一種甘薯爪哇黑腐病抗性鑒定方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及植物保護領域，具體涉及一種甘薯爪哇黑腐病抗性鑒定方法。
【背景技術】
[0002] 甘薯爪唾黑腐病（Java black rot of sweetpotato)是由可可毛色二孢 (Lasiodiplodia theobromae)引起的一種重要甘薯儲藏性病害。該病害是美國南部以及夏 威夷州重要的毀滅性儲藏病害，據報道在上世紀八十年代曾在我國南方局部地區發生，近 年來逐漸成為南方地區危害最重的甘薯儲藏性病害之一。該病害多從甘薯的薯蒂和薯尾以 及傷口侵入，特別是搬運過程中薯皮損傷極易導致病菌侵入，形成棕褐色病斑或者整個甘 薯薯塊腐爛失水干縮，在廣州個別倉庫發病率可達50%以上，可造成了巨大的經濟損失。
[0003] 培育和利用抗甘薯爪哇黑腐病的新品種或材料是防治和控制該病最經濟環境友 好的措施。因此，建立一種操作簡單、快速準確的甘薯爪哇黑腐病抗性鑒定評價方法十分必 要。
[0004]迄今，在我國目前沒有甘薯爪哇黑腐病抗性鑒定評價方法，發明人曾嘗試利用甘 薯爪哇黑腐病菌分生孢子和菌絲塊對甘薯薯塊進行接種，發現采用分生孢子和菌絲塊均不 能使無創傷薯塊致病，而利用分生孢子接種有創傷的薯塊，發病不穩定，培養分生孢子需要 時間較長，試驗操作較為復雜，不適合用于該病的抗性鑒定評價。最終，建立了一種操作簡 單、發病迅速、效果穩定的適于甘薯爪哇黑腐病抗性鑒定評價方法。
【發明內容】
[0005] 為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種效果穩定的甘薯爪哇黑腐 病抗性鑒定方法。
[0006] 為解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：
[0007] 本發明提供一種甘薯爪哇黑腐病抗性鑒定方法，包括以下步驟：
[0008] 1)病原菌活化培養:將甘薯爪哇黑腐病菌接種至PDA培養基平板，活化培養，PDA培 養基平板上生長出菌絲體；
[0009] 2)待鑒定甘薯材料準備:取待鑒定甘薯材料和對照品種，清洗晾干，削薯皮使待鑒 定甘薯材料和對照品種均露出〇. 5-2cm2創面；
[0010] 3)接種培養:分別從roA培養基平板邊緣取含有菌絲體的菌塊，將長有菌絲體的一 面貼附于待鑒定甘薯材料和對照品種的創面，進行培養；
[0011] 4)等級鑒定:接種培養5-10天后，將待鑒定甘薯材料和對照品種取出，觀察病害情 況并測量薯塊病斑直徑，進行發病嚴重度分級，然后計算每個待鑒定甘薯材料和對照品種 的平均發病嚴重度，根據平均發病嚴重度進行抗性評價。
[0012] 作為優選，步驟1)中，病原菌活化培養的具體操作方法如下:將甘薯爪哇黑腐病菌 接種至PDA培養基平板，活化培養2天，用打孔器從PDA培養基平板的邊緣取含有菌絲體的菌 塊，將所述菌塊置于另一新的PDA培養基平板的中央，繼續活化培養2天。
[0013] 作為優選，所述活化培養的具體操作步驟:將PDA培養基平板置于25±3°C培養。
[0014] 作為優選，步驟2)中，所述對照品種為廣薯79。
[0015]作為優選，步驟3)中，所述培養步驟的具體參數如下:培養溫度為25 ± 3 °C，培養濕 度為85-98 %。
[0016]作為優選，步驟4)中，發病嚴重度分級標準如下：
[0017] 1級:薯塊正常無任何病癥，或者薯塊病斑直徑< 1cm;
[0018] 2級：1 · 0cm〈薯塊病斑直徑< 2 · 0cm;
[0019] 3級：2 · 0cm〈薯塊病斑直徑< 3 · 0cm;
[0020] 4級：3 · 0cm〈薯塊病斑直徑< 4 · 0cm;
[0021] 5級:整個薯塊腐爛，薯塊病斑直徑>4.0cm。
[0022] 作為優選，步驟4)中，抗性評價標準如下：
[0023]高抗:平均發病嚴重度<1.5;
[0024]抗病：1.5〈平均發病嚴重度< 2;
[0025]中抗:2〈平均發病嚴重度<3;
[0026]感病:3〈平均發病嚴重度<4;
[0027] 高感:4〈平均發病嚴重度。
