是實施例1中射頻診療劑的動態光散射粒徑分布圖，從中可以看出制得射頻診療劑的平均水和動力學直徑450nm。圖4是對比例I中制得的不包裹薄荷醇的EPLGA納米顆粒，從中可以看到，顆粒分散均勾，尺寸在100-500nm之間。圖5是對比例2中制備的包裹較多薄荷醇的PLGA-LM透射電鏡圖。從圖中可以看到，包裹的薄荷醇量過多導致該診療劑整體的熔點降低，襯度降低，在透射電鏡作用下熔化，同時可看到該顆粒尺寸在100nm-2um之間，且分散均勻。
[0045]實施例2射頻診療劑溫度響應產生氣泡
1mg實施例1中制備的射頻診療劑溶于Iml脫氣PBS中，取200ul加入到直徑2.5cm，含有0.5mm深度的圓形凹槽的共聚焦顯微鏡培養皿，隨后用蓋玻片分裝，玻璃膠邊緣密封，置于熒光中厚的共聚焦培養皿中。在加入射頻加熱的熱水之前和之后分別截取圖像。
[0046]圖6是實施例2中射頻輻照前后PLGA-LM的光學顯微照片，a為射頻加熱前，b為射頻加熱后，明顯地，在射頻加熱后的b圖上出現微米級別的氣泡，說明薄荷醇發生了 RSV過程。
[0047]實施例3體外、活體超聲成像
體外超聲成像:兩只2ml裝的一次性滴管分別Iml抽取濃度為10mg/ml實施例1中制得的射頻診療劑(PLGA-LM)分散液以及濃度為11.77mg/ml對比例I制得的不擔載薄荷醇的PLGA分散液，將該滴管置于大的水槽中，射頻針直接置于水槽中進行加熱，在加熱前、后分別進行B基波模式下的超聲造影，獲取圖像。超聲探頭距離一地性滴管距離為2.8cm，機械指數0.6 ；
活體成像:皮下接種有Hela宮頸癌的雌性裸鼠3只，分別向hela腫瘤中注射0.3mlPBS、對比例I制得的PLGA(11.7mg/ml)以及實施例1制得的PLGA-LM(1mg/ml)，隨后腫瘤處穿入射頻針，在射頻輻照開始前超聲造影，在輻照20s后再進行超聲造影，造影模式為B基波模式，機械指數分比為0.6，射頻輻照的功率為1W。
[0048]圖7是實施例3中體外超聲成像實驗的B基波模式下的獲取的超聲圖片，從圖可以看到實施例1中合成的PLGA — LM在射頻加熱后圖像襯度和對應的灰度增加值明顯比對比例I中PLGA的大很多，表明發生了射頻響應超聲造影成像。
[0049]對比例3
參照實施例3中體外超聲的實驗流程，進行不同濃度的PLGA-LM超聲成像實驗。將實施例I制得的PLGA-LM射頻診療劑分別配置成0、2、4、6、8、I Omg/ml (&1?a 6)的濃度，每個濃度的PLGA-LM溶液Iml分別置于2ml的一次性滴管中，將滴管置于大的水槽中，射頻針直接置于水槽中進行加熱，然后依次進行B基波模式下的超聲造影成像，機械指數都為0.6。
[0050]圖8是對比例3中不同濃度的從實施例1中合成的PLGA-LM膠囊在經過射頻作用后用作造影劑并在B基波模式下獲取的超聲圖像，圖中隨著濃度的增加，圖像程度相應增加。
[0051]對比例4
參照實施例3實驗流程，在對比造影諧波模式下進行活體超聲成像。活體成像:皮下接種有Hela宮頸癌的雌性裸鼠3只，分別向hela腫瘤中注射0.3ml PBS、PLGA (I 1.7mg/ml)以及PLGA-LM(10mg/ml)，隨后腫瘤處穿入射頻針，在射頻輻照開始前超聲造影，在輻照20s后在進行超聲造影，造影模式為對比造影諧波模式，機械指數分比為0.17，射頻輻照的功率為IW0
[0052]圖9是實施例3和對比例4活體腫瘤超聲成像實驗中在B基波模式下和對比造影諧波模式下的獲取的超聲圖片，從圖可以看到實施例1中合成的PLGA—LM在射頻加熱后圖像襯度和對應的灰度增加值明顯比對比例I中PLGA的大很多，表明發生了射頻響應超聲造影成像。
[0053]實施例4離體、活體射頻消融增效
離體豬肝射頻消融:脫氣離體豬肝切成小塊狀(2CmX2CmX2Cm)，向其中分別注射0.3ml PBS、對比例I中制得的PLGA(1L 7mg/ml)以及實施例1中制得的PLGA-LM(10mg/ml)分散液，然后將射頻針插入到注射的位置后進行射頻消融(1W-20S)，之后解剖切片，截取橫截面積最大的一面量取長(L)、寬(W)，后根據公式LX W2/6計算消融體積；
