織病理形態觀察
[0090] 取自各組荷S180小鼠的瘤體及脾臟，用10%甲醛固定，以最大切面取材，常規石蠟 包埋切片，HE染色，普通光學顯微鏡分別觀察以下指標：1、瘤細胞生長情況，分四級，瘤細胞 量少，稀疏為+，瘤細胞成片，較密集為++，瘤細胞成片密集+++，瘤細胞大片密集，壞死少，為 ++++，分別計1~4分;2、瘤組織浸潤程度，分四級，皮下結節，無浸潤為+，侵及脂肪為++，侵 及脂肪、肌肉為+++，侵及脂肪、肌肉、神經，穿入胸腔為++++，分別計1~4分;3、核分裂數，每 張片觀察5個高倍(40X10)視野，記錄核分裂數;4、血管數目，每張片觀察3個中倍(20X10) 視野，記錄瘤實質中血管總數/3; 5、壞死程度，分四級，少量壞死+，小灶狀壞死++，片狀壞死 +++，壞死并出血++++，計1~4分;6、脾臟，每張片計數中倍(20X10)視野脾小體個數及巨核 細胞數。
[0091] 2.1.4數據處理
[0092] 實驗數據以f 士S表示，組間比較采用SPSS軟件進行統計處理。
[0093] 2.2結果
[0094] 2.2.1本發明所述中藥組合物對荷Sl 80小鼠的抑瘤作用
[0095] 第1批和第2批小鼠實驗結果見表1，表中數據表明上述制備的中藥組合物能抑制 小鼠移植性肉瘤S180的生長。與對照組比較，上述制備的中藥組合物中劑量組8g/kg具有十 分顯著的抑瘤作用，其抑瘤率分別為51.95%和41.88% (P〈0.01)，最接近環磷酰胺的抑瘤 效果;低劑量組4g/kg亦有顯著的抑瘤作用，其抑瘤率分別為44.45%和36.31 % (P〈0.01)。
[0096] 表1本發明所述中藥組合物對荷S180小鼠的抑瘤作用（穿出§)
[0099] 與生理鹽水組比較，*P〈0 · 05，林P〈0 · 01;
[0100] 與環磷酰胺組比較，#P〈0 · 05，##P〈0 · 01。
[0101] 2.2.2本發明所述中藥組合物對荷瘤小鼠免疫器官的影響
[0102] 結果見表2,表中可看出本發明所述中藥組合物實驗組小鼠的胸腺、脾指數與生理 鹽水對照組相比較，無顯著性差異(P>〇.05)。環磷酰胺組能顯著降低脾指數和胸腺指數(P〈 0·01)〇
[0103] 表2本發明所述中藥組合物對荷S180小鼠的脾臟、胸腺器官的影響（f 士s )
[0105] 與生理鹽水組比較，*P〈0 · 05，#P〈0 · 01;
[0106] 與環磷酰胺組比較，#P〈0 · 05，##P〈0 · 01。
[0107] 2.2.3瘤組織病理形態觀察鏡檢計分情況
[0108] 其數據結果見表3,從圖1可以看出生理鹽水組瘤細胞生長旺盛、細胞較密集、或呈 大片狀，核分裂數多，浸潤較深，至脂肪、肌層及胸管等處，血管較豐富，壞死范圍較小。低、 中、高劑量組及環磷酰胺組上述各指標程度較輕，而壞死較嚴重，且有大量淋巴細胞、巨噬 細胞浸潤，如圖2、3、4、5,圖2中瘤細胞生長受限，部分瘤細胞體積變小，核固縮，部分核碎 裂、壞死(紅染成片無結構）；圖3中瘤細胞大片壞死，部分細胞退變，粒染色淺，部分細胞胞 漿缺失成為裸核；圖4中瘤細胞生長受抑制，部分大片狀壞死，部分殘留的瘤細胞也有變性； 圖5中瘤細胞部分結構存在，但核內出現明顯空泡，部分瘤細胞核固縮，核深染，胞漿濃縮嗜 伊紅著色，部分細胞已壞死。各給藥組與對照組相比有顯著差異，上述制備的中藥組合物 中、低劑量組對瘤細胞的生長浸潤及血管數目抑制作用更明顯，促進腫瘤細胞的壞死。脾臟 病理變化中，環磷酰胺組脾小體數目少，體積小，因而脾臟指數降低較對照組顯著；上述制 備的中藥組合物各組單位面積內脾小體數目無明顯增多，但脾小體體積增大，淋巴細胞數 多，在某種程度上說明機體的免疫反應較明顯。聯合用藥組腫瘤細胞稀疏，部分核退變，核 膜消失，部分區域大片狀壞死，核崩解、碎裂，細胞結構完全消失，如圖6所示。
[0109] 表3瘤組織病理形態觀察鏡檢積分結果（Γ士s )(第1批n = 10;第2批n = 12)
[0111] 與生理鹽水組比較，*P〈0 · 05，**P〈0 · 01。
[0112] 3、結果分析
[0113] 在抗腫瘤藥物研究方面，動物移植性腫瘤實驗法仍是最通用的方法。易于實行且 現有移植性腫瘤接種成功率達100%，通過對動物一般狀況、體重變化、瘤重及存活時間等 觀察，可以判斷藥物是否有明顯的抑制腫瘤生長的作用，這是任何體外實驗所不能替代的。
