東方瓜馥木提取物及其制備方法與應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及植物化學應用領域，具體涉及一種東方瓜馥木提取物及其制備方法與 應用。
【背景技術】
[0002] 類風濕性關節炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一種以關節滑膜炎為特征的慢性 全身性自身免疫性疾病，以慢性、對稱性、多關節滑膜炎和關節外病變為主要臨床表現。其 病理改變隨著滑膜炎的進程，滑膜細胞異常增殖形成滑膜血管翳，其內部有大量的新生血 管增生及各種炎性細胞浸潤，侵蝕軟骨與骨導致關節破壞。RA患者滑液中滑膜細胞明顯增 多，其中含有大量成纖維樣滑膜細胞，滑膜細胞的增殖與其凋亡減少有關。增殖的滑膜細胞 周圍還有大量炎性細胞浸潤，不僅可導致基質降解，還可產生大量炎癥因子如IL-I、TNF_a 等，從而導致滑膜炎癥和軟骨及骨的破壞。因此，利用藥物是否抑制滑膜細胞的增殖探討藥 物的抗類風濕性關節炎的作用。
[0003] 東方瓜馥木(拉丁名:Fissistigma tungfangense Tsiang et P.T.L)為番蒸枝科 瓜馥木屬物種，為中國的特有植物。目前東方瓜馥木在治療類風濕關節炎藥物中的應用尚 無報道。
【發明內容】
[0004] 本發明所要解決的技術問題是提供一種東方瓜馥木提取物，該提取物可以用于抗 類風濕關節炎。
[0005] 本發明還要解決的技術問題是提供上述東方瓜馥木提取物的制備方法。
[0006] 本發明最后要解決的技術問題是提供上述東方瓜馥木提取物的應用。
[0007] 為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：
[0008] -種東方瓜馥木提取物的制備方法，將東方瓜馥木原料烘干并粉碎，然后用醇加 熱回流提取，過濾得到提取液，減壓濃縮至浸膏狀得到醇粗提物，醇粗提物加水稀釋后用有 機溶劑萃取，將萃取液或萃取后剩余的水溶液分別濃縮至浸膏狀，真空干燥得到的粉末即 為東方瓜馥木的有機溶劑提取物或東方瓜馥木的水提物;其中，所述的有機溶劑為石油醚、 氯仿和乙酸乙酯中的任意一種或幾種的組合。
[0009] 其中，醇粗提物加水稀釋后用有機溶劑萃取，將萃取液或萃取后剩余的水溶液分 別濃縮至浸膏狀，真空干燥得到的粉末，優選如下方式之一：
[0010] 1、醇粗提物加水稀釋后用石油醚萃取，將萃取液濃縮至浸膏狀，真空干燥得到的 粉末即為石油醚萃取部位；
[0011] 2、醇粗提物加水稀釋后用石油醚萃取，萃取后剩余的水溶液濃縮至浸膏狀，真空 干燥得到的粉末即為水相萃取部位；
[0012] 3、醇粗提物加水稀釋后依次順序用石油醚和乙酸乙酯萃取，將乙酸乙酯萃取液濃 縮至浸膏狀，真空干燥得到的粉末即為乙酸乙酯萃取部位；
[0013] 4、醇粗提物加水稀釋后依次順序用石油醚、乙酸乙酯和氯仿萃取，將氯仿萃取液 濃縮至浸膏狀，真空干燥得到的粉末即為氯仿萃取部位。
[0014] 上述方式中，最優選方式1、方式2和方式4。
[0015] 其中，所述的東方瓜馥木原料為東方瓜馥木的根、莖或葉。
[0016] 其中，所述的用醇加熱回流提取中，所述的醇為60%~100 % v/v的甲醇水溶液或 60 %~100 % v/v的乙醇水溶液。
[0017]其中，所述的用醇加熱回流提取中，回流提取溫度為25~80°C，回流提取1~3次， 每次回流提取，每次提取中甲醇水溶液或乙醇水溶液與東方瓜馥木的質量比為1:1~3,每 次回流提取時間為5~24h。
[0018] 其中，所述的過濾，其方式為紗布過濾，優選三層紗布過濾。
