卻。打開水解管，將水解液全部過濾轉移到 25mL容量瓶中，取濾液lmL用真空干燥器在40°C干燥，蒸干，用lmL O.lmol/L的鹽酸溶解， 0.45μπι的濾膜過濾來高效液相色譜進樣瓶中； Β、水解產物自動柱前衍生處理，獲取衍生產物 吸取硼酸緩沖液5份，吸取鄰苯二甲醛1份，吸收樣品1份，混勻，再吸取9-芴基甲基氯甲 酸酯1份，混勻，準備上樣； C、高效液相色譜法同時γ -氨基丁酸和16種氨基酸 高效液相色譜的分離條件為，色譜柱:X Bridge C18液相色譜柱;流動相A: 1000mL純 水中，加入4g份結晶乙酸鈉，混勻，pH調為7.15;加入3.5mL四氫呋喃；流動相B: 400mL純水 中，加入6g結晶乙酸鈉，混勻，pH調為7.15;按加入800mL乙腈和800mL甲醇，混勻；梯度洗脫 備件見下表：
(I) Asp，天門冬氨酸；（2)Glu，谷氨酸；（3)Ser，絲氨酸；（4)His，組氨酸；（5)Gly，甘氨酸；（6) Thr，蘇氨酸；（7)Arg，精氨酸；（8)Ala，丙氨酸；（9)GABA，γ-氨基丁酸；（lO)Tyr，酪氨酸； (II) Val，纈氨酸；（12)Met，蛋氨酸；（13)Phe，苯丙氨酸；（14)Ile，異亮氨酸；（15)Leu，亮氨 酸；（16)Lys，賴氨酸；（17)Pro，脯氨酸。
[0024]上述描述僅作為本發明可實施的技術方案提出，不作為對其技術方案本身的單一 限制條件。
【主權項】
1. 含乳飲料中丫-氨基下酸和16種蛋白水解氨基酸同時檢測的專用高精度高效液相色 譜方法，其特征在于:設定樣品水解、衍生處理、上柱檢測=個操作步驟，然后針對含乳飲料 的特性設定上述=操作步驟所使用的處理試劑及試劑用量及處理參數，使得上述=操作步 驟的工藝參數相互嚴密配合，實現對含乳飲料中丫-氨基下酸和16種蛋白水解氨基酸的一 步式高精度檢測。2. 根據權利要求1所述的含乳飲料中T-氨基下酸和16種蛋白水解氨基酸同時檢測的 專用高精度高效液相色譜方法，其特征在于:該檢測方法包括如下步驟： A、 制備含乳飲料水解樣品：取含乳飲料置于水解管中，加入鹽酸和苯酪后隨即冷凍處 理，然后充入惰性氣體并梓緊水解管螺蓋，再將水解管放入恒溫干燥箱進行充分水解，然后 將水解液取出過濾，取濾液干燥蒸干，再次用鹽酸溶解并精濾到高效液相色譜的進樣瓶中； B、 水解樣品的自動柱前衍生處理:在室溫條件下，吸收步驟A所得樣品并與和棚酸緩沖 液、鄰苯二甲醒混勻，再吸取9-巧基甲基氯甲酸醋混勻，準備上樣； C、 高效液相色譜檢測丫 -氨基下酸和16種氨基酸的含量:高效液相色譜的分離條件為， 色譜柱:通用的C18液相色譜柱;柱溫:40°C ;流動相A:純水中加入結晶乙酸鋼混勻，調pH調 后加入四氨巧喃;流動相B:純水中加入結晶乙酸鋼混勻，調抑后加入乙臘和甲醇混勻;梯度 洗脫條件設定如下：^檢測條件設定如下：檢測器采用二極管陣列或紫外檢測器；〇-25min，設定檢測波長 338nm; 25-32min，設定檢測波長262nm; 32-35.5min，設定檢測波長338nm。3. 根據權利要求1所述的含乳飲料中T-氨基下酸和16種蛋白水解氨基酸同時檢測的 專用高精度高效液相色譜方法，其特征在于:該檢測方法包括如下步驟，下述步驟中設及的 重量份均W克為單位計算，設及的體積份均W毫升為單位計算： A、 制備含乳飲料水解樣品：取含乳飲料1重量份置于水解管中，加入濃鹽酸1-3體積份 或加入6mol/L鹽酸10-15體積份，再加入新蒸饋的苯酪3-4滴，將水解管放入冷凍劑中，冷凍 3min-5i皿，充入高純氮氣并在充氮氣狀態下梓緊螺蓋，將水解管放入109-11 TC的恒溫干 燥箱中，水解20-30小時后取出冷卻，打開水解管，將水解液全部過濾轉移到容量瓶中，取濾 液1-2體積份用真空干燥器在40°C-5(rC干燥，蒸干，用0.5-2體積份0.1mol/L的鹽酸溶解， 然后采用0.