4中離體豬肝在注射實施例1中合成的PLGA-LM和對比例I合成的PLGA，并經射頻原位消融后得到的消融區域橫截面(A)數碼照片以及計算的消融體積(B)，圖中PLGA-LM獲得消融體積最大；
圖11是實施例4中活體Hela腫瘤在注射實施例1中合成的PLGA-LM和對比例I合成的PLGA，并經射頻原位消融后得到的消融區域橫截面(A)數碼照片以及計算的消融體積(B)，圖中C1表示PBS (對照)，c 2表示PLGA，c 3表示PLGA-LM，圖中PLGA-LM獲得消融體積最大，說明實施例1中合成的射頻診療劑射頻作用時發生持續地三相轉變產生，進而產生持續地瞬態空化效應顯著增強射頻消融。
【具體實施方式】
[0022]以下結合附圖和下述實施方式進一步說明本發明，應理解，附圖及下述實施方式僅用于說明本發明，而非限制本發明。
[0023]本發明的有機射頻診療劑包括固態薄荷醇分子內核和聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)外殼，其中外殼表面進一步包裹聚乙烯醇(PVA)，賦予該診療劑良好的分散性、穩定性和體內生物相容性。
[0024]本發明的有機射頻治療增效劑在血循環中具有較好的穩定性和降解性，在射頻輻照作用下可實現薄荷醇介質發生持續性的固-液-氣的三相轉變，實現射頻固相揮發(rad1frequency solidoid evaporat1n，簡稱RSV)過程。利用該持續產生氣泡的可以實現兩大功能，一是持續地增強超聲成像，提高診斷精度和實時監督治療過程，二是極大地增強射頻消融體積、降低射頻消融治療功率和時間，最終實現超聲引導下的射頻消融。
[0025]作為外殼的PLGA中，乳酸單體與羥基乙酸單體的摩爾比可為I?3:1。另外，PLGA包括但不僅限于含有羥基、氨基、羧基、巰基、酰胺基的PLGA單體。
[0026]作為內核的固態薄荷醇包括但不限于左旋薄荷醇(恪點:32?36°C )，右旋薄荷醇(熔點:42?45°C )和消旋薄荷醇(熔點:41?43°C )。由于薄荷醇在上述步驟B)中PLGA包封后，其熔點都會相應地增加5?10°C以上，考慮到人體的體溫為36.8°C，較佳地選擇左旋薄荷醇。薄荷醇在射頻作用下，待溫度高于熔點時發生固液相變，進一步依賴其揮發性的優點持續產生氣態薄荷醇，因此，本發明的射頻診療劑在射頻作用下可持續地產生薄荷醇氣泡，該氣泡可以持續地增強重生成像，同時其空化效應還可以增強射頻消融。
[0027]在射頻診療劑中，作為外殼的PLGA和作為內核的固態薄荷醇的質量比可為1:(0.3?I)，優選為1: (0.3?0.6)。內核在整個診療劑中的質量分數在O?20%之間可調，優選為在大于O且20%以下的范圍內可調。若薄荷醇量過多，則會導致該診療劑整體的熔點降低。
[0028]本發明的射頻診療劑表面呈電中性。本發明的射頻診療劑尺寸在100?2000nm之間，平均粒徑450nm，由于其表面吸附PVA分子，因此具有良好的分散性。通過不同孔徑的濾膜，可篩選出粒徑均一的診療劑。同時這一顆粒尺寸既滿足了滲入腫瘤組織血管內皮細胞所要求的最大尺寸的要求，同時又滿足了超聲造影中尺寸越大造影效果越好這一要求。
[0029]本發明的射頻診療劑中，還可以在外殼內擔載各種熒光分子、抗癌藥物等親、疏水性分子，從而除了具有超聲造影和增效HIFU無創消融治療的功能外，還可以實現熒光成像以及射頻刺激下藥物的可控釋放以及射頻/化療協同治療。熒光分子、抗癌藥物包括但不限于吲哚菁綠、Dil、DPA和PdOET，羅丹明6G，甲氨蝶呤等。另外，熒光分子和/或抗癌藥物的質量分數可在0-9 %之間。
[0030]本發明的射頻診療劑還可以通過聚合物進行表面改性，以提高體內環境下的穩定性及腫瘤靶向藥物運輸性能。所述聚合物包括但不限于含有功能基團(包括但不限于氨基、巰基和二硫鍵等)的聚乙二醇、磷脂分子，以及靶向配體，如RGD。
[0031]本發明的射頻診療劑因其組分都是生物相容性好的材料，因此具有優異的生物相容性和無毒性。
[0032]本發明的射頻診療劑可以通過一種改性的微乳液法制得。以下，作為示例，說明本發明的射頻診療劑的制備方法。