[0019] 其中，所述的減壓濃縮，溫度為30~70°C，壓力為-0.06~-0.15MPa。
[0020] 其中，醇粗提物加水稀釋成懸浮液，一般按照粗提物與水質量比為2:3進行稀釋。 [0021 ]其中，有機溶劑萃取時，以有機溶劑的量和懸浮液的體積比為3: 2進行萃取，萃取1 ~3次。
[0022] 其中，所述的真空干燥條件為30~90°C，_0.09~-O.IMPa，干燥5~24h。
[0023] 上述東方瓜馥木提取物的制備方法制備得到的東方瓜馥木提取物也在本發明的 保護范圍之內。
[0024] 發明人在抗類風濕關節炎篩選實驗中發現東方瓜馥木提取物在抗類風濕關節炎 中具有良好的藥效，可以用來制備抗類風濕關節炎的藥物。因此上述東方瓜馥木提取物在 制備抗類風濕關節炎藥物中的應用也在本發明的保護范圍之內。
[0025] 有益效果:本發明首次發現東方瓜馥木醇提物的石油醚萃取部位、氯仿萃取部位 以及水相部位對滑膜細胞具有較好的抑制效果，表明東方瓜馥木醇提物的石油醚萃取部 位、氯仿萃取部位以及水相部位具有良好的體外抗類風濕關節炎藥效，可以用于抗類風濕 關節炎藥物的研發。
【具體實施方式】
[0026]根據下述實施例，可以更好地理解本發明。然而，本領域的技術人員容易理解，實 施例所描述的內容僅用于說明本發明，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本 發明。
[0027] 實施例1
[0028] 東方瓜馥木5Kg干燥的莖粉碎成粉末，粉末用15L 75%v/v的乙醇水溶液，在45°C 條件下熱回流提取3次，每次10h，3層紗布過濾合并得到提取液，將提取液在45°C，壓力為-0.1 MPa條件下減壓濃縮成膏狀(約520g)。將提取物按照與水質量比為2:3稀釋成懸浮液，依 次用石油醚、乙酸乙酯以及氯仿萃取，以有機溶劑的量和懸浮液的體積比為3:2進行萃取， 萃取3次，分別合并石油醚，乙酸乙酯以及氯仿萃取液，石油醚萃取液，乙酸乙酯萃取液，氯 仿萃取液以及萃取過后的水相分別在溫度為45°C，壓力為_0.09MPa條件下進行減壓濃縮得 到石油醚浸膏（IOlg)，乙酸乙酯浸膏（IlOg)，氯仿浸膏（80g)以及水相浸膏（208)。將4個部 位的浸膏以及第一步得到的留下的醇提物（20g)在50°C，-0.1 MPa條件下進行真空干燥，干 燥24h，得到5個部位用于體外抗類風濕關節炎的實驗。
[0029] 實施例2:東方瓜馥木醇提物和醇提物的各極性萃取部位體外抗類風濕關節炎的 實驗。
[0030] 1、實驗材料
[0031] 細胞:滑膜細胞(原代大鼠滑膜細胞）。
[0032] 細胞培養液:原代大鼠滑膜細胞培養基。
[0033] 試劑：噻挫藍（3_(4，5-dimethyIthiazol-2-yl )_2，5_diphenyl tetrazol ium bromide，MTT，Sigma生產）。乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH)試劑盒(購自碧云天 公司）。甲氨蝶呤(methot rexate，MTX，上海信宜藥廠有限公司，批號20140307)。
[0034] 2、儀器:96孔細胞培養板;infinite 200Pro多功能酶標儀。
[0035] 3、實驗方法
[0036] MTT法、LDH活性測定藥物對滑膜細胞的抑制作用
