一種內皮培養體系的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明特別涉及一種內皮培養體系，屬于大血管內皮細胞培養技術領域。
【背景技術】
[0002]內皮細胞或血管內皮是一薄層的專門上皮細胞，由一層扁平細胞所組成，呈多邊形，細胞的邊緣呈鋸齒狀，相互嵌合，它形成血管的內壁，是血管管腔內血液及其他血管壁(單層鱗狀上皮)的接口，內皮細胞是沿著整個循環系統，由心臟直至最小的微血管;血管內皮細胞最為重要的一個功能就是參與血管的形成，而在眾多心血管疾病、糖尿病及其他原因引起的血管器質性病變中，很多情況下都是由于血管內皮細胞凋亡、壞死或是不再增殖引起的，因此血管內皮細胞就成為了現在很多研究的熱點，這些研究以及實驗往往需要用到大量的血管內皮細胞;現有技術中，采用M199基礎培養基和10%胎牛血清作為培養基培養內皮細胞，其大血管內皮細胞的生長活性不夠，且容易受到雜細胞的污染。
【發明內容】
[0003](一)要解決的技術問題
為解決上述問題，本發明提出了一種內皮培養體系，能夠在2%血清的環境下促進大血管內皮細胞的生長活性，也可以部分抑制成纖維和平滑肌細胞的活性，減少雜細胞的污染。
[0004](二)技術方案
本發明的內皮培養體系，包括內皮培養基和內皮添加劑;所述內皮培養基其組成成分及濃度為:氯化鈉6800mg/L，氯化鉀400mg/L，氯化I^OOmg/L，硫酸鎂200mg/L，磷酸二氫鈉140mg/L，L-精氨酸 70mg/L，L-組氨酸 20mg/L，L-賴氨酸 70mg/L，DL-色氨酸 20mg/L，DL_ 苯丙氨酸 50mg/L，DL-蛋氨酸 30mg/L，DL-絲氨酸 50mg/L，DL-蘇氨酸 60mg/L，DL-亮氨酸 120mg/L，DL-異亮氨酸 40mg/L，DL-繳氨酸 50mg/L，DL-谷氨酸 150mg/L，DL-天冬氨酸 60mg/L，DL-α-丙氨酸50mg/L，L-脯氨酸40mg/L，L-輕脯氨酸10mg/L，甘氨酸50mg/L，乙酸鈉83mg/L，酸紅15mg/L，L-酪氨酸 40mg/L，L-胱氨酸 20mg/L，煙酸(維生素 B3 )0.025mg/L，煙酰胺0.025mg/L，鹽酸吡哆辛0.025mg/L，鹽酸吡哆醛0.025mg/L，維生素BI 0.01mg/L，核黃素(維生素B2)0.0lmg/L，泛酸|丐0.01mg/L,內消旋肌醇0.05mg/L，對氨基苯酸0.05mg/L，氯化膽堿0.5mg/L，膽固醇0.2mg/L，維生素K3(甲萘醌)0.01mg/L，維生素D2(骨化醇)0.lmg/L，維生素A
0.lmg/L，吐溫80 5mg/L，L-鹽酸半胱氨酸0.lmg/L，還原型谷胱甘肽0.05mg/L，抗壞血酸(維生素C)0.05mg/L，DL-a-鹽酸生育酚鈉0.01mg/L，葉酸(維生素B)0.01mg/L，D-生物素
0.0 lmg/L，葡萄糖3150mg/L，胸腺嘧啶0.37mg/L，次黃嘌呤2.4mg/L ；
所述內皮添加劑其組成成分及濃度為:重組人表皮細胞生長因子5ng/ml，氫化可的松10ng/ml，重組人血管內皮生長因子10ng/ml，重組人堿性成纖維生長因子5ng/ml，R3胰島素樣生長因子I 5ng/ml，維生素C 50ug/ml，肝素50ug/ml，重組人胰島素10ug/ml，人全鐵轉鐵蛋白 5ug/ml。
[0005]有益效果與現有技術相比，本發明的內皮培養體系，能夠在5%血清的環境下促進大血管內皮細胞的生長活性，也可以部分抑制成纖維和平滑肌細胞的活性，減少雜細胞的污染。
【具體實施方式】
[0006]本發明內皮培養體系，包括內皮培養基和內皮添加劑;所述內皮培養基其組成成分及濃度為:氯化鈉6800mg/L，氯化鉀400mg/L，氯化I^^OOmg/L，硫酸鎂200mg/L，磷酸二氫鈉 140mg/L，L-精氨酸 70mg/L，L-組氨酸 20mg/L，L-賴氨酸 70mg/L，DL-色氨酸 20mg/L，DL-苯丙氨酸 50mg/L，DL-蛋氨酸 30mg/L，DL-絲氨酸 50mg/L，DL-蘇氨酸 60mg/L，DL-亮氨酸 120mg/L，DL-異亮氨酸 40mg/L，DL-繳氨酸 50mg/L，DL-谷氨酸 150mg/L，DL-天冬氨酸 60mg/L，DL-a-丙氨酸50mg/L，L-脯氨酸40mg/L，L-輕脯氨酸10mg/L，甘氨酸50mg/L，乙酸鈉83mg/L，酸紅15mg/L，L-酪氨酸 40mg/L，L-胱氨酸 20mg/L，煙酸(維生素 B3 )0.025mg/L，煙酰胺0.025mg/L，鹽酸吡哆辛0.025mg/L，鹽酸吡哆醛0.025mg/L，維生素BI 0.01mg/L，核黃素(維生素B2)
