市場上廣泛應用，各種提取物的制備是已有的技術，得到的產品只是在物質濃度上有 所差別，其各種產品均可在本發明中實施應用。
[0037] 2)將各菌種發酵液混合后離心，棄上清，菌體沉淀洗滌，離心，滅菌，得菌泥；
[0038] 3)配制干粉保護劑;干粉保護劑的配方組成為:β-環狀糊精10g、乳糖2_5g、海藻糖 0 · 5-2g、酵母膏0 · 5-2g、維生素EO · 05-0 · Ig、蒸餾水IOOmL;
[0039] 4)將干粉保護劑和菌泥混合，進行成膜反應，然后，將混合物預凍，再冷凍干燥，制 成具有包埋層的活性益生菌干粉；
[0040] 上述乳桿菌為保加利亞乳桿菌、德氏乳桿菌乳亞種和嗜酸乳桿菌中的至少兩種等 比例混合菌，優選保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌兩種等比例混合菌。
[0041] ⑵過篩
[0042]將步驟(1)中的益生菌干粉、黃芪提取物粉、枸杞提取物粉分別過80~100目篩。
[0043] (3)配料
[0044]稱量過篩后的原料，按益生菌干粉70%、黃芪提取物粉20%、枸杞提取物粉10%配 料，以上含量均為重量百分比含量。
[0045] (4)混合
[0046] 將配好的益生菌干粉、黃芪提取物粉、枸杞提取物粉于三維混合機中混合至色澤 均勻一致，無色差，即得到具有提高免疫力功能的益生菌組合物。
[0047] 實施例2
[0048] 具體步驟同實施例1，不同之處在于：步驟(3)中配料:稱量過篩后的原料，按益生 菌干粉60%，黃芪提取物粉30%，枸杞提取物粉10%配料，以上含量均為重量百分比含量。
[0049] 實施例3
[0050] 具體步驟同實施例1，不同之處在于：步驟(3)中配料:稱量過篩后的原料，按益生 菌干粉60%，黃芪提取物粉20%，枸杞提取物粉20%配料，以上含量均為重量百分比含量。 [0051 ] 實施例4
[0052]具體步驟同實施例1，不同之處在于：步驟(3)中配料:稱量過篩后的原料，按益生 菌干粉65%，黃芪提取物粉25%，枸杞提取物粉10%配料，以上含量均為重量百分比含量。 [0053] 實施例5
[0054]具體步驟同實施例1，不同之處在于：步驟(3)中配料:稱量過篩后的原料，按益生 菌干粉65%，黃芪提取物粉20%，枸杞提取物粉15%配料，以上含量均為重量百分比含量。
[0055] 實驗例1具有提高免疫力功能的益生菌組合物對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化 反應的影響
[0056] (D實驗動物
[0057] 選用SPF級昆明種雌性小白鼠48只，6-8周齡(體重18~22g)，在武漢大學生命科學 學院實驗動物中心飼養室飼養。
[0058] (2)劑量與分組
[0059]實驗按人體每日推薦量（以兒童體重30kg計，推薦量為0.05g/kg · BW)的5倍 (0.25g/kg · BW)、10倍(0.5g/kg · BW)和30倍（1.5g/kg · BW)分成對照組和低、中、高劑量組 共四組，每組12只。
[0060] (3)灌喂方法
[00611 實驗時分別稱取樣品0.50、1.00、3. OOg，用純凈水配制成20mL的樣液，分別供低、 中、高三個劑量組動物灌胃使用。動物在實驗室條件下適應三天后，隨機將48只鼠分為四 組，每組12只，每日灌胃給予實施例1組合物，給樣量根據每周體重增減調整，連續灌胃四 周。對照組灌服無菌純凈水。
[0062] (4) ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化試驗(MTT法）
[0063] 淋巴細胞增殖反應：將細胞懸液分兩孔加入24孔培養板中，每孔ImL，一孔75yL (：〇1^液(相當于7.5以8/111〇，另一孔作為對照，置5%0)2,37°(：培養7211。培養結束前4小時，每 孔吸去上清液0.7mL，加入0.7mL無血清RPMI 1640培養液，同時加入MTT(5mg/mL)50yL/孔， 繼續培養4h。培養結束后，每孔加入ImL異丙醇，吹打混勻，使紫色結晶溶解，分加于96孔培 養板中，作3個孔的平行樣，以570nm波長測定光密度值。
[0064] (5)實驗結果
[0065]對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化反應，其高劑量組光密度差值高于對照組，差 異有顯著性意義(見表1)。表明益生菌沖劑的脾淋巴細胞轉化試驗結果為陽性，受試樣品具 有增強細胞免疫功能作用。
[0066]表1實施例1組合物對小鼠脾淋巴細胞轉化反應的影響(X ± s)
[0068]實驗例2具有提高免疫力功能的益生
菌組合物對受試動物NK細胞活性的影響 [0069] (1)實驗動物
[0070] 選用SPF級昆明種雌性小白鼠48只，6-8周齡(體重18~22g)，在武漢大學生命科學 學院實驗動物中心飼養室飼養。
[0071] (2)劑量與分組
[0072]實驗按人體每日推薦量（以兒童體重30kg計，推薦量為0.05g/kg · BW)的5倍 (0.25g/kg · BW)、10倍(0.5g/kg · BW)和30倍（1.5g/kg · BW)分成對照組和低、中、高劑量組 共四組，每組12只。
[0073] (3)灌喂方法
