混合液在30_35°C下真空旋蒸至無醇味兒，用鹽酸調節上述混 合液的pH至4,過濾后用1/2體積的乙酸乙酯萃取兩次，取酯相在30°C下旋蒸除去乙 酸乙酯；用PH6. 5的水溶液溶解辛弗林粗品，并用氫氧化鈉將其pH調整到6. 5后上 XAD18(〇80X350mm)層析柱，上柱后先用3BV水洗脫除雜，再用10%的乙醇水溶液將辛弗 林洗脫下來，分步收集洗脫液，并通過HPLC檢測，將辛弗林純度大于95%的洗脫液混合， XAD18樹脂柱提取收率為93. 4%，冷凍干燥得白色粉末狀物質即為辛弗林。
[0034] 實施例3
[0035] 取1kg柑橘皮渣，水洗后濾干，用3L 90% (v/v)乙醇在70°C下浸泡提取lh后，過 濾取上清液，重復提取一次，合并兩次上清液，在30-35°C下真空旋蒸至無醇味兒，得到粗提 物濃縮液。
[0036] 用鹽酸調節上述濃縮液的pH至3. 5,過濾后用粗提物濃縮液的1/2體積的乙酸乙 酯萃取兩次，萃取后向乙酸乙酯相中加入pH為3. 5的蒸餾水，振蕩混合后取酯相在30°C下 旋蒸除去乙酸乙酯得辛弗林粗品；再用含10%的乙醇水溶液溶解辛弗林粗品，并用鹽酸將 其pH調整到3. 5。
[0037] 將辛弗林粗品的溶液上大孔吸附樹脂ΗΡ20(Φ80Χ350πιπι)層析柱，上柱后先用 3BV含15%的乙醇水溶液洗脫除雜，再用3BV 50%的乙醇水溶液將辛弗林集中洗下，分步 收集洗脫液，并通過HPLC檢測，將辛弗林純度大于70%的洗脫液混合，ΗΡ20樹脂柱提取收 率為76. 8%。
[0038] 將上述辛弗林混合液在30_35°C下真空旋蒸至無醇味兒，用鹽酸調節上述混 合液的pH至3. 5,過濾后用1/2體積的乙酸乙酯萃取兩次，取酯相在30°C下旋蒸除去 乙酸乙酯；用PH7.0的水溶液溶解辛弗林粗品，并用氫氧化鈉將其pH調整到7.0后上 XAD18(〇80X350mm)層析柱，上柱后先用3BV水洗脫除雜，再用10%的乙醇水溶液將辛弗 林洗脫下來，分步收集洗脫液，并通過HPLC檢測，將辛弗林純度大于95%的洗脫液混合， XAD18樹脂柱提取收率為90. 8%，冷凍干燥得白色粉末狀物質即為辛弗林。
[0039] 實施例4
[0040] 取lkg柑橘皮漁，水洗后濾干，用2L 95% (v/v)乙醇在65°C下浸泡提取lh后，過 濾取上清液，重復提取一次，合并兩次上清液，在30_35°C下真空旋蒸至無醇味兒，得到粗提 物濃縮液。
[0041] 用鹽酸調節上述濃縮液的pH至3. 0,過濾后用粗提物濃縮液的1/2體積的乙酸乙 酯萃取兩次，萃取后向乙酸乙酯相中加入pH為3. 0的蒸餾水，振蕩混合后取酯相在30°C下 旋蒸除去乙酸乙酯得辛弗林粗品；再用含10%的乙醇水溶液溶解辛弗林粗品，并用鹽酸將 其pH調整到3.0。
[0042] 將辛弗林粗品的溶液上大孔吸附樹脂ΗΡ20(Φ80Χ350πιπι)層析柱，上柱后先用 3BV含20%的乙醇水溶液洗脫除雜，再用3BV 60%的乙醇水溶液將辛弗林集中洗下，分步 收集洗脫液，并通過HPLC檢測，將辛弗林純度大于70 %的洗脫液混合，ΗΡ20樹脂柱提取收 率為84. 2%。
[0043] 將上述辛弗林混合液在30_35°C下真空旋蒸至無醇味兒，用鹽酸調節上述混 合液的pH至3. 0,過濾后用1/2體積的乙酸乙酯萃取兩次，取酯相在30°C下旋蒸除去 乙酸乙酯；用PH8. 5的水溶液溶解辛弗林粗品，并用氫氧化鈉將其pH調整到8. 5后上 XAD18(〇80X350mm)層析柱，上柱后先用3BV水洗脫除雜，再用10%的乙醇水溶液將辛弗 林洗脫下來，分步收集洗脫液，并通過HPLC檢測，將辛弗林純度大于95%的洗脫液混合， XAD18樹脂柱提取收率為62. 4%，冷凍干燥得白色粉末狀物質即為辛弗林。