[0114] 本實驗階段進行了本發明所述中藥組合物對小鼠肉瘤S180體內抗瘤作用實驗觀 察，兩次實驗結果表明：本發明所述中藥組合物具有抑制動物體內移植性腫瘤生長作用，瘤 周徑減小，重量減輕。高、中及低劑量組的抑瘤率分別可達35.36%、51.95%、44.45%，其中 本發明所述中藥組合物中、低劑量組與生理鹽水組相比有顯著性(P〈〇.01及P〈〇.05)，并且 抑瘤效果與劑量呈正相關趨勢。從瘤組織病理形態觀察看，生理鹽水組瘤細胞生長旺盛、細 胞較密集、或呈大片狀，核分裂數多，浸潤較深，至脂肪、肌層及胸管等處，血管較豐富，壞死 范圍較小。高、中、低劑量組及環磷酰胺組上述各指標程度較輕，而壞死較嚴重，且有大量淋 巴細胞、巨噬細胞浸潤。其作用機制可能為直接殺傷瘤細胞，或影響腫瘤的血管生成，使其 供血減少而導致瘤細胞壞死。
[0115] 但高劑量組的抑瘤率并不理想，提示小鼠灌胃本發明所述中藥組合物的最適劑量 為8g/kg。環磷酰胺組抗腫瘤作用雖好，但小鼠普遍消瘦，體質惡化，給藥結束時平均體重僅 為26.47g，本發明所述中藥組合物中、低濃度組小鼠的一般生長情況如進食量、毛發光澤 度、動物的行為狀態等普遍好于生理鹽水組。表明本發明所述中藥組合物較安全，對機體無 明顯的毒副作用。
[0116] 機體免疫機能降低有利于腫瘤的形成和發展，癌癥患者常伴有免疫功能的低下及 免疫器官的萎縮，因此，抗腫瘤藥物可通過增強機體的免疫機能來防治腫瘤。本實驗在對免 疫器官的影響中發現，環磷酰胺組的脾指數、胸腺指數均有明顯下降，本發明所述中藥組合 物各組臟器指數均高于對照組，聯合用藥組亦有脾臟指數降低現象。中、低劑量抑瘤作用較 明顯，脾小體數目無增多，但脾小體體積增大，淋巴細胞增多，脾巨核細胞數有所增加，說明 本發明所述中藥組合物在一定劑量內有良好的抑瘤作用，而增加巨核細胞數目，一定程度 上反映小鼠髓外造血作用，表明該藥不同程度提高機體免疫功能，有進一步研究的價值。
[0117]最后所應當說明的是，以上實施例僅用以說明本發明的技術方案而非對本發明保 護范圍的限制，盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當 理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質 和范圍。
【主權項】
1. 一種野芋提取物，其特征在于，所述野芋提取物是由以下方法制備而成： 將野芋用乙醇水溶液提取，得到提取液，去除提取液中的乙醇和水，得到浸膏，即為所 述野芋提取物。2. -種野芋提取物，其特征在于，所述野芋提取物是由以下方法制備而成:將野芋用乙 醇水溶液提取，得到提取液，去除提取液中的乙醇和水，得到浸膏，將所述浸膏用乙酸乙酯 萃取，得到萃取液，去除萃取液中乙酸乙酯后得到所述野芋提取物。3. -種野芋提取物，其特征在于，所述野芋提取物是由以下方法制備而成:將野芋用乙 醇水溶液提取，得到提取液，去除提取液中的乙醇和水，得到浸膏，將所述浸膏用正丁醇萃 取，得到萃取液，去除萃取液中正丁醇后得到所述野芋提取物。4. 一種藥物組合物，其特征在于，所述中藥組合物包括以下原料:野芋、玄參、南沙參和 黨參。5. 根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述野芋、玄參、南沙參和黨參的重 量比為1~10:1~5:1~5:1~5。6. -種如權利要求4或5任一所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，所述方法包 括以下步驟： (1) 稱取野芋、玄參、南沙參和黨參，用乙醇水溶液提取，得到提取液； (2) 去除提取液中的乙醇和水，得到浸膏； (3) 取步驟(2)中獲得的浸膏，用正丁醇萃取，得到正丁醇萃取液，去除正丁醇萃取液中 的正丁醇，得到所述中藥組合物。7. 如權利要求1所述的野芋提取物在制備抗腫瘤的藥物中的用途。8. 如權利要求2所述的野芋提取物在制備抗腫瘤的藥物中的用途。9. 如權利要求3所述的野芋提取物在制備抗腫瘤的藥物中的用途。10. 如權利要求4或5所述的中藥組合物在制備抗腫瘤的藥物中的用途。
【專利摘要】本發明提供了一種野芋提取物，該野芋提取物具有良好的抗腫瘤功能，本發明提供了一種中藥組合物，所述中藥組合物包含野芋提取物，該中藥組合物也具有良好的抑瘤作用，對機體無明顯的毒副作用，并且不同程度提高機體免疫功能。
【IPC分類】A61P35/00, A61K36/888
【公開號】CN105641271
【申請號】
【發明人】殷紅, 王嘉
【申請人】浙江醫學高等專科學校
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年1月26日