一株裂褶菌菌株及其在普洱茶生產中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及普洱茶生產領域，具體涉及一株裂褶菌菌株及其在普洱茶生產中的應 用。
【背景技術】
[0002] 隨著食品科學與技術的進步，以及微生物資源的挖掘與利用，微生物優良菌株的 選育和應用研究越來越廣泛。
[0003] 裂褶菌真菌廣泛分布于世界各地，特別是在熱帶、亞熱帶雜木林下常可找到它的 蹤跡。裂褶菌能夠產生多種活性成分，能夠從中分離出裂褶菌多糖（SPG)、蘋果酸、裂褶菌制 素等物質。該菌廣泛應用于生產有機酸、促生素吲哚乙酸等食品工業中。
[0004] MacKenzie CR等報道，裂褶菌可以產生一種酯酶，催化基質中纖維素產生阿魏 酸。同時，該菌含有較強活性的纖維素酶，在普洱茶發酵中能夠促進物質產生變化，對 普洱茶品質的形成具有很好的促進作用。此外，裂褶菌的菌絲體提取液對金黃色葡萄 球菌（Staphylococcus aureus)、大腸桿菌（Escherichia col i)、痢疾桿菌（Dysentery bacilli)、枯草桿菌（Bacillus subtilis)以及乙型副傷寒沙門氏菌（Salmonella paratyphi B)具有明顯的抑制作用。
[0005] 然而，在普洱茶發酵研究領域中，前期偏重于進行基礎性研究，而缺乏在具體應用 方面的深度跟蹤。隨著對普洱茶發酵技術的突破，從傳統渥堆發酵樣品中獲得具有潛在應 用價值的微生物菌株，并應用于普洱茶的發酵生產中已經成為普洱茶生產的必然趨勢，具 有重要的意義。
【發明內容】
[0006] 為了解決以上問題，本發明從微生物資源挖掘和開發利用的角度出發，對普洱茶 的生產，尤其是普洱茶的渥堆過程進行研究，提供了一株在普洱茶生產中能夠提高品質的 候選菌株，并將其應用于普洱茶的生產中，不僅縮短了普洱茶的發酵周期，而且對提高普洱 茶產品的食品安全性具有重要作用。
[0007] 因此，本發明一方面提供了一株裂裙菌菌株，該菌株為裂裙菌（Schizophyllum commune) TMCC 70002,其已于2014年01月06日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普 通微生物中心（簡稱CGMCC)，該菌株的保藏編號為CGMCC No. 8751。
[0008] 本發明所述的裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002菌株分離自動海茶業 有限責任公司（勐海茶廠）的傳統渥堆普洱茶發酵樣品中，利用常規培養基，通過傳統的初 篩、復篩、純化培養獲得。
[0009] 本發明的裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002菌株劃線接種在沙堡氏瓊 脂培養基（SDA)上，培養36小時后開始生長，7天后菌落直徑約為60mm，形成白色致密基內 菌絲和濃密厚重的白色或者灰白色氣生分枝菌絲，培養基背面期初為白色，其后變為淡黃 色。裂褶菌屬中高溫型菌類，菌絲生長適溫為7~30°C，最適溫度為22~25°C，子實體形 成溫度為14~20 °C，孢子萌發最適溫度為21~26 °C。裂褶菌菌絲培養基最適含水量為 60 %~75%，菌絲生長階段，適宜的空氣相對濕度為70 %~80%。
[0010] 本發明另一方面提供了本發明的裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002菌 株在普洱茶生產中的應用。
[0011] 其中，在一個優選的實施方案中，該菌株在已潮水的普洱毛茶中的接種量為 5-10% (體積/重量）。
[0012] 本發明的裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002菌株從普海茶渥堆樣品 中分離得到，將制備好的該菌株的種子液按特定比例應用于普洱茶發酵生產中，不僅縮短 了普洱茶的發酵周期，獲得了紅褐、清香、爽口的普洱茶茶湯，而且該菌株的菌絲體能夠產 生一些抑制金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、大腸桿菌（Escherichia coli)、 痢疾桿菌（Dysenterybacilli)、枯草桿菌（Bacillus subtilis)以及乙型副傷寒沙門氏菌 (Salmonellaparatyphi B)的物質，對提高普海茶產品的食品安全性也具有重要作用。
[0013] 本發明的裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002菌株的生物材料信息如 下：
[0014] 分類命名：裂裙菌（Schizophyllum commune);
[0015] 菌株編號：TMCC 70002 ;
[0016] 保藏機構：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；
[0017] 保藏機構簡稱：CGMCC ;
[0018] 保藏機構地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號；
[0019] 保藏日期：2014年01月06日；
[0020] 保藏中心登記入冊編號：CGMCC No. 8751。
【具體實施方式】
[0021] 下面通過實施例對本發明作進一步的詳細說明，旨在用于說明本發明而非限定本 發明。應當指出，對于本領域技術人員而言，在不脫離本發明原理的前提下，還可以對本發 明進行若干改進和修飾，這些改進和修飾也同樣落入本發明的保護范圍之內。
[0022] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0023] 下述實施例中所使用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0024] 實施例 1 裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002 菌株的篩選
[0025] 從普洱茶渥堆中采集新鮮的發酵茶樣，通過選擇性分離培養基分離得到裂褶菌 (Schizophyllum commune)TMCC 70002 菌株。