[0037] 取對數期的滑膜細胞接種至96孔培養板（I X IO4個細胞/孔），設置為空白組(不給 予藥物）、甲氨蝶呤組(給予lyg/mL的甲氨蝶呤）、給藥組(給予100、200、400、600、800、1000μ g/mL濃度的藥物），培養孵育過夜后用于實驗。細胞給予不同濃度的藥物培養48h后，每孔加 入IOyL濃度為5mg/mL MTT，繼續培養4h后，小心吸棄培養上清液，每孔加入IOOyL的DMSO溶 解甲瓚結晶，室溫震搖5min，完全溶解后，用酶標儀在570nm處檢測光密度(0D值）。根據OD值 計算細胞存活率。
[0038]
[0039] 4、統計方法
[0040]采用SPSS 22.0統計軟件分析實驗數據。結果用均數土標準差( ?±>? )表示，用單因 素方差(one-way AN0VA)分析組間差異。以Ρ〈0.05認為具有統計學差異。
[0041 ]實驗結果
[0042] 使用不同濃度藥物培養48h后，MTT檢測細胞活力結果見下表。
[0043]表1各藥物對滑膜細胞的抑制作用
[0046] 注:與空白組比較，*P<0.05。
[0047] 實驗結果表明石油醚萃取部位、氯仿萃取部位以及水相部位具有較好的藥效，可 以用于制藥。
【主權項】
1. 一種東方瓜馥木提取物的制備方法，其特征在于，將東方瓜馥木原料烘干并粉碎，然 后用醇加熱回流提取，過濾得到提取液，減壓濃縮得到醇粗提物，醇粗提物加水稀釋后用有 機溶劑萃取，將萃取液或萃取后剩余的水溶液分別減壓濃縮至浸膏狀，真空干燥得到的粉 末即為東方瓜馥木的有機溶劑提取物或東方瓜馥木的水提物； 其中，所述的有機溶劑為石油醚、氯仿和乙酸乙酯中的任意一種或者幾種的組合。2. 根據權利要求1所述的東方瓜馥木提取物的制備方法，其特征在于，所述的東方瓜馥 木原料為東方瓜馥木的根、莖或葉。3. 根據權利要求1所述的東方瓜馥木提取物的制備方法，其特征在于，所述的用醇加熱 回流提取中，所述的醇為60 %~100 % v/v的甲醇水溶液或60 %~100 % v/v的乙醇水溶液。4. 根據權利要求1所述的東方瓜馥木提取物的制備方法，其特征在于，所述的用醇加熱 回流提取中，回流提取溫度為25~80°C，回流提取時間為5~24h。5. 根據權利要求1所述的東方瓜馥木提取物的制備方法，其特征在于，所述的過濾，其 方式為紗布過濾。6. 根據權利要求1所述的東方瓜馥木提取物的制備方法，其特征在于，所述的減壓濃 縮，溫度為30~70°C，壓力為-0 · 06~-0 · 15MPa。7. 根據權利要求1所述的東方瓜馥木提取物的制備方法，其特征在于，所述的有機溶劑 為石油醚或氯仿。8. 根據權利要求1所述的東方瓜馥木提取物的制備方法，其特征在于，所述的真空干燥 條件為30~90°C，-0 · 09~-0 · IMPa，干燥5~24h。9. 權利要求1~8中任意一項所述的東方瓜馥木提取物的制備方法制備得到的東方瓜 寵木提取物。10. 權利要求9所述的東方瓜馥木提取物在制備抗類風濕關節炎藥物中的應用。
【專利摘要】本發明公開了一種東方瓜馥木提取物的制備方法，將東方瓜馥木原料烘干并粉碎，然后用醇加熱回流提取，過濾得到提取液，減壓濃縮得到醇粗提物，醇粗提物加水稀釋后用有機溶劑萃取，將萃取液或萃取后剩余的水溶液分別濃縮至浸膏狀，真空干燥得到的粉末即為東方瓜馥木的有機溶劑提取物或東方瓜馥木的水提物；其中，所述的有機溶劑為石油醚、氯仿、正丁醇或乙酸乙酯。本發明在抗類風濕性關節炎篩選實驗中，發現東方瓜馥木提取物及提取物的各極性部位具有良好的抗類風濕關節炎效果，可以用來制備治療類風濕關節炎的藥物。
【IPC分類】A61P29/00, A61P19/02, A61K36/185
【公開號】CN105641005
【申請號】
【發明人】陳光英, 周學明, 韓長日, 宋小平, 徐偉, 孫麗麗
【申請人】海南師范大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2015年11月11日