[0074] 實驗時分別稱取樣品0.50、1.00、3.OOg，用純凈水配制成20mL的樣液，分別供低、 中、高三個劑量組動物灌胃使用。動物在實驗室條件下適應三天后，隨機將48只鼠分為四 組，每組12只，每日灌胃給予實施例1組合物，給樣量根據每周體重增減調整，連續灌胃四 周。對照組灌服無菌純凈水。
[0075] (4)NK細胞活性測定(LDHfe)
[0076] NK細胞活性檢測：取濃度為4*105個/mL的YAC-I靶細胞和效應細胞各IOOyL(效靶 比50:1 )，加入U型96孔培養板;靶細胞自然釋放孔加靶細胞和培養液各IOOyL，靶細胞最大 釋放孔加靶細胞和1%ΝΡ4〇各IOOyL;上述各項均設三個復孔，于37°C，5%C0 2培養箱中培養4 小時，然后將96孔培養板以1500rpm離心5分鐘，每孔吸取上清IOOyL置平底96孔培養板中， 同時加入LDH基質液100yL，反應3分鐘，每孔加入I mol/L Hcl30yL，在酶聯儀492nm處測定 光密度值。
[0077] (5)實驗結果
[0078]中、高劑量組的NK細胞活性高于對照組，差異均有顯著性意義（見表2)。表明益生 菌沖劑對受試動物NK細胞活性試驗結果為陽性，受試樣品具有增強NK細胞活性作用。
[0079] 表2實施例1組合物對小鼠NK細胞活性的影響(n = ll，x土s)
NK細胞活性轉換值:* = Sin-1 (P)1/2
[0081]上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式并不受上述實施例的 限制，其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所做的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應為等效的置換方式，都包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1. 一種具有提高免疫力功能的益生菌組合物，其特征在于：它包含如下按質量百分比 計的組分:益生菌干粉60~70%，黃芪提取物粉20~30%，枸杞提取物粉10~20%。2. 根據權利要求1所述的具有提高免疫力功能的益生菌組合物，其特征在于:它包含如 下按質量百分比計的組分:益生菌干粉70%，黃芪提取物粉20%，枸杞提取物粉10%。3. 根據權利要求1或2所述的具有提高免疫力功能的益生菌組合物，其特征在于:所述 益生菌干粉由嬰兒雙歧桿菌、乳桿菌按質量比為1:1的比例組成。4. 一種制備如權利要求1所述的具有提高免疫力功能的益生菌組合物，其特征在于:它 包含如下步驟： (1) 選料:選取含有嬰兒雙歧桿菌、乳桿菌的益生菌干粉，優質黃芪提取物粉，枸杞提取 物粉； (2) 過篩:將選好的益生菌干粉、黃芪提取物粉、枸杞提取物粉分別過80~100目篩； (3) 配料:將過篩后的益生菌干粉、黃芪提取物粉、枸杞提取物粉稱量備用;所述各組分 質量百分比為益生菌干粉60~70%，黃芪提取物粉20~30%，枸杞提取物粉10~20% ; (4) 混合:將配好的原料于三維混合機中混合至色澤均勻一致，無色差，即得到具有提 高免疫力功能的益生菌組合物。5. 根據權利要求4所述具有提高免疫力功能的益生菌組合物的制備方法，其特征在于： 所述益生菌干粉制備方法步驟如下： 1) 分別將嬰兒雙歧桿菌、乳桿菌經培養基活化后，接種于發酵培養基中，振蕩培養，使 菌體濃度達到對數生長期0.5~1.0 X 109cfu/ml; 2) 將步驟1)中各菌種發酵液混合后離心，棄上清，菌體沉淀洗滌，離心，滅菌，得菌泥； 3) 配制干粉保護劑;所述的干粉保護劑的配方組成為:β-環狀糊精10g、乳糖2-5g、海藻 糖0 · 5_2g、酵母膏0 · 5_2g、維生素 E0 · 05-0 · lg、蒸餾水 100mL; 4) 將干粉保護劑和菌泥混合，進行成膜反應，然后，將混合物預凍，再冷凍干燥，制成具 有包埋層的活性益生菌干粉。6. -種如權利要求1或2所述具有提高免疫力功能的益生菌組合物在制備提高免疫力 食品/保健品中的應用。7. 根據權利要求6所述的具有提高免疫力功能的益生菌組合物在制備提高免疫力食 品/保健品中的應用，其特征在于:所述具有提高免疫力功能的益生菌組合物使用在粉劑、 片劑、膠囊劑、顆粒、沖劑、果凍、飲料、乳制品、酸奶或小點心烘烤品中；所述保健品為粉劑、 片劑、膠囊劑、液體劑、懸浮液、乳劑、口服液、果凍或沖劑中任一種。8. -種提尚免疫力食品/保健品，其特征在于:它包含如權利要求1或2所述的具有提尚 免疫力功能的益生菌組合物。
【專利摘要】本發明公開了一種具有提高免疫力功能的益生菌組合物及其制備方法與應用，該益生菌組合物包含如下質量百分比計的組分:益生菌干粉60～70％，黃芪提取物粉20～30％，枸杞提取物粉10～20％。有益菌和中藥是兩類國際公認的益生物質，兩者作用機理一脈相通，在具體使用過程中也能完美互補，共同發揮優勢。本發明將益生菌與中藥完美結合，利用中藥的增菌作用，促進益生菌增殖，調節腸內微生態平衡，從而達到提高免疫力的效果。
【IPC分類】A61P37/04, A61K35/742, A23L33/135, A61K35/747, A61K35/745, A61K36/815
【公開號】CN105641209
【申請號】
【發明人】王業富, 胡詩夢, 董艷山, 向好
【申請人】武漢萬德瑞生物技術有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年2月2日