[0026] 純化培養基為：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀0. 5g、蛋白胨3g、磷酸氫二鉀 〇· 5g、硫酸鎂 0· 5g、瓊脂 15g、水 1000mL、pH 自然，121°C滅菌 30min。
[0027] 具體分離純化方法如下：
[0028] 1、培養基準備：將配制好的培養基于121°C滅菌30min，冷卻至45°C左右，倒入無 菌培養皿中，每皿約20ml，冷卻凝固后備用；
[0029] 2、樣品處理：取待分離的普洱茶樣，研磨粉碎，取5g，在超凈工作臺中加入到裝有 45ml無菌水的三角燒瓶中，振蕩制成菌懸液，濃度標記為10 S
[0030] 3、稀釋：按十倍稀釋法逐步稀釋，稀釋4次為止。十倍稀釋法是指下一管的菌懸液 濃度是上一管的十分之一；
[0031] 4、接種：將標記有10 2、10 3、10 4、10 5濃度的菌懸液分別取400 μ 1注入到已配 制好的培養皿中，每個稀釋度三個重復，并用涂布棒均勻涂布。完成后放置于l〇°C、20°C、 30°C、4(TC四個溫度梯度下培養，每隔24小時觀察一次；
[0032] 5、純化：培養4~8天，挑取單菌落轉接到沙堡氏瓊脂培養基（SDA)中培養，多次 劃線純化直至得到純化菌株；
[0033] 6、種子液的制備：將純化得到的裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002菌 株接種于馬鈴薯一葡萄糖液體培養基中，然后放置于搖床（150rpm/min、30°C )上，培養4天 后，用于接種發酵。
[0034] 實施例2裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002菌株的形態鑒定
[0035] 將本發明的裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002菌株劃線接種在沙堡氏 瓊脂培養基（SDA)上，培養36小時后開始生長，7天后菌落直徑約為60mm，形成白色致密基 內菌絲和濃密厚重的白色或者灰白色氣生分枝菌絲，培養基背面期初為白色，其后變為淡 黃色。裂褶菌屬中高溫型菌類，菌絲生長適溫為7~30°C，最適溫度為22~25°C，子實體 形成溫度為14~20°C，孢子萌發最適溫度為21~26°C。裂褶菌菌絲培養基最適含水量為 60 %~75%，菌絲生長階段，適宜的空氣相對濕度為70 %~80%。
[0036] 實施例3裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002菌株的生產應用
[0037] 將大葉種曬青毛茶加水至含水量達到20% - 40%左右，121°C滅菌30min，隨后在 滅菌的毛茶中按照5%~10%的接種量接種本發明的裂裙菌（Schizophyllum commune) TMCC 70002菌株種子液，放置于40°C培養數周。以周為單位補水并翻堆，在第一周內該菌 株開始大量繁殖，菌株數量呈幾何倍數增加，其分泌的酶量也增加。由于大量生物活性物質 和酶等的作用，促進了茶葉中內含物質進行氧化、分解作用，增加了普洱茶的香氣、湯色等 品質特征。具體的比較結果參見表1和表2中的數據。
[0038] 表1采用裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002在不同條件下發酵普海 茶后，其內含物質與大益2012年7572普洱熟茶的比較表
[0039]
[0040] 表2采用裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002單菌發酵與傳統渥堆發 酵各酶酶活比較表 [0041 ]
[0042] 此外，本發明的裂糟菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002菌株的菌絲體能夠 產生一些抑制金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、大腸桿菌（Escherichia coli)、 痢疾桿菌（Dysentery bacilli)、枯草桿菌（Bacillus subtilis)以及乙型副傷寒沙門氏菌 (Salmonella paratyphi B)的物質，對提高普海荼產品的食品安全性具有重要的作用。
【主權項】
1. 一株裂裙菌菌株，其特征在于，該菌株為裂裙菌（Schizophyllum commune)TMCC 70002,其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的登記入冊編號為CGMCC No.8751〇2. 根據權利要求1所述的裂褶菌菌株，其是從普洱茶渥堆樣品中，利用常規培養基，通 過傳統的初篩、復篩、純化培養獲得的。3. 權利要求1或2所述的裂褶菌菌株在普洱茶生產中的應用。4. 根據權利要求3所述的應用，其中該菌株在已潮水的普洱毛茶中的接種量為5-10% (體積/重量）。
【專利摘要】本發明屬于普洱茶生產領域，具體公開了一株裂褶菌菌株及其在普洱茶生產中的應用。本發明所提供的裂褶菌菌株為裂褶菌(Schizophyllum？commune)TMCC？70002，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的登記入冊編號為CGMCC？No.8751。將本發明的裂褶菌菌株應用于普洱茶的渥堆過程中，不僅縮短了普洱茶的發酵周期，獲得了紅褐、清香、爽口的普洱茶茶湯，而且該菌株的菌絲體能夠產生一些抑制多種雜菌生長的物質，對提高普洱茶產品的食品安全性也具有重要作用，非常適合應用于普洱茶的加工生產中。CGMCC No. 875120140106
【IPC分類】C12R1/645, C12N1/14, A23F3/10
【公開號】CN105647812
【申請號】
【發明人】唐蜀昆, 高林瑞, 任萬增, 鄒小林, 童一峰, 盧開陽, 黃華偉, 劉韜, 田飛, 盧曉慧
【申請人】勐海茶業有限責任公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2014年11月24日