[0028]相比現有技術，本發明的有益效果在于：
[0029]該方法通過將含有菌絲體的PDA培養基菌塊直接接種于待鑒定甘薯材料的創面， 菌塊中PDA培養基為菌絲體提供養分，使菌絲體保持較高的致病性和活力，進而使甘薯材料 的發病迅速、染病效果穩定。該方法操作簡單，適合大規模推廣。
[0030]下面結合附圖和【具體實施方式】對本發明作進一步詳細說明。
【附圖說明】
[0031 ]圖1為廣薯79的抗性鑒定結果示意圖；
[0032] 圖2為待鑒定品系4的抗性鑒定結果示意圖；
[0033] 圖3為待鑒定品系9的抗性鑒定結果示意圖。
【具體實施方式】
[0034] 本發明提供一種甘薯爪哇黑腐病抗性鑒定方法，以下【具體實施方式】中，如未特殊 說明，所采用的待鑒定甘薯材料均可通過市售途徑獲得。所采用的甘薯爪哇黑腐病菌由廣 東省農業科學院研究所保存，命名為甘薯爪哇黑腐病菌LP1，該菌株是按《植病研究方法》 (方中達編著，中國農業出版社)所述方法進行病菌分離純化，并完成柯赫氏法則而獲得。以 下【具體實施方式】中的PDA培養基平板可采用《植病研究方法》所述方法進行配制，培養皿的 直徑為7-9cm。該甘薯爪哇黑腐病菌還可以通過常規的操作手段從感病植株的感病部位分 離純化而得到。
[0035] 本發明提供一種甘薯爪哇黑腐病抗性鑒定方法，包括以下步驟：
[0036] 1)病原菌活化培養:將甘薯爪哇黑腐病菌接種至PDA培養基平板，活化培養，PDA培 養基平板上生長出菌絲體；
[0037] 2)待鑒定甘薯材料準備:取待鑒定甘薯材料和對照品種，清洗晾干，削薯皮使待鑒 定甘薯材料露出ο · 5-2cm2創面；
[0038] 3)接種培養:從TOA培養基平板邊緣取含有菌絲體的菌塊，分別將長有菌絲體的一 面貼附于待鑒定甘薯材料和對照品種的創面；
[0039] 4)等級鑒定:接種培養5-10天后，將待鑒定甘薯材料和對照品種取出，觀察病害情 況并測量薯塊病斑直徑，進行發病嚴重度分級，然后計算每個待鑒定甘薯材料和對照品種 的平均發病嚴重度，根據平均發病嚴重度進行抗性評價。
[0040] 該方法通過將含有菌絲體的PDA培養基菌塊直接接種于待鑒定甘薯材料的創面， 菌塊中PDA培養基為菌絲體提供養分，使菌絲體保持較高的致病性和活力，進而甘薯材料的 發病迅速、染病效果穩定。該方法操作簡單，適合大規模推廣。
[0041 ] 實施例1:
[0042]本實施例提供一種甘薯爪哇黑腐病抗性鑒定方法，包括以下步驟：
[0043] 1)病原菌活化培養:將甘薯爪哇黑腐病菌LP1接種至TOA培養基平板，25°C活化培 養2天，利用滅菌打孔器從PDA培養基平板的邊緣取一塊直徑為6mm的含有菌絲體的菌塊，將 所述菌塊置于另一新的PDA培養基平板的中央，繼續25°C活化培養2天;本步驟采用二次活 化培養的方式，將活化培養后的菌塊取出，移植至另一新的活化培養基，能獲得致病性較高 的、活力較強的菌絲體；
[0044] 2)待鑒定甘薯材料準備:取待鑒定甘薯材料和對照品種，清洗晾干，削薯皮使待鑒 定甘薯材料露出l-2cm 2創面;每一待鑒定品系或品種或對照品種取10個單重200g左右的薯 塊進行平行試驗;本步驟中，因菌絲體對無創面的甘薯材料的染病能力差，而創面過大，存 在易受其它病菌侵擾等問題；
[0045] 3)接種培養:利用滅菌打孔器從步驟1)繼續活化培養后的PDA培養基平板邊緣取 一塊直徑為6mm含有菌絲體的菌塊，分別將長有菌絲體的一面貼附于待鑒定甘薯材料和對 照品種的創面，將待鑒定甘薯材料和對照品種置于溫度為25°C，濕度為85%的培養室進行 培養;本步驟中，菌塊中的培養基一方面為菌絲體提供過渡期營養，另一方面，培養基上的 菌絲體的存活率較高，活力較強，可使甘薯材料的發病快、發病穩定；
[0046] 4)等級鑒定:接種培養5-10天后，將待鑒定甘薯材料和對照品種取出，觀察病害情 況并測量薯塊病斑直徑，進行發病嚴重度分級，然后計算每個待鑒定甘薯材料和對照品種 的平均發病嚴重度，根據平均發病嚴重度進行抗性評價；
[0047]其中，發病嚴重度分級標準如下：
[0048] 1級:薯塊正常無任何病癥，薯塊病斑直徑<