楊梅果肉提取物在制備α-葡萄糖苷酶抑制劑的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于功能食品或醫藥領域，涉及一種楊梅果肉提取物制備α-葡萄糖苷酶抑 制劑的應用。
【背景技術】
[0002] 糖尿病是一種人體血液中胰島素含量絕對或相對不足，從而出現血糖高于正常 值、糖尿的現象，并引發脂肪和蛋白質等一系列代謝紊亂的疾病。通過抑制體內一些促進碳 水化合物消化的酶如α-葡萄糖苷酶的活性來降低餐后血糖是一種有效的治療方法。
[0003] 飲食中的碳水化合物在α-葡萄糖苷酶的作用下釋放葡萄糖，小腸吸收葡萄糖進入 血液，這是餐后血糖升高的主要原因。α-葡萄糖苷酶抑制劑一方面可以通過可逆地占據α-葡萄糖苷酶與糖的絡合位點抑制α-葡萄糖苷酶的活性，延遲碳水化合物的吸收，另一反面 可以使碳水化合物、脂肪、蛋白質進入富含胰高血糖素樣肽1的回腸末端，刺激其分泌的增 加，促進胰島素的釋放，降低餐后血糖。與其他口服降糖藥及胰島素治療相比，α-葡萄糖苷 酶抑制劑類藥物最顯著的特征是能有效阻止糖尿病患者的餐后血糖升高，使患者血糖平穩 且緩慢地維持在一定水平，但脂肪和蛋白質的吸收不受其影響，因此不會造成營養物質的 吸收障礙。
[0004] 目前，阿卡波糖和伏格列波糖是臨床上常用的α-葡萄糖苷酶抑制劑，然而，長期服 用這些藥物后會產生一些毒副作用，例如腸胃氣脹、腹痛、腹瀉等。因此，開發天然高效、毒 副作用小的α-葡萄糖苷酶抑制劑尤為重要。
[0005] 研究表明，楊梅果實提取物可有效預防和控制糖尿病，但是還沒有相關文獻報道 其提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種楊梅果肉提取物在制備α-葡萄糖苷酶抑制劑中的應用。 本發明所述的楊梅果肉提取物由甲醇提取濃縮，經固相萃取柱富集、洗脫后得到。經初步活 性篩選試驗證明：不同品種的楊梅果肉提取物都表現出α-葡萄糖苷酶抑制活性。該提取物 經固相萃取柱富集后的不同洗脫組分抑制α-葡萄糖苷酶的活性顯著提高，且50%洗脫組分 的活性遠高于陽性對照阿卡波糖。所述α-葡萄糖苷酶抑制劑的應用是指可在制備功能食品 或保健藥品中應用，所述的α-葡萄糖苷酶抑制劑由楊梅果肉提取物與一種或多種食品或保 健藥品可接受的輔助劑制成。
[0007] 本發明所述的楊梅果肉提取物通過以下方法制備獲得： a、楊梅果實采收后，將果核丟棄，果肉部分液氮充分凍干，在冷凍干燥儀中-80 °C下干 燥72h至恒重，用磨樣機打磨成粉末狀。
[0008] b、用濃度為80 %的甲醇溶液浸泡2h后，超聲提取30min，料液比為Ig: 20mL，使用高 速離心機l〇〇〇〇r/min條件下離心5min，取上清液。超聲提取重復2次，合并上清液，上清液在 旋轉蒸發儀上37°C蒸干濃縮后溶于一定量的水中。
[0009] c、濃縮液過預處理好的C18 Sep-Paki)固相萃取柱，用濃度為10 %的甲醇溶液洗脫 后再用濃度為50%的甲醇溶液洗脫，將10%和50%甲醇洗脫后的流出液分別收集后濃縮干 燥即可得到不同的洗脫組分，即10 %洗脫組分和50 %洗脫組分。
[0010]所述材料為楊梅的不同品種，即'荸薺'、'東魁'、'木葉'、'水晶'、'烏紫'、'小葉細 蒂'和'早大梅'。
[0011] 所述楊梅果肉提取物為過固相萃取柱后的洗脫組分，即10%洗脫組分或50%洗脫 組分，或二種組分混合。
[0012] 本發明公開了楊梅果肉提取物抑制α-葡萄糖苷酶的應用。楊梅果肉提取物由甲醇 提取濃縮，經固相萃取柱萃取分離后得到。經初步的活性篩選試驗證明：不同品種楊梅果肉 粗提物均表現出α-葡萄糖苷酶抑制活性。該粗提物經固相萃取柱富集后不同的洗脫組分抑 制α-葡萄糖苷酶的活性顯著提高，尤其50%洗脫組分活性遠高于陽性對照阿卡波糖。本發 明對于楊梅資源的合理利用，以及提高楊梅產品附加值具有重大意義。
【附圖說明】
[0013] 圖1為楊梅品種'荸養'果肉不同提取物與陽性對照阿卡波糖的α-葡萄糖苷酶抑制 活性。