[0033]首先，將聚乳酸-羥基乙酸共聚物、固態薄荷醇充分溶解至易揮發性溶劑中形成混合液。聚乳酸-羥基乙酸共聚物和固態薄荷醇的投料比可按照目標產物中兩者的質量比。在一個示例中，聚乳酸-羥基乙酸共聚物的用量為0.05?0.2g，固態薄荷醇的用量為O?0.lg，優選為O?0.06g，以使最終得到的射頻診療劑(納米膠囊)中固相內核質量分數為0-20%之間可調。聚乳酸-羥基乙酸共聚物中乳酸單體與羥基乙酸單體的摩爾比可為I?3:1。
[0034]所使用的易揮發性溶劑包括但不限于氯仿和/或二氯甲烷。該易揮發性溶劑作為微乳液的油相。在所形成的混合液中，聚乳酸-羥基乙酸共聚物的濃度可為0.005?0.1g/mL。在一個示例中，聚乳酸-羥基乙酸共聚物的用量為0.05?0.2g，易揮發性溶劑的用量為2?8ml ο
[0035]在該混合液中，還可以加入有上述各種熒光分子、抗癌藥物等親、疏水性分子，以實現熒光成像以及射頻刺激下藥物的可控釋放以及射頻/化療協同治療。這些分子可以是單獨添加，也可以是多種分子共同添加。這些分子的加入量可為使其最終在射頻診療劑中的質量分數在0-9 %之間。
[0036]然后，將混合液加入(例如逐滴加入)到PVA溶液中，超聲，磁力攪拌預乳化，制得預乳化液。所采用的PVA溶液的質量分數可為1.5wt%? 5wt%，醇解度可為87?98%(mol/mol)，其作為微乳液的水相。所述混合液與PVA溶液的體積比可為1: (I?20)。在一個示例中，上述易揮發性溶劑的用量為2?8ml，PVA溶液的體積為10?30ml。在一個示例中，超聲乳化10?30分鐘得到預乳化液，進一步在800-1500轉/分鐘轉速下磁力攪拌 5-20min。
[0037]將上述預乳化液進行均質處理。例如，將上述預乳化液在置于均質機下，以10000-30000轉/分鐘速度均質2-10min。然后，去除上述易揮發性溶劑。例如，室溫下攪拌使易揮發性溶劑充分揮發。然后，離心收集沉淀，得到表面電中性的PLGA膠囊，即射頻診療劑，重新分散于PBS中，置于4°C下備用。
[0038]在上述制備過程中，溫度可在0_50°C之間進行。
[0039]本發明的有機射頻治療增效劑在血循環中具有較好的穩定性和降解性，在射頻輻照作用下可實現薄荷醇介質發生持續性的固-液-氣的三相轉變，實現射頻固相揮發(rad1frequency solidoid evaporat1n，簡稱RSV)過程。利用該持續產生氣泡的可以實現兩大功能，一是持續地增強超聲成像，提高診斷精度和實時監督治療過程，二是極大地增強射頻消融體積、降低射頻消融治療功率和時間，最終實現超聲引導下的射頻消融。本發明中射頻診療劑所采用的組分都是FDA批準可用于臨床的物質，因此該診療劑具有優異的生物兼容性，同時該制備條件溫和，簡單易行、無污染且產量高，適用于工業化大規模生產；可同時實現多種疾病尤其是癌癥的超聲診斷以及射頻增效治療，在醫學臨床應用中具有非常重要意義，臨床轉化潛力巨大。
[0040]下面進一步例舉實施例以詳細說明本發明。同樣應理解，以下實施例只用于對本發明進行進一步說明，不能理解為對本發明保護范圍的限制，本領域的技術人員根據本發明的上述內容作出的一些非本質的改進和調整均屬于本發明的保護范圍。下述示例具體的工藝參數等也僅是合適范圍中的一個示例，即本領域技術人員可以通過本文的說明做合適的范圍內選擇，而并非要限定于下文示例的具體數值。[0041 ] 實施例1射頻診療劑制備
將0.1g PLGA加入4mL氯仿溶劑中，然后加入0.05g左旋薄荷醇，室溫下磁力攪拌和超聲促溶，直至所有試劑充分溶解。然后加入20ml質量分數為2.5wt%的PVA水溶液，先用細胞粉碎機乳化I分鐘，后用高速磁力攪拌乳化9分鐘得到預乳化液。最后將預乳化液體置于均質機上，在10000轉/分鐘的速度均質5min，水洗、離心收集后得到射頻診療劑。
[0042]對比例I
參照實施例1合成工藝，制備不包裹薄荷醇的PLGA顆粒。將0.1g PLGA加入4mL氯仿溶劑中，室溫下磁力攪拌和超聲促溶，后續處理如實施例1。
[0043]對比例2
參照實施例1合成工藝，制備薄荷醇擔載量大的PLGA-LM膠囊。將0.1g PLGA加入4mL氯仿溶劑中，然后加入0.0Sg左旋薄荷醇，室溫下磁力攪拌和超聲促溶，直至所有試劑充分溶解，后續處理如實施例1。
[0044]圖1是實施例1中制得的射頻診療劑透射電鏡圖，從中可以看到射頻診療劑顆粒形貌規整，球形，且均勻分散。圖2是實施例1的射頻診療劑的掃描電鏡圖，尺寸在100nm-2um之間，且均勻分散。圖3