算得出蝦青素的含量，其中C為蝦青素含量，A為490nm下0D 值，Va為DMS0體積，Vb為藻液體積。
[0022] 實施例1
[0023] (1)雨生紅球藻采用雨生紅球藻菌株，利用BBM培養基，在25°C、光強30001x，持續 光照條件下培養，培養雨生紅球藻到達對數生長期，此時藻細胞濃度達到l〇6celIs ml/1，無 菌條件下離心，利用缺氮的BBM培養基稀釋到2X 105cellS ml/1作為誘導藻液。
[0024] (2)用DMSO配成WSgl/1的丁基羥基茴香醚母液，將丁基羥基茴香醚母液添加到已 經稀釋好的誘導藻液中使丁基羥基茴香醚濃度達到2mg I/1;然后將上述藻液在28°C、光強 ΙΟΟΟΟΙχ、冷光燈連續光照及饑餓營養鹽的復合脅迫下進行培養，每天定期取樣觀察藻細胞 顏色變化，發現13天后藻體細胞完全變紅后，收集藻細胞利用有機溶劑提取藻細胞的蝦青 素，此時其蝦青素的積累量已達到最高。
[0025] 實施例2
[0026] (1)雨生紅球藻采用雨生紅球藻菌株，利用BBM培養基，在25 °C、光強30001x，持續 光照條件下培養，培養至雨生紅球藻到達對數生長期，此時藻細胞濃度達到l〇6celIs ml/1， 利用缺氮的BBM培養基稀釋到2X 105cells ml/1作為誘導藻液。
[0027] (2)用DMS0配成128g L-1的丁基羥基茴香醚母液，將丁基羥基茴香醚母液添加到已 經稀釋好的誘導藻液中使丁基羥基茴香醚濃度達到4mg I/1;然后將上述藻液在28°C、光強 100001X、冷光燈連續光照及饑餓營養鹽的復合脅迫下進行培養，每天定期取樣觀察藻細胞 顏色變化，13天后藻體細胞完全變紅后，收集藻細胞利用有機溶劑提取藻細胞的蝦青素，此 時其蝦青素的積累量已達到最高。
[0028] 實施例3
[0029] (1)雨生紅球藻采用雨生紅球藻菌株，利用BBM培養基，在25°C、光強30001x，持續 光照條件下培養，培養至雨生紅球藻到達對數生長期，此時藻細胞濃度達到l〇6celIs ml/1， 利用缺氮的BBM培養基稀釋到2X 105cells ml/1作為誘導藻液。
[0030] (2)用DMS0配成128g Γ1的丁基羥基茴香醚母液，將丁基羥基茴香醚母液添加到已 經稀釋好的誘導藻液中使丁基羥基茴香醚濃度達到8mg I/1;然后將上述藻液在28°C、光強 100001X、冷光燈連續光照及饑餓營養鹽的復合脅迫下進行培養，每天定期取樣觀察藻細胞 顏色變化，14天后藻體細胞完全變紅后，收集藻細胞利用有機溶劑提取藻細胞的蝦青素，此 時其蝦青素的積累量已達到最高。
[0031 ] 丁基羥基茴香醚可以作為一種植物生長調節劑有效地促進植物的生長和發育，利 用一定適當濃度的丁基羥基茴香醚作為誘導劑，誘導雨生紅球藻積累蝦青素，通過采用上 述蝦青素的提取方法對各組進行提取蝦青素，結果顯示:空白對照組(不添加丁基羥基茴香 醚)積累蝦青素完成的時間為15天，第10天時蝦青素的含量為12.4725mg Γ1，丁基羥基茴香 醚處理后的比對照組積累蝦青素的周期縮短了 6-13%，且蝦青素的產量比對照組提高了 56.14-71.72%，達到19.99-21.654mg L-1。
[0032]最后應說明的是：以上所述僅為本發明的優選實施例而已，并不用于限制本發明， 盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，對于本領域的技術人員來說，其依然可 以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換。 凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的 保護范圍之內。
【主權項】
1. 一種利用下基徑基茵香酸促進雨生紅球藻生產郵青素的方法，包括W下步驟： 步驟1、藻液的制備:培養雨生紅球藻到對數生長期后期，用缺氮的BBM培養基稀釋藻液 并獲得誘導的藻液； 步驟2、誘導雨生紅球藻積累郵青素：用DMSO配成128g [1的下基徑基茵香酸母液，將下 基徑基茵香酸母液添加到已經稀釋好的誘導的藻液中使下基徑基茵香酸濃度達到2-8mg [1;然后將上述藻液進行培養，待藻體細胞完全變紅后，收集藻細胞； 步驟3、利用有機溶劑提取藻細胞的郵青素。2. 根據權利要求1所述的利用下基徑基茵香酸促進雨生紅球藻生產郵青素的方法，其 特征在于，所述雨生紅球藻為雨生紅球藻菌株。3. 根據權利要求1所述的利用下基徑基茵香酸促進雨生紅球藻生產郵青素的方法，其 特征在于，所述步驟1中藻液的制備具體為:在25°C、光強30001X，持續光照條件下培養，培 養雨生紅球藻到達對數生長期后期，此時細胞濃度達到IO 6Cells ml/i，利用缺氮的BBM培養 基稀釋到2 X IO5Cells ml/i作為誘導藻液。4. 根據權利要求1所述的利用下基徑基茵香酸促進雨生紅球藻生產郵青素的方法，其 特征在于，所述步驟2中誘導雨生紅球藻積累郵青素中的培養條件為:28°C、光強lOOOOlx、 冷光燈連續光照及氮饑餓的復合脅迫。5. 根據權利要求1所述的利用下基徑基茵香酸促進雨生紅球藻生產郵青素的方法，其 特征在于，所述步驟3中利用有機溶劑提取藻細胞的郵青素具體為:取5ml上述藻液，400化/ min離屯、5min，棄上清得藻細胞沉淀;分別向藻細胞沉淀中加入2mL 30 %甲醇和5 %K0H混合 液，60°C水浴15min，4000r/min離屯、IOmin，除上清，沉淀加入純水洗涂2次，除堿液殘留；然 后加入5mL DMS0,200w超聲破壁15min，其中，超聲Imin, IOs間歇，于45°C水浴20min，抽提至 藻體發白，離屯、收集上清測0D490;并按照公式計算得出 郵青素的含量，其中C為郵青素含量，A為490nm下OD值，化為DMSO體積，Vb為藻液體積。
【專利摘要】本發明公開了一種利用丁基羥基茴香醚促進雨生紅球藻生產蝦青素的方法，首先制備雨生紅球藻藻液，雨生紅球藻到對數生長期后期，此時細胞濃度達到106cells？mL-1，用缺氮的BBM培養基稀釋藻液使其濃度達到2×105cells？mL-1，獲得誘導用的藻液；然后用DMSO配成128g？L-1的丁基羥基茴香醚母液，將丁基羥基茴香醚母液添加到已經稀釋好的誘導藻液中使丁基羥基茴香醚濃度達到4.95-5.05mgL-1；然后將上述藻液進行培養，待藻體細胞完全變紅后，收集藻細胞此時其蝦青素的積累量已達到最高。本發明方法簡單可行，成本低廉，并大幅縮短雨生紅球藻變紅的時間且蝦青素的量有較顯著地提高，從而很大的提高了蝦青素的產率。
【IPC分類】C07C403/24, C12R1/89, C12P23/00
【公開號】CN105648018
【申請號】
【發明人】余旭亞, 尚敏敏, 徐軍偉, 李濤, 趙鵬
【申請人】昆明理工大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年2月27日