達水平抑制腫瘤細胞的增殖來達到治療的目的。具體的，治療時，將能有效降低人KIAA0101 基因表達水平的物質給藥于患者。
[0028] 本發明第二方面公開了一種降低腫瘤細胞中KIAA0101基因表達的分離的核酸分 子，所述核酸分子包含 ：
[0029] a)雙鏈RNA，所述雙鏈RNA中含有能夠在嚴緊條件下與KIAA0101基因雜交的核苷 酸序列；或者
[0030] b) shRNA，所述shRNA中含有能夠在嚴緊條件下與KIAA0101基因雜交的核苷酸序 列。
[0031] 進一步的，所述雙鏈RNA包含第一鏈和第二鏈，所述第一鏈和所述第二鏈互補共 同形成RNA二聚體，并且所述第一鏈的序列與KIAA0101基因中15-27個連續的核苷酸序列 基本相同。較佳的，所述第一鏈的序列與KIAA0101基因中19-23個連續的核苷酸序列基本 相同；更佳的，所述第一鏈的序列與KIAA0101基因中19、20或者21個連續的核苷酸序列基 本相同。
[0032] 更進一步的，所述雙鏈RNA包含第一鏈和第二鏈，所述第一鏈和所述第二鏈互補 共同形成RNA二聚體，并且所述第一鏈的序列與KIAA0101基因中的靶序列基本相同。
[0033] 所述雙鏈RNA第一鏈和第二鏈的長度均為15-27個核苷酸；較佳的，長度均為 19-23個核苷酸；最佳的，長度均為19、20或者21個核苷酸。
[0034] 進一步的，所述雙鏈RNA為小干擾RNA (siRNA)。更進一步的，所述小干擾RNA第一 鏈的序列如 SEQ ID N0 :13 所示，具體為 5' -CGGUUGAUAAUGCCUCUACAA-3'。
[0035] SEQ ID N0 :13所示的siRNA為以SEQ ID NO: 1所示的序列為RNA干擾靶序列設 計的、針對人KIAA0101基因的小干擾RNA的一條鏈，另一條鏈即第二鏈的序列與第一鏈序 列互補，該siRNA可以起到特異性沉默腫瘤細胞中內源KIAA0101基因表達的作用。
[0036] 進一步的，所述shRNA包括正義鏈片段和反義鏈片段，以及連接所述正義鏈片段 和反義鏈片段的莖環結構，所述正義鏈片段和所述反義鏈片段的序列互補，并且所述正義 鏈片段的序列與KIAA0101基因中15-27個連續的核苷酸序列基本相同。所述shRNA經加 工后可成為小干擾RNA (siRNA)進而起到特異性沉默腫瘤細胞中內源KIAA0101基因表達的 作用。
[0037] 更一步的，所述shRNA包括正義鏈片段和反義鏈片段，以及連接所述正義鏈片段 和反義鏈片段的莖環結構，所述正義鏈片段和所述反義鏈片段的序列互補，并且所述正義 鏈片段的序列與KIAA0101基因中的靶序列基本相同。
[0038] 較佳的，所述正義鏈片段與KIAA0101基因中19-23個連續的核苷酸序列基本相 同；更佳的，所述正義鏈片段與KIAA0101基因中19、20或者21個連續的核苷酸序列基本相 同。
[0039] 進一步的，所述shRNA的莖環結構的序列可選自以下任一 ：UUCAAGAGA、AUG、CCC、 UUCG、CCACC、CTCGAG、AAGCUU 和 CCACACC。
[0040] 更進一步的，所述shRNA的序列如SEQ ID N0:14所示，具體為：5' -CCGGCGGUUGAU AAUGCCUCUACAACUCGA ⑶腳 AGAGGCAUUAUCAACC ⑶ UUUUG-3。
[0041] shRNA經酶切加工后可成為siRNA，進而起到特異性沉默腫瘤細胞中內源性人 KIAA0101基因表達的作用。
[0042] 編碼本發明所述shRNA的基因片段的干擾慢病毒載體含有SEQ ID NO: 1的序列及 其互補序列。
[0043] 所述雙鏈RNA的第一鏈或所述shRNA的正義鏈片段與KIAA0101基因中的靶序列 基本相同，所述KIAA0101基因的靶序列即為siRNA用于特異性沉默KIAA0101基因表達時， 被所述siRNA識別并沉默的mRNA片段所對應的KIAA0101基因中的片段。
[0044] 較佳的，所述KIAA0101基因中的靶序列含有SEQ ID NO: 1的序列。
[0045] 進一步的，所述KIAA0101基因來源于人。
[0046] 本發明第三方面，公開了一種KIAA0101基因干擾核酸構建體，含有編碼本發明所 述分離的核酸分子中的shRNA的基因片段，能表達所述shRNA。
[0047] 所述的人KIAA0101基因干擾核酸構建體可以是將編碼前述人KIAA0101基因 shRNA的基因片段克隆入已知載體獲得。進一步的，所述KIAA0101基因干擾核酸構建體為 KIAA0101基因干擾慢病毒載體。
[0048] 本發明的KIAA0101基因干擾慢病毒載體是將編碼前述KIAA0101基因 shRNA的 DNA片段克隆入已知載體獲得，所述已知載體多為慢病毒載體，所述KIAA0101基因干擾慢 病毒載體經過病毒包裝成為有感染力的病毒顆粒后，感染腫瘤細胞，進而轉錄出本發明所 述shRNA，通過酶切加工等步驟，最終獲得所述siRNA，用于特異性沉默KIAA0101基因的表 達。
