的原料中加入質量配比為0.26WT%的蛋白水解酶，再加入 濃度為0.2m〇VL的乙酸溶液(PH為3)，并在10°C的條件下，緩慢攪拌5天，然后離心取出沉 淀，制得粗提膠原蛋白溶液。
[0031] C、膠原蛋白的提純:在制得的粗提膠原蛋白溶液中加入質量分數為1.5%的H2〇2溶 液，混合均勻后靜置5小時，之后，再用檸檬酸三鈉溶液調節PH值到6,離心后，在PH值在6的 酸性條件下，放入濃度為〇. 3mol/L的氯化鈉溶液進行沉淀處理，再將沉淀物裝入透析袋中， 用0.2mol/L的乙酸溶液透析1.5天，再用蒸餾水透析4天，且每天換透析液3次，最終得到膠 原蛋白水液。
[0032] d、活性保存處理:在膠原蛋白水液中加入lOOppm的復合酶，所述復合酶包括纖維 素酶、海藻糖酶、出芽短梗酶和甘露聚糖酶，然后在-50 °C真空超低溫狀態下冷凍干燥處理， 制得哺乳類動物膠原蛋白。
[0033] 對比實施例：
[0034] 試驗組A:實施例1所生產的哺乳類動物膠原蛋白
[0035] 試驗組B:實施例2所產生的哺乳類動物膠原蛋白
[0036] 試驗組C:市售一般哺乳類動物膠原蛋白
[0037]
[0038] 經Akta分析表明，試驗組A和試驗組B的產品純度分別為98.3%和98.8%。
[0039] 從以上試驗分析結果可知:本發明提取的哺乳類動物膠原蛋白具備完整的三螺旋 結構，保持了完整的生物活性結構，而市售的一般哺乳類動物膠原蛋白是變性蛋白，不具備 生物活性，分子量呈現不規則散亂分布。然而，膠原蛋白在臨床使用中的效果主要是可溶性 膠原蛋白，且由于保持了完整的三螺旋結構使膠原蛋白的生理功能得到了充分的體現。
[0040] 本發明提取所得的膠原蛋白能夠達到醫用I型活性膠原的級別。構成真皮的膠原 主要就是I型膠原，人體中膠原約90%是I型膠原。
[0041 ] I型活性膠原的核心作用機理如下：
[0042] -、保濕性
[0043]三螺旋結構膠原分子，含天然保濕因子和親水基團，配合三種肌膚所需的多糖成 分，可降低經皮失水率(TEWL)，肌底保濕；
[0044] 二、修復性
[0045] 皮膚存在微損傷情況下，促進表皮細胞正常生長，具有獨特的自動修復功能，引導 上皮細胞迀入缺損區，并在細胞迀移時起支持和潤滑作用，改善表皮細胞微循環。
[0046] 三、成膜性
[0047]完整三螺旋結構膠原分子在皮膚表面形成保護膜，提高其新陳代謝;恢復皮膚微 環境平衡，加速皮膚微循環;模擬肌膚屏障功能，恢復改善肌膚自身抵抗力。
[0048]以上顯示和描述了本發明的基本原理和主要特征和本發明的優點。本行業的技術 人員應該了解，本發明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本 發明的原理，在不脫離本發明精神和范圍的前提下，本發明還會有各種變化和改進，這些變 化和改進都落入要求保護的本發明范圍內。本發明要求保護范圍由所附的權利要求書及其 等效物界定。
【主權項】
1. 一種哺乳類動物膠原蛋白的提取方法，其特征在于，包括如下步驟： a、 原料處理:將原料清洗干凈，去除脂肪和筋膜后，放入碳酸鈉溶液中浸泡3-6個小時， 然后再用蒸餾水漂洗3-4次后，晾干； b、 酶解處理:在步驟a處理后原料中加入質量配比為0.2WT % -0.3WT %的蛋白水解酶， 再加入濃度為〇.2mol/L乙酸溶液，并緩慢攪拌3-5天，然后離心取出沉淀，制得粗提膠原蛋 白溶液； c、 膠原蛋白的提純:在制得的粗提膠原蛋白溶液中加入質量分數為〇.5%-1.5%的H2〇2 溶液，混合均勻后靜置3-6小時，之后，再用檸檬酸三鈉溶液調節PH值到5-6,離心后，再進行 鹽析處理，再將沉淀物裝入透析袋中，用〇.2mol/L的乙酸溶液透析1-1.5天，再用蒸餾水透 析3-4天，且每天換透析液2-3次，最終得到膠原蛋白水液； d、 活性保存處理:在膠原蛋白水液中加入90-1 lOppm的復合酶，然后在-50 °C真空超低 溫狀態下冷凍干燥處理，制得哺乳類動物膠原蛋白。2. 如權利要求1所述的一種哺乳類動物膠原蛋白的提取方法，其特征在于，所述原理處 理中除脂肪和筋膜后，先在2-3 °C的溫度下冷凍后，再放入碳酸鈉溶液中。3. 如權利要求2所述的一種哺乳類動物膠原蛋白的提取方法，其特征在于，所述碳酸鈉 溶液為 0.05 %-0.1%。4. 如權利要求1所述的一種哺乳類動物膠原蛋白的提取方法，其特征在于，所述乙酸溶 液的濃度為〇. 3mol/L，PH值為2-3。5. 如權利要求1所述的一種哺乳類動物膠原蛋白的提取方法，其特征在于，所述酶解處 理中緩慢攪拌在8_10°C的條件下進行。6. 如權利要求1所述的一種哺乳類動物膠原蛋白的提取方法，其特征在于，所述鹽析處 理為在PH值在4-6的酸性條件下，用濃度為0.3mol/L的氯化鈉的濃度對離心后的膠原蛋白 溶液進行處理。7. 如權利要求1所述的一種哺乳類動物膠原蛋白的提取方法，其特征在于，所述活性保 存處理中復合酶包括纖維素酶、海藻糖酶、出芽短梗酶和甘露聚糖酶。
【專利摘要】本發明公開了一種哺乳類動物膠原蛋白的提取方法，包括如下步驟：將原料清洗干凈,去除脂肪和筋膜后,放入碳酸鈉溶液中浸泡，再用蒸餾水漂洗晾干；在處理后原料中加入的蛋白水解酶，再加入乙酸溶液，并緩慢攪拌，然后離心取出沉淀，制得粗提膠原蛋白溶液；在制得的粗提膠原蛋白溶液中加入H2O2溶液，混合均勻后靜置3-6小時，再用檸檬酸三鈉溶液調節PH值到5-6，離心后，再進行鹽析處理，再將沉淀物裝入透析袋中，用乙酸溶液透析1-1.5天，再用蒸餾水透析3-4天，最終得到膠原蛋白水液。采用本方法不僅大大提高了膠原蛋白的純度，還100％的保留膠原蛋白的活性。
【IPC分類】C12P21/06, C07K1/14
【公開號】CN105648017
【申請號】
【發明人】陳瀟
【申請人】森知（上海）國際貿易有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年4月13日