] 進一步地，本發明提供了一種聯合用藥方法，具體為一種抗隱球菌聯合用金屬納 米藥物，所述的聯合用藥物其活性成分為銀包鈀納米制劑與兩性霉素B。
[0020] 本發明所述的聯合用藥方案，可同時或序貫施用有效量的銀包鈀納米制劑與有效 量的兩性霉素B。所述的順序可以是先用銀包鈀納米制劑，再用兩性霉素B;也可以是先用 兩性霉素B，再用銀包鈀納米制劑。
[0021] 本發明經實驗證明，Pd@Ag納米制劑與AmB具有協同抗隱球菌效應。在對常見隱 球菌標準株的藥敏試驗中，單獨作用時，Pd@Ag納米制劑的MIC值為0. 25-2yg/ml，AmB的 MIC值為0. 125-1yg/ml，而聯合作用后Pd@Ag納米制劑（80nm)和AmB的MIC值分別降為 0. 06和0. 004yg/ml，聯用指數FICI均小于0. 5,可見二者合用對隱球菌有顯著的協同抗菌 作用。
[0022] 本發明所述的藥用載體，即藥學上可接受的載體，是指藥學領域中常用的除活性 成分以外添加物，例如稀釋劑（淀粉類、糖類、纖維素類和無機鹽類）、賦形劑等，填充劑如 淀粉蔗糖、粘合劑如水、乙醇、纖維素衍生物、明膠和聚乙烯吡咯烷酮，崩解劑如干淀粉、羧 甲基淀粉鈉，增溶劑如聚山梨酯類和聚氧乙烯脂肪酸酯類等，吸收促進劑、表面活性劑如吐 溫、司盤，吸附載體、潤滑劑如硬脂酸鎂、微粉硅膠等。另外，還可以在組合物中加入其它輔 料如香味劑、甜味劑等。
[0023] 本發明為銀包鈀納米制劑開辟了新的用途，將其用于抗真菌藥物或抗真菌藥物的 增效劑，不僅能提高藥物的抗真菌作用，而且在臨床治病真菌耐藥性日趨普遍，耐藥程度日 趨嚴重的情況，使抗真菌藥物恢復對耐藥真菌的作用，具有良好的臨床應用前景。
【附圖說明】
[0024] 圖1為PdOAg納米制劑對HeLa細胞的毒性檢測。
【具體實施方式】
[0025] 下面結合本發明的實施例對本發明的實施作詳細說明，以下實施例是在以本發明 技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式，但本發明的保護范圍不限于下述的 實施例。
[0026] 實施例1.不同直徑的銀包鈀PdOAg納米制劑對多種常見的侵襲性真菌病原體的 抑制實驗
[0027] 實驗材料：
[0028] 銀包鈀納米制劑所需的合成原料：2,4_戊二酸鈀Pd(acac)2(99%)購自Alfa Aesar公司，聚乙烯基吡咯烷酮（PVP，麗=30000)、二甲基甲酰胺（DMF)、溴化鈉（NaBr) 和硝酸鹽（AgN03)購自國藥集團化學試劑有限公司，四丁基溴化銨（TBAB)購自Acros Organics公司。氟康唑（FCZ)購自輝瑞制藥有限公司，抗真菌藥物兩性霉素B(AmB)、RPMI 1640液體培養液以及PDA培養基均購自Sigma-Aldrich公司。
[0029] 研究所用的常見病原真菌標準株均由上海市醫學真菌分子生物學重點實驗室提 供，除H99、R265、SC5314保留原始標準號外，其它標準株采用ATCC編號。
[0030] 儀器設備：
[0031] Multiskan MK3型酶標檢測儀（芬蘭Labsystems產品）
[0032] 隔水式電熱恒溫培養箱（上海躍進醫療器械廠）
[0033] THZ-82A臺式恒溫振蕩器（上海躍進醫療器械廠）
[0034] SW-CT-IF型超凈化工作臺（蘇州安泰空氣技術有限公司）
[0035] 實驗方法：
[0036] -、納米材料合成
[0037] 不同直徑（5，ll，30,80，120nm)的銀包鈀納米制劑均委托廈門大學固體表面物理 化學國家重點實驗室合成，具體方法參照參考文獻（HuangX，TangS，LiuB，RenB，Zheng N.Enhancingthephotothermalstabilityofplasmonicmetalnanoplatesbya core-shellarchitecture.AdvMater. 2011. 23(30):3420-5.) 〇
[0038] 二抗真菌藥敏實驗
[0039] 本實驗采用美國臨床實驗室標準化協會（ClinicalandLaboratory StandardsInstitute?CLSI)CLSI-M27A3(SafdarA,HannaHA,BoktourM,et al.Impactofhigh-dosegranulocytetransfusionsinpatientswithcancerwith candidemia:retrospectivecase-controlanalysisof491episodesofCandida speciesbloodstreaminfections.Cancer. 2004. 101 (12):2859-65.)和M38A2(Romani L.Immunitytofungalinfections.NatRevImmunol. 2011. 11 (4):275-88.)文件所 推薦的微量液基稀釋法（BrothMicrodilution)配制上述藥物的存液及倍比稀釋液 (0. 125mg/L-64mg/L)〇
[0040] 試驗前所有受試菌均接種在馬鈴薯葡萄糖培養基（PDA)上28°C培養7d使其活 化。在孵育7d的菌落上加入含有0.OlmL吐溫20(1滴）的0. 85%鹽水lmL，制備菌懸液； 菌懸液靜置3-5min后，大顆粒沉于底部，取上層均質液體（含孢囊孢子或分生孢子以及菌 絲片段）；用血細胞計數板將菌懸液濃度用RPMI1640培養液調整至2X106-1X10CFU