化m-0. Sym的濾膜過濾到高效液相色譜進樣瓶中； B、 水解樣品的自動柱前衍生處理:在室溫條件下，吸收步驟A所得樣品0.5-2體積份，吸 取棚酸緩沖液3-7體積份，吸取鄰苯二甲醒0.5-2體積份，混勻，再吸取9-巧基甲基氯甲酸醋 0.5-2體積份，混勻，準備上樣； C、 高效液相色譜檢測丫 -氨基下酸和16種氨基酸的含量:高效液相色譜的分離條件為， 色譜柱:通用的C18液相色譜柱;柱溫:40°C;流動相A: 1000體積份純水中加入4-8重量份結 晶乙酸鋼，混勻，pH調為7.15-7.25，再加入3-5體積份四氨巧喃;流動相B: 400體積份純水中 加入6-12重量份結晶乙酸鋼，混勻，pH調為7.15-7.25，再加入600-1000體積份乙臘和600-1000體積份甲醇，混勻;梯度洗脫條件設定如下：檢測條件設定如下：檢測器采用二極管陣列或紫外檢測器；〇-25min，設定檢測波長 338nm; 25-32min，設定檢測波長262nm; 32-35.5min，設定檢測波長338nm。4. 根據權利要求1所述的含乳飲料中T-氨基下酸和16種蛋白水解氨基酸同時檢測的 專用高精度高效液相色譜方法，其特征在于:該檢測方法包括如下步驟，下述步驟中設及的 重量份均W克為單位計算，設及的體積份均W毫升為單位計算： A、 制備含乳飲料水解樣品：取含乳飲料1重量份置于水解管中，加入濃鹽酸2體積份或 加入6mol/L鹽酸12體積份，再加入新蒸饋的苯酪3滴，將水解管放入冷凍劑中，冷凍4imn，充 入高純氮氣并在充氮氣狀態下梓緊螺蓋，將水解管放入ll〇°C的恒溫干燥箱中，水解24小時 后取出冷卻，打開水解管，將水解液全部過濾轉移到25mL容量瓶中，取濾液1.5體積份用真 空干燥器在45°C干燥，蒸干，用1體積份0.1mol/L的鹽酸溶解，然后采用0.45叫!的濾膜過濾 到高效液相色譜進樣瓶中； B、 水解樣品的自動柱前衍生處理:在室溫條件下，吸收步驟A所得樣品1體積份，吸取棚 酸緩沖液5體積份，吸取鄰苯二甲醒1體積份，混勻，再吸取9-巧基甲基氯甲酸醋1體積份，混 勻，準備上樣； C、 高效液相色譜檢測丫-氨基下酸和16種氨基酸的含量:高效液相色譜的分離條件為， 色譜柱:通用的C18液相色譜柱;柱溫:40°C;流動相A: 1000體積份純水中加入6重量份結晶 乙酸鋼，混勻，pH調為7.15-7.25，再加入4體積份四氨巧喃;流動相B: 400體積份純水中加入 9重量份結晶乙酸鋼，混勻，P的周為7.15-7.25，再加入800體積份乙臘和800體積份甲醇，混 勻;梯度洗脫條件設定如下：檢測條件設定如下：檢測器采用二極管陣列或紫外檢測器；〇-25min，設定檢測波長 338nm; 25-32min，設定檢測波長262nm; 32-35.5min，設定檢測波長338nm。5. 根據權利要求1或2或3或4所述的含乳飲料中T-氨基下酸和16種蛋白水解氨基酸同
【專利摘要】本發明公開了一種含乳飲料中γ-氨基丁酸和16種蛋白水解氨基酸同時檢測的專用高精度高效液相色譜方法，設定樣品水解、衍生處理、上柱檢測三個操作步驟，然后針對含乳飲料的特性設定上述三操作步驟所使用的處理試劑及試劑用量及處理參數，使得上述三操作步驟的工藝參數相互嚴密配合，實現對含乳飲料中γ-氨基丁酸和16種蛋白水解氨基酸的一步式高精度檢測。本發明能夠實現對含乳飲料中的γ-氨基丁酸和16種蛋白水解氨基酸的一步式檢測，且具有極高的靈敏度和優越的穩定性。
【IPC分類】G01N30/02, G01N30/06
【公開號】CN105651874
【申請號】
【發明人】房新平, 賈云虹, 李朝旭, 凌森, 李志鈞
【申請人】河北三元食品有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2015年12月30日