活體腫瘤實驗:皮下接種有Hela宮頸癌的雌性裸鼠，向hela腫瘤中分別注射0.3mlPBS、對比例I中制得的PLGA(11.7mg/ml)以及實施例1中制得的PLGA-LM(10mg/ml)分散液，隨后腫瘤處穿入射頻針，進行射頻輻照，功率為1W，輻照時間20s。之后，解剖腫瘤并切片，截取橫截面積最大的一面量取長(L)、寬(W)，后根據公式LX W2/6計算消融體積。每個樣品重復三次，取平均值。
[0054]圖10是實施例4中離體豬肝在注射實施例1中合成的PLGA-LM和對比例I合成的PLGA，并經射頻原位消融后得到的消融區域橫截面(a)數碼照片以及計算的消融體積(b)，圖中PLGA-LM獲得消融體積最大。圖11是實施例4中活體Hela腫瘤在注射實施例1中合成的PLGA-LM和對比例I合成的PLGA，并經射頻原位消融后得到的消融區域橫截面(a)數碼照片以及計算的消融體積(b)，圖中PLGA-LM獲得消融體積最大，說明實施例1中合成的射頻診療劑射頻作用時發生持續地三相轉變產生，進而產生持續地瞬態空化效應顯著增強射頻消融。
【主權項】
1.一種射頻診療劑，其特征在于，包括:固態薄荷醇內核、包裹所述內核的聚乳酸-羥基乙酸共聚物外殼、以及在所述外殼表面修飾的聚乙烯醇。2.根據權利要求1所述的射頻診療劑，其特征在于，所述射頻診療劑表面呈電中性，所述射頻診療劑的顆粒尺寸在100 nm?2 μ m范圍之間。3.根據權利要求1或2所述的射頻診療劑，其特征在于，在所述射頻診療劑中，內核的質量分數在O?20%之間可調。4.根據權利要求1至3中任一項所述的射頻診療劑，其特征在于，所述固態薄荷醇為左旋薄荷醇、右旋薄荷醇、和/或消旋薄荷醇，優選為左旋薄荷醇。5.根據權利要求1至4中任一項所述的射頻診療劑，其特征在于，所述聚乳酸-羥基乙酸共聚物中乳酸單體與羥基乙酸單體的摩爾比為(I?3):1，所述聚乳酸-羥基乙酸共聚物的端鏈含有官能團，所述官能團為羥基、氨基、巰基、羧基、和酰胺基中的至少一種。6.根據權利要求1至5中任一項所述的射頻診療劑，其特征在于，所述射頻診療劑中還包括焚光分子和/或抗癌藥物，所述焚光分子和/或抗癌藥物的質量分數在O?9%之間。7.根據權利要求1至6中任一項所述的射頻診療劑，其特征在于，所述射頻診療劑表面還修飾有含功能基團的聚乙二醇、磷脂分子、和靶向配體中的至少一種。8.—種權利要求1至7中任一項所述的射頻診療劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: A)將聚乳酸-羥基乙酸共聚物、固態薄荷醇充分溶解至易揮發性溶劑中形成混合液； B)將所得的混合液加入到聚乙烯醇溶液中，超聲、磁力攪拌預乳化得到預乳化液； C)將所得的預乳化液進行均質處理后去除所述易揮發性溶劑。9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于， 步驟A)中，所述易揮發性溶劑是氯仿和/或二氯甲烷，在所述混合液中，聚乳酸-羥基乙酸共聚物的濃度為0.005?0.lg/mL ; 步驟B)中，聚乙烯醇溶液的質量分數為1.5 wt%?5 wt%,醇解度為87?98%摩爾分數，所述混合液與所述聚乙烯醇溶液的體積比為1: (I?20)，超聲時間為10?30分鐘，磁力攪拌的速度為800?1500轉/分鐘，時間為5?20分鐘； 步驟C)中，均質處理的均質速度為10000?30000轉/分鐘，時間為2?10分鐘。10.根據權利要求8或9所述的制備方法，其特征在于，步驟A)中，所述混合液中還加入焚光分子和/或抗癌藥物。
【專利摘要】本發明涉及一種新型射頻診療劑及其制備方法，該射頻診療劑包括：固態薄荷醇內核、包裹所述內核的聚乳酸–羥基乙酸共聚物外殼、以及在所述外殼表面修飾的聚乙烯醇。本發明選擇生物相容性好的有機PLGA聚合物為材料，同時裝載固態天然薄荷醇，該固態薄荷醇是由FDA批準的可用于臨床的具有三相轉變特性的物質，可以吸收射頻能量，由固態變為液態，繼而持續地揮發成氣態，形成薄荷醇氣泡，該氣泡可以增強超聲線性和非線性響應，同時該氣泡發生空化效應，伴隨的高熱、微射流、沖擊波等物理作用可以殺死腫瘤細胞。
【IPC分類】A61K49/22, A61P35/00, A61K47/34, A61K47/32, A61K41/00, A61K47/10
【公開號】CN105169420
【申請號】
【發明人】張坤, 徐輝雄, 賀亞萍
【申請人】上海市第十人民醫院
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年9月2日