[0014] 圖2為楊梅品種'東魁'果肉不同提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
[0015] 圖3為楊梅品種'木葉'果肉不同提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
[0016] 圖4為楊梅品種'水晶'果肉不同提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
[0017] 圖5為楊梅品種'烏紫'果肉不同提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
[0018] 圖6為楊梅品種'小葉細蒂'果肉不同提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
[0019] 圖7為楊梅品種'早大梅'果肉不同提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合附圖和通過實施例對本發明進行具體的描述，有必要在此指出的是本實 施例只用于對本發明進行進一步說明，不能理解為對本發明保護范圍的限制，該領域的技 術熟練人員可以根據本發明的內容作出一些非本質的改進和調整。
[0021] 實施例一： (1)α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定方法:從SIGMA公司訂購的α-葡萄糖苷酶用磷酸鉀緩 沖液(0.01111〇1/1^!1 = 6.8)配制成0.21]/11^，加入0.2%的834。其中酶活力單位定義為：37 °C，pH為6.8條件下，對硝基苯基-€(-0-吡喃葡萄糖苷(？即6)在酶的作用下1分鐘釋放1以111 〇1 葡萄糖，規定為一個酶活力單位(U)。
[0022] 測定時，在96孔酶標板中將112yL 0. lmol/L的磷酸鉀液和20yLa-葡萄糖苷酶混合 均勻，然后加入8yL抑制劑，37°C恒溫靜置15min，加入20yL PNPG(2.5mmo 1/L)，37°C恒溫靜 置15min，加入80yL Na2C03(2.5mmol/L)，用酶標儀測定405nm的吸光值(樣品組，A1),不加 a-葡萄糖苷酶的作為空白對照(樣品空白，A2)，不加樣品的為對照(酶活組，A3)，不加樣品和a-葡萄糖苷酶的為背景對照(酶活空白，A 4)。阿卡波糖作為陽性對照。計算公式如下： 酶活抑制率（％ ) = [ 1-(Αι-Α2)/(Α3-Α4) ] X 100。
[0023] (2)新鮮的楊梅果實采收后，將果核丟棄，果肉部分液氮充分凍干，在冷凍干燥儀 中-80°C下干燥72h至恒重，用磨樣機打磨成粉末狀。稱量'荸薺'果肉10g，加入含有0.5%甲 酸的80%甲醇溶液200mL，料液比為Ig: 20mL，浸泡2h后，超聲提取30min，使用高速離心機 10000r/min條件下離心5min，合并上清液，重復2次，37°C旋轉濃縮至只剩水相，定容到75mL 水中即為粗提液，粗提液過ClSScp-PakK固相萃取柱，每個小柱用20mL的水洗去糖，然后用 水-甲醇梯度洗脫，濃度為10%和50%，收集流出液，濃縮干燥后得到10%洗脫組分89.2mg， 50%洗脫組分60.2mg，將10%、50%洗脫組分和粗提液分別配制一系列梯度后進行α-葡萄 糖苷酶抑制活性試驗分析。結果表明，'荸薺'果肉粗提液表現出α-葡萄糖苷酶抑制活性，其 IC 5?為2433.4yg/mL(圖1)。該粗提物經固相萃取柱后的不同洗脫組分也具有顯著的α-葡萄 糖苷酶抑制活性，10 %洗脫組分的IC5q為207.2yg/mL，50 %洗脫組分的IC5q為15.41yg/mL， 其50%洗脫組分的活性遠高于陽性對照阿卡波糖（IC 5Q = 383.2yg/mL)(圖1)。
[0024] 實驗結果表明，'荸薺'果肉不同提取物均表現出α-葡萄糖苷酶抑制活性。其中 50%洗脫組分的α-葡萄糖苷酶抑制活性遠高于陽性對照阿卡波糖。
[0025] 實施例二 稱取楊梅品種'東魁'果肉冷凍干燥粉末IOg