[0044] 以上詳細描述了本發明的較佳具體實施例。應當理解，本領域的普通技術人員無 需創造性勞動就可以根據本發明的構思作出諸多修改和變化。因此，凡本技術領域中技術 人員依本發明的構思在現有技術的基礎上通過邏輯分析、推理或者有限的實驗可以得到的 技術方案，皆應在由權利要求書所確定的保護范圍內。
【主權項】
1. 一種從柑橘皮中提取辛弗林的方法，其特征在于，所述方法包括步驟： (1) 制備辛弗林粗提物 取柑橘皮渣，用乙醇水溶液提取得到辛弗林粗提物； (2) 初步純化 將辛弗林粗提物用乙酸乙酯萃取后，使用HP20樹脂進行柱層析； (3) 精制 將步驟（2)得到的初步純化的辛弗林用XAD18樹脂進行柱層析，并通過HPLC檢測，將 辛弗林純度大于95%的洗脫液混合，冷凍干燥得白色粉末狀物質即為辛弗林。2. 如權利要求1所述的方法，其中，步驟（2)中使用HP20樹脂進行柱層析過程中，上柱 液 pH 為 2. 5-4. 5。3. 如權利要求1所述的方法，其中，步驟（3)中使用XAD18樹脂進行柱層析過程中，上 柱液 pH 為 6. 0-8. 0。4. 如權利要求1所述的方法，其中，步驟（2)中調節辛弗林粗提物pH2. 5-4. 5后再用乙 酸乙酯萃取。5. 如權利要求1所述的方法，其中，所述步驟（1)中，取柑橘皮渣，用60-95% (v/v)的 乙醇水溶液在50°C _70°C下浸泡提取l_2h后，過濾取上清液，真空旋蒸去除乙醇，得到辛弗 林粗提物。6. 如權利要求1所述的方法，其中，所述步驟（2)中，調節辛弗林粗提物的pH至 2. 5-4. 5,乙酸乙酯萃取后蒸干除去乙酸乙酯，再用含10%的乙醇水溶液溶解，并用鹽酸將 其pH調整到2. 5-4. 5,上大孔吸附樹脂HP20層析柱，上柱后先用10% -20%的乙醇水溶液 洗脫除雜，再用50-70%的乙醇水溶液將辛弗林集中洗下。7. 如權利要求1所述的方法，其中，所述步驟（3)中，將步驟（2)所得辛弗林洗脫液旋 蒸去除乙醇，用鹽酸調節pH至2. 5-4. 5,乙酸乙酯萃取后旋蒸除去乙酸乙酯；用pH6-8的水 溶解，并用氫氧化鈉調節pH至6-8后上XAD18層析柱，上柱后先用水洗脫除雜，再用5-20% 的乙醇水溶液將辛弗林洗脫下來，分步收集洗脫液,并通過HPLC檢測，將辛弗林純度大于 95%的洗脫液混合，冷凍干燥得白色粉末狀物質即為辛弗林。
【專利摘要】本發明公開了一種從柑橘皮中提取辛弗林的方法，該方法包括步驟，取柑橘皮渣，用乙醇水溶液提取得到辛弗林粗提物；將辛弗林粗提物用乙酸乙酯萃取后，使用HP20樹脂進行柱層析；將初步純化的辛弗林用XAD18樹脂進行柱層析，并通過HPLC檢測，將辛弗林純度大于95％的洗脫液混合，冷凍干燥得白色粉末狀物質即為辛弗林。本發明的方法，合理充分地利用了柑橘加工產業的廢棄物，并且能夠獲得HPLC純度大于95％的辛弗林，并且制備過程中辛弗林回收率在65％以上。
【IPC分類】C07C213/10, C07C215/60
【公開號】CN105646244
【申請號】
【發明人】王林婧
【申請人】上海霖成生物科技有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2014年11月14日