0.0lmg/L，泛酸|丐0.0 lmg/L，內消旋肌醇0.05mg/L，對氨基苯酸0.05mg/L，氯化膽堿0.5mg/1，膽固醇0.211^/1，維生素1(3(甲萘醌)0.0111^/1，維生素02(骨化醇)0.111^/1^，維生素八
0.lmg/L，吐溫80 5mg/L，L-鹽酸半胱氨酸0.lmg/L，還原型谷胱甘肽0.05mg/L，抗壞血酸(維生素C)0.05mg/L，DL-a-鹽酸生育酚鈉0.0lmg/L，葉酸(維生素B)0.0lmg/L，D-生物素
0.0lmg/L，葡萄糖 3150mg/L，胸腺嘧啶 0.37mg/L，次黃嘌呤 2.4mg/L ；
所述內皮添加劑其組成成分及濃度為:重組人表皮細胞生長因子5ng/ml，氫化可的松10ng/ml，重組人血管內皮生長因子10ng/ml，重組人堿性成纖維生長因子5ng/ml，R3胰島素樣生長因子I 5ng/ml，維生素C 50ug/ml，肝素50ug/ml，重組人胰島素10ug/ml，人全鐵轉鐵蛋白 5ug/ml。
[0007]本發明的內皮培養體系，能夠在2%血清的環境下促進大血管內皮細胞的生長活性，也可以部分抑制成纖維和平滑肌細胞的活性，減少雜細胞的污染。
[0008]上面所述的實施例僅僅是對本發明的優選實施方式進行描述，并非對本發明的構思和范圍進行限定。在不脫離本發明設計構思的前提下，本領域普通人員對本發明的技術方案做出的各種變型和改進，均應落入到本發明的保護范圍，本發明請求保護的技術內容，已經全部記載在權利要求書中。
【主權項】
1.一種內皮培養體系，其特征在于:包括內皮培養基和內皮添加劑； 所述內皮培養基其組成成分及濃度為:氯化鈉6800mg/L，氯化鉀400mg/L，氯化鈣200mg/L，硫酸鎂200mg/L，磷酸二氫鈉140mg/L，L-精氨酸70mg/L，L-組氨酸20mg/L，L-賴氨酸 70mg/L，DL-色氨酸 20mg/L，DL-苯丙氨酸 50mg/L，DL-蛋氨酸 30mg/L，DL-絲氨酸 50mg/L，DL-蘇氨酸60mg/L，DL-亮氨酸120mg/L，DL-異亮氨酸40mg/L，DL-繳氨酸50mg/L，DL-谷氨酸150mg/L，DL-天冬氨酸 60mg/L，DL-α-丙氨酸 50mg/L，L-脯氨酸 40mg/L，L-輕脯氨酸 10mg/L，甘氨酸50mg/L，乙酸鈉83mg/L，酸紅15mg/L，L-酪氨酸40mg/L，L-胱氨酸20mg/L，煙酸(維生素B3)0.025mg/L，煙酰胺0.025mg/L，鹽酸吡哆辛0.025mg/L，鹽酸吡哆醛0.025mg/L，維生素BI 0.0 lmg/L，核黃素(維生素B2)0.內消旋肌醇 0.05mg/L，對氨基苯酸0.05mg/L，氯化膽堿0.5mg/L，膽固醇0.2mg/L，維生素K3 (甲萘醌)0.0 lmg/L，維生素D2(骨化醇)0.lmg/L，維生素A 0.lmg/L，吐溫80 5mg/L，L_鹽酸半胱氨酸0.lmg/L，還原型谷胱甘肽0.05mg/L，抗壞血酸(維生素C)0.05mg/L，DL-a-鹽酸生育酚鈉0.01mg/L，葉酸(維生素13)0.0111^/1，0-生物素0.0111^/1，葡萄糖315011^/1，胸腺啼啶0.3711^/1，次黃嘌呤2.411^/1; 所述內皮添加劑其組成成分及濃度為:重組人表皮細胞生長因子5ng/ml，氫化可的松10ng/ml，重組人血管內皮生長因子10ng/ml，重組人堿性成纖維生長因子5ng/ml，R3胰島素樣生長因子I 5ng/ml，維生素C 50ug/ml，肝素50ug/ml，重組人胰島素10ug/ml，人全鐵轉鐵蛋白 5ug/ml。
【專利摘要】本發明公開了一種內皮培養體系；包括內皮培養基和內皮添加劑；所述內皮添加劑其組成成分及濃度為：重組人表皮細胞生長因子5ng/ml，氫化可的松10ng/ml，重組人血管內皮生長因子10ng/ml，重組人堿性成纖維生長因子5ng/ml，R3胰島素樣生長因子1？5ng/ml，維生素C？50ug/ml，肝素50ug/ml，重組人胰島素10ug/ml，人全鐵轉鐵蛋白5ug/ml。本發明的內皮培養體系，能夠在5%血清的環境下促進大血管內皮細胞的生長活性，也可以部分抑制成纖維和平滑肌細胞的活性，減少雜細胞的污染。
【IPC分類】C12N5/071
【公開號】CN105647851
【申請號】
【發明人】王悅
【申請人】賽百慷（上海）生物技術股份有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年3月1日