[0049] 進一步的，所述KIAA0101基因干擾慢病毒載體還含有啟動子序列和/或編碼腫瘤 細胞中可被檢測的標記物的核苷酸序列；較優的，所述可被檢測的標記物如綠色熒光蛋白 (GFP)〇
[0050] 進一步的，所述慢病毒載體可以選自：pLK0. l-puro、pLKO. 1-CMV-tGFP、 pLKO. 1-puro-CMV-tGFP、pLKO. 1-CMV-Neo、pLKO. 1-Neo、pLKO. 1-Neo-CMV-tGFP、 pLKO.1-puro-CMV-TagCFP、 pLKO.1-puro-CMV-TagYFP、 pLKO.1-puro-CMV-TagRFP、 pLKO. l-pur〇-CMV-TagFP635、pLKO. 1-puro-UbC-TurboGFP、pLKO. l-pur〇-UbC-TagFP635、 pLKO-puro-IPTG-lxLacO、pLK0-pur〇-IPTG-3xLac0、pLPl、pLP2、pLP/VSV-G、pENTR/U6、 pLenti6/BL0CK-iT-DEST、pLenti6-GW/U6-laminshrna、pcDNAl. 2/V5-GW/lacZ、pLenti6. 2/ N-Lumio/V5-DEST、pGCSIL-GFP 或 pLenti6. 2/N-Lumio/V5-GW/lacZ 中的任一。
[0051] 本發明實施例具體列舉了以pGCSIL-GFP為載體構建的人KIAA0101基因干擾慢病 毒載體，命名為 pGCSIL-GFP-KIAA0101-siRNA。
[0052] 本發明分離的核酸分子可用于制備預防或治療腫瘤的藥物，所述腫瘤為結腸癌。
[0053] 本發明的KIAA0101基因 siRNA可用于抑制腫瘤細胞的增殖，進一步地可以用作 治療腫瘤的藥物或制劑。KIAA0101基因干擾慢病毒載體則可用于制備所述KIAA0101基因 siRNA。當用作治療腫瘤的藥物或制劑時，是將安全有效量的所述核酸分子施用于哺乳動 物。具體劑量還應考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫師技能范圍之內 的。
[0054] 本發明第四方面，公開了一種KIAA0101基因干擾慢病毒，由前述KIAA0101基因 干擾慢病毒載體在慢病毒包裝質粒、細胞系的輔助下，經過病毒包裝而成。該慢病毒可感 染腫瘤細胞并產生針對KIAA0101基因的小分子干擾RNA，從而抑制結腸癌細胞的增殖。該 KIAA0101基因干擾慢病毒可用于制備預防或治療腫瘤的藥物。
[0055] 本發明第五方面，公開了一種用于預防或治療腫瘤的藥物組合物，其有效物質含 有前述的分尚的核酸分子，KIAA0101基因干擾核酸構建體或KIAA0101基因干擾慢病毒中 的一種或多種的組合。
[0056] 進一步的，所述藥物組合物含有1~99wt%所述雙鏈RNA、shRNA、KIAA0101基因干 擾核酸構建體或KIAA0101基因干擾慢病毒，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
[0057] 在制備這些組合物時，通常將活性成分與賦形劑混合，或用賦形劑稀釋，或包在可 以膠囊或藥囊形式存在的載體中。當賦形劑起稀釋劑作用時，它可以是固體、半固體或液體 材料作為賦形劑、載體或活性成分的介質。因此，組合物可以是片劑、丸劑、粉劑、溶液劑、糖 漿劑、滅菌注射溶液等。合適的賦形劑的例子包括：乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀 粉、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、等。制劑還可包括：濕潤劑、乳化劑、防腐劑 (如羥基苯甲酸甲酯和丙酯）、甜味劑等。
[0058] 本發明還公開了所述藥物組合物在制備治療結腸癌的腫瘤治療藥物中的應用。
[0059] 該藥物組合物的應用為腫瘤的治療提供了一種方法，具體為一種預防或治療對象 體內腫瘤的方法，包括將有效劑量的所述的藥物組合物施用于對象中。進一步的，所述腫瘤 選自結腸癌。
[0060] 所述藥物組合物用于預防或治療對象體內腫瘤時，需要將有效劑量的所述的藥物 組合物施用于對象中。采用該方法，所述腫瘤的生長、增殖、復發和/或轉移被抑制。進一 步的，所述腫瘤的生長、增殖、復發和/或轉移的至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、 70 %、80 %、90 %、95 %或99 %的部分被抑制。
[0061] 所述方法的對象可以為人。
[0062] 本發明第六方面，公開了一種用于降低腫瘤細胞中的KIAA0101基因表達的試劑 盒，所述試劑盒包括：存在于容器中的所述分離的核酸分子，KIAA0101基因干擾核酸構建 體，和/或所述的KIAA0101基因干擾慢病毒。
[0063] 綜上所述，本發明設計了針對人KIAA0101基因的1個RNAi靶點序列，構建相應的 KIAAOlOIRNAi 載